Summary
Ce protocole mesure spatiale d’apprentissage et de mémoire à l’aide du labyrinthe de Barnes. Un nouveau paradigme de demoiselle en détresse sert à évaluer l’activité locomotrice et comportement prosocial chez la souris.
Abstract
Le labyrinthe de Barnes est une mesure fiable de l’apprentissage spatial et de la mémoire qui ne nécessite pas de restriction alimentaire ou l’exposition à des stimuli extrêmement stressants. Le labyrinthe de Barnes peut également évaluer les autres comportements de souris, tels que de la motivation générale à s’échapper de la plate-forme du labyrinthe et le comportement exploratoire. Le labyrinthe de Barnes peut mesurer si une mutation génétique ou la variable d’environnement peut influer l’acquisition et la rétention de la mémoire spatiale, ainsi que fournir des informations sur la stratégie de recherche utilisée par les souris. Ici, nous utilisons le labyrinthe Barnes pour détecter un déficit de mémoire chez les souris adultes suite à un événement d’exposition unique éthanol du développement. Le paradigme de la demoiselle en détresse nouvellement décrit expose une souris mâle dans une souris femelle, pris au piège dans une chambre dans le champ ouvrir de la centre de l’arène. Il offre la possibilité pour la souris socialement, répondre à la femelle piégée et présenter un comportement prosocial. Le paradigme de la demoiselle en détresse peut également être utilisé pour examiner le comportement de la souris dans une nouvelle arène et mesure l’activité locomotrice. Fois le labyrinthe de Barnes et les protocoles de la demoiselle en détresse nécessitent peu d’investissement financier et la plupart des aspects des essais peuvent être construits de fournitures de laboratoire commun. Ces outils flexibles et accessibles peuvent également servir à détecter les changements de comportement au cours du développement.
Introduction
Ce protocole vise à mesurer l’apprentissage spatial et la mémoire chez les souris en utilisant le labyrinthe Barnes ainsi que la sensibilité sociale et la locomotion en utilisant le paradigme de la demoiselle en détresse. Couramment utilisé des tests d’apprentissage et la mémoire spatiales pour rongeurs incluent le labyrinthe de bras radial, qui mesure la capacité de la souris pour trouver de la nourriture cachée dans un des bras d’un appareil à rayons multiples, et le labyrinthe d’eau Morris, qui met une souris dans une grande cuve ou flaque d’eau et évalue le temps nécessaire pour trouver une plate-forme cachée sous l’eau. En règle générale, la formation pour ces paradigmes s’étend sur multiples essais et permet la mesure des deux taux d’acquisition et de rétention grâce à court terme et des essais de mémoire à long terme de l’apprentissage.
Bien que le labyrinthe radial-bras et le labyrinthe aquatique Morris sont des moyens fiables pour tester la mémoire chez les rongeurs, elles présentent des complications pour certains chercheurs. Les deux labyrinthes utilisent privation ou forts stimulus aversif comme renfort1. Le labyrinthe de bras radial utilise la privation de nourriture pour s’assurer que les rongeurs sont bien motivés pour trouver une récompense alimentaire. Dans le labyrinthe de l’eau de Morris, les effets du stress induit par une nage forcée peuvent modifier les résultats dans la souris2.
Le labyrinthe de Barnes est une tâche de la conscience spatiale alternative qui nécessite des rongeurs apprendre la position d’un trou afin d’échapper à la surface du labyrinthe lumineux et ouverts3. Faible stimulation aversive (lumineux ou sonore) est ensuite appliquée pour augmenter la probabilité que les souris seront échappera de la plate-forme. Le labyrinthe de Barnes n’exige pas la privation de nourriture, donc la quantité de préparation animaux est moindre que dans le dédale de bras radial. Il peut être utilisé sans conflit par les chercheurs qui étudient les comportements ou les molécules associées à la manger, régulation hormonale ou voies hypothalamiques.
Le labyrinthe de Barnes a également des avantages sur le labyrinthe de l’eau de Morris. C’est moins stressant que le labyrinthe d’eau Morris, entraînant des concentrations moins élevées de corticostérone souris4. En outre, il est beaucoup plus simple à monter et nécessite un espace moins consacré pendant la procédure test et le stockage.
L’essai de la demoiselle en détresse est une simple expérience de deux parties qui peut évaluer l’activité locomotrice suivie de comportement prosocial. Le dosage de la demoiselle en détresse est conçu pour évaluer les comportements exploratoires et sensibilité sociale d’un rongeur male en réponse à un rongeur femelle piégé. Une méthode couramment utilisée pour évaluer la sociabilité (ainsi que la préférence pour la nouveauté sociale) est l’utilisation du test de sociabilité de trois compartiments de Crawley, qui évalue le libre choix d’une souris de passer du temps près ou loin des autres souris5.
Similaire au test de sociabilité de trois compartiments de Crawley, l’essai de demoiselle en détresse mesure également libre choix concernant la façon de passer du temps en présence d’une autre souris, mais il fournit également des mesures pour les aspects plus profondes du fonctionnement social : 1) dans le Demoiselle en détresse test, la souris femelle piégée se tient au centre d’un champ ouvert, donc aversion potentiels du mâle dans un champ est piquée contre son lecteur à explorer ou enquêter sur une femme en détresse conspécifique socialement. 2) le modèle de la demoiselle en détresse fournit également un moyen d’évaluer le comportement prosocial et empathique en réponse à la souris piégée, ce qui n’a pas été explorée fréquemment chez les souris.
L’empathie animale est certainement observables et mesurables, bien que pas beaucoup de paradigmes existent à cet effet. Par exemple, chez le rat, un compagnon de cage piégés peut induire un état de motivation prosocial, où les rats travailleront pour libérer l’animal pris au piège. En fait, des rats choisira aider l’animal pris au piège, même avant d’ouvrir un conteneur similaire contenant une collation au chocolat, puis accéder au chocolat et partagez-la avec le rat nouvellement libéré6.
Mesures de l’empathie chez les souris comportent généralement le fait d’infliger de la douleur ; en effet, les souris qui regardent les autres souris de douleur sont plus sensibles à la douleur se7,8. Stress de contrainte est un phénomène caractérisé chez les rongeurs et s’accompagne de choc afin d’examiner les réactions de stress, comme une mesure de l’empathie chez les souris9,10.
