Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Cancer Research
Click here for the English version

Cancer Research

Orthotopic השתלת ריאות Syngeneic תאים אדנוקרצינומה ללמוד ביטוי PD-L1

Published: January 19, 2019 doi: 10.3791/58101
Automatic Translation
1, 2, 2, 2, 2, 1,2
1Department of Physiology, Center of Physiology and Pharmacology & Comprehensive Cancer Center (CCC), Medical University of Vienna, 2Ludwig Boltzmann Institute for Cancer Research (LBI-CR)

Summary

כאן נתאר מודל השתלת orthotopic syngeneic פולשנית של תאים אדנוקרצינומה של הריאה העכבר כמודל זמן - ו בהפחתת עלויות ללמוד סרטן ריאות שאינם קטנים התא.

Abstract

השימוש העכבר מודלים היא הכרחית עבור לימוד הפתופיזיולוגיה של מחלות שונות. לגבי סרטן ריאות, במספר דגמים זמינים, כולל גנטית מהונדסים מודלים, כמו גם מודלים השתלת. עם זאת, מודלים מהונדס גנטית עכבר הם זמן רב ויקר, ואילו דגמים השתלת orthotopic קשים להתרבות. כאן, שיטת משלוח intratracheal לא פולשנית של תאים סרטניים ריאות כמודל השתלת orthotopic חלופי הוא תיאר. השימוש העכבר ריאות אדנוקרצינומה תאים והנמענים שתל syngeneic מאפשר ללמוד tumorigenesis תחת הנוכחות של מערכת החיסון פעיל מלא. יתר על כן, שינויים גנטיים של גידול תאים לפני השתלת גורם מודל זה גישה לחיסכון בזמן אטרקטיבי לחקור את ההשפעה של גורמים גנטיים על הגידול ועל גידול התא גנים פרופילים בתנאים פיזיולוגיים. באמצעות מודל זה, אנו מציגים את הריאה תאים אדנוקרצינומה אקספרס רמות גבוהות של משתיק קול T-cell מתוכנת מוות-ליגנד 1 (PD-L1) כאשר גדל בסביבה הטבעית שלהם לעומת טיפוח במבחנה.

Introduction

סרטן הריאות הוא עדיין עד כה הרוצח הגדול ביותר הקשורים לסרטן הן גברים והן נשים1. ואכן, על פי האגודה האמריקנית לסרטן, כל שנה יותר אנשים מתים מסרטן הריאות מאשר של השד, הערמונית, המעי הגס סרטן ביחד1 עד לאחרונה, רוב החולים הסובלים סרטן ריאות תאים שאינם קטנים (NSCLC), המהווה סוג המשנה הנפוץ ביותר של סרטן ריאות, טופלו עם פלטינה מבוססי כימותרפיה באווירה השורה הראשונה, בעיקר עם התוספת של אנגיוגנזה מעכבי2. רק תת-ערכה של חולים בנמלים מוטציות oncogenic הקולטן גורם הגדילה באפידרמיס (EGFR), קינאז לימפומה אנפלסטית (ALK), או ROS1, ולא יכולים להיות מטופלים עם זמינות מיקוד סמים3,4. עם כניסתו של מעכבי המערכת החיסונית במחסום, שצמחו תקווה חדשה לחולי סרטן ריאות, אמנם עד עכשיו, רק 20-40% מהחולים מגיבים לטיפול מערכת החיסון5. לפיכך, בהמשך המחקר נדרש כדי לשפר את התוצאה על ידי כוונון מחסום המערכת החיסונית טיפול חוקרים את אפשרויות הטיפול combinatory.

ללמוד סרטן ריאות, מגוון רחב של מודלים פרה זמינים, כולל דגמים ספונטנית מופעלות על ידי כימיקלים, חומרים מסרטנים ועכבר מהונדס גנטית מודלים (GEMM) בו גידולים autochthonous להתעורר בעקבות הפעלת מותנה oncogenes ו/או איון של הגידול משתיק קול גנים6,7,8. מודלים אלה הם בעלי ערך מסוים כדי לחקור תהליכי יסוד בהתפתחות סרטן ריאות, אבל הם גם דורשים עכברים נרחב רבייה, ניסויים הם זמן רב. לכן, מחקרים רבים הערכת פוטנציאל מעכבי את היתרון של מודלים xenograft תת עורית (נגזר החולה) שבו שורות תאים של סרטן ריאות אדם subcutaneously מוזרק עכברים immunodeficient9.

