Summary
Bu iletişim kuralı kayma öğrenme ve hafıza Barnes labirent kullanarak ölçer. Roman bir sıkıntı küçük hanım paradigma lokomotor aktivite ve farelerde prosocial davranışını değerlendirmek için kullanılır.
Abstract
Barnes labirent kayma öğrenme ve does değil istemek gıda kısıtlama veya son derece stresli uyarıcılara maruz bellek güvenilir bir ölçüsüdür. Barnes labirent Ayrıca labirent platformu ve keşif amaçlı davranış kaçmak için genel motivasyon gibi diğer fare davranışları değerlendirebilirsiniz. Barnes labirent bir genetik mutasyon olup olmadığını ölçebilirsiniz veya çevre değişken edinme ve tutma kayma anıları etkisi, yayılımının fareler tarafından istihdam arama stratejisi hakkında bilgi sağlar. Burada bir tek gelişimsel etanol maruz kalma olayı takip yetişkin fareler bir bellek açığı algılamaya Barnes labirent kullanırız. Yeni açıklanan sıkıntı küçük hanım paradigma arenanın açık orta sahaya bir bölmede sıkışmış bir kadın fare bir erkek fare sunar. Sosyal kapana kısılmış dişi yanıt verebilmesi ve prosocial davranışlar fare için bir fırsat sağlar. Sıkıntı küçük hanım paradigma bir roman arena ve ölçü lokomotor aktivite fare davranışı incelemek için de kullanılabilir. Barnes labirent ve sıkıntı içinde küçük hanım iletişim kuralları en az finansal yatırım gerektirir ve testleri, birçok yönüyle ortak laboratuar malzemeleri inşa edilecek. Bu esnek ve erişilebilir araçları geliştirme boyunca davranış değişiklikleri algılamak için kullanılabilir.
Introduction
Bu iletişim kuralının amacını kayma öğrenme ve hafıza farelerde Barnes labirent gibi sosyal duyarlılık ve sıkıntı içinde küçük hanım paradigması kullanarak hareket kullanarak ölçmek etmektir. Bir multi-çubuklu aparatı bir kolundan gizli yiyecek bulmak için bir farenin yeteneğini ölçer, Radyal Kol labirent ve bir büyük küvet veya su havuzunda bir fare yerleştirir Morris su labirent kemirgenler içerir için yaygın olarak kullanılan kayma öğrenme ve hafıza testleri ve gizli bir sualtı platform bulmak için ne kadar süreceği değerlendiriyor. Tipik olarak, eğitim bu paradigmalar için birden çok deneme yayılan ve her ikisi de ölçüm sağlar edinme oranları ve saklama kısa vadeli ve uzun vadeli bellek denemeler yoluyla öğrenme.
Radyal kollu labirent ve Morris su labirent kemirgen bellek test etmek için güvenilir yolu olmakla birlikte, bazı araştırmacılar için komplikasyonlar mevcut. Her iki labirentine yoksunluğu veya güçlü itici uyarıcılara takviye1kullanın. Radyal Kol labirent gıda yoksunluğu kemirgen bir gıda ödül bulmak için yeteri kadar motive olmasını sağlamak için kullanır. Morris su labirentinde zorla yüzmeye tarafından indüklenen stresin etkilerini fareler2sonuçlarında değiştirebilir.
Kemirgenler parlak, açık labirent yüzey3kaçmak için bir delik konumunu öğrenmek gerektiren bir alternatif mekansal farkındalık görevi Barnes labirentidir. Zayıf caydırıcı stimülasyon (ışık veya ses) o zaman fareler platformdan kaçış olacak olasılığını artırmak için uygulanır. Hayvan hazırlık miktarına göre daha az bu yüzden Barnes labirent gıda yoksunluğu, gerektirmez Radyal Kol labirent. Bu davranışları veya moleküller yemek, hormonal düzenleme veya hipotalamik yolları ilişkili araştırıyor araştırmacılar tarafından çakışma kullanılabilir.
Barnes labirent de Morris su labirent avantajları vardır. Corticosterone daha az yüksek seviyede fareler4' te neden Morris su labirent, daha az stresli. Buna ek olarak, bu çok montajı kolaydır ve sınama yordamı ve depolama sırasında daha az özel alanı gerektirir.
Sıkıntı küçük hanım tahlil lokomotor aktivite prosocial davranış tarafından takip değerlendirebilir basit bir iki parçalı deneydir. Sıkıntı küçük hanım tahlil araştırmacı davranışlar ve sosyal yanıt yanıt hapsolmuş bir kadın kemirgen olarak erkek bir kemirgen değerlendirmek için tasarlanmıştır. Sosyallik (aynı zamanda tercih sosyal yenilik için) değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan bir yöntem bir fare serbestçe seçmeye yakın ya da uzak diğer fareler5vakit değerlendiriyor Crawley'nın üç-odası sosyallik test kullanmaktır.
Crawley'nın üç-odası sosyallik testine benzer, sıkıntı içinde küçük hanım tahlil Ayrıca başka bir fare varlığında vakit geçirmek nasıl ilgili ücretsiz seçim önlemler, aynı zamanda sosyal işleyen daha derin yönleri ölçülerini sağlar: 1) içinde Erkeğin potansiyel riskten kaçınmanın açık alana sosyal keşfetmek veya sıkıntılı erkek conspecific araştırmak için onun sürücü karşı Çekirdeksiz bu yüzden sıkıntı küçük hanım tahlil, açık bir alanın ortasında kapana kısılmış dişi fare düzenlenmektedir. 2) sıkıntı küçük hanım modelinin de prosocial ve empatik davranış sık farelerde keşfedilmeyi değil kapana kısılmış fare yanıt olarak değerlendirmek için bir yol sağlar.
Hayvan empati kesinlikle gözlenebilir ve ölçülebilir, bu amaç için değil birçok paradigmaları yok olsa. Örneğin, fareler, nerede fare kapana kısılmış hayvan ücretsiz çalışacak bir devlet prosocial motivasyon, bir kapana kısılmış kafes dostum tetikleyebilir. Aslında, fareler hatta çikolata atıştırmak içeren benzer bir kapsayıcı açmadan önce kapana kısılmış hayvan yardımcı tercih sonra çikolata erişmek ve yeni bırakılmış sıçan6ile paylaşın.
Farelerde empati önlemleri genellikle ağrı eziyet içerir; Gerçekten de, diğer farelerin acı içinde izlemek fareler kendilerini7,8ağrı daha duyarlıdır. Kısıtlama stres kemirgenler karakterize bir olgudur ve stres yanıt, empati fareler9,10bir ölçü olarak incelemek için şok ile birleştiğinde.
Stres-inducing alternatifler ihtiyaç vardır bu yüzden indüklenen ağrı veya şok, ilişkili etik konuları vardır. Sıkıntı küçük hanım paradigma yokluğunda ağrı veya şok tedavisi, empatik davranış bir ölçüsü olarak geliştirdik. Bizim sıkıntı küçük hanım Protokolü kapana kısılmış fareler aleni sıkıntının sadece birkaç saniye sonra onlar küçük kap içinde arkanı edemiyoruz henüz onların sıkıntı için yanıt vermek diğer fareler için bir fırsat sağlarken sağ salim gösteriyor.
