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Bioengineering

Herstellung von Nafion-beschichtet, reduziert Graphene Oxid/Polyaniline Chemiresistive Sensor Monitor pH in Echtzeit während der mikrobiellen Fermentation

Published: January 7, 2019 doi: 10.3791/58422

Summary

Hier berichten wir über das Protokoll für die Herstellung von einer Nafion-beschichtet, Polyaniline funktionalisiert, elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid Chemiresistive Mikro pH-Sensor. Diese Chemiresistor-basierte, Solid-State-Mikro-pH-Sensor erkennt pH-Wert-Änderungen in Echtzeit während Lactococcus Lactis Fermentationsprozess.

Abstract

Hier berichten wir über das Engineering von einem Solid-State-Mikro pH-Sensor basiert auf Polyaniline funktionalisiert, elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid (ERGO-PA). Elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid fungiert als leitende Schicht und Polyaniline als pH-Sensitive Schicht. Die pH-abhängige Leitfähigkeit des Polyaniline erfolgt durch doping Löcher während Protonierung und durch die dedoping Löcher während Deprotonierung. Wir fanden, dass eine Solid-State-ERGO-PA-Elektrode nicht als solche in Fermentationsprozessen funktionsfähig war. Elektrochemisch aktiven Spezies, die die Bakterien während der Gärung produzieren stören die Elektrode Antwort. Wir erfolgreich Nafion als protonenleitende Schicht über ERGO-PA. Die Nafion-beschichteten Elektroden (ERGO-PA-NA) zeigen eine gute Empfindlichkeit von 1,71 Ω/pH (pH 4 bis 9) für Chemiresistive Sensormessungen. Wir testeten die ERGO-PA-NA-Elektrode in Echtzeit in der Vergärung von Lactococcus Lactis. Während des Wachstums der L. Lactis, verändert der pH-Wert des Mediums von pH 7,2 pH 4,8 und den Widerstand der ERGO-PA-NA-Solid-State-Elektrode von 294.5 Ω in 288.6 Ω (5,9 Ω pro 2.4 pH-Einheit) geändert. Die pH-Reaktion der ERGO-PA-NA-Elektrode im Vergleich mit der Antwort von einem herkömmlichen Glas-basierten pH-Elektrode zeigt, dass Referenz-weniger Solid-State-Mikrosensor Arrays in eine mikrobiologische Fermentation erfolgreich operieren.

Introduction

pH spielt eine wichtige Rolle in vielen chemischen und biologischen Prozessen. Selbst kleine Veränderungen in den pH-Wert ändern, den Prozess und das Ergebnis des Prozesses beeinträchtigen. Daher ist es notwendig, die Überwachung und Steuerung des pH-Wertes in jeder Phase der Experimente. Die Glas-basierten pH-Elektrode wird erfolgreich eingesetzt, pH in vielen chemischen und biologischen Prozessen zu überwachen obwohl der Einsatz von einer Glaselektrode mehrere Einschränkungen zur pH-Messung darstellt. Die Glas-basierten pH-Elektrode ist relativ groß, zerbrechlich, und kleine Leckagen des Elektrolyten in der Probe sind möglich. Darüber hinaus die Elektrode und die Elektronik sind relativ teuer, für Anwendungen in 96-Well-Screening Fermentationssysteme. Darüber hinaus die elektrochemischen Sensoren sind invasive und verbrauchen die Probe. Daher ist es vorteilhafter, nicht-invasive, Referenz-weniger Sensoren zu verwenden.

Heutzutage sind miniaturisierte Reaktionssysteme in viele chemische Technik und Biotechnologieanwendungen begünstigt, da diese Mikrosysteme verbesserte Prozesskontrolle, sowie viele weitere Vorteile gegenüber ihren Makro System Analoga bieten. Zur Überwachung und Kontrolle der Parameter in einem miniaturisierten System ist eine anspruchsvolle Aufgabe als die Größe des Sensors zu messen, zum Beispiel, pH-Wert und O2, sowie minimiert werden müssen. Die erfolgreiche Herstellung von Mikroreaktoren für biologische Systeme erfordern verschiedene Arten von Analyse-Tools zur Prozessüberwachung. Die Entwicklung von intelligenten Mikrosensoren spielt daher eine wichtige Rolle bei der Durchführung biologischer Prozesse in Mikroreaktoren.