דגמים אלה, micromilieu של גידולים אינו מיוצג בהתאם; לכן, החוקרים להשתמש גם מודלים השתלת orthotopic, שבו תאים סרטניים שהם מזריקים לווריד, intrabronchially או ישירות לתוך הריאות parenchyma10,11,12,13, 14,15,16,17,18,19,20. כמה שיטות אלה הן מבחינה טכנית מאתגר, קשה להיות מועתק, וזקוקים אימונים אינטנסיביים של החוקרים. 21 . שינינו orthotopic לא פולשנית, intratracheal שיטת השתלת בעכברים immunocompetent, איפה גידולים לפתח בתוך 3-5 שבועות, נספח למחזהו משמעותי גידולים אנושיים, לזירוז הביטוי של T-cell משתיק קול מתוכנת מוות-ליגנד 1 (PD-L1) על תאים סרטניים. 11 , 12 , 20 השימוש של תאים סרטניים העכבר נגזר GEMM מודלים ומאפשר עכברים הנמען syngeneic לומד נכונה של microenvironment הגידול כולל תאים חיסוניים. יתר על כן, ג'ין עריכה כלים כמו CRISPR/Cas9 טכנולוגיה22 יכול לשמש במבחנה לפני השתלת המאפשרת החקירה של ההשפעה של גורמים גנטיים בתוך הריאות tumorigenesis.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל ניסוי הפרוטוקולים כמתואר להלן ההנחיות אתית ואושרו על-ידי האוסטרי הפדרלי משרד המדע, מחקר וכלכלה.

הערה: פרוטוקול כאן מתאר מודל השתלת orthotopic של תאים אדנוקרצינומה של הריאה העכבר לתוך נמענים syngeneic. תאים עשויים להיות מבודד נושאות הריאות של קראסLSL-G12D: p53חליל/חליל (KP) עכברים7,18, אם הוא זמין ללא צורך במיקור חוץ, מושתל לתוך עכברים מאותו רקע ומין. אם תאים נמסרו מקבוצות אחרות מחקר רקע המדויק אינו ידוע, אנו ממליצים על השימוש הדור F1 של הכלאה בין עכברים C57BL/6 ו- 129S כמו השתלת הנמענים כדי להבטיח עמידות מקסימאלית.

1. תא הכנה

  1. KP הזרע תאים 24 שעות לפני השתלת כ 50% confluency ב RPMI בתוספת עגל עוברית 10% סרום (FCS), גלוטמין, ואת פניצילין U/mL 100 100 סטרפטומיצין μg/mL (ןלהל בינוני תרבות רגיל). דגירה של תרביות תאים ב- 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2ו בסביבות 95% לחות יחסית.
  2. ביום הבא, קציר תאים באמצעות 1 מ"ל של טריפסין-EDTA (0.05% בתוך באגירה פוספט תמיסת מלח [PBS]) עבור 5 דקות לכל צלחת 10 ס מ ו, לאחר מכן, resuspend מנותקת תאים עם 9 מ של תקן תרבות בינוני.
  3. לספור את התאים hemocytometer ולהעביר את מספר התאים הדרושים עבור הניסויים בשפופרת צנטרפוגה חרוט 50-mL.
    הערה: מומלץ משתילים בין 2.5 x 105 KP עונה 1 פרק 106 תאי עכבר, אבל זה יכול להיות מותאם מבוסס על הצרכים של החוקר.
  4. לאחר מכן, centrifuge את התאים עבור 5 דקות ב x 300 גרם, וארוקן את תגובת שיקוע, באמצעות פיפטה של, resuspend את התאים על צפיפות של 2 x 107/mL (לאינהלציה של עונה 1 פרק 106 KP תאי עכבר) בסרום, תרופתיים RPMI , בתוספת חומצה ethylenediaminetetraacetic 0.01 M (EDTA).
  5. לשמור את התאים על הקרח עד השתלת.