Sıkıntı küçük hanım değerlendirme başlamak için bir erkek fare küçük bir boş Merkez silindir içeren büyük bir roman arenada yer alıyor. Araştırmacı davranışlar arenanın kaç bölüm geçti ve ne kadar zaman merkezi açık alanda harcanan dahil olmak üzere, birkaç dakika için kaydedilir. Bu yöntem başarılı bir şekilde tamamlanması için Eşgüdümlü hareket gerektiren bir öğrenme durum potansiyel bir confounder olarak lokomotor açıkları ekarte etmek için hızlı ve kolay bir şekilde sağlar. Ayrıca temel ölçü açık orta sahaya ne kadar nefret mevcuttur sağlar. Her iki önlemler Barnes labirent performansı etkileyebilir.
İlk keşif, Erkek salondan kaldırılır ve kadın bir fare bir kapalı, küçük açık Merkez silindir (fareler kan toplamak için kullanılan benzer) yerleştirilir. Sonra özgün erkek fare arenaya yeniden ortaya çıkar ve keşif amaçlı davranış daha attı. Bir fare dayalı davranış kalıpları değişiklikleri (merkez meydan ve kazma bölüm sayısı harcanan süre tarafından attı) kapana kısılmış bir kadın olmadığı durumlarda ve olup olmadığını bir sosyal etkileşim baktılar olup sıkıntı küçük hanım paradigma değerlendiriyor Fare kapana kısılmış erkek (silindir araştırmalar ve kapana kısılmış erkek ile temas olayları miktarıyla attı) karşı prosocial davranış sergiler. Sıkıntı küçük hanım tahlil sosyal yenilik (Crawley'nın üç-odası sosyallik testine benzer) bağlı olarak olup araştırmacılar bir tanıdık veya roman fare yakalamak için bir eğilimi ölçmek için kullanılabilir.
Birlikte, Barnes labirent ve sıkıntı içinde küçük hanım deneyler fare doğru değerlendirilmesi öğrenme yetenekleri ve sosyal yanıt son derece stresli uyaranların yokluğunda sağlar. Tüm davranış deneyleri gibi ile bu deneylerin hayvan deneyim hayvan tarafından deneyimli rahatsızlık en aza indirerek doğru büyük hassasiyetle yapılmalıdır.
Araştırmacılar ayrıca lokomotor aktivite, özellikle Barnes labirent hareket (sözgelimi bozabilen mutasyonlar ile farelerde öğrenmeyi değerlendirme için kullanırken değerlendirmek bu yüzden çoğu labirentine gibi lokomotor aktivite farklılıkları Barnes labirent, performansını etkileyebilir o Huntington hastalığı fare modellerinde kurmak, ya da o hiperaktivite teşvik veya hareketi, etanol gibi geri zekalı toksinler maruz). Buna ek olarak, labirent ve odası yüzeyler iyice temizlenmelidir ve koku işaret önlemek için her hayvan arasında değişti yatak zihnimi karıştıran.
Önemlisi, tüm malzemeler en az finansal yatırım ile sitede sahte olduğu ve bu deneyleri küçük fiziksel yer kaplayan bu deneyler için büyük esneklik sağlayan hemen hemen her ortamda çoğaltılabilir anlamına gelir. Bu tür bir erişilebilirlik sınırlı kaynaklara sahip veya nerede pilot verileri hızlı bir şekilde önemli destek olmaması durumunda alınması gereken durumlarda daha küçük kurumlarında gerçekleştirilecek iyi bilim sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Hampden-Sydney kolej veya Randolph-Macon College (nerede bazı işler daha önce yapıldı) tarafından kabul edildi.
1. temel konut farelerin
- Fareler düz dipleri ve yan ve yumuşak yatak takımları ve malzeme kağıt parçalama gibi iç içe geçmiş bir tabaka ile plastik kafeslerde ev. Rendelenmiş Mısır koçanı ile oluşan yatak veya talaş kullanın ve yatak takımları sıhhi müessese düzenli olarak değiştirilir olun.
- Ad libitumsu ve gıda erişim sağlar. Plastik kafes üst bir gıda hopper ev sahipliği yapmaktadır. Düzgün formüle fare gıda gıda hopper çökeltilerini dağıtmak ve su dağıtıcısı sağlar. Kafes üst dış kirletici fareler korumak için bir hava filtresi özellikleri sağlamak.
- Doğal sirkadiyen ritim farelerin konut tesisi 12 saatlik koyu döngüsünde takip ederek korumak. Gündüz, hayvanın karanlık döngüsü, ideal olarak aynı anda gibi akşam saatlerinde test davranış kuralları.
Not: Konut farelerde ayırt etmek için özen gösterilmelidir. Kulak yumruklar, kulak Etiketler ve kuyruk işaretler gibi ayırt edici fareler için çeşitli yöntemler kullanılabilir.
2. Barnes labirent testi: İnşaat
- 120 cm çapında dairesel bir ahşap tahta edinin.
- 20 dairesel (4,5 cm çapında) dairenin çevresi delik. 2.5 cm uzakta labirent kenar ve komşu delik dışında 13 cm olmak için her delik getirin.
- Yüzeyleri pürüzsüz ve parlak beyaz (parlak renk önerilir) boya.
- Adayı bir yan ekleme küçük Kupası için labirent gemide yaklaşık 2-3 cm uzakta her 20 delik ve her deliğin (her deliğin her iki tarafında bir) için yer iki kanca kanca.
- Sığ siyah (plastik) diskler labirent Kancalı tarafında delik kapsayan için kullanın. Labirent alt üzerine diskleri tutmak için kalın lastik bantlar güvenli için kanca kullanın.
- Güvenli bir şekilde Barnes labirent 120 cm yerden ve tablolar veya sandalye gibi benzer şekilde uzun diğer nesnelerden uzakta bağlayın. Bir kutu veya dışkı labirent ortasına desteklemek için kullanılabilir.
- Büyük beyaz poster bir şekli ile ekstra-labirent yardımlar üzerinde labirentin sonuna 3 taraf olarak her bir duvar (üçgen, daire ve çapraz) yerleştirin. Her deneme için labirent etrafında duvarlar afişlerde korumak.
- Labirent son tarafında katı bir siyah perde böylece veriler araştırmacılar fareler üzerinde labirent görünür olmak olmadan doğru bir şekilde kaydedilebilir gözlemciler gizlemek için ayarlayın.
- Bir video kamera kuşbakışı tüm labirent yüzey ile arena üzerinden askıya alma.
- Labirent (siyah diskleri ve hedef kutusu dahildir) her yüzeyi su ile sonra önce ve sonra her fare deneme % 70 etanol çözüm temiz.
- 100 W ışık kaynağı 25 cm labirent (fırsatta açma/kapama başlangıç/bitiş deneme) ortasına yerleştirin ve diskleri ve yere bakan kanca var emin olun.
Not: Diğer genel gider ışıklar odasında test sırasında kapatılmalıdır. 100 W ışık yanında asılı bir ultrasonik ses makinesi eklenmesi önerilir. Açma/kapama her başlangıç/bitiş açın.