Vor kurzem gab es mehrere Versuche, intelligente pH-Sensoren mit Chemiresistive Materialien wie Kohlenstoff-Nanoröhren sensing und Durchführung von Polymeren1zu entwickeln. Diese Chemiresistive-Sensoren benötigen keine Bezugselektrode und sind einfach zu integrieren mit elektronischen Schaltungen. Erfolgreiche Chemiresistive Sensoren machen es möglich, intelligente Sensoren zu produzieren, die sind kostengünstig und einfach zu produzieren, benötigen eine kleine Menge zum Testen und sind nicht-invasiv.

Hier berichten wir über eine Methode, um eine Elektrode mit Polyaniline funktionalisiert, elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid zu entwickeln. Die Chemiresistive Elektrode arbeitet als ein pH-Sensor während der Gärung ein L. Lactis . L. Lactis ist ein Milchsäure-Säure-produzierenden Bakterium in Essen Gärung und konservierende Verfahren verwendet. Während der Gärung die Produktion von Milchsäure senkt den pH-Wert, und das Bakterium aufhört zu wachsen in einem niedrigen pH-Wert2,3,4.

Ein Fermentationsmedium ist eine komplexe chemische Umgebung, die enthält Peptide, Salze und Redox-Moleküle, die dazu neigen, mit dem Sensor Oberfläche5,6,7,8,9stören. Diese Studie zeigt, dass ein pH-Sensor basiert auf Chemiresistive Material mit einer richtigen Oberflächenschutz Schicht verwendet werden, um pH in dieser Art von komplexen Gärung Medien zu messen. In dieser Studie verwenden wir erfolgreich Nafion als Schutzschicht für Polyaniline beschichtet, elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid, Messen Sie den pH-Wert in Echtzeit während einer L. Lactis Gärung.

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Protocol

1. Vorbereitung von Graphit-Oxid

Hinweis: Graphit-Oxid ist im Sinne des Hummers Methode10,11bereit.

  1. Fügen Sie 3 g Graphit in 69 mL konzentrierter H2SO4 und rühren Sie die Lösung bis die Graphit hat vollständig dispergiert. 1,5 g Natriumnitrit und lassen Sie es für 1 h unter Rühren. Dann stellen Sie den Behälter in ein Eisbad.
  2. 9 g Kaliumpermanganat in der Dispersion und entfernen Sie den Behälter aus dem Eisbad. Lassen Sie die Lösung auf Raumtemperatur aufwärmen.
  3. Fügen Sie zunächst 138 mL destilliertem Wasser tropfenweise. Dann weiterhin 420 mL destilliertem Wasser hinzufügen. Behalten Sie die Temperatur auf 90 ° C für 15 min mit einer Kochplatte. Die Dispersion 7,5 mL 30 % Wasserstoffperoxid hinzufügen.
  4. Sammeln Sie das Produkt durch Zentrifugation bei 10.000 x g für 20 min und entsorgen Sie die überstehende Lösung. Waschen Sie die Pellets 4 X mit warmem bidestilliertem Wasser und 2 X mit 10 % HCl (V/V) Lösung. Schließlich waschen Sie es 2 X mit Ethanol und bei 50 ° C im Ofen trocknen.