2. Orthotopic השתלת באמצעות משלוח Intratracheal

  1. תרופת הרגעה עכבר (מגיל 8-12 שבועות) על ידי זריקה תת עורית של תערובת של קטאמין (100 mg/kg של משקל גוף) חריגות השירותים הווטרינריים (10 mg/kg של משקל גוף).
  2. בזמן ההרדמה מגדיר, להכין את הצנתר לצנרור. לכן, להקהות את המחט של צנתר על ידי חיתוך פשוט הסוף עם מספריים. לאחר מכן, דחף את הצנתר לחלוטין מעל קצה המחט.
  3. לאשר את רמת ההרדמה המתאימה על ידי פדלים רפלקס באמצעות הבוהן המשרד צובט ולהחיל אופטלמולוגיות משחה לעיניים.
  4. לתקן את העכבר על פלטפורמת צנרור (איור 1 א') על-ידי חיבור החותכות העליונות שלה על התפר, ובדקו כי החזה אנכי מתחת התפר.
  5. במקום כבל סיב אופטי סיבים בין כאשר רגליו הקדמיות כדי להאיר את החזה (איור 1B).
  6. בזהירות פתח את הפה של העכבר, להוציא את הלשון באמצעות מלקחיים שטוח מחוטא. חפשו את פליטת אור לבן כדי לאתר את הגרון והמחש את הסחוסים האפיגלוטיס ו- arytenoid (איור 1C).
  7. לאחר הפתיחה של קנה הנשימה נראה בבירור, החלק בעדינות את הצנתר לתוך קנה הנשימה (איור 1D). האורך של הקטטר שיוכנס תלוי הגיל והגודל של החיה, מאז זה לא צריך להיות מתחת ההסתעפות להבטחת ריפודי כתופיים של הריאה תאים אדנוקרצינומה בתוך הריאות. להסיר במהירות את המחט של הקטטר.
  8. אור לבן זורח דרך הקטטר (איור 1E) מציינים את המיקום הנכון של הקטטר לקנה. על מנת לוודא את המיקום של הקטטר לקנה, לצרף מזרק 1-mL המכיל מים הצנתר. המים במזרק ינוע במהירות מעלה מטה לפי הנשימה (איור 1F).
    הערה: שלב זה יכול להיות מושמט על ידי חוקרים מנוסים.
  9. לחמם את התליה תא על-ידי החזקת את הצינורית ביד, לאחר מכן, פיפטה µL 50 של ההשעיה המכיל 1 x 106 תאים (מספר התאים עשוי להיות משתנה) אל מרכז ה-hub קטטר. ההשעיה aspirated מיד. לאחר מכן, לצרף מזרק 1 מ"ל, לוותר על 300 µL של אוויר כדי להבטיח התפלגות אחידה בתוך הריאות.
  10. בעדינות להסיר את הצנתר להסיר את העכבר פלטפורמת צנרור, שים את זה על כרית חום עד זה יחלים מן ההרדמה.

3. ריאות הכנה Cytometry זרימה

  1. נקודת הקצה ניסיוני הרצוי, לסמם את העכבר על ידי זריקה תת עורית של תערובת של קטאמין (100 mg/kg של משקל גוף) חריגות השירותים הווטרינריים (10 mg/kg של משקל גוף), המתת חסד זה מאת נקע בצוואר הרחם.
  2. להשרות את הגווייה 70% אתנול ולאבטח את העכבר על קרש חיתוך באמצעות הקלטת.
  3. עושים חתך הגחון קו האמצע, היפוך בעדינות על העור כדי לחשוף את שרירי בית החזה הקיר ואת על אברי הבטן. לנקב את הסרעפת וחותכים את הצלעות עם מספריים כדי לחשוף את חלל בית החזה.
  4. Perfuse הריאות 3 x 6-8 מ של PBS קר כקרח דרך החדר הימני באמצעות מחט 27 G לאחר חיתוך פתח קטן החדר השמאלי כדי לאפשר לדם לעזוב. יש לנקות את הריאות של הדם, להפוך לבן לחלוטין.
  5. להוציא את הריאות, מינצ האונות לחתיכות קטנות בעזרת מספריים. להעביר את חתיכות ריאות צינור microcentrifuge 2 מ"ל, דגירה זה ב- 1.5 מ של מאגר עיכול בריאה (RPMI, 5% FCS, collagenase U/mL 150 ואני DNase U/mL 50 אני).
  6. דגירה הריאה חתיכות 30-60 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, עם טלטול מתמיד.
  7. העברת התליה תא הריאות דרך מסננת תא מיקרומטר 70 לתוך צינור 50 מ. נקה את מסננת עם גב מזרק 10-mL סטרילי ולשטוף את מסננת 15 מ של PBS עם 2% FCS.
  8. Centrifuge התאים ב x 300 גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C, וארוקן את תגובת שיקוע. Resuspend תאי 1 מ"ל אמוניום כלוריד-אשלגן (ACK) מאגר lysing, דגירה אותם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר במשך פירוק של אריתרוציטים שיורית.
  9. Centrifuge התאים ב x 300 גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C, resuspend תאי 1 מ"ל של PBS עם 2% FCS והמשך עם פרוטוקול ההגדלה הרצויה עבור cytometry זרימה23.
    הערה: לחלופין, ייתכן resuspended התאים ב RPMI המכיל 30% FCS ו-10% דימתיל סולפוקסיד קפוא באמצעות מיכל ההקפאה לניתוח בשלב מאוחר יותר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

