כאן נתאר מודל השתלת orthotopic syngeneic פולשנית של תאים אדנוקרצינומה של הריאה העכבר כמודל זמן – ו בהפחתת עלויות ללמוד סרטן ריאות שאינם קטנים התא.
השימוש העכבר מודלים היא הכרחית עבור לימוד הפתופיזיולוגיה של מחלות שונות. לגבי סרטן ריאות, במספר דגמים זמינים, כולל גנטית מהונדסים מודלים, כמו גם מודלים השתלת. עם זאת, מודלים מהונדס גנטית עכבר הם זמן רב ויקר, ואילו דגמים השתלת orthotopic קשים להתרבות. כאן, שיטת משלוח intratracheal לא פולשנית של תאים סרטניים ריאות כמודל השתלת orthotopic חלופי הוא תיאר. השימוש העכבר ריאות אדנוקרצינומה תאים והנמענים שתל syngeneic מאפשר ללמוד tumorigenesis תחת הנוכחות של מערכת החיסון פעיל מלא. יתר על כן, שינויים גנטיים של גידול תאים לפני השתלת גורם מודל זה גישה לחיסכון בזמן אטרקטיבי לחקור את ההשפעה של גורמים גנטיים על הגידול ועל גידול התא גנים פרופילים בתנאים פיזיולוגיים. באמצעות מודל זה, אנו מציגים את הריאה תאים אדנוקרצינומה אקספרס רמות גבוהות של משתיק קול T-cell מתוכנת מוות-ליגנד 1 (PD-L1) כאשר גדל בסביבה הטבעית שלהם לעומת טיפוח במבחנה.
סרטן הריאות הוא עדיין עד כה הרוצח הגדול ביותר הקשורים לסרטן הן גברים והן נשים1. ואכן, על פי האגודה האמריקנית לסרטן, כל שנה יותר אנשים מתים מסרטן הריאות מאשר של השד, הערמונית, המעי הגס סרטן ביחד1 עד לאחרונה, רוב החולים הסובלים סרטן ריאות תאים שאינם קטנים (NSCLC), המהווה סוג המשנה הנפוץ ביותר של סרטן ריאות, טופלו עם פלטינה מבוססי כימותרפיה באווירה השורה הראשונה, בעיקר עם התוספת של אנגיוגנזה מעכבי2. רק תת-ערכה של חולים בנמלים מוטציות oncogenic הקולטן גורם הגדילה באפידרמיס (EGFR), קינאז לימפומה אנפלסטית (ALK), או ROS1, ולא יכולים להיות מטופלים עם זמינות מיקוד סמים3,4. עם כניסתו של מעכבי המערכת החיסונית במחסום, שצמחו תקווה חדשה לחולי סרטן ריאות, אמנם עד עכשיו, רק 20-40% מהחולים מגיבים לטיפול מערכת החיסון5. לפיכך, בהמשך המחקר נדרש כדי לשפר את התוצאה על ידי כוונון מחסום המערכת החיסונית טיפול חוקרים את אפשרויות הטיפול combinatory.
ללמוד סרטן ריאות, מגוון רחב של מודלים פרה זמינים, כולל דגמים ספונטנית מופעלות על ידי כימיקלים, חומרים מסרטנים ועכבר מהונדס גנטית מודלים (GEMM) בו גידולים autochthonous להתעורר בעקבות הפעלת מותנה oncogenes ו/או איון של הגידול משתיק קול גנים6,7,8. מודלים אלה הם בעלי ערך מסוים כדי לחקור תהליכי יסוד בהתפתחות סרטן ריאות, אבל הם גם דורשים עכברים נרחב רבייה, ניסויים הם זמן רב. לכן, מחקרים רבים הערכת פוטנציאל מעכבי את היתרון של מודלים xenograft תת עורית (נגזר החולה) שבו שורות תאים של סרטן ריאות אדם subcutaneously מוזרק עכברים immunodeficient9.
דגמים אלה, micromilieu של גידולים אינו מיוצג בהתאם; לכן, החוקרים להשתמש גם מודלים השתלת orthotopic, שבו תאים סרטניים שהם מזריקים לווריד, intrabronchially או ישירות לתוך הריאות parenchyma10,11,12,13, 14,15,16,17,18,19,20. כמה שיטות אלה הן מבחינה טכנית מאתגר, קשה להיות מועתק, וזקוקים אימונים אינטנסיביים של החוקרים. 21 . שינינו orthotopic לא פולשנית, intratracheal שיטת השתלת בעכברים immunocompetent, איפה גידולים לפתח בתוך 3-5 שבועות, נספח למחזהו משמעותי גידולים אנושיים, לזירוז הביטוי של T-cell משתיק קול מתוכנת מוות-ליגנד 1 (PD-L1) על תאים סרטניים. 11 , 12 , 20 השימוש של תאים סרטניים העכבר נגזר GEMM מודלים ומאפשר עכברים הנמען syngeneic לומד נכונה של microenvironment הגידול כולל תאים חיסוניים. יתר על כן, ג’ין עריכה כלים כמו CRISPR/Cas9 טכנולוגיה22 יכול לשמש במבחנה לפני השתלת המאפשרת החקירה של ההשפעה של גורמים גנטיים בתוך הריאות tumorigenesis.
במחקר ריאות הפיזיולוגיות ואירועים פיפטות בריאה, intratracheal פולשני ו פולשני שיטות צנרור החדרה של ריאגנטים שונים נמצאים בשימוש נרחב26,27,28,29 ,30,31,32. בתחום הסרטן, חוקרים …
The authors have nothing to disclose.
המחברים רוצה להודות Safia Zahma עזרה עם הכנת הרקמה מקטעים.
mouse lung adenocarcinoma cell line | isolated in house | ||
C57Bl/6 mice | F1 of the cross of the two backgrounds may be used (8-12 weeks) | ||
129S mice | |||
RPMI 1640 Medium | Life Technologies | 11544446 | |
Fetal Calf Serum | Life Technologies | 11573397 | |
Penicillin/Streptomycin Solution | Life Technologies | 11548876 | |
L-Glutamine | Life Technologies | 11539876 | |
Trypsin, 0.25% (1X) with EDTA | Life Technologies | 11560626 | |
UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0 | Thermo Fisher Scientific | 15575020 | |
Ketasol (100 mg/ml Ketamine) | Ogris Pharma | 8-00173 | |
Xylasol (20 mg/ml Xylazine) | Ogris Pharma | 8-00178 | |
BD Insyste (22GA 1.00 IN) | BD | 381223 | |
Blunt forceps | Roboz | RS8260 | |
Leica CLS150 LED | Leica | 30250004 | Fibre Light Illuminator |
Student Iris Scissors | Fine Science Tools | 91460-11 | |
DNase I (RNase-Free) | New England Biolabs | M0303S | |
Collagenase Type I | Life Technologies | 17100017 | |
ACK Lysing Buffer | Lonza | 10-548E | |
CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoclonal Antibody (MIH5), PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-5982-82 | |
Rat IgG2a kappa Isotype Control, PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-4321-82 |