(2) GO-hinterlegt Elektrode Vorbereitung

  1. Auflösen Sie 10 mg Graphit Oxid in 10 mL Wasser und beschallen Sie es dann in ein Ultraschallbad für 6 h.
  2. Nehmen Sie die unexfoliated Graphitflocken Oxid durch Zentrifugation für 30 min bei 2.700 x g. verwerfen die festen Partikel nach Zentrifugation und überstand für weitere Experimente.
    Hinweis: Wir nutzten diese Schuppung GO Flocken Dispersion als Vorratslösung.
  3. Verdünnen Sie die GO-Stammlösung zweifach. Bereiten Sie immer eine frische GO funktionierende Lösung aus der Stammlösung.
  4. Fügen Sie 2 µL GO funktionierende Lösung auf einer exponierten die gold Elektrode (Abb. 1A und Abbildung 2). Trocknen Sie nach Tropfen gießen die Elektrode bei Raumtemperatur für 12 h. Dies ist die Elektrode GO hinterlegt.

3. Reduzierung von GO elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid

  1. Legen Sie die Elektrode in der Polydimethylsiloxan (PDMS) Elektrodenhalter (Unterteil). Legen Sie den anderen Teil des Elektrodenhalters, dient als ein Reservoir Lösung, auf die Elektrode wie dargestellt wie in Abbildung 1A - 1 C. Montieren Sie die Inhabern durch die beiden Teile zusammen mit zwei Büroklammern zuschneiden. Stellen Sie sicher, daß der PDMS-Inhaber nicht den GO hinterlegt Elektrode Teil abdeckt.
  2. Pipettieren 300 µL 0,2 M Phosphatpuffer (pH 7) in das Reservoir. Dann setzen Sie die Referenz und die Gegenelektrode in der Lösung in einer Weise, dass die Elektroden in der Nähe der Oberfläche der Folie gehen, wie in Abbildung 1dargestellt. Diese Aufstellung dient als eine elektrochemische Zelle, elektrochemische Reduktion von GO und für Polyaniline Absetzung durchzuführen.
  3. Verbinden Sie die Elektroden mit dem Potentiostaten verbunden mit einem Computer zur Datenerfassung. Zyklischer Voltammetrie für die elektrochemische Reduktion verwenden: Wählen Sie 0 bis -1,2 V als eine mögliche Auswahl und 50 mV/s als Scan-Rate. Zyklus der Spannung über die Elektrode zwischen 0 bis 10 V -1,2 x (Abbildung 3).
  4. Entfernen Sie nach dem Experiment die Elektrode aus dem Halter und waschen Sie ihn immer wieder mit bidestilliertem Wasser. Trocknen Sie die Elektrode in einem Ofen bei 101 ° C für 12 h.
  5. Wenn die Elektrode trocken ist, die Elektrode aus dem Ofen nehmen und auf Raumtemperatur abkühlen lassen. Dann messen Sie die Leitfähigkeit der Elektrode mit einem Multimeter. Die Elektrode wird jetzt als elektrochemisch reduzierte Graphene Oxid (ERGO) Elektrode bezeichnet.

4. Polyaniline Funktionalisierung der ERGO Elektrode

  1. Die Polyaniline Funktionalisierung 10 mM Anilin Monomer vorbereiten. Auflösen von 5 µL 10 mM Anilin in 5 mL 1 M H2SO4.
  2. Fügen Sie für die Funktionalisierung Polyaniline 300 µL Anilin Monomer die Lösung-Reservoir hinzu. Legen Sie die ERGO hinterlegt Elektrode in den Elektrodenhalter, wie beschrieben in das Verfahren zur Verringerung der GO.
  3. Zyklischer Voltammetrie für die Electropolymerization von Anilin, ERGO in ERGA-Polyaniline (ERGO-PA) funktionalisieren verwenden: Wählen Sie 0 bis 0,9 V als eine mögliche Auswahl und 50 mV/s als Scan-Rate. Zyklus der Spannung über die Elektrode zwischen 0 bis 0,9 V für 50 x (Abbildung 4).
  4. Entfernen Sie nach der Absetzung Polyaniline die Elektrode zu und waschen Sie ihn immer wieder mit bidestilliertem Wasser. Trocknen Sie die Elektrode bei 80 ° C in den Ofen für 12 h.
  5. Die Elektrode aus dem Ofen nehmen und auf Raumtemperatur abkühlen, bevor Sie die Leitfähigkeit der Elektrode mit einem Multimeter messen lassen.
  6. Bereiten Sie eine Pufferlösung pH 5 durch Zugabe von 0,2 M NaOH, Britton-Robinson-Pufferlösung bis pH 5 (siehe Punkt 5.1). Halten Sie die Elektrode in Puffer bei pH 5 für 24 h.
    1. Zur Vorbereitung einer universellen Britton-Robinson-Pufferlösung vermischen Sie 0,04 Mol Phosphorsäure, 0,04 Mol Essigsäure und 0,04 Mol von Borsäure in 0,8 Liter Reinstwasser. 0,2 M Natronlauge tropfenweise die Puffer Projektmappe fügen Sie bis der gewünschte pH-Wert4erreicht ist hinzu. Fügen Sie hochreines Wasser hinzu, bis der letzte Band 1 L. ist

(5) ERGO-PA Elektrode Tests bei verschiedenen pH-Werten (Vorkalibrierung vor Nafion Beschichtung)

  1. Nach der Konditionierung der Elektrode in eine Pufferlösung pH 5, Messen Sie den Widerstand der Elektrode in Lösungen von einem anders pH-Wert (von pH 4 bis pH 9; siehe Abbildung 5).
    1. Für diese Messung die Elektrode direkt in die Pufferlösung Tauchen und den andere Teil der Elektrode mit der Computer-gesteuerten Potentiostaten für Datenerfassung verbinden. Ändern Sie den pH-Wert, indem mit 0,2 M NaOH titrieren.
    2. Wählen Sie Chronopotentiometry oder strommesstechnik i-t-Kurve aus der Liste der Techniken und wenden Sie eine 100 mV-Potentialdifferenz an der Elektrode.
      Hinweis: Die Potentiostaten misst den Strom gegen die Zeit. Die Software steuert die Potentiostaten bietet eine grafische Darstellung der aktuellen gegen die Zeit.
    3. Verwenden des Ohmschen Gesetzes (Widerstand ist gleich Spannung geteilt durch Strom) um den Widerstandswert von der gemessenen aktuellen und angewandte Spannung zu berechnen.
  2. Trocknen Sie nach den Messungen die Elektrode bei Raumtemperatur für 12 h.

6. Vorbereitung der Nafion-beschichtete ERGO-PA-Elektrode

  1. Fügen Sie 5 µL von 5 Gew.-% Nafion auf der ERGO-PA-Elektrode und trocknen Sie die Elektrode bei Raumtemperatur für 12 h.
  2. Nach der Nafion-Beschichtung, halten Sie die Elektrode in der Pufferlösung bei pH 5 für 24 h vor der pH-Messung.
  3. Nach Konditionierung in pH 5, entfernen der Nafion-beschichtete ERGO-PA-Elektrode (ERGO-PA-NA) und Messen Sie den Widerstand der Elektrode von pH 4 bis pH 9 wie bereits in Abschnitt 5.1 (Abbildung 6).

7. Vorbereitung der L. Lactis Kulturmedium

  1. Fügen Sie 9,3 g M17 Pulver in 250 mL Reinstwasser. Schütteln Sie langsam die Lösung, bis sich das Pulver vollständig auflöst. Autoklaven die Lösung bei 121 ° C für 15 Minuten.
  2. Nehmen ein 250-mL sterilisierten Fläschchen mit Magnetrührer Bar und 50 mL des Mediums sterilisierte M17 in den Kolben. Fügen Sie dann 8 mL autoklaviert Glukoselösung verdünnt 1 M. Impfen Sie die Lösung mit 10 µL einer L. Lactis -Kultur, die zuvor in der gleichen Nährmedium gewachsen.
    Hinweis: Jan Kok, molekulare Genetik, Universität von Groningen war der Bakterienstamm entnommen.
  3. Legen Sie die Flasche mit der beimpften Kulturmediums für 18 h auf dem Magnetrührer Teller im Ofen Inkubation bei 30 ° C unter Rühren und überwachen Sie den pH-Wert zu.

8. Prüfung der ERGO-PA-NA-pH Antwort in einem L. Lactis Gärung Experiment

  1. Legen Sie die ERGO-PA-NA-Elektrode in die L. Lactis Kultur und schließen Sie es mit einem Baumwoll-Stecker. Legen Sie dann das Setup in der Thermostat bei 30 ° C, L. Lactiszu wachsen.
  2. Anwenden von 100 mV bis die Elektrode und messen den Strom gegen die Zeit.
  3. 0,5 mL Proben nehmen zu verschiedenen Zeitpunkten (siehe zum Beispiel Abbildung 7) Offline Messung die optische Dichte bei 600 nm und der pH-Wert mit einer konventionellen Glaselektrode. Fahren Sie die Messungen, bis die optische Dichte der Kultur konstant wird, darauf hinweist, dass die Bakterien nicht mehr wachsen.

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Representative Results

Das Aussehen eines starken Rückgangs Peaks rund -1,0 V (Abbildung 3) illustriert die Reduzierung von GO-ERGO12,13,14,22. Die Intensität des Peaks hängt von der Anzahl der GO-Schichten auf die Elektrode. Ein dicker schwarze Folie vollständig abgedeckt Golddrähten an der Elektrode. Zu diesem Zeitpunkt waren die zwei isolierte gold-Elektroden leitfähigen, weil unterwegs zwei gold Elektrodenleitungen verbunden. Electropolymerization von Anilin hinterlegt einen grünen Film auf ERGO15,16,17,18,19,20,21, 22. Diese grüne Farbe ist ein Hinweis auf die Bildung einer leitfähigen Polyaniline Schicht auf der ERGO. Die Leitfähigkeit der ERGO-Elektrode (Widerstand Abnahme) stieg nach der Funktionalisierung Polyaniline.

Wenn wir die ERGO-PA-Elektrode in einer Lösung mit einem pH-Wert zwischen 4 und 9 setzen, der aktuelle Wert erhöht (Abbildung 5) wegen der doping- und dedoping von Löchern bei der Protonierung/Deprotonierung in ERGO-PA (Abbildung 2)22. Der gewünschte pH-Wert für die Messung des aktuellen Wertes der ERGO-PA-Elektrode wurde durch die Britton-Robinson-Pufferlösung mit 0,2 M NaOH titrieren erhalten. Daher für jede Zugabe von 0,2 M NaOH, der aktuelle Wert der Elektrode erhöht (Abbildung 5 und Abbildung 6). Die Reaktion der Elektrode war sofort stabil, wenn die Zugabe von 0,2 M NaOH bei einem bestimmten pH-Wert gestoppt.

Ein dünner Film von Protonen leitenden Nafion gebildet, nachdem das Lösungsmittel bei Raumtemperatur verdunstet. Die Leitfähigkeit der Elektrode war nicht viel betroffen, aber ein paar Ohm Unterschied des Widerstandswertes aufgetreten ist und der aktuellen Basiswert der ERGO-PA-Elektrode geändert. Ähnlich wie bei der ERGO-PA-Elektrode, den Widerstand der ERGO-PA-NA-Elektrode geändert, wenn der pH-Wert der Pufferlösung von 4 bis 9, geändert, wie in Abbildung 618dargestellt.

Nach dem Platzieren der ERGO-PA-NA-Elektrode im Inneren der L. Lactis -Kultur, der Strom zunächst abgenommen und dann dauerte einige Zeit, um einen stabilen Wert zu erreichen. Einmal das Wachstum von L. Lactis begonnen, der Strom der ERGO-PA-NA allmählich verringert. Der Rückgang der Strom in der exponentiellen Wachstumsphase von L. Lactis beschleunigt und erreicht einen stabilen Wert am Ende des Wachstums (Abbildung 7)18. Der endgültige Wert des Stromes (oder Widerstand) ist vergleichbar mit dem aktuellen Wert der ERGO-PA-NA-Elektrode getestet in Pufferlösung (pH 4-7), wie in den Einschub von Abbildung 7dargestellt.

Figure 1
Abbildung 1: Bilder von unten (links) und das Oberteil (rechts) des Elektrodenhalters PDMS. (A) die montierten Zelle (B) und (C) die Gegenelektrode. (D) die die gold-Elektrode mit der Maßstabsleiste in Zentimetern. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 2
Abbildung 2: Schematische ERGO-PA-hinterlegt die gold-Elektrode mit einer grafischen Darstellung der ERGO und PA. Das Bild zeigt auch Loch doping auf ERGO-PA bei Protonierung. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 3
Abbildung 3: zyklischer Voltammetrie GO Reduktion mit verschiedenen GO-Konzentrationen mit einer Scanrate von 50 mV/s. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 4
Abbildung 4: zyklischer Voltammetrie Polyaniline Ablagerung mit einer Scanrate von 50 mV/s. Die ersten 10 Scans von insgesamt 50 werden angezeigt. Der vertikale Pfeil markiert den Trend der Stromanstieg während der Scans und die horizontalen Pfeile markieren die Richtung der Spannung Scan. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 5
Abbildung 5: Widerstandswert der ERGO-PA-Elektrode gegen pH 4 bis 9. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 6
Abbildung 6: Widerstandswert der ERGO-PA-NA-Elektrode gegen pH 4 bis 9. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 7
Abbildung 7: Echtzeit-kontinuierliche pH-Änderung der ERGO-PA-NA während der Gärung L. Lactis . Der Inset zeigt den erwarteten Widerstandswert des ERGO-PA-NA für pH 4-7 in Britton-Robinson-Pufferlösung gemessen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

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Discussion

Es ist wichtig, dass die GO "" vollständig Layers bedecken die gold Elektrodenleitungen nach der Absetzung von GO. Wenn der gold-Elektroden mit GO nicht abgedeckt sind, wird Polyaniline nicht nur auf ERGO, sondern auch auf die sichtbare gold Elektrodenleitungen direkt einzahlen. Ablagerung von Polyaniline auf gold Elektrodenleitungen möglicherweise Auswirkungen auf die Leistung der Elektrode. Nach der Reduktion des GO, ERGO wird die Elektrode bei 100 ° C zur Stärkung der Bindung zwischen der ERGO-Schicht und die gold Elektrodenleitungen getrocknet. Der Widerstand der einzelnen Elektrode variiert basierend auf der Anzahl von GO-Schichten, die auf die gold-Elektroden abgelegt werden. Daher, es ist wichtig, die gleiche Konzentration von GO für jede Elektrode, und es ist schwierig, die Elektrode mit einem Widerstand in einem vorbestimmten angegebenen Bereich zu fertigen, die kompatibel mit den Messkreis. Dies schränkt die einfache Massenproduktion der Elektroden.

Die Vorbereitung der reduzierten Graphene Oxid/Polyaniline durch eine elektrochemische Methode hat einige Vorteile gegenüber anderen gemeldeten Zubereitungsmethoden. Die hier vorgestellte elektrochemische Methode erfordert keine stark reduzieren und Oxidationsmittel (z. B.., Hydrazin und Ammonium Bleichen)23,26. Darüber hinaus das Material lagert sich direkt auf die Elektrode und keine weitere Verarbeitung erforderlich ist, den Fertigungsprozess schneller und einfacher machen. Wie gehen Sie elektrochemisch reduzierten in Situist, ist eine gute Verbindung zwischen dem Gold und den Graphen erreicht, machen die pH-Elektrode robuster.

Die ERGO-PA-Elektrode in einem Puffer mit einem pH-Wert zwischen 3 und 9 vor dem Auftragen der Nafion Äquilibrierung verbessert die Empfindlichkeit der Elektrode (Daten nicht gezeigt). Das Weglassen dieser Schritt erfordert ein Einweichen der ERGO-PA-NA-Elektrode in einem Puffer pH 5 mehr als 24 Stunden vor Gebrauch.

Darüber hinaus muss die ERGO-PA-Elektrode trocken sein, bevor man Nafion. Eine nasse ERGO-PA-Elektrode führte zu eine wässrige Schicht zwischen der ERGO-PA und Nafion und erhöht die Reaktionszeit des pH-Sensor. Den Widerstand oder gemessene Strom von ERGO-PA-NA-Lösungen mit unterschiedlichen pH-Werten variierten zwischen den Elektroden. Diese Variante im Widerstand oder Strom für jede Elektrode verursacht wahrscheinlich durch den Unterschied in der Anzahl der GO Schichten lagern sich auf den gold Elektrodenleitungen. Genau wie mit anderen pH-Elektroden ist korrekte Kalibrierung der ERGO-PA-NA-Elektrode erforderlich, um zuverlässige pH Werte zu erhalten.

Nach der Platzierung der Elektrode im Inneren der L. Lactis -Kultur, ist eine erste Stabilisierungszeit notwendig, einen konstanten Strom zu erhalten. Bei der Fermentation L. Lactis ist die anfängliche pH 7,2. Während des Wachstums der L. Lactiswird Glukose umgewandelt, in Biomasse und in Milchsäure, die die Gärsaft säuert. Wenn der pH-Wert des Mediums Gärung zu niedrig, um korrektes Wachstum unterstützt wird oder wenn es keine Glukose links, stoppt das Wachstum. Der Strom (oder Widerstand) Wert von ERGO-PA-NA vor und nach Wachstum sind gleich dem aktuellen (oder Widerstand) Wert der ERGO-PA-NA zuvor in verschiedenen Pufferlösungen kalibriert. Der anfängliche pH-Wert und Ende pH-Wert des Mediums L. Lactis Gärung wurde bestätigt mit einem herkömmlichen Glas-pH-Elektrode.

Die pH-Sensor kann leicht House mit billigen Chemikalien hergestellt werden. Die niedrigen Herstellungskosten erlauben Forschern, diese Elektrode in Anwendungen zu verwenden, wurden eine große Anzahl von pH-Elektroden notwendig sind (z. B.in einer bakteriellen Gärung-Screening-Plattform). Eine weitere Anwendung der pH-Elektrode ist in Situationen vorgesehen, wo die Verteilung von KCl aus einer herkömmlichen Glas-pH-Elektrode in die Messlösung nicht erwünscht ist. Die pH-Elektrode dieses Protokolls hat keine interne Flüssigkeiten, die in der Probe diffundieren können.

Kompatibilität des Chemiresistive Sensors mit derzeit verfügbaren drahtlosen elektronischen Schaltungen1,27 ermöglicht es auf einfache Weise Anwendungen mit Wireless-pH-Sensoren zu entwickeln.

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Disclosures

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Acknowledgments

Die Autoren erkennen der Universität Groningen für finanzielle Unterstützung.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Graphite flakes Sigma Aldrich
Sulfuric acid (H2SO4) Merck
Sodium nitrite (NaNO2) Sigma Aldrich
Potassium permanganate (KMnO4) Sigma Aldrich
30 % H2O2 Sigma Aldrich
HCL Merck
Aniline Sigma Aldrich
5wt % Nafion Sigma Aldrich
M17 powder BD Difco
Phosphoric acid (H3PO4) Sigma Aldrich
Boric acid (HBO3) Merck
Acetic acid Merck
Sodium Hydroxide Sigma Aldrich
Potassium dihydrogen phosphate Sigma Aldrich
Dipostassium hydrogen phosphate Sigma Aldrich
Au Interdigitated electrodes BVT technology - CC1 W1
Potentiostat CH Instruments Inc (CH-600, CH-700)

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Biotechnik Ausgabe 143 reduzierte Graphene Oxid Polyaniline Chemiresistor potentiometrische pH-Sensor Reinstraum bakterielle Gärung
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Chinnathambi, S., Euverink, G. J. Manufacturing of a Nafion-coated, Reduced Graphene Oxide/Polyaniline Chemiresistive Sensor to Monitor pH in Real-time During Microbial Fermentation. J. Vis. Exp. (143), e58422, doi:10.3791/58422 (2019).

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