השתמשנו המודל השתלת orthotopic ויה intratracheal גידול התא משלוח כדי לבדוק אם הגידול microenvironment מעוררת את הביטוי PD-L1. לכן, אנחנו מבודדים העכבר ריאות AC תאים מהמודל KP autochthonous (KP תאים), 10 שבועות בעקבות הגידול אינדוקציה דרך לבטא-Cre-recombinase משלוח אדנו (Ad.Cre)24. לאחר מכן, סיווגנו את הריאה תאים AC באמצעות חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP)-ביטוי lentivirus25 ו orthotopically engrafted אותם לתוך עכברים immunocompetent, syngeneic ויה intratracheal משלוח. כדי לאמת את הדגם, אנו מושתלים כמויות שונות של תאים סרטניים, לבצע ניתוח הישרדות. כצפוי, ההישרדות של עכברים הנמען היה בקורלציה מספר התאים engrafted, הפעם הישרדות היה בין 2 שבועות עבור נמענים של 2 x 106 תאים ובסביבות 10 שבועות עבור נמענים של 2.5 x5 10 תאים (איור 2 א). כאשר הריאות היו גזור בעקבות מותו של העכברים השתמשו לצורך ניתוח הישרדות, הבחנו ריפודי כתופיים של הגידול גושים ברחבי כל האונות של הריאות (איור 2B). לגבי המורפולוגיה של הגידולים, השווינו גידולים מושתל עם קראס autochthonousG12D-מונע גידולים7 ולא הבחינה הבדל ברור (איור 2C).

ללמוד את הביטוי PD-L1 של תאים סרטניים המושתלים, אנחנו מורדמים עכברים הנמען 3 שבועות לאחר ההשתלה של תאים6 עונה 1 פרק 10, הריאות לקראת ניתוח cytometric תזרים. בודק את הביטוי PD-L1 ו gating עבור תאים GFP+ , זיהינו שינוי משמעותי בתאים חיובי PD-L1+ , לעומת תאים תרבותי במבחנה (איור דו-ממדי). לפיכך, אנו תוקף מודל זה מודל לחיסכון בזמן לבדיקת שינויים בביטוי הגנים תאים סרטניים בנסיבות הפיזיולוגיות, אשר, למשל, יכול לשמש כדי לחקור את ההשפעות של שינויים גנטיים או טיפול תרופתי ב- PD-L1 ביטוי בתאי ריאות AC.

