치료 약물은 중요 한 질병에 항생제의 동위 원소 희석 HPLC-MS/MS에 의해 Monitoring 다중화
Summary
여기 선물이 집중 치료 단위, 즉 cefepime, meropenem, ciprofloxacin, moxifloxacin, linezolid, 및 piperacillin에서에서 자주 사용 되는 항생제의 정량화를 위한 탠덤 질량 분석 기반 프로토콜.
Abstract
특히 병원 항생제 관리 프로그램의 구현에 관한 많은 임상 시설에서 항생제의 치료 약물 모니터링에 대 한 늘어나는 수요를 있다.
현재 작업에서는 cefepime, meropenem, ciprofloxacin, moxifloxacin, linezolid, 및 일반적으로 사용 되는 piperacillin의 정량화에 대 한 다중-고성능 액체 크로마토그래피 탠덤의 질량 분석 (HPCL-MS/MS) 프로토콜 소개 집중 치료 단위에 항생제입니다. 메서드는 이전 유럽 약 기관의 지침에 따라 포괄적으로 검증 된다.
빠른 샘플 정리 후에 analytes는 4 분 이내 C8 역 상 HPLC 열에 분리 하 고 해당 안정 동위 원소 라는 내부 표준 여러 반응에 분무 이온화 (ESI +) 질량 분석에서 정량 시간 모니터링 (MRM)입니다. 제시 방법은 간단한 계측 균일 한 컬럼에 조건 설정, 임상 실험실에서 매일 하 고 강력한 항생제 치료 약물 모니터링에 대 한 허용을 사용 합니다. 보정 곡선 함으로써 민감한 박테리아 및 피크 농도 (C최대) bolus로 가져온 최소 억제 농도 (MIC) 가까이 항생제 금액을 포함 한 pharmacokinetic 농도 범위에 걸쳐 관리 식이요법입니다. 샘플 정리 하기 전에 혈 청 희석이 필요 없이 관리 항생제에 대 한 곡선 아래의 영역 여러 측정을 통해 얻어질 수 있다.
Introduction
항생제는 의학의 실천에 혁명을, 비록 심각한 세균 감염 병 적 상태 및 중요 한 질병1사망률의 주요 원인이 남아 있습니다. 이와 관련, 적절 한 복용량에 적합 한 조직과의 프롬프트 관리 질병 통제2최고 중요성 이다.
증거의 성장 몸은 넓 스펙트럼 항생제와 경험적 치료 환자 집단의 복잡도와 점점 더 문제가 되고있다 보여줍니다. 이것은 특히 집중 치료 단위 (ICU)에 대 한 사실 어디 키 pharmacokinetic (PK) 매개 변수의 엄청난 간 개별 다양성은 자주 관찰3,4. 따라서, 중 환자 실 환자 부족 치료 성공을5,6의 위험 치료 하위 레벨의 절박 한 위험이 있습니다. 그럼 다시, 환자는 심각한 부작용 없이 임상 혜택7에서 발생할 수 있는 항생제 농도 지나치게 높은 불필요 하 게 노출 된다. 항생제 오용 및 부족 한 먹이 지 보건8적 성장 위협 되 고 항생제 저항의 보급을 연료도 있습니다.
항생제의 사용을 개선 하 고 그들의 effectivenessas를 유지 하기 위해, 가능한 한 세계 보건 기구 20159에 항균 성 저항에 대 한 글로벌 행동 계획에 착수 했다. 항생제 관리 프로그램 구성 국가 공중 보건 전략10, 같은 시간에, 그리고 환자 치료11 의 품질을 크게 개선 임상을 돕고 신중한 항균 성 사용의 필수적인 초석 항생제 저항12감소. 항균 성 치료 약물의 응용 프로그램을 통해 개별 환자에서 투약 모니터링 (TDM)이 컨텍스트13주요 악기 이다.
날짜 하려면, 상용 TDM 분석 실험 glycopeptide 항생제와 aminoglycosides 사용할 수만 있습니다. 다른 클래스에서 물질의 정량화는 일반적으로 사내 방법 개발 또는 성가신 수 있는 유효성 검사를 해야 합니다. 그러므로, 선물이 자세히14그들의 임상 관련 농도 범위 내에서 중 환자 실에 가장 관련성이 높은 항생제의 정량화에 대 한 사용할 수 있는 강력한 질량 분석 기반 분석에 대 한 프로토콜. 메서드와 우리의 질량 분석 시설에 최근에 설립 이후로 루틴 중 환자 실에서 TDM에 대 한 적용 되었습니다. 절차 유니폼 샘플 정리, 질량 분석 기능을 갖춘 많은 시설에서 항생제 TDM의 신속한 구현을 위한 수 있도록 간단 하 고 단순 분석 설정을 사용 합니다.