3. Barnes labirent testi: yordamı
Not: tüm labirent bileşenleri öncesinde ve sonrasında devam eder test etmeden önce kurumasını süre sağlayan her deneme, su ve % 70 etanol çözümüyle temizlenmiş emin olun. Temizlik malzemeleri hazır yanı sıra sayaçları için denemeler var emin olun.
- Gruplar halinde tüm fareler güvenilir tanımlama yöntemi kullanırken ev. Ne zaman aktif labirent üzerinde çalışan değil fareler dışında test oda tutun. Bu onlar için ultrasonik şenlikli zamanından önce tabi değil sağlamaktır.
- Yavaşça alacak ve onları bir yandan sürekli pençeleri ile kuyruk, tabandan tutan tarafından fareler başa.
- Eğitim için labirent üzerinde günlük öğrenme/edinme değerlendirmek için arka arkaya 7 gün için günlük bir kez çalıştırmak fareler var.
Not: Bellek/saklama değerlendirmek için daha sonraki bir tarihte tek bir uzun vadeli deneme yapılabilir. Geçerli protokol ergen fareler postnatal gün 32 başlayan eğitim ve uzun vadeli bir deneme erişkinlerde 4 aylıkken gerçekleştirildi. - Rastgele test dönemi kullanmak için bir hedef delik her fare atayın. Delikleri 1-20 labirent dibinde ya da nerede onlar için fare labirent içinde görünür değil labirent çevre dış etiketli.
- Atanan delik disk küçük bir kara kutu (23 x 11 cm) ile değiştirin. Sıkıca lastik bantlar için yakın kanca bağlı kullanarak Barnes labirent iliştirin.
Not: yeterince fare kolayca içine inebilirsin veya fareyi aşağı içine atlamak zorunda değil emin olmak için bir adım içerir böylece hedef sığ kutusudur. - Bir fincan test başlayana kadar 30 saniye boyunca alışmana altında labirent ortasına üzerine fareyi getirin. Video kaydetmeye başlamak.
- Üzerinde ışık ve ultrasonik şenlikli açın. Hayvan ilk başlık kutuplama önlemek için bir dize mekanizması yoluyla Kupası kaldır. Bir sayacı başlatmak ve gözlemlemek için perdenin arkasına otur.
- Fareyi hedef delik girdikten sonra mahkeme veya bir bağlayıcı başlangıcında kullanılan aynı opak Kupası ile delik kapak ve ultrasonik şenlikli açmak. 5 dakika geçtikten sonra fareyi hedef eğer, fareyi hedef deliğe corral.
- Fare deliği girer emin olun. Fare hedef kutusu içinde olduğunda, deliği ve şenlikli açmak. Hedef kutusunda 1 dakikalığına rahatsız edilmeden kalır için fareyi izin.
- Hedef delik her fare eğitim süresi boyunca sabit kalacak olmasına rağmen fareler onlar herhangi bir ipuçları/koku tarafından önceki fare sol izliyorsunuz değil emin olmak için her gün rastgele sırayla çalıştırın.
4. Barnes labirent testi: Veri analizi
- Barnes labirent denemeler sırasında kayıt aşağıdaki veri zaman aşımına: Toplam labirent üzerinde harcanan zaman, hedef bulmak için zaman ve hedef girilirse hedef deliğe girmek için zamanı.
- Hata (sayı-in yanlış delik araştırdı) sayısını belirlemek için fare genel hareketlerini takip önce ve sonra hedef bulunur. Aynı zamanda hedef delik Uzaklik araştırdı ilk delik kaydı (mesafe uzakta delik sayısı ölçülür), herhangi bir önemli davranış damat ile birlikte.
- Her duruşmada bir kağıt parçası ile bir diyagram labirentin sonuna her hayvan hareketleri izlemek ve arama stratejileri analiz gibi hedef karşısında kadranda araştırdı delik sayısını belirlemek için kullanabilirsiniz. Video analiz yolları onaylamak için kullanın.
5. küçük hanım-içinde-test sıkıntı: kısıtlama odası inşa
- Açık bir silindir uzunluğu eşit bir dişi fare uzunluğu ¾ kuyruk burun ipucu için tabanından yara bere. Öyle ki içine yerleştirilen fare kapatamazsınız silindir boyutları olduğundan emin olun.
Not: 1-ay-yaşlı fareler için 4 cm uzun bir tüp ve bir 8 cm uzunluğunda 4-ay-yaşlı fareler için tüp yapmak aşağı 50 mL konik tüp koni sonu keseceğiz. - Öyle ki bir kapaklar kaldırıldı ve reattached her iki ucunda da silindir kap. 3-4 delikler, yaklaşık 0.5 cm her, her kap içinde. Delikleri burun-dokunmadan fareler ve nefes12arasında izin vermek için yeterli büyüklükte olduğundan emin olun.
Not: Alternatif olarak, bir aygıt için fare kısıtlama kan toplama sırasında kullanılabilir.
6. küçük hanım-içinde-test sıkıntı: Arena hazırlanıyor
- Arena bir opak üstsüz plastik kare kutu 38 x 38 cm 19 cm duvarlı olduğundan emin olun. Mısır yatak için yaklaşık 2.5 cm yüksekliğe ile aynı şekilde doldurun.
Not: Mısır koçanı odada kazma olayları algılamak kolaylaştırır. - Böylece arena tamamını görünümünde bir video kamera üzerinde arena askıya alma.
7. küçük hanım-içinde-test sıkıntı: keşif davranış ölçü birimi
- Kapalı ve boş stres odası arena ortasına yerleştirin.
- Askıya alınmış kamera ile kayıt başlayın.
- Bir erkek fare seçin. Fareler için kimlik işaretliyse, bu erkeğin kimliğini not edin; Eğer değilse, kafese döndükten sonra ayırt edilebilir bu fare işaretliyoruz.
- Yavaşça erkek fareyi bir Kupası'nda arena sol alt köşede altında yerleştirin. 30 saniye içinde bir dize mekanizması yoluyla Kupası kaldırın.
- Fareyi 10 dk, kayıt sırasında onun görüş alanı dışında kalmak bakımı için keşfetmek izin. 10 min sonundaki fare salondan çıkarın ve bir holding kafes gelecek 5 dk12için geri verin.
- Kaydı durdurmak ve uygun bir tanımlayıcı ile video dosyasını kaydedin.
8. küçük hanım-içinde-test sıkıntı: sosyal duyarlılık ölçü birimi
- Keşif davranış ölçü olduğu gibi aynı arena ve kayıt kurulum kullanın.
- Kadın bir fare seçmek. Fareler için kimlik işaretliyse, bu dişinin kimliğini not edin; Eğer değilse, kafese döndürüldükten sonra ayırt bu fare işaretliyoruz.
Not: Littermate, kafes dostum veya yeni fare, araştırma soru bağlı olarak kullanılabilir. Birden fazla çalışmaların gerçekleştirilmesi durumunda, ilişkinin türünü tüm denemeler korumak. - Kadın fareyi yavaşça kuyruk Bankası veya boyun kısıtlama, gerekirse tutun ve kısıtlama odasına indir. Açık uçlu arkasında kapatın ve geri dönmek mümkün olduğundan emin olun.
Not: ısırık dayanıklı eldivenler dişi fare kısıtlama odası girmek için dayanıklı olarak düşünün. - Askıya alınmış kamera ile kayıt başlayın.