Figure 1
איור 1 : השתלת תאי גידול ריאה Intratracheal. (א) צנרור מראה מתוצרת בית זה לוח פלטפורמה באמצעות מכסה פוליסטירן, שני צינורות 15 מ"ל בתפר משי 6.0. (B) הכבל סיבים אופטיים בוים בחזה של עכבר ו- (ג) לאחר הוצאת בעדינות את הלשון, ניתן לראות אור לבן הנפלטים הפתיחה של קנה הנשימה. השמה נכונה (D ו- E) של העכבר הוא הצביע על ידי אור זוהר דרך הקטטר, יכול להיות מאומתים (F) על ידי תנועת המים שיהיה ממוקם מזרק 1 מ"ל. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2 : מורפולוגיה של הריאות העכבר בעקבות syngeneic, intratracheal השתלת תאי ריאות AC- (א) לוח זה מציג ניתוח קפלן מאייר של העכברים הנמען בעקבות השתלת orthotopic את כמויות שונות של תאים סרטניים. הכמויות של תאים סרטניים המשמש למשלוח intratracheal מצוינים במקרא. (B) זוהי תמונה ייצוגית של ריאה של תאים סרטניים עכבר הנמען. המוצג הוא הריאות של עכבר קיבל 5 x 105 תאים, נפטרו 43 ימים בעקבות השתלת. (ג) לוח זה מראה על hematoxylin אאוזין מכתים של המקטע ריאות של גידולים autochthonous 10 שבועות בעקבות משלוח Ad.Cre (החלונית הימנית), 6 שבועות בעקבות השתלת את orthotopic של 5 x 105 תאים סרטניים (לוח הנכון), כולל של הגדלה גבוהה יותר של האזורים המצוין (למטה). (ד) ה PD-L1 ביטוי נמדדה על ידי cytometry זרימה ב GFP+ KP תאים בעקבות טיפוח במבחנה בתנאים סטנדרטיים (לפני ההשתלה, אדום), לאחר השתלת orthotopic ובידוד של העכבר הריאות 3 שבועות engraftment הבאים (לאחר ההשתלה, כחול). עכברוש IgG2a PE-Cyanine7 שימש פקד isotype. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

במחקר ריאות הפיזיולוגיות ואירועים פיפטות בריאה, intratracheal פולשני ו פולשני שיטות צנרור החדרה של ריאגנטים שונים נמצאים בשימוש נרחב26,27,28,29 ,30,31,32. בתחום הסרטן, חוקרים משתמשים את intratracheal (ולא תוך-אפי) החדרה של Cre-recombinase-הבעת ' וירוסים להציג סומאטית מוטציות בתאי אפיתל ריאות. המינהל של Ad.Cre או lentivirus מאפשר את הפעלת מותנה oncogenic K-ras בעכברים קראס-LSL-G12D, יחד עם הסתרה באמצעות של p53 בתאים transduced, כאשר עכברים מובאים עם עכברים p53-floxed7. האפשרות ללמוד ריאות tumorigenesis מן השלב המוקדם עד מותו של בעל החיים, כמו גם דמיון גבוה בין גידולים העכבר גידולים אנושיים, הופך את המודלים האלה מאוד פופולרי. עם זאת, מנקודת מבט מעשית, מודל זה דורש העכבר נרחב הרבייה ללמוד שונים אחרים, וזה ב קצת אחרים, ניסויים לוקח שנה מן הגידול אינדוקציה עד הקצה ניסיוני. פעולה זו דורשת העכבר מוגברת שטח ועכבר, לפיכך, עלויות עבור דיור.

אפשרות לתמרן בקלות תאים סרטניים במבחנה באמצעות טכנולוגיית CRISPR-Cas922 עושה מודלים השתלת orthotopic חלופה מהירה לחקור את ההשפעה של הגנים שנבחרו על הגידול ופרופילים ביטוי הגידול. ניתן להשתמש בתיוג של תאי הגידול עבור ניטור בזמן אמת של הגידול באמצעות תאים חיים imagers או למיון תאים סרטניים על פי תגיות שלהם. זה גם מאפשר כימות קל של תאים סרטניים (קרי, נטל הגידול) לפי תוויות שלהם. הוקמה לאחר, שיטה זו מסירה תא הגידול היא מאוד לשחזור. לעומת השתלת orthotopic דרך הזנב הווריד משלוח, לתאי הגידול מועברות ישירות אל הסביבה הטבעית שלהם בריאות, ואילו חשיפה דם ורכיביו עשוי לשנות מאפייני תא הגידול. עוד יותר, ההשפעות של גנים מניפולציה על הגידול הישרדות cell הדם, extravasation לריאות אינם ברורים, עלול לגרום שינויים תלויי-גנוטיפ כמות התאים מועברים אל הריאות.

במודל המתוארים כאן, גידולים להתפשט באופן סימטרי בכל הריאה. זה מאפשר את נפרד קציר וניתוח של נגעים שונים, למשל, אונה אחת יכולה להיות נתונה לניתוח cytometry זרימה כמתואר לעיל, ואילו האונה אחר יכול לשמש לניתוח immunohistochemical, הכנה lysate הריאה, ועוד. גדלים גידולים תוצאה מותו של עכבר הנמען בתוך 3-10 שבועות לאחר הלידה intratracheal, תלויים מספר התאים בשימוש. זה מאפשר החוקר להתאים את מספר התאים המושתלים לצרכי הפרט, ולאפשר הדומיננטיים תא הגידול יותר וחשיפה גידול התא microenvironment. מצד שני, מספר תאים גבוה יותר עשוי להיות הרצוי ללימודי תרופתי לקצר את תקופת משלוח סמים.