Il y a des considérations éthiques associées à la douleur induite ou choc, donc stress induisant des solutions de rechange sont nécessaires. Nous avons développé le paradigme de la demoiselle en détresse comme une mesure du comportement empathique en l’absence de douleur ou de traitement de choc. Les souris piégées dans notre protocole de demoiselle en détresse montrent des signes évidents de détresse après seulement quelques instants, comme on ne peut faire demi-tour dans le petit récipient, et pourtant ils sont sain et saufs, tout en offrant aux autres souris répondre à leur détresse.
Pour commencer l’évaluation de la demoiselle en détresse, une souris mâle est placée dans une grande arène roman contenant un petit cylindre central vide. Les comportements exploratoires sont enregistrées pendant plusieurs minutes, y compris combien de sections de l’arène est croisés et combien de temps est passé dans la zone centrale ouverte. Cette méthode fournit un moyen rapide et facile d’exclure déficits locomoteurs comme un facteur de confusion potentielle dans une situation d’apprentissage nécessitant un mouvement coordonné pour la réussite. Il fournit également une mesure élémentaire de combien l’aversion pour le plein champ centre est présente. Ces deux mesures pourraient influencer la performance de labyrinthe de Barnes.
Après l’exploration initiale, le mâle est retiré de l’arène et une souris femelle est placée dans un cylindre fermé, petit clair central (similaire à celle utilisée pour recueillir le sang des souris). Ensuite, la souris mâle originale est réintroduite dans l’arène et comportement exploratoire est à nouveau marqué. Le paradigme de la demoiselle en détresse évalue si une souris est intéressée par une interaction sociale basée sur les changements dans les comportements lorsqu’une femme piégée est présente (marqué par le temps consacré à la place du centre et le nombre d’épisodes de creuser) et si le la souris présente un comportement prosocial vers la femelle piégé (marqué par la quantité d’enquêtes de cylindre et événements contact avec la femelle piégée). Le dosage de la demoiselle en détresse peut être utilisé pour mesurer une propension à la nouveauté sociale (similaire au test de sociabilité de trois compartiments de Crawley) selon si les chercheurs piéger une souris familière ou roman.
Ensemble, le labyrinthe de Barnes et expériences de la demoiselle en détresse permettent l’évaluation exacte des souris capacités d’apprentissage et de la sensibilité sociale en l’absence de stimuli extrêmement stressants. Comme avec tous les tests comportementaux, ces expériences doivent être effectuées avec une grande sensibilité envers l’expérience animale, réduisant au minimum l’inconfort ressenti par l’animal.
Comme la plupart des labyrinthes, des différences dans l’activité locomotrice peuvent influencer la performance sur le labyrinthe de Barnes, donc les chercheurs devraient aussi évaluer l’activité locomotrice, surtout lorsque vous utilisez le labyrinthe Barnes pour évaluer l’apprentissage chez les souris porteuses de mutations qui peuvent altérer le mouvement (telles que ceux trouvés dans des modèles murins de la maladie de Huntington, ou ceux exposés à des toxines qui peuvent provoquer de l’hyperactivité ou retarder le mouvement, comme l’éthanol). En outre, labyrinthe et chambre les surfaces doivent être soigneusement nettoyés et literie changée entre chaque animal afin d’éviter le cue de parfum confond.
Ce qui est important, tous les matériaux peuvent être fabriqués sur place avec peu d’investissement financier et le faible encombrement physique de ces tests signifie que ces expériences peuvent être répliqués dans presque tous les milieux, ce qui permet une grande flexibilité. Ce type d’accessibilité permet de bonne science devant être célébré dans les petits établissements disposant de ressources limitées ou dans des situations où les données pilotes doivent percevoir rapidement en l’absence d’un soutien substantiel.
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Protocol
Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvées par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) de Hampden-Sydney College ou Randolph-Macon College (où que certains travaux ont été réalisés auparavant).
1. base logement de souris
- Maison des souris dans des cages en plastique avec fond solide et côtés et une couche de literie molle et de matériaux comme le déchiquetage de papier de nidification. Utiliser la literie qui est composée d’épis de maïs broyés ou copeaux de bois et faire en sorte que la literie est changée régulièrement pour l’assainissement.
- Fournir l’accès à la nourriture et l’eau ad libitum. Le haut de la cage en plastique abrite une trémie d’alimentation. Répartir les boulettes souris correctement formulé la trémie d’alimentation et fournir un distributeur d’eau. Veiller à ce que le dessus de la cage dispose d’un filtre à air pour protéger les souris contre des contaminants extérieurs.
- Maintenir les rythmes circadiens naturels des souris en suivant un cycle lumière-obscurité de 12 heures dans l’établissement de logements. Effectuer des tests comportementaux à la même heure, idéalement pendant cycle foncé de l’animal, comme pendant les heures du soir.
Remarque : Il faut distinguer la souris dans le logement. Diverses méthodes pour souris distinctifs sont disponibles, tels que les poinçons de l’oreille, les marques auriculaires et des marquages de queue.
2. tests de labyrinthe Barnes : Construction
- Obtenir une planche de bois circulaire qui est de 120 cm de diamètre.
- Couper 20 trous circulaires (4,5 cm de diamètre) autour du périmètre du cercle. Positionner chaque trou pour être 2,5 cm loin du bord du labyrinthe et 13 cm en dehors de trous voisins.
- Les surfaces lisses et les peindre blanc brillant (une couleur vive est recommandée).
- Désigner un côté de l’organe de labyrinthe pour insertion de petite tasse crochets à peu près 2-3 cm de chacun des 20 trous et placer deux crochets pour chaque trou (un de chaque côté de chaque trou).
- Utiliser des disques noirs peu profonds (plastique) pour recouvrir les trous sur le côté du labyrinthe avec des crochets. Utilisez crochets pour fixer des bandes de caoutchouc épais afin d’y pour tenir les disques sur le fond du labyrinthe.
- Fixer solidement le labyrinthe Barnes 120 cm au-dessus du sol et loin des autres objets de même hautes comme les tables ou chaises. Une boîte ou un tabouret peut être utilisé pour soutenir le milieu du labyrinthe.
- Placez les grandes affiches blanches avec une seule forme sur chaque mur (triangle, cercle et croix) comme repères extra-labyrinthe sur 3 côtés du labyrinthe. Maintenir les affiches sur les murs dans le labyrinthe pour chaque essai.
- Le dernier côté du labyrinthe, mis en place un solid rideau noir pour cacher les observateurs afin que les données peuvent être enregistrées avec précision sans les chercheurs perceptible à la souris sur le labyrinthe.
- Suspendre une caméra vidéo sur la scène avec une vue d’ensemble de la surface entière de labyrinthe.
- Nettoyer toutes les surfaces du labyrinthe (disques noirs et zone cible inclus) avec de l’eau puis une solution d’éthanol à 70 % avant et après chaque essai de souris.
- Placer une source lumineuse à 100 W 25 cm au centre du labyrinthe (tournant marche/arrêt à l’arrivée du procès) et assurez-vous d’avoir les disques et les crochets vers le sol.
Remarque : Toutes les autres lumières dans la salle doivent être éteint au cours des essais. L’ajout d’un fabricant de bruit ultrasonique accroché à côté de 100 W light est recommandé. Il marche/arrêt tourner à l’arrivée de chaque essai.
3. Barnes labyrinthe essais : procédure
Remarque : Assurez-vous que tous les composants de labyrinthe sont nettoyés avec l’eau et 70 % de solution d’éthanol avant et après chaque essai, permettant de temps à sécher complètement avant l’essai de curriculum vitae. Soyez sûr d’avoir nettoyage fournitures prêt ainsi que les minuteries pour les essais.
- Toutes les souris dans les groupes de la maison tout en utilisant une méthode d’identification fiable. Gardez la souris à l’extérieur de la salle d’examen quand ils ne fonctionnent pas activement sur le labyrinthe. C’est pour s’assurer qu’ils ne subissent pas de la crécelle ultrasonique prématurément.
- Gérer les souris en ramassant doucement et leur détention de la base de la queue, les pattes tenus en main.
- Pour la formation, ont les souris courir sur le labyrinthe quotidienne fois par jour pendant 7 jours d’affilée pour évaluer l’acquisition/apprentissage.
Remarque : Un seul essai à long terme peut s’effectuer à une date ultérieure afin d’évaluer la mémoire/rétention. Le protocole actuel formé adolescents souris commençant à jour après la naissance 32 et un essai de longue durée a été réalisé chez l’adulte à l’âge de 4 mois. - Répartissent de manière aléatoire chaque souris vers un trou cible à utiliser tout au long de la période d’essai. Les trous peuvent être étiquetés 1-20 sur le fond du labyrinthe ou à l’extérieur du périmètre labyrinthe, où ils ne sont pas visibles à la souris dans le labyrinthe.
- Remplacer le disque assigné trou avec une petite boîte noire (23 x 11 cm). Attachez-le fermement pour le labyrinthe de Barnes à l’aide de bandes de caoutchouc reliés aux crochets de la plus proche.
Remarque : La zone cible est peu profonde, suffisamment pour que la souris peut facilement descendre dedans ou contient une étape pour vous assurer que la souris n’a pas à sauter dedans. - Placez votre souris sur le centre du labyrinthe sous une tasse s’acclimater pendant 30 secondes jusqu'à ce que le test commence. Lancer l’enregistrement vidéo.
- Allumez le bruiteur léger et ultrasons. Soulever la coupe par un mécanisme en chaîne afin d’éviter la polarisation de la position initiale de l’animal. Démarrer un timer et s’asseoir derrière le rideau d’observer.
- Après la souris entre dans le trou de la cible, recouvrir le trou avec la même tasse opaque utilisée au début du procès ou un liant et éteindre le bruiteur ultrasonique. Si la souris n’est pas entré la cible une fois 5 minutes écoulées, corral la souris dans le trou de la cible.
- S’assurer que la souris entre dans le trou. Lorsque la souris est à l’intérieur de la zone cible, recouvrir le trou et éteindre le bruiteur. Laissez la souris pour rester dans la zone cible pendant une minute non perturbée.
- Bien que le trou cible restera constant pour chaque souris tout au long de la période de formation, exécutez souris dans un ordre aléatoire chaque jour pour s’assurer qu’ils ne suivent pas tous cues/parfums à gauche de la souris précédente.
4. Barnes labyrinthe tests : Analyse des données
- Au cours des essais de labyrinthe Barnes, record qui suit chronométré données : temps total passé sur le labyrinthe, le temps de rechercher la cible et le temps d’entrer dans le trou de la cible si la cible est entrée.
- Suivre le mouvement général de la souris pour déterminer le nombre d’erreurs (nombre de trous incorrects exploré) avant et après la cible est trouvée. Enregistrent aussi la distance entre le trou de la cible et le premier trou explorée (la distance est mesurée en nombre de trous de suite), ainsi qu’un remarquable comportement de toilettage.
- Suivre les déplacements de chaque animal sur un morceau de papier avec un diagramme du labyrinthe au cours de chaque essai et utilisez-la pour analyser les stratégies de recherche, mais aussi de déterminer le nombre de trous qui ont été explorées dans le quadrant en face de la cible. Analyse vidéo permet de confirmer les chemins d’accès.
5. demoiselle-en-détresse essais : construction de la chambre de retenue
- Couper un cylindre transparent d’une longueur égale à ¾ de la longueur de la souris femelle de la base de la queue à la pointe du nez. S’assurer que les dimensions du cylindre sont telles que la souris placée à l’intérieur ne peut pas tourner autour.
NOTE : Nous avons coupé l’extrémité du cône d’un tube de 50 mL conique vers le bas pour faire un tube de 4 cm de longueur pour 1 mois souris et un longueur de 8 cm tube depuis 4 mois souris. - Cap les deux extrémités du cylindre, telle que l’un chapeaux de peut être enlevé et remis en place. Percer des trous de 3-4, chacun, environ 0,5 cm dans chaque bouchon. Assurez-vous que les trous sont assez grands pour permettre au nez-toucher entre souris et12de la respiration.
Remarque : Par ailleurs, un dispositif de retenue de la souris pendant la collecte de sang peut être utilisé.
6. demoiselle-en-détresse essais : préparation de l’arène
- Veiller à ce que l’arène est une boîte carrée en plastique topless opaque de 38 x 38 cm avec parois de 19 cm. Remplir uniformément avec la litière de maïs jusqu'à une hauteur d’environ 2,5 cm.
Remarque : La literie de l’épi de maïs fait creuser des événements plus faciles à détecter. - Suspendre une caméra vidéo sur l’arène afin que l’intégralité de l’arène est en vue.
7. demoiselle-en-détresse tests : mesure du comportement exploratoire
- Placez la chambre fermée et vide le stress dans le centre de l’arène.
- Commencez l’enregistrement avec la caméra suspendue.
- Sélectionnez une souris mâle. Si les souris sont marqués pour identification, notez identité de cet homme ; Si ce n’est pas le cas, marquent cette souris afin qu’il peut être distingué après son retour à la cage.
- Placez délicatement la souris mâle sous une tasse dans le coin inférieur gauche dans l’arène. Après 30 secondes, retirer la coupe par un mécanisme de chaîne.
- Laissez la souris Explorer pendant 10 min, en prenant soin de rester en dehors de son champ de vision pendant l’enregistrement. À la fin des 10 min, retirez la souris de l’arène et retourner à une cage de rétention pour les prochaines 5 min12.
- Arrêter l’enregistrement et enregistrer le fichier vidéo avec un identificateur approprié.
8. demoiselle-en-détresse tests : mesure de la sensibilité sociale
- Utiliser la même configuration arena et enregistrement que dans la mesure du comportement exploratoire.
- Sélectionnez une souris femelle. Si les souris sont marqués pour identification, notez identité de cette femelle ; Si ce n’est pas le cas, marquent cette souris afin qu’elle se distingue lorsqu’il est renvoyé à la cage.
Remarque : Une même portée, compagnon de cage ou nouvelle souris peut être utilisée, selon la question de recherche. Si plusieurs essais sont en cours, conserver le type de relation entre tous les essais. - Maintenez la souris femelle doucement de la base de la queue, ou de retenue de la nuque, si nécessaire et abaissez-la dans la chambre de retenue. Fermer l’extrémité ouverte derrière elle et s’assurer qu’il est impossible de faire demi-tour.
Remarque : Pensez à porter des gants résistant à la morsure, car la souris femelle sera résistante à entrer dans la chambre de retenue. - Commencez l’enregistrement avec la caméra suspendue.
- Placer la chambre de retenue avec la souris femelle piégée à l’intérieur dans le centre de l’arène de l’empathie et laisser la femelle s’acclimater pendant 10 min. Prendre soin de rester hors de champ de la femelle.
- Après que la souris femelle a été dans la chambre de retenue pendant 5 min, placer la souris mâle marquée dans l’arène de l’empathie en utilisant le même processus qu’avant. Laissez la souris mâle un 5 min supplémentaire explorer la scène, encore une fois, en prenant soin de rester en dehors du champ de vue des souris.
- Arrêter l’enregistrement et enregistrer le fichier vidéo avec un identificateur approprié.
- À la fin de la 5 min, retirez les deux souris de l’arène et les placer dans leurs cages. Remplacer la litière de maïs et assainir l’arène et la chambre de stress avec de l’éthanol 70 %12.
9. demoiselle-en-détresse tests : analyse des données
- Logiciel de suivi peut être utilisé, mais la vidéo peut également être analysée manuellement. Une fois que le fichier vidéo est visible sur l’ordinateur, superposer une feuille transparente sur l’écran et définir la place de l’arène à l’aide d’un marqueur. Diviser le carré de l’arène en neuf compartiments égaux.
- Examiner les données vidéo pour les 5 premières minutes de la mesure initiale exploratoire. Noter le nombre de compartiments traversés (le comportement de l’activité locomotrice et d’étude), le temps passé dans le centre du carré de l’arène (aversion de plein champ), nombre de creuser et de toilettage des épisodes et nombre de fois que la souris a touché la retenue vide Centre chambre.
NOTE : Notation n’est pas fait pour le second 5 min d’exploration initiale de 10 minutes du mâle, ni pendant le 10 min, la femelle est pris au piège dans la chambre centrale en l’absence du mâle. - Examiner les données vidéo pendant le 5 min de la mesure de la sensibilité sociale immédiatement après que le mâle est réintroduit dans l’arène avec la femelle piégée. Enregistrer les données mêmes en ce qui concerne la mesure initiale exploratoire, mais en outre enregistrer le nombre de fois la souris mâle a touché le nez avec la souris femelle piégée.
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Representative Results
Le labyrinthe de Barnes
Pour illustrer comment le labyrinthe Barnes peut être utilisé, nous avons examiné si une seule exposition au début de l’éthanol a provoqué une différence dans l’apprentissage au cours du développement chez la souris. Des souris C57Bl6/J ont été soit injectés avec une solution d’éthanol 2,5 g/kg (n = 8) ou avec une solution saline (n = 6) deux fois, deux heures d’intervalle, au 21e jour 6. Nous avons formé les animaux sur le labyrinthe de Barnes pendant l’adolescence (P30), puis effectué un essai à long terme à l’âge adulte (4 mois). Notre collecte de données peut être divisée en plusieurs grandes catégories : précision 1) par le taux de temps et d’erreur, entrée 2) cible et 3) cartographie le chemin de l’exploration.
Précision par taux de temps et d’erreur :
Mesures du temps englobent plusieurs aspects importants : la latence pour atteindre le premier trou (le temps qu’il faut pour enquêter sur tout premier trou après le début du procès de la souris) illustrera si la souris est d’apprendre qu’est c'censé pour aller trouver la fuite trou ( Figure 1 a). Le temps de latence pour trouver le trou de la cible (marqué par un abaissement initial du nez à travers le plan du trou cible) est en mesure de trouver le bon trou (Figure 1 b). Avec chacune de ses sessions, l’heure d’exécution de la session de formation devrait diminuer, ce qui indique que les animaux apprennent le labyrinthe.
Le nombre d’enquêtes de mauvais trou (appelés erreurs) la souris effectue avant de repérer le trou correct (Figure 1) indique si l’animal est capable d’aller relativement tout droit vers le trou d’évacuation de cible. Le nombre total de fois où qu'une souris explore un trou incorrect au cours du procès donne une mesure rudimentaire de l’activité locomotrice et comportement exploratoire. (Figure 1). Toutes les souris ont été avec succès formés sur le labyrinthe de Barnes sur une période de 7 jours de tests au cours de l’adolescence (représentée ici par des séances quotidiennes sur jours 32-39), indiquée par une diminution des taux d’erreurs et de temps pour trouver le trou de la cible. Il n’y avait aucun différence statistique dans l’apprentissage entre les animaux de l’éthanol et le contrôle au cours de la période de formation.
Taux d’entrée cible :
La latence à fait entrer dans le trou de la cible est couramment utilisée comme critère pour l’achèvement réussi de labyrinthe, mais probablement ne donne pas autant d’informations que d’autres aspects de l’essai. Entrée dans la cible peut également être notée comme un 0 ou 1. Si la souris entre dans la cible avant les 5 minutes s’écoulent, l’essai est considéré comme réussi, mais si la souris n’entre pas dans la cible, un classeur ou un livre devrait être utilisé pour corral l’animal dans la cible afin qu’il éprouve la sécurité de la chambre sous. Les premiers jours de formation, il faut s’attendre à voir de faibles taux de pénétration de la cible et les animaux qui prennent les 5 minutes sur le labyrinthe. Dans les jours suivants, le test devrait prendre moins de temps.
Faire plusieurs erreurs après avoir trouvé la cible indique la faible motivation pour entrer dans la zone cible et peut également détecter confort anormal avec une situation qui est aversif généralement à des souris (plate-forme surélevée, champ lumineux de lumière, ouvert, bruit ultrasonique). Une grande différence entre les erreurs commises avant de trouver la cible et le nombre total d’explorations de trou lors d’un essai indique mauvaise motivation pour entrer dans la chambre d’échappement de cible (Figure 2 a). Si la souris ne pénètrent pas dans le trou d’évacuation de cible après la découverte, des lumières vives ou des bruits peuvent être ajoutés à la situation de test comme des stimuli nociceptifs légèrement.
Dans notre expérience, un émetteur de bruit ultrasonique a été ajouté au-dessus du labyrinthe journée test 5 à introduire une motivation supplémentaire pour entrer dans la cible. Avant l’introduction du bruit ultrasonique, aucune souris traitées salines n’avaient jamais pénétré la cible, mais les entrées dopés après l’introduction du bruit. Significativement plus de souris (solution saline et éthanol combiné) est entré la cible le procès 6 par rapport au procès 4 (t-test, p = 0,0014) (Figure 2 b).
Mappage de path :
Cartographie le chemin de la souris peut aider à évaluer la rétention d’information et d’apprentissage, aussi bien. La distance entre le premier trou exploré et le trou de la cible est un bon indicateur de mémoire dans l’emplacement cible, comme cette pistes où la souris va d’abord et fermer comment ils sont à la cible (Figure 3 a). Vous attendez cette mesure varie largement au début de la formation, mais le premier trou a visité devrait se rapprocher de la cible comme les souris apprennent l’emplacement cible.
Aucune différence statistique dans l’apprentissage n’a été trouvée entre l’éthanol et contrôle des animaux au cours de la période de formation, lorsque ces souris ont été ré-exécuter en tant qu’adultes à l’aide d’un seul essai à long terme (à 4 mois), les animaux traités à l’éthanol avaient un moment plus difficile se souvenir où se trouvait le trou de cible (Figure 3 b)12. Cette différence dans la rétention de la mémoire n’a pas été trouvée dans le dédale de Barnes initial de formation, en utilisant le labyrinthe à nouveau à une date ultérieure, nous a permis de relever des différences subtiles dans l’apprentissage/mémoire, telles que celles trouvées avec un événement d’intoxication d’éthanol unique du développement. Un diagramme représentatif de la Barnes surface labyrinthe permet aux chercheurs de mapper le chemin qu'a pris la souris, y compris le nombre d’erreurs et un enregistrement du premier trou a visité (Figure 3).
Temps passé dans le quadrant opposé correspond à la quantité de temps qu'une souris explore une partie du labyrinthe sur d’autres, plus précisément le contraire d’un de la cible. Il est possible pour un chercheur d’obtenir et de calculer toutes les autres mesures, comme la souris est en cours d’exécution le labyrinthe, mais cette mesure nécessite l’analyse à une date ultérieure. Une souris qui apprend doit diminuer les trous Explorer de temps passé dans le quadrant opposé. Sur l’adulte à long terme du procès, l’éthanol traités souris explorent significativement plus de trous dans le quadrant opposé de la cible, indiquant une panne de se rappeler l’emplacement correct de spatial général (p = 0,03) (Figure 4 a).
Il est important de briser cette mesures de cartographie dans les erreurs commises avant et après effectivement de trouver la cible. Le nombre d’erreurs avant de trouver la cible peut révéler si l’apprentissage se produit, mais il peut aussi nous parler de la stratégie de recherche de la souris. Au lieu de hasard visiter trous, la souris peut adopter une stratégie pour trouver rapidement la cible. Au cours de l’essai de longue durée, tous les animaux traités à l’éthanol utilisé une recherche séquentielle de trou-aux-trou de façon annulaire jusqu'à ce que le trou a été découvert, alors que beaucoup moins saline souris employé cette technique (p = 0,004) (Figure 4 b et 4D). Alternativement, les souris peuvent cibler une direction générale du labyrinthe (Figure 4), qui indique que l’apprentissage spatial se produit et l’animal utilise probablement des facteurs externes de la tête pour le voisinage de l’orifice de la cible.
Demoiselle en détresse
L’arène de la demoiselle en détresse a été construit et utilisé pour tester le comportement exploratoire et social de souris C57Bl6/J à deux 1M (n = 15) et 4M (n = 12) de l’âge. Une arène d’empathie a été utilisée lorsque la souris mâle placé dans un coin (Figure 5 a). Comportement exploratoire de la souris est quantifié le nombre de carrés traversés en 5 min sur la scène de roman. Nos résultats montrent que les souris âgées (4 mois) franchissent plus carrés que les souris jeunes (1 mois) (p < 0,0001) (Figure 5 b).
Ensuite, la femelle piégée a été placée dans un cylindre au milieu de l’arène (Figure 5 a). Une fois que la femelle est pris au piège dans la chambre, comportement exploratoire peut à nouveau être quantifié comme le nombre de carrés traversés. La présence de la femelle piégée impacts comportement exploratoire des hommes. Peu importe l’âge, les souris mâles explorent moins en présence d’une femme emprisonnée. Mâles juvéniles exploré l’arène moins (telle que mesurée par le nombre de carrés traversés en présence d’une femelle pris au piège de souris que lorsque seul (à 1 mois : t-test, p = 0,001 ; moyenne homme seul 46 ± 4,34 places vs avec des femelles 26,13 ± 3,42 carrés). Cette différence était également manifeste chez l’adulte (à 4 mois : t-test, p < 0,000001 ; moyenne ± mâle seul 151,5 5,31 places vs avec des femelles 103,08 ± 0.3.59 carrés) (Figure 5 b).
En outre, la durée d’une souris sur la place centrale sur une période de 5 minutes devrait aussi être appréciée. Temps consacré à la place du Centre doivent être comparé à la présence et l’absence de la femelle en guise d’intérêt social. Nos résultats montrent que les hommes passent plus de temps dans le carré central, en présence de la femelle piégé. Les mâles juvéniles passent plus de temps explorer le centre de l’arène en présence d’une femme piégée de souris que lorsque seul (à 1 mois : p = 0,05 ; moyenne homme seul s 13.14 ± 2,79 vs avec femelle 33.42 ± 9,32 s). Cette différence a été également observée chez les adultes (à 4 mois : p = 0,001 ; moyenne s seul contre 14.80 ± 1,89 mâle avec la femelle 52.87 ± 8,9 s) (Figure 5).
En outre, chercheurs devraient également quantifier le nombre d’événements de creuser dans l’arène, qui pourrait être une mesure d’anxiété ou de comportement prosocial vers la femelle piégée. Cette mesure ne différait en présence de la femelle pour 1 mois (1 M) souris, mais pas des souris de 4 mois (4 M). Mâles juvéniles passent plus creuser de temps pendant leur temps dans l’arène en présence d’une femelle pris au piège de souris que lorsque seul (à 1 mois : p = 0,027 ; moyenne mâle seul 0,4 ± 0,27 fois vs avec ± 3,2 femelle 1,09 fois). Cette différence n’était pas considérée chez les adultes (à 4 mois : p = 0,65 ; moyenne mâle seul 1,33 ± 0,54 fois vs. avec femelle 1 ± 0,49 fois) (Figure 5).
Le nombre de fois qu'un homme touche la chambre de retenue contenant la femelle piégée et le nombre de fois que les animaux touchés nez à travers les trous d’aération est des mesures de comportement prosocial. Dans nos résultats, les souris mâles a touché le tube contenant la femelle piégée significativement plus fréquemment que les adultes (4 mois) qu’au stade juvénile (1 mois) (p = 0,00001 ; moyenne ± 1 mois 4,73 0,95 fois vs. 4 mois 15.92 ± 1,64 fois) (Figure 5E). Mâles adultes également ouverte plus pris au piège des événements contact femelles. Les souris mâles touché nez avec la femme piégée dans les trous d’air significativement plus fréquemment que les adultes (4 mois) qu’au stade juvénile (1 mois) (p = 0,002 ; moyenne ± 1 mois 3.93 1 fois contre 4 mois 8,67 ±.94 fois). (Figure 5F).
Appareil de contrôle par ultrasons a été utilisé pour écouter les vocalisations ultrasoniques au-delà de 20 kHz par les souris femelles, et on l’utilisait aussi pour écouter les vocalisations ultrasoniques de souris mâles piégés dans un paradigme de l’inversion de « bachelor en détresse ». Aucun cris ont été détectés dans chaque situation, ce qui est attendue, puisque des recherches antérieures ne trouvent aucune souris vocalisations ultrasoniques entre le stimulus aversif exposition (par exemple, une contrainte physique ou électrocution)11.
Figure 1 : Représentant de précision pour le labyrinthe Barnes se traduit par des taux de temps et d’erreur. Souris ont été soit injectés avec une solution d’éthanol 2,5 g/kg ou avec une solution saline deux fois 2 heures d’intervalle à jour après la naissance 6. Nous avons formé les animaux une fois par jour pendant 7 jours au cours de l’adolescence, puis effectué un essai à long terme dans l’âge adulte,11. (A) la latence pour atteindre la première révèle trou (le temps qu’il faut pour enquêter sur tout premier trou après le début du procès de la souris), si la souris est d’apprendre à trouver le trou d’évacuation. (B) la latence pour trouver le trou de la cible (marqué par un abaissement initial du nez à travers le plan du trou cible) est en mesure de trouver le bon trou. (C) le nombre de mauvais trou enquêtes (appelés erreurs) la souris fait avant de repérer le trou correct indique si l’animal est capable d’aller relativement tout droit vers le trou d’évacuation de cible. (D), le total nombre de fois où qu'une souris explore un trou incorrect au cours du procès donne une mesure rudimentaire de l’activité locomotrice et comportement exploratoire. Barres d’erreur représentent SEM11. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 2 : Achèvement du labyrinthe Barnes réussie. La latence à fait entrer dans le trou de la cible est couramment utilisée comme critères pour l’achèvement réussi de labyrinthe, mais les animaux ne peut pénétrer le trou cible après la découverte. (A), A grande différence entre les erreurs avant de trouver la cible et le nombre total d’explorations de trou lors d’un essai indique mauvaise motivation pour entrer dans la chambre d’échappement de cible. Dans notre expérience, un bruit ultrasonique a été ajouté 5 procès pour induire la souris pour entrer dans la cible. (B) significativement plus de souris (solution saline et éthanol combiné) est entré la cible le procès 6 par rapport au procès 4 (t-test, p = 0,0014). Aucune souris d’éthanol maintenues Explorer après avoir trouvé la cible par jour 7. Barres d’erreur représentent SEM. s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 3 : Motivation labyrinthe Barnes. Cartographie des sentiers de la souris peut fournir des informations sur la motivation. (A) la distance entre le premier trou exploré et le trou de la cible est un bon indicateur de mémoire dans l’emplacement cible, comme les titres de cette mesure lorsque la souris passe d’abord et dans quelle mesure ils sont loin de la cible. (B) aucune différence statistique dans l’apprentissage n’a été trouvée entre l’éthanol et contrôle des animaux au cours de la période de formation, lorsque ces souris ont été ré-exécuter en tant qu’adultes à l’aide d’un seul essai à long terme (à 4 mois), les animaux traités à l’éthanol a un moment plus difficile de se souvenir où se trouvait le trou de la cible. (C), un diagramme représentatif de la Barnes surface labyrinthe permet aux chercheurs de mapper le chemin qu'a pris la souris, y compris le nombre d’erreurs et un enregistrement du premier trou a visité. Cette souris est allé directement à la cible dans les 16 secondes, mais il n’est jamais entré au cours de 5 minutes et exploré 41 trous par la suite. Ce comportement indique la faible motivation pour entrer dans la cible. Barres d’erreur représentent SEM. s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 4 : Stratégie de recherche pour le labyrinthe Barnes. Cartographie des sentiers de la souris, vous pouvez découvrir les stratégies de recherche et fournissent des informations sur la stratégie d’apprentissage. (A) sur l’adulte à long terme du procès, l’éthanol traités souris explorent significativement plus de trous dans le quadrant opposé de la cible, indiquant une panne de se rappeler l’emplacement correct spatiale (* p = 0,03). (B) au cours de l’essai de longue durée, tous les animaux traités à l’éthanol utilisé une recherche séquentielle de trou-aux-trou de façon annulaire jusqu'à ce que le trou a été découvert, alors qu’il est significativement moins de la solution saline traités souris employé cette technique (** p = 0,004) (B D). Jour du procès 6 résultats sont sur la photo pour une solution saline (C) traités de souris et souris traitée d’éthanol (D). Souris peuvent cibler une direction générale du labyrinthe (C), qui indique que l’apprentissage spatial se produit et l’animal utilise probablement des facteurs externes de la tête pour le voisinage de l’orifice de la cible. En règle générale, les scores de quadrant sont beaucoup mieux pour la souris à l’aide de cette stratégie. (D), le trou-à-trou séquentiels Rechercher est une stratégie de l’anneau, où la souris va à n’importe quel bord du labyrinthe et regarde dans chaque trou pour trouver la cible. Scores de quadrant sont pauvres avec grande variation lorsque les souris utilisent la stratégie de l’anneau. Barres d’erreur représentent SEM. s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 5 : Demoiselle en détresse. (A) la demoiselle en détresse arène est divisée en 9 carrés. La souris mâle est placée dans un coin et le comportement des hommes est observée. La souris femelle, pris au piège dans un conteneur de cylindre, est placée sur la place centrale de l’arène. (B) un comportement exploratoire dans l’arène augmente entre l’adolescence (1 mois = 1 M) et l’âge adulte (4 mois = 4 M). Dans l’ensemble, le mâles souris exploré moins en présence d’une femme emprisonnée. En addition, souris juvéniles explorés moins de souris adultes en présence de la femelle piégée. (C) sensibilité sociale peut également être mesurée par le temps qu'une souris passe dans le carré central, où la souris piégée se déroule. Les mâles juvéniles et adultes passent plus de temps dans le carré central, en présence de la femelle piégé. (D) les mâles juvéniles passent plus creuser de temps pendant leur temps dans l’arène en présence d’une femelle pris au piège de souris que lorsque seul. Les souris mâles (E) a touché le tube contenant la femelle piégée significativement plus fréquemment que les adultes qu’au stade juvénile. (F) les mâles adultes également ouverte plus pris au piège des événements contact femelles que les juvéniles. Barres d’erreur représentent SEM (*** p < 0,0001, ** p 0,001, * p 0,05). S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
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Discussion
Le labyrinthe de Barnes et les expériences de la demoiselle en détresse sont des moyens peu coûteux, rapides et relativement faciles d’évaluer l’apprentissage spatial, l’activité locomotrice et comportement prosocial chez la souris. D’autres avantages incluent l’absence de facteurs d’agression manifestes, douleur ou restriction alimentaire pour l’animal. Comme la plupart des paradigmes d’apprentissage/mémoire, un inconvénient du labyrinthe Barnes est le nombre d’essais requis pour les animaux à apprendre où se trouve le trou de la cible et entrer.
Collecte de données :
Données doivent être systématiquement collectées lors de l’observation des activités et des comportements dans les deux paradigmes de la souris. Pour le labyrinthe de Barnes, cela comprend le temps le premier trou est atteint, le nombre de trous d’erreurs/faux il explore, à l’époque à laquelle il atteint l’orifice de la cible et le moment où il pénètre dans le trou de la cible d’enregistrement. En outre, les chercheurs doivent mapper le chemin d’accès de chaque souris sur le labyrinthe. Données peuvent être suivies à l’aide d’une carte papier du labyrinthe Barnes en même temps que la souris est en cours d’exécution le labyrinthe, et les numéros de cadencement et trou peuvent être confirmées à l’aide de séquences vidéo. Lorsque le suivi de l’animal, il peut être utile de changer de couleur de stylo une fois par minute pour garder une trace des explorations de trou susceptibles de se recouper. Systèmes de suivi assistée par ordinateur sont disponibles pour assurer l’exactitude et la fiabilité, comme idTracker, Ctrax ou tracktor, et quelques-uns sont gratuits ou open source.
Pour le dosage de la demoiselle en détresse, les données enregistrées devraient comprendre combien de places le mâle saisit, le temps que nécessaire pour les hommes d’atteindre la femelle, combien de temps le mâle passe dans le carré central quand la femelle piégée est présente par rapport à seulement la bouteille vide , combien d’événements contact y est avec le cylindre, le nombre de fois où les nez d’animaux touchés par le biais de la chambre, et combien de fois creuser événements ont eu lieu dans l’ensemble et dans le centre carré.
Constantes de tests comportementaux :
Comme avec tous les tests comportementaux, il est essentiel que les conditions restent constantes entre et au sein des essais animaux pour s’assurer que les variables environnementales confond pas les résultats de l’étude. Des stimuli visuels, auditifs ou olfactifs dans l’environnement expérimental peuvent provoquer des changements comportements chez les souris, qu’ils soient destinés ou pas13. Par conséquent, il faut protéger les souris de distraire les stimuli externes14. L’arène utilisé pour le scénario de la demoiselle en détresse tant le labyrinthe Barnes doit être nettoyé après chaque essai avec de l’eau et désinfectées avec de l’éthanol 70 % pour s’assurer qu’aucun indicateur persistante des souris précédentes n’influence un procès ultérieur. En outre, la literie doit être changé après chaque essai de demoiselle en détresse. Collecte des données doit toujours être enregistrée sur vidéo pour permettre les expérimentateurs examiner les données et assurer une analyse précise. Il peut être un défi pour le chercheur de rester caché derrière un rideau ou autrement hors de la vue tout en collectant les données, mais il est important de maintenir un réglage constant, sans distraction pour les souris.
Conception de paradigm pour le labyrinthe Barnes et modifications :
Il y a plusieurs paradigmes publiés en cours d’utilisation pour le labyrinthe de Barnes. Des protocoles d’entraînement labyrinthe Barnes vont généralement de 7 à 15 jours, mais le protocole peut être raccourci. Parfois en tronquant le nombre de sessions de formation pour rendre l’apprentissage de la tâche plus difficile peut isoler les différences de protocoles plus manquer15. Il peut être utilisé avec seulement une imposte (comme dans l’étude originale de Barnes), ou autres éléments peuvent être ajoutés (par exemple, une lumière plus brillante, un ventilateur ou un bruit) afin de rendre les souris plus motivés pour entrer dans l’évasion chambre3,16. Si vous observez la faible motivation pour entrer dans la zone cible au cours d’une étude pilote, l’ajout de ces éléments devrait considérer au cours de la formation.
Entrée dans le trou de la bonne cible se produira probablement moins rapidement sans ces éléments, mais les chercheurs doivent être conscients que ces ajouts peuvent être stress induisant des stimuli. La présence ou l’absence de stimulus aversif peut être manipulé pour évaluer la motivation pour entrer dans le trou de la cible. Notre étude a montré que l’éthanol prénatale a eu un effet sur la probabilité qu’une souris entreraient le trou d’évacuation pendant la période de formation où seulement la lumière brillante a été utilisée, et ce phénomène était différent en fait d’apprendre où se trouvait le trou de la cible.
Comme on le voit dans les jours 1 à 4 de notre protocole, les souris n’étaient pas très motivés pour entrer dans le trou, bien qu’ils semblent trouver assez facilement. Toutefois, lorsque le bruit ultrasonique a été placé au-dessus du labyrinthe au jour 5, scores améliorée sur la plupart des mesures de Barnes, y compris la probabilité que les souris entrerait la chambre cible après qu’il est. Le bruit est apparu pour réduire considérablement le nombre d’enquêtes étrangères trou à l’essai les jours 6 et 7, et par jour 7 aucune souris éthanol ne gardé Explorer après avoir trouvé la cible (Figure 2 a). Si c’est possible, qu'il s’agit d’une conséquence naturelle de l’apprentissage du labyrinthe, les animaux semblent plus agitée après l’introduction du bruit ultrasonique et moins enclins à explorer le labyrinthe. Afin que la chambre de rester une situation gratifiante pour les souris, les chercheurs doivent aussi faire attention éteindre les stimulus aversif (recouvrir le trou et éteindre le bruit) et laisser l’animal à rester immobile dans la chambre pour le montant alloué de temps de récupération avant d’enlever l’animal.
La conception du labyrinthe Barnes peut avoir un impact sur l’apprentissage et l’évaluation de la mémoire. Le protocole actuel utilise des signaux extra-labyrinthe. En plus de l’asymétrie de la salle d’examen, affiches de quatre formes de-le-blanc-fond noir simples (carré, triangle, cercle, Croix) étaient montés sur les murs de la salle comme repères visuels. Le labyrinthe de Barnes peut être résolu avec ou sans les repères distales sur les murs de la salle d’examen, ou peut être résolu en utilisant une stratégie de recherche de serial. Pour cette raison, en utilisant seulement une mesure de « premier trou de distance de la cible » peut manquer les différences dans la façon dont la souris résout le labyrinthe et ne peut pas différencier spatiale de capacités non spatiales17. Plusieurs mesures d’analyse doivent être utilisés, par exemple examiner également le nombre de trous dans le carré opposé ou le nombre d’erreurs avant la cible. Le modèle de stratégie de recherche peut également être analysé.
Différentes souches consanguines de souris peuvent avoir des performances variables sur le labyrinthe de Barnes, peut-être en raison de différences dans l’acuité visuelle. Si une souche de souris possédant une faible acuité visuelle est choisie pour une utilisation dans le labyrinthe de Barnes, l’ajout d’un petit mur sur le pourtour du labyrinthe peut augmenter la thigmotaxie (comportement près du mur) et augmenter l’utilisation d’une stratégie de recherche non visuels. Les hommes avaient le meilleur apprentissage performance que les femelles chez les souches DBA/2J et C3H/HeJ, et bien que seuls les hommes ont été utilisés dans le protocole actuel, souris C57/Bl6 n’ont pas été trouvés pour afficher les différences entre les sexes en mémoire sur le labyrinthe de Barnes18.
Paradigme de la demoiselle en détresse design et modifications :
Pour l’expérience de la demoiselle en détresse, une limitation majeure est qu’il n’existe aucun moyen pour la souris exploratoire libérer la souris femelle, ou « demoiselle », le tube dans le centre de l’arène. Refonte de la chambre pour contenir un mécanisme de libération serait une modification future intéressante. Un inconvénient de la demoiselle en détresse est l’absence d’études comparatives en utilisant le paradigme, comme c’est une nouvelle évaluation pour mesurer le comportement prosocial.
La demoiselle en détresse pourrait être modifiée afin d’évaluer la sociabilité (définie comme l’envie de passer du temps avec une autre souris), préférence pour la nouveauté sociale (l’inclinaison pour étudier une nouvelle souris par rapport à une souris familière), sexuel ou agressif les comportements (piégeage une femelle en oestrus ou un nouveau mâle dans la chambre) et les questions de biologie de l’évolution, comme les répercussions du bagage génétique partagé sur les tendances de comportement altruiste (la réponse à une même piégée portée par rapport à une même piégée non portée 19de souris).
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Disclosures
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Acknowledgments
Nous au Hampden-Sydney College donner reconnaissance et gratitude à Sean Walden, Zach Leitner, Hunter Lee et Anton Kheirani pour leur implication dans les protocoles pour le labyrinthe de Barnes et expériences de la demoiselle en détresse les essais. Nous tenons également à remercier James Foster au Randolph-Macon College pour la construction du labyrinthe de Barnes et le département de biologie de Randolph-Macon College pour un espace de test.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Damsel-in-Distress | |||
| 50 mL conical tube | Fisher Scientific | 14-432-22 | Any brand of 50 mL conical tube will work |
| Rubber bands | Sprano Brand | n/a | Size 62, used to keep caps held to plywood |
| hammer | Grainger | 6R252 | Any standard hammer will work |
| nail (size 8D) | Grainger | 4NFE3 | Similarly-sized nails should work just as well |
| opaque, topless plastic box | AcmePlastics | CUT-TO-SIZE-ACRYLIC-CAST-BLACK-SHEET-2025 | Opaque plastic, cut to size (30 cm L x 19 cm W x 3-6 cm H). Step may be added to ensure no more than a 3.5 cm entrance depth for the mouse. |
| video camera (smartphone) | N/A | N/A | Any camera-equipped smartphone will work |
| bite-resistant gloves | Kent Scientific | GLVDYN02 | Any brand offering appropriate protection |
| transparency sheet | Staples | 954145 | Any brand of clear plastic sheet will work, used for scoring |
| Barnes Maze | |||
| Petri Dishes | Corning | 353025 | Spray painted and used as covers for Barnes maze holes |
| Plywood (3/4 in.) | LP Building Products | 22487 | To construct Barnes maze |
| Spray Paint | Krylon | 1274937 | Used to paint petri dish caps black, white paint used to paint plywood |
| Cup Hooks (5/8 in.) | Ace Hardware | 5360615 | 2 used on either side of ventral hole surfaces; Rubber band wraps around hooks to hold cap flat |
| Poster Board | Creatology | n/a | Used at edges of maze as extra cues |
| Light Bulbs | Phillips | n/a | 100W light bulb, used to during the trials |
| Rubber bands | Sprano Brand | n/a | Size 62, used to keep caps held to plywood |
| Ultrasonic noisemaker | Victor mini PestChaser | M753SN | Used as aversive stimuli |
References
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