- Kısıtlama odası içinde kapana kısılmış dişi fare ile empati arena ortasına yerleştirin ve dişi 10 dakikadır alışmana izin. Dişinin görüş alanı dışında kalır için dikkat ediniz.
- Dişi fare 5 min için kısıtlama odasında kaldıktan sonra geri önce olarak aynı işlem kullanılarak empati arena işaretli erkek fare yerleştirin. Erkek fareyi bir ek 5 dk daha fareler görüş alanı dışında kalmaya dikkat çekici arena, keşfetmek izin.
- Kaydı durdurmak ve uygun bir tanımlayıcı ile video dosyasını kaydedin.
- 5 dk sonunda, her iki fare salondan kaldırmak ve onların kafes koyun. Mısır yatak takımları değiştirmek ve arena ve % 70 etanol12ile stres odası sterilize.
9. küçük hanım-içinde-test sıkıntı: veri analizi
- İzleme yazılımı kullanılabilir ancak video da el ile analiz edilebilir. Video dosyası bilgisayarda görünür olduğunda, bir şeffaf levha ekran üzerinde yerleşimi ve bir işaretleyici kullanarak arena karesiyle anahat. Arena kare dokuz eşit bölmeleri bölmek.
- İlk keşif ölçü ilk 5 min için video verileri gözden geçirin. Kaydedin geçti bölmeleri (lokomotor aktivite/araştırmacı davranış), merkezi kare arena (açık alan tiksinme), dizi kazma ve bölüm bakım ve fare dokundu ilk boş merkezi sayısı kaç kez harcanan zaman odası.
Not: Puanlama erkeğin 10 dakikalık ilk keşif ikinci 5 min için bitmiş değil, ne de 10 dakikadır dişi erkek yokluğunda orta odasında mahsur kaldı. - Hemen erkek arenaya kapana kısılmış dişi ile yeniden ortaya çıkar sonra sosyal duyarlılık ölçü 5 min için video verileri gözden geçirin. İlk keşif ölçü gelince aynı veri kayıt, ancak Ayrıca erkek fare kapana kısılmış dişi fare ile burun dokundu kez kaydedin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Barnes labirent
Barnes labirent nasıl kullanılacağını göstermek için tek bir erken etanol pozlama fare geliştirme boyunca öğrenme bir fark neden olup olmadığını araştırdık. C57Bl6/J fareler de 2.5 g/kg etanol çözümle enjekte (n = 8) veya serum fizyolojik ile (n = 6) iki kez, iki saat ayrı, postnatal gün 6. Hayvanlar üzerinde Barnes labirent (P30) ergenlik döneminde eğitim, sonra tek bir uzun vadeli deneme yetişkinlikte (4 ay) gerçekleştirilen. Bizim toplanan verileri birkaç ana kategoriye ayrılabilir: 1) doğruluk zaman ve hata oranı, 2) hedef giriş ve 3) eşleme arama yolu.
Doğruluk zaman ve hata oranına göre:
Zaman ölçümleri kapsayacak birkaç önemli yönleri: fareyi bulmak kaçış delik (gitmen gerektiğini öğrenme eğer ilk delik (için belgili tanımlık duruşma başladıktan sonra ilk herhangi bir delik araştırmak için fareyi süresini) ulaşmak için gecikme süresi gösterilecektir Şekil 1A). Gecikme süresi (bir ilk burun hedef delik uçak arasında düşürerek attı) hedef delik bulmak için doğru delik (Şekil 1B) bulmak mümkün olur. Her oturum, eğitim oturumu çalıştırmak için zaman, hayvanlar labirent öğrenme vardır gösteren azaltmak gerekir.
Yanlış delik araştırmalar (adlandırılan hataları) doğru delik (Şekil 1 c) bulma önce fare gerçekleştirir hayvan nispeten düz hedef kaçış deliğe gitmek mümkün olup olmadığını gösterir. Toplam kaç kez bir fare yanlış bir delik duruşma boyunca araştırıyor lokomotor aktivite ve keşif amaçlı davranış ilkel bir ölçü verir. (Şekil 1 d). Bütün fareler başarıyla Barnes labirent hata oranı ve saat bir düşüş göstermiştir (burada Doğum sonrası günlerde 32-39 günlük oturumları tarafından temsil edilen), ergenlik sırasında 7 gün test sürecinde hedef delik bulmak için eğitilmiştir. Öğrenme eğitim dönemi boyunca etanol ve denetim hayvanlar arasında istatistiksel fark vardı.
Hedef giriş hızı:
Aslında hedef deliğe girmek için gecikme süresi ölçütü olarak başarılı labirent tamamlama için yaygın olarak kullanılan, ama büyük olasılıkla test diğer yönleri olduğunca fazla bilgi vermez. Hedef girdiği Ayrıca bir 0 veya 1 attı. 5 dk geçmesi önce fare hedef girerse, test başarılı olarak kabul edilir, ancak fare hedef girmezse, Ciltçi veya kitap Emanet odasının altında deneyimleri bu yüzden hayvan hedef haline corral için kullanılmalıdır. İlk eğitim günlerde düşük oranları hedef ve tam 5 dakika üzerinde labirent atın hayvanların içine giriş görmek için beklenmelidir. Sonraki günlerde, test daha az zaman almalıdır.
Hedefi bulduktan sonra birden fazla hata yapma hedef kutusuna girmek için düşük motivasyon gösterir ve genellikle (yükseltilmiş platform, parlak ışık, açık alan, Ultrasonik ses) fareler için caydırıcı bir durum ile anormal konfor da algılayabilir. Hedef ve delik keşifler toplam sayısı bir duruşma sırasında bulmadan önce yapılan hatalar arasında büyük bir fark hedef kaçış odası (Şekil 2A) girmek için zavallı motivasyon gösterir. Fareler hedef kaçış delik bulma sonra değil giriyorsanız, parlak ışıklar veya gürültü test durumu hafif zararlı uyaranlara eklenebilir.
Deneyimimizi, Ultrasonik ses verici labirent hedef girmek için ekstra motivasyon tanıtmak için 5 sınav günü eklendi. Ultrasonik ses giriş öncesinde, tuzlu hiçbir tedavi fareler hiç gürültü girişten sonra çivili girişleri ama hedef girmişti. Önemli ölçüde daha fazla fare (serum ve kombine etanol) hedef deneme deneme 4'e göre 6 girilen (t-testi, p 0.0014 =) (Şekil 2B).
Yol eşleştirmesi aşağıda verilmiştir:
Fare yolunu eşleme bilgi saklama ve öğrenme stratejileri, de değerlendirmek yardımcı olabilir. Nerede fare ilk gider ve ne kadar yakın onlar bu parça (Şekil 3A) hedef olarak ilk keşfedilmeyi delik ve hedef delik arasındaki mesafe bellek hedef konumu için iyi bir göstergedir. Bu ölçü eğitim yılının başında değişkenlik bekliyoruz, ama fareler hedef konumunu öğrenmek gibi ziyaret ilk delik daha yakın hedefe taşımak.