הוקמה לאחר, הממשל intratracheal של תאים סרטניים הוא מאוד לשחזור. עם זאת, כמה נקודות קריטיות צריך להיחשב בעת ביצוע הליך זה. ראשית, זהירות יש לנקוט כדי למנוע נזק לרקמות בעת ועקרו מבתיהם הלשון עם המלקחיים, ובעיקר, כאשר מוכנס הצנתר. את המיקום של הקטטר, זה חיוני כי החוקר ניתן לראות בבירור את האור הלבן כדי לאתר את הפתיחה של קנה הנשימה. למרות זאת, בטעות, הצנתר יכול להיות בקלות מוכנס לתוך הוושט juxtaposed. לכן, מומלץ תמיד לבדוק את המיקום הנכון של הקטטר לקנה כמתואר לעיל. זה גם חיוני כדי למנוע הצנתר כדי עמוק (קרי, הקטטר להניחן מתחת ההסתעפות הסימפונות). זה מבטיח ריפודי כתופיים תאי ריאות ומכאן גידולים ברחבי הריאות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

המחברים רוצה להודות Safia Zahma עזרה עם הכנת הרקמה מקטעים.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
mouse lung adenocarcinoma cell line isolated in house
C57Bl/6 mice F1 of the cross of the two backgrounds may be used (8-12 weeks)
129S mice
RPMI 1640 Medium Life Technologies 11544446
Fetal Calf Serum Life Technologies 11573397
Penicillin/Streptomycin Solution Life Technologies 11548876
L-Glutamine Life Technologies 11539876
Trypsin, 0.25% (1x) with EDTA Life Technologies 11560626
UltraPure 0.5 M EDTA, pH 8.0 Thermo Fisher Scientific 15575020
Ketasol (100 mg/mL Ketamine) Ogris Pharma 8-00173
Xylasol (20 mg/mL Xylazine) Ogris Pharma 8-00178
BD Insyste (22 GA 1.00 IN) BD 381223
Blunt forceps Roboz RS8260
Leica CLS150 LED Leica 30250004 Fibre Light Illuminator
Student Iris Scissors Fine Science Tools 91460-11
DNase I (RNase-Free) New England Biolabs M0303S
Collagenase Type I Life Technologies 17100017
ACK Lysing Buffer Lonza 10-548E
CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoclonal Antibody (MIH5), PE-Cyanine7 eBioscience 25-5982-82
Rat IgG2a kappa Isotype Control, PE-Cyanine7 eBioscience 25-4321-82