여기에 설명 된 프로토콜은 cefepime, meropenem, ciprofloxacin, moxifloxacin, linezolid, 및 탠덤와 함께에서 동위 원소 희석 액체 크로마토그래피 (LC)를 사용 하 여 인간의 혈 청에 piperacillin의 정량화에 대 한 최적화 된 질량 분석 (MS/MS)입니다. 동위 원소 희석 LC-MS/MS 방법론에 대 한 안정 동위 원소 표시 된 화합물 (예, 혈 청) 특정 행렬에 대 한 관심의 샘플에 추가 됩니다. 동위 원소 분류 기준은 그들의 레이블 없는 대응, 즉 자연 분자 및 부모 이온-하-딸-이온 전환 되 나, 그들의 조각화 제품의 다른 분자 중량으로 관심의 분석에서에서 구분할 수 있습니다. 동위 원소 라는 화합물 그들의 레이블 없는 대응에 비해 거의 동일한 전반적인 물리 화학 행동으로, 그들은 MS/MS의 높은 수준으로 거의 매트릭스 독립적인 분석 정량화를 허용에 대 한 이상적인 내부 표준 정확도15. 요즘, 많은 안정 동위 원소 라는 내부 표준 작은 분자 정량화, 항균, TDM을 포함 하 여 사용할 수 있는 상업적으로 사용할 수 있습니다.
설명된 프로토콜에서 항생제 analytes 컬럼에 분리 분석 C8 알 킬 체인 길이 역 상 열 (100 m m x 2.1 m m, 3 µ m 입자 크기)으로 수행 됩니다. 방법 개발 하는 동안 모든 analytes에 대 한 내부 표준 정규화 된 매트릭스 요소 94.6%와 105.4%, ≤8.314의 변형 계수 했다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 원고에 보고 하는 중 환자 실19, 즉 cefepime, meropenem, ciprofloxacin, moxifloxacin, linezolid, 자주 사용된 항생제의 정량화에 대 한 간단 하 고 강력한 탠덤 질량 분석 기반 방법에 대 한 프로토콜 및 piperacillin14. 스프레드시트 항생제 재고 솔루션, 교정기, 및 품질 컨트롤, 항생제의 순도 및 그들의 counterions의 분자량의 준비에 대 한 원고를 동반 한다. 항생제의 농도 오히?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자에 대 한 그의 제시 방법 수립 박사 Schütze 감사 하 고 귀중 한 입력에 대 한 박사 Zoller 적절 한 보정 범위에 관한. 저자는 또한 질량 분석 시설 기술 직원을 인정합니다.
Materials
| cefepime hydrochloride | Sigma-Aldrich | 1097636 | USP Reference Standard |
| meropenem trihydrate | Sigma-Aldrich | Y0001252 | EP Reference Standard |
| ciprofloxacin | Sigma-Aldrich | 17850 | |
| moxifloxacin hydrochloride | Sigma-Aldrich | SML1581 | |
| linezolid | Toronto Research Chemicals | L466500 | |
| piperacillin sodium salt | Sigma-Aldrich | 93129 | |
| cefepime-13C12D3 sulfate | Alsachim | C1297 | Isotope labelled internal standard for cefepime |
| meropenem-D6 | Toronto Research Chemicals | M225617 | Isotope labelled internal standard for meropenem |
| ciprofloxacin-D8 | Toronto Research Chemicals | C482501 | Isotope labelled internal standard for ciprofloxacin |
| moxifloxacin-13C1D3 hydrochloride | Toronto Research Chemicals | M745003 | Isotope labelled internal standard for moxifloxacin |
| linezolid-D3 | Toronto Research Chemicals | L466502 | Isotope labelled internal standard for linezolid |
| piperacillin-D5 | Toronto Research Chemicals | P479952 | Isotope labelled internal standard for piperacillin |
| methanol | JT Baker | 8402 | |
| HPLC grade water | JT Baker | 4218 | |
| formic acid | Biosolve | 6914132 | |
| acetic acid | Biosolve | 1070501 | |
| ammonium formate | Sigma-Aldrich | 70221-25G-F | |
| tert-Butyl methyl ether | Merck | 101845 | |
| Fortis 3 μm C8 100 * 2.1 mm | Fortis | F08-020503 | |
| Ti-PEEK-encased Prifilter (2 μm) | Chromsystems | 15011 | |
| 2795 Alliance HPLC system | Waters | 176000491 | |
| Quattro micro API Tandem Quadrupole System | Waters | 720000338 | |
| QuanLynx 4.1 software | Waters | / | Data evaluation software provided by the mass spectrometer manufacturer |
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