Bu fareler bir tek uzun vadeli duruşmada (4 ay) kullanarak yetişkin olarak yeniden çalıştırdığınızda, eğitim dönemi boyunca etanol ve denetim hayvanlar arasında istatistiksel fark öğrenme bulundu rağmen etanol enjekte hayvanlar daha sert bir zaman vardı hedef delik neredeydi hatırlayarak (Şekil 3B)12. Bellek saklama bu farklılığı was değil kurmak-eğitim, öğrenme ve bellek, ince farklılıkları almak için bize izin bir süre sonra yeniden labirent kullanarak ilk Barnes labirentteki bulunanlar ile bir tek gelişimsel etanol zehirlenme olayı gibi. Fareyi aldı yol eşlemek araştırmacılar labirent yüzey sağlar Barnes temsilcisi bir diyagram, (Şekil 3 c) hata sayısı ve ilk delik kaydını da dahil olmak üzere ziyaret etti.
Ters çeyreğinde harcanan süre süreyi bir fare labirentin sonuna bir bölümde diğerleri üzerinde anlatıyor özellikle bir tam tersi hedef için karşılık gelir. Bir araştırmacı elde edilir ve fare labirent çalışıyor, ancak bu ölçü birimi daha sonra analiz gerektirir gibi diğer önlemler hesaplamak mümkündür. Öğrenme bir fare harcanan süre keşfetmek delik ters çeyrekte azaltmak gerekir. Etanol deneme uzun vadeli yetişkin üzerinde tedavi fareler araştırdı ters çeyrekte önemli ölçüde daha fazla delik doğru genel uzamsal konumu hatırlamak bir hata olduğunu gösteren hedeften (p = 0,03) (Şekil 4A).
Bu eşleme ölçümleri önce ve aslında hedefi bulduktan sonra yapılan hataları içine bölmek önemlidir. Hedef bulma önce hata sayısı öğrenme meydana gelen, ama aynı zamanda fare arama stratejisi hakkında bize söyleyebilir ortaya çıkarabilir. Rastgele delik ziyaret yerine, fare hızlı bir şekilde hedef bulmak için bir strateji kabul edebilir. Delik bulana uzun vadeli mahkemede etanol tedavi edilen hayvanların hepsi bir sıralı delik delik arama halka şeklinde bir biçimde kullanılan, önemli ölçüde daha az tuz tedavi ise fareler bu tekniği istihdam (p = 0,004) (Şekil 4B ve 4 D). Alternatif olarak, fare labirent (Şekil 4 c), kayma öğrenme meydana gelen ve hayvan büyük olasılıkla hedef delik çevresinde için kafa dış yardımlar kullanarak belirten genel bir yönüyle hedefleyebilirsiniz.
Sıkıntı küçük hanım
Sıkıntı küçük hanım arena inşa ve her iki 1 M C57Bl6/J fareler keşif ve sosyal davranışını sınamak için kullanılan (n = 15) ve 4M (n = 12) yaş. Bir empati arena erkek fareyi bir köşede (Şekil 5A) yerleştirileceği yeri kullanılmıştır. Fare keşif davranış roman arenada 5 min içinde çapraz kare sayısını olarak sayılabilir. Büyük fareler (4 ay) daha küçük fareler (1 ay) (p < 0.0001) daha fazla kare çapraz bizim sonuçları göster (Şekil 5B).
Ardından, kapana kısılmış erkek arena (Şekil 5A) ortasında bir silindir yerleştirildi. Dişi odasında mahsur kaldı sonra keşif davranışı tekrar çarpı işareti kare sayısını sayısal. Kapana kısılmış erkek varlığı erkek keşif davranışını etkiler. Yaş ne olursa olsun, erkek fare kapana kısılmış bir kadın varlığında daha az keşfedin. Genç erkekler araştırdı arena daha az (varlığı çarpı işareti kare sayısını tarafından ölçülen kapana kısılmış bir dişi fare daha tek başına (1 ay itibariyle: t-testi, p 0,001 =; erkek yalnız 46 ± kadın 26.13 ± 3.42 kareler ile vs 4.34 kareler demek). Bu fark da yetişkinlerde belli oldu (4 aylıkken: t-testi, p < 0.000001; kadın 103,08 ± 0.3.59 kareler ile vs 5,31 kareler erkek yalnız 151.5 ± demek) (Şekil 5B).
Buna ek olarak, bir fare orta meydanda bir 5 dakikalık süre içinde harcanan süreyi de değerlendirilmesi. Merkezi Meydanı'nda harcanan süre varlığı ve dişi yokluğu sosyal ilgi bir tedbir olarak karşılaştırılmalıdır. Erkek merkez meydan kapana kısılmış erkek varlığında daha fazla zaman harcamak bizim sonuçlar gösterir. Genç erkekler kapana kısılmış bir erkek huzurunda arena merkezi keşfetmek daha fazla zaman geçirdim daha ne zaman yalnız fare (1 ay,: p 0.05 =; erkek yalnız 13.14 ± 2,79 vs kadın 33.42 ± 9,32 s demek). Bu fark da yetişkinlerde görüldü (4 aylıkken: p 0,001 =; erkek tek başıma 14,80 ± 1.89 vs kadın 52.87 ± 8.9 s demek) (Şekil 5C).
Buna ek olarak, araştırmacılar da kazma olayların anksiyete veya kapana kısılmış erkek karşı prosocial davranış ölçüsü olabilir arenada sayısını ölçmek. Bu ölçü birimi 1 ay (1 M) fareler ama 4 ay (4 M) fareler için erkek varlığında önemli ölçüde farklı. Genç erkekler harcanan daha fazla zaman kazma onların süre içinde kapana kısılmış bir erkek huzurunda arenada daha ne zaman yalnız fare (1 ay,: p = 0,027; ile kadın 3.2 ± 0,27 kez vs erkek yalnız 0.4 ± 1,09 kez demek). Bu fark yetişkinlerde görülen değildi (4 aylıkken: p = 0,65; erkek yalnız 1.33 ± 0,54 kez vs. kadın 1 ± ile 0,49 kez demek) (Şekil 5 d).
Bir erkek kapana kısılmış dişi ve hayvanlar burun hava delikleri ile dokundu sayısını içeren kısıtlama odası dokunur kaç kez prosocial davranış önlemlerdir. Sonuçlarımızda, erkek fare kapana kısılmış erkek önemli ölçüde yetişkinler (4 ay) daha sık daha gençlere (1 ay) içeren tüp dokundu (p = 0,00001; 1 ay 4,73 ± 0.95 kez vs. 4 ay 15.92 ± 1,64 kez demek) (Şekil 5E). Ayrıca daha başlatılan yetişkin erkekler kadın kişi olayları tuzağa. Erkek farelerin dokundu burun hava deliklerden kapana kısılmış erkek ile önemli ölçüde yetişkinler (4 ay) daha sık daha gençlere (1 ay) (p = 0,002; 1 ay 3,93 ± 1 kez vs 4 ay 8.67 ±.94 kez demek). (Şekil 5F).
Ultrasonik kayıt cihazları için 20 kHz yukarıda ultrasonik vocalizations dinlemek için dişi fareler tarafından kullanıldı ve bu bir "Lisans içinde sıkıntı" ters paradigma içinde kapana kısılmış erkek fareler tarafından Ayrıca ultrasonik vocalizations için dinlemek için kullanıldı. Hiçbir vocalizations önceki araştırma itici uyarıcılara maruz kalma (örneğin fiziksel kısıtlama veya elektrik çarpması)11sırasında hiçbir ultrasonik vocalizations fareler bulduğumda, beklenen ya da durum, tespit edildi.
Resim 1 : Barnes labirent doğruluk temsilcisi tarafından zaman ve hata oranı sonuç. Fareler de 2.5 g/kg etanol çözüm veya serum fizyolojik ile 2 saat iki kez Doğum sonrası gün 6 ayrı enjekte edildi. Biz hayvanlar günde bir kez ergenlik sırasında 7 gün için eğitimli, daha sonra tek bir uzun vadeli deneme yetişkinlikte11' de gerçekleştirilen. (Fare kaçış delik bulmak öğrenme eğer ilk delik (için belgili tanımlık duruşma başladıktan sonra ilk herhangi bir delik araştırmak için fareyi süresini) ortaya çıkarır ulaşmak içinA) gecikme süresi. ((Bir ilk burun hedef delik uçak arasında düşürerek attı) hedef delik bulmak içinB) gecikme süresi doğru delik bulmak mümkün. Önce doğru delik bulma hayvan nispeten düz hedef kaçış deliğe gitmek mümkün olup olmadığını gösterir (C) yanlış delik sayısı araştırmalar (adlandırılan hataları) fare olur. (D) Toplam kaç kez bir fare yanlış bir delik duruşma boyunca araştırıyor lokomotor aktivite ve keşif amaçlı davranış ilkel bir ölçü verir. Hata çubukları SEM11temsil eder. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 : Başarılı Barnes labirent tamamlanma. Aslında hedef deliğe girmek için gecikme süresi genellikle başarılı labirent tamamlanması için ölçüt olarak kullanılır, ancak hayvanlar hedef delik bulma sonra giremezsiniz. (A) A hedef ve delik keşifler toplam sayısı bir duruşma sırasında bulma hedef kaçış odası girmek için zavallı motivasyon gösterir önce yapılan hatalar arasındaki büyük fark. Deneyimimizi, ultrasonik bir gürültü deneme fareler hedef girmek için ikna etmek için 5 tarihinde eklendi. (B) önemli ölçüde daha fazla fare (serum ve kombine etanol) girilen hedef deneme deneme 4'e göre 6 (t-testi, p 0.0014 =). Etanol fareler keşfetmek hedefi 7 gün tarafından bulduktan sonra devam etti. Hata çubukları temsil SEM Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 : Barnes labirent motivasyon. Fare yolları eşleme motivasyon hakkında bilgi sağlar. (A) ilk keşfedilmeyi delik ve hedef delik arasındaki mesafe bellek nerede fare ilk gider bu ölçü birimi parça olarak hedef konum için iyi bir göstergesi olduğunu ve ne kadar onlar uzak hedef. (B) Bu fareler yeniden çalıştırdığınızda bir tek uzun vadeli duruşmada (4 ay) kullanarak yetişkin olarak, eğitim dönemi boyunca etanol ve denetim hayvanlar arasında istatistiksel fark öğrenme bulundu rağmen etanol enjekte hayvanlar hedef delik neredeydi hatırlayarak daha sert bir zaman vardı. (C) A temsilcisi diyagramı fareyi aldı yol eşlemek araştırmacılar labirent yüzey sağlar Barnes, hata sayısını ve ilk delik kaydını da dahil olmak üzere ziyaret etti. Bu fare 16 saniye içinde hedef düz gitti ama asla 5 dakika boyunca girilen ve daha sonra 41 delik araştırdı. Bu davranış hedef girmek için düşük motivasyon gösterir. Hata çubukları temsil SEM Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4 : Barnes labirent arama stratejisi. Fare yolları eşleme arama stratejileri ortaya çıkarmak ve strateji öğrenme hakkında bilgi sağlar. (A)etanol deneme uzun vadeli yetişkin üzerinde tedavi fareler araştırdı ters çeyrekte önemli ölçüde daha fazla delik doğru genel uzamsal konumu hatırlamak bir hata olduğunu gösteren hedeften (* p = 0,03). (B) delik bulana uzun vadeli mahkemede etanol tedavi edilen hayvanların hepsi bir sıralı delik delik arama halka şeklinde bir biçimde kullanılan, önemli ölçüde daha az tuz tedavi ise fareler bu tekniği istihdam (** p = 0,004) (B D). (C) serum için deneme gün 6 sonuçları resimde tedavi fare ve (D) tedavi etanol fare. Fare labirent (C), kayma öğrenme meydana gelen ve hayvan büyük olasılıkla hedef delik çevresinde için kafa dış yardımlar kullanarak belirten genel bir yönüyle hedefleyebilirsiniz. Genellikle, çeyreği puanları Bu strateji kullanarak fareler için iyidir. (D) sıralı delik-için-delik arama nerede fare labirent herhangi bir kenarına gider ve hedef bulmak için her delik görünüyor bir yüzük, bir stratejidir. Fareler yüzük stratejiyi kullandığınızda çeyreği puanları ile büyük varyasyon fakirdir. Hata çubukları temsil SEM Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5: Sıkıntı küçük hanım. (A) küçük hanım sıkıntı arena 9 kareler halinde ayrılmıştır. Erkek fareyi bir köşeye yerleştirilir ve erkek davranışı görülmektedir. Bir silindir kap içinde sıkışıp dişi fare arena merkezi kare yerleştirilir. (B) araştırmacı davranış arena içinde (1 ay = 1 M) ergenlik ve yetişkinlik (4 ay = 4 M) arasında artar. Genel olarak, erkek fare kapana kısılmış bir kadın varlığında daha az araştırdı. Ayrıca, juvenil fareler keşfedilmeyi daha az içinde kapana kısılmış erkek huzurunda yetişkin fareler. (C) sosyal duyarlılık fare kapana kısılmış fare düzenlendiği merkezi Meydanı'nda geçirdiği zaman tarafından ölçülebilir. Çocuk ve yetişkin erkekler kapana kısılmış erkek huzurunda merkezi meydanında daha fazla zaman harcadı. (D) Juvenil erkek harcanan daha fazla zaman kazma onların süre içinde kapana kısılmış bir erkek huzurunda arenada daha ne zaman yalnız fare. (E) erkek fare kapana kısılmış erkek önemli ölçüde yetişkin gençler olarak daha sık içeren tüp dokundu. (F) Yetişkin erkekler daha da başlatılan gençlere daha kadın kişi olayları tuzak. Hata çubukları temsil SEM (*** p < 0,0001, ** p 0,001, * p 0.05). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Barnes labirent ve sıkıntı içinde küçük hanım deneyler kayma öğrenme, lokomotor aktivite ve farelerde prosocial davranışını değerlendirmek için ucuz, hızlı ve nispeten kolay yolu vardır. Diğer avantajı aleni stresler, ağrı ya da hayvan için yiyecek kısıtlaması yokluğu içerir. Çoğu öğrenme/bellek paradigmalar gibi hayvanlar için hedef delik nerede bulunduğunu öğrenmek ve girmek gereken deneme sayısı Barnes labirent bir dezavantajdır.
Veri toplama:
Verileri sürekli olarak ne zaman fare faaliyetleri ve her iki paradigmalar davranışları gözlem toplanan. Barnes labirent için bu ilk delik ulaşıldığında, hangi hedef delik ulaştığı zaman ve hangi hedef deliğe girer zaman araştırıyor hataları/yanlış delik sayısı saat kayıt içerir. Buna ek olarak, araştırmacılar her fare labirent yolunu eşleme. Veri fare labirent çalıştıran aynı anda Barnes labirent bir kağıdı Haritası kullanılarak izlenebilir ve zamanlama ve delik numaraları video görüntüleri kullanarak onaylanabilir. Hayvan izlerken, potansiyel olarak örtüşen delik keşifler izlemek için bir kez her dakika kalem renkleri değiştirmek yararlı olabilir. Bilgisayar destekli izleme sistemleri doğruluk ve güvenilirlik, idTracker, Ctrax veya traktör, gibi emin olmak kullanılabilir ve birkaç ücretsiz ya da açık kaynak.
Sıkıntı küçük hanım tahlil için kaç kareler erkek girer, erkek kadın ne kadar zaman kapana kısılmış erkek olmadığı durumlarda merkezi Meydanı'nda erkek harcadığını sadece boş silindir için karşılaştırıldığında, ulaşmak için gereken süreyi kaydedilen veri içermelidir , kaç kişi orada silindir, numarayı kaç kez dokundu hayvanlar burun odası ve kazma olaylar kaç kez oluştuğunu genel olarak ve merkezi ile kare olaylardır.
Davranışsal test sabitler:
Tüm davranış testleri gibi ile koşulları arasında ve ortam değişkenleri çalışmanın sonuçları yıkmak değil emin olmak için hayvan çalışma içinde sabit tutulur önemlidir. Görsel, işitsel veya koku uyaranlara Deneysel ortamda neden olabilir davranış değişiklikleri fareler, amaçlanan olup olmadığını ya da değil13. Bu nedenle, fare rahatsız edici dış uyaranlara14korumak için özen gösterilmelidir. Hem arena sıkıntı küçük hanım senaryo için kullanılan ve Barnes labirent sonra her su ile deneme ve ayıklanmış önceki farelerin kalan gösterge bir sonraki deneme etkisi emin olmak için % 70 etanol ile temizlenmelidir. Ayrıca, yatak her sıkıntı küçük hanım tahlil sonra değiştirilmelidir. Veri toplama her zaman verileri gözden geçirin ve doğru analiz emin olmak Denemecileri izin videoya kaydedildi. Araştırmacı bir perdenin arkasında gizli kalması için bir meydan okuma olabilir veya aksi takdirde veriler ancak bu toplarken önünden fareler için bir sabit, oyalama ücretsiz ayarı korumak önemlidir.
Barnes labirent paradigma tasarım ve değişiklikler:
Kullanım Barnes labirent için birden çok yayımlanmış paradigmaları vardır. Ama Barnes labirent eğitim protokolleri genellikle 7-15 gün sonra menzil protokol kısaltılmış. Bazen görev daha zor öğrenme yapmak için eğitim oturumları kesiliyor uzun protokolleri15özledim farklılıkları ortadan kaldırabilirsiniz. Sadece bir ek yük (olduğu gibi orijinal Barnes çalışma) ışık ile kullanılabilir veya diğer öğeleri fareyi kaçış odası3,16girmek için daha fazla motive yapmak için (daha parlak bir ışık, bir fan veya ses gibi) eklenebilir. Bir pilot çalışma sırasında hedef kutusuna girmek için zavallı motivasyon görüyorsanız, bu unsurların eklenmesi sırasında gerçek eğitim düşünülmelidir.
Doğru hedef deliğe giriş bu öğeler büyük olasılıkla daha az hızla gerçekleşir, ancak araştırmacılar bu eklemeler stres-inducing olabilir farkında olması gereken bir çekim gücü. İtici uyarıcılara olup hedef deliğe girmek için motivasyon değerlendirmek için manipüle edilebilir. Bizim çalışma gösterdi o Doğum öncesi etanol olasılığını bir fare ne zaman sadece parlak ışık kullanıldı ve bu olay aslında hedef delik neredeydi öğrenme farklı eğitim süresi boyunca kaçış delik girersiniz üzerinde bir etkisi vardı.
Olsa bulmak o kadar kolay görünüyordu bizim protokol 1-4 günde da görüldüğü gibi fareler delik girmek için çok motive değildi. Ancak, ultrasonik gürültü labirent 5 gün yerleştirildiğinde, puanları fareler bulduktan sonra hedef odası girersiniz olasılığı da dahil olmak üzere çoğu Barnes önlemler geliştirmek. Gürültü ediyor önemli ölçüde yabancı delik araştırmalar sayısını azaltmak mahkemeye 6 ve 7 gün ve 7 gün tarafından hedef (Şekil 2A) bulduktan sonra hiçbir etanol fareler keşfetmek devam etti. Bu labirent öğrenme doğal bir sonucudur mümkün olsa da, hayvanlar Ultrasonik ses giriş sonra daha heyecanlı ve daha az labirent keşfetmek olasılığı ortaya çıktı. Fareler için ödüllendirici bir durum kalmasını odası için araştırmacılar da itici uyarıcılara açmak dikkatli olması gerekir (deliği ve sesi açın) ve hayvan odasında ayrılan miktar için bozulmamış kalmak izin hayvan kaldırmadan önce kurtarma zamanı.
Barnes labirent tasarım öğrenme ve bellek değerlendirmesi üzerinde etkisi olabilir. Geçerli protokol ekstra-labirent ipuçlarını kullanır. Test Oda asimetri ek olarak, dört basit siyah üzerinde beyaz arka plan şekilleri (kare, üçgen, daire, çapraz) posterleri odanın duvarları görsel yardımlar monte edildi. Barnes labirent ile ya da ezelî distal yardımlar test odanın duvarları üzerinde çözülebilir veya bir seri arama strateji kullanılarak çözülebilir. Bu nedenle, yalnızca bir "ilk hedef mesafe delik" ölçüm kullanarak fare labirent çözer ve kayma olmayan yetenekleri17kayma ayırt etmek değil ilgili farklılıklar eksik. Ayrıca ters kare veya hedef önce hataları sayısı araştırdı delik sayısı incelenmesi gibi birden fazla analiz önlemler kullanılmalıdır. Arama Strateji desen da analiz edilebilir.
Farelerin farklı doğuştan suşları değişken performans Barnes labirent, görme keskinliği farklılıkları nedeniyle olabilir. Zavallı görme keskinliği ile fareler bir tür Barnes labirent olarak kullanılmak üzere tercih edilirse, labirent kenarında küçük bir duvar ilavesi thigmotaxis (duvar-sarılma davranış) artırmak ve görsel olmayan arama strateji kullanımını artırmak. Erkekler daha iyi DBA/2J ve C3H/HeJ suşları kadınlara göre performans öğrenme vardı ve her ne kadar sadece erkeklerin geçerli protokolünde kullanılan, C57/Bl6 fareler üzerinde Barnes labirent18bellek cinsiyet farklılıkları görüntülemek için bulundu değil.
Sıkıntı küçük hanım paradigma tasarım ve değişiklikler:
Sıkıntı küçük hanım deneme için önemli bir sınırlama hiçbir şekilde keşif fare dişi fare veya "küçük hanım," boş tüp arenada Merkezi'nde olmasıdır. Bir bırakma mekanizması içerir odası yeniden tasarlama ilginç bir sonraki değişiklikler olur. Prosocial davranış ölçmek için yeni bir değerlendirme olarak sıkıntı içinde küçük hanım bir dezavantajı karşılaştırmalı çalışmalar paradigması kullanarak bulunmamasıdır.
Küçük hanım sıkıntı daha da (başka bir fare ile vakit geçirmek için eğim olarak tanımlanan), sosyallik değerlendirmek için değiştirilmiş olabilir tercih sosyal yenilik (tanıdık bir fare göre bir roman fare araştırmak için eğim), için çiftleşme veya saldırgan (a dişi içinde estrus veya bir roman erkek odasında bindirme) davranışları ve paylaşılan genetik arka planda fedakar davranış eğilimleri (yanıt için kapana kısılmış sigara littermate göre bir kapana littermate etkisi gibi Evrimsel biyoloji konuları fare)19.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Hampden-Sydney Koleji'nde bildirim ve takdir Sean Walden, Zach Leitner, Hunter Lee ve Anton Kheirani Barnes labirent ve sıkıntı içinde küçük hanım deneyler protokollerde test onların katılımı için veriyoruz. Biz de James Foster Randolph-Macon College Barnes labirent ve Randolph-Macon College test alanı sağlamak için Biyoloji bölümü inşası için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Damsel-in-Distress | |||
| 50 mL conical tube | Fisher Scientific | 14-432-22 | Any brand of 50 mL conical tube will work |
| Rubber bands | Sprano Brand | n/a | Size 62, used to keep caps held to plywood |
| hammer | Grainger | 6R252 | Any standard hammer will work |
| nail (size 8D) | Grainger | 4NFE3 | Similarly-sized nails should work just as well |
| opaque, topless plastic box | AcmePlastics | CUT-TO-SIZE-ACRYLIC-CAST-BLACK-SHEET-2025 | Opaque plastic, cut to size (30 cm L x 19 cm W x 3-6 cm H). Step may be added to ensure no more than a 3.5 cm entrance depth for the mouse. |
| video camera (smartphone) | N/A | N/A | Any camera-equipped smartphone will work |
| bite-resistant gloves | Kent Scientific | GLVDYN02 | Any brand offering appropriate protection |
| transparency sheet | Staples | 954145 | Any brand of clear plastic sheet will work, used for scoring |
| Barnes Maze | |||
| Petri Dishes | Corning | 353025 | Spray painted and used as covers for Barnes maze holes |
| Plywood (3/4 in.) | LP Building Products | 22487 | To construct Barnes maze |
| Spray Paint | Krylon | 1274937 | Used to paint petri dish caps black, white paint used to paint plywood |
| Cup Hooks (5/8 in.) | Ace Hardware | 5360615 | 2 used on either side of ventral hole surfaces; Rubber band wraps around hooks to hold cap flat |
| Poster Board | Creatology | n/a | Used at edges of maze as extra cues |
| Light Bulbs | Phillips | n/a | 100W light bulb, used to during the trials |
| Rubber bands | Sprano Brand | n/a | Size 62, used to keep caps held to plywood |
| Ultrasonic noisemaker | Victor mini PestChaser | M753SN | Used as aversive stimuli |
References
- Sunyer, B., Patil, S., Höger, H., Lubec, G. Barnes maze, a useful task to assess spatial reference memory in the mice. Protocol Exchange. 2007, (2016).
- Vorhees, V., Williams, M. T. Assessing Spatial Learning and Memory in Rodents. ILAR Journal. 55 (2), 310-332 (2014).
- Barnes, C. A. Memory deficits associated with senescence: A neurophysiological and behavioral study in the rat. Journal of Comparative and Physiological Psychology. 93 (1), 74-104 (1979).
- Harrison, F. E., Hosseini, A. H., McDonald, M. P. Endogenous anxiety and stress responses in water maze and Barnes maze spatial memory tasks. Behavioural Brain Research. 198 (1), 247-251 (2009).
- Silverman, J. L., Yang, M., Lord, C., Crawley, J. N. Behavioural phenotyping assays for mouse models of autism. Nature Reviews Neuroscience. 11 (7), 490 (2010).
- Bartal, I. B. A., Decety, J., Mason, P. Empathy and pro-social behavior in rats. Science. 334 (6061), 1427-1430 (2011).
- Langford, D. L., et al. Social modulation of pain as evidence for empathy in mice. Science. 312 (5782), 1967-1970 (2006).
- Smith, M. L., Hostetler, C. M., Heinricher, M. M., Ryabinin, A. E. Social transfer of pain in mice. Science Advances. 2 (10), e1600855 (2016).
- Melia, K. R., Ryabinin, A. E., Schroeder, R., Bloom, F. E., Wilson, M. C. Induction and habituation of immediate early gene expression in rat brain by acute and repeated restraint stress. Journal of Neuroscience. 14 (10), 5929-5938 (1994).
- Watanabe, S. Empathy and reversed empathy of stress in mice. Public Library of Science (PloS) One. 6 (8), e23357 (2011).
- Portfors, C. V. Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 46 (1), 28-34 (2007).
- Houlé, K., Abdi, M., Clabough, E. B. D. Acute ethanol exposure during late mouse neurodevelopment results in long term deficits in memory retrieval, but not in social responsiveness. Brain and Behavior. , (2017).
- Sales, G. D., Wilson, K. J., Spencer, K. E., Milligan, S. R. Environmental ultrasound in laboratories and animal houses: A possible cause for concern in the welfare and use of laboratory animals. Laboratory Animals. 22, 369-375 (1988).
- Crabbe, J. C., Walhsten, D., Dudek, B. C. Genetics of mouse behavior: Interactions with laboratory environment. Science. 248, 1670-1672 (1999).
- Attar, A., Liu, T., Chan, W. T. C., Hayes, J., Nejad, M., Lei, K., Bitan, G. A shortened Barnes maze protocol reveals memory deficits at 4-months of age in the triple-transgenic mouse model of Alzheimer's disease. PloS One. 8 (11), (2013).
- Inman-Wood, S. L., Williams, M. T., Morford, L. L., Vorhees, C. V. Effects of prenatal cocaine on Morris and Barnes maze tests of spatial learning and memory in the offspring of C57BL/6J mice. Neurotoxicology and Teratology. 22 (4), 547-557 (2000).
- Harrison, F. E., Reiserer, R. S., Tomarken, A. J., McDonald, M. P. Spatial and nonspatial escape strategies in the Barnes maze. Learning and Memory. 13 (6), 809-819 (2006).
- O'Leary, T. P., Savoie, V., Brown, R. E. Learning, memory and search strategies of inbred mouse strains with different visual abilities in the Barnes maze. Behavioural Brain Research. 216 (2), 531-542 (2011).
- Kaidanovich-Beilin, O., Lipina, T., Vukobradovic, I., Roder, J., Woodgett, J. R. Assessment of social interaction behaviors. Journal of Visualized Experiments. 48, (2011).