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2018. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).
  2. Zappa, C., Mousa, S. A. Non-small cell lung cancer: current treatment and future advances. Translational Lung Cancer Research. 5 (3), 288-300 (2016).
  3. Dolly, S. O., Collins, D. C., Sundar, R., Popat, S., Yap, T. A. Advances in the Development of Molecularly Targeted Agents in Non-Small-Cell Lung. Drugs. 77 (8), 813-827 (2017).
  4. Stinchcombe, T. E. Targeted Therapies for Lung Cancer. Cancer Treatment Research. 170, 165-182 (2016).
  5. Brody, R., et al. PD-L1 expression in advanced NSCLC: Insights into risk stratification and treatment selection from a systematic literature review. Lung Cancer. 112, 200-215 (2017).
  6. Safari, R., Meuwissen, R. Practical use of advanced mouse models for lung cancer. Methods in Molecular Biology. 1267, 93-124 (2015).
  7. DuPage, M., Dooley, A. L., Jacks, T. Conditional mouse lung cancer models using adenoviral or lentiviral delivery of Cre recombinase. Nature Protocols. 4 (7), 1064-1072 (2009).
  8. Kwon, M. C., Berns, A. Mouse models for lung cancer. Molecular Oncology. 7 (2), 165-177 (2013).
  9. Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).
  10. Chen, X., et al. An orthotopic model of lung cancer to analyze primary and metastatic NSCLC growth in integrin alpha1-null mice. Clinical & Experiment Metastasis. 22 (2), 185-193 (2005).
  11. Kang, Y., et al. Development of an orthotopic transplantation model in nude mice that simulates the clinical features of human lung cancer. Cancer Science. 97 (10), 996-1001 (2006).
  12. Kang, Y., et al. Proliferation of human lung cancer in an orthotopic transplantation mouse model. Experimental and Therapeutic. 1 (3), 471-475 (2010).
  13. Kuo, T. H., et al. Orthotopic reconstitution of human small-cell lung carcinoma after intravenous transplantation in SCID mice. Anticancer Research. 12 (5), 1407-1410 (1992).
  14. Li, B., et al. A novel bioluminescence orthotopic mouse model for advanced lung cancer. Radiation Research. 176 (4), 486-493 (2011).
  15. Mase, K., et al. Intrabronchial orthotopic propagation of human lung adenocarcinoma--characterizations of tumorigenicity, invasion and metastasis. Lung Cancer. 36 (3), 271-276 (2002).
  16. McLemore, T. L., et al. Novel intrapulmonary model for orthotopic propagation of human lung cancers in athymic nude mice. Cancer Research. 47 (19), 5132-5140 (1987).
  17. Tsai, L. H., et al. The MZF1/c-MYC axis mediates lung adenocarcinoma progression caused by wild-type lkb1 loss. Oncogene. 34 (13), 1641-1649 (2015).
  18. Winslow, M. M., et al. Suppression of lung adenocarcinoma progression by Nkx2-1. Nature. 473 (7345), 101-104 (2011).
  19. Zou, Y., Fu, H., Ghosh, S., Farquhar, D., Klostergaard, J. Antitumor activity of hydrophilic Paclitaxel copolymer prodrug using locoregional delivery in human orthotopic non-small cell lung cancer xenograft models. Clinical Cancer Research. 10 (21), 7382-7391 (2004).
  20. Buckle, T., van Leeuwen, F. W. Validation of intratracheal instillation of lung tumour cells in mice using single photon emission computed tomography/computed tomography imaging. Lab Animal. 44 (1), 40-45 (2010).
  21. Berry-Pusey, B. N., et al. A semi-automated vascular access system for preclinical models. Physics in Medicine & Biology. 58 (16), 5351-5362 (2013).
  22. Ran, F. A., et al. Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. Nature Protocols. 8 (11), 2281-2308 (2013).
  23. Singer, B. D., et al. Flow-cytometric method for simultaneous analysis of mouse lung epithelial, endothelial, and hematopoietic lineage cells. American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (9), L796-L801 (2016).
  24. Moll, H. P., et al. Afatinib restrains K-RAS-driven lung tumorigenesis. Science Translational Medicine. 10 (446), (2018).
  25. Campeau, E., et al. A versatile viral system for expression and depletion of proteins in mammalian cells. PLoS One. 4 (8), e6529 (2009).
  26. Gui, L., Qian, H., Rocco, K. A., Grecu, L., Niklason, L. E. Efficient intratracheal delivery of airway epithelial cells in mice and pigs. American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 308 (2), L221-L228 (2015).
  27. Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. Direct tracheal instillation of solutes into mouse lung. Journal of Visualized Experiments. (42), e1941 (2010).
  28. Lin, Y. W., et al. Pharmacokinetics/Pharmacodynamics of Pulmonary Delivery of Colistin against Pseudomonas aeruginosa in a Mouse Lung Infection Model. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (3), (2017).
  29. Wegesser, T. C., Last, J. A. Lung response to coarse PM: bioassay in mice. Toxicology and Applied Pharmacology. 230 (2), 159-166 (2008).
  30. Cai, Y., Kimura, S. Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung. Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).
  31. Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system. Journal of Visualized Experiments. (93), e52261 (2014).
  32. Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice. Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).

Tags

חקר הסרטן גיליון 143 סרטן ריאות תא חדרים-קטן השתלת orthotopic פולשנית syngeneic PD-L1 משלוח intratracheal
Orthotopic השתלת ריאות Syngeneic תאים אדנוקרצינומה ללמוד ביטוי PD-L1
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moll, H. P., Mohrherr, J.,… More

Moll, H. P., Mohrherr, J., Breitenecker, K., Haber, M., Voronin, V., Casanova, E. Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression. J. Vis. Exp. (143), e58101, doi:10.3791/58101 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter