चूहों में Lipopolysaccharide इंजेक्शन द्वारा प्रेरित उप तीव्र सेरेब्रल Microhemorrhages
Summary
हम Sprague-Dawley चूहों में एलपीएस इंजेक्शन की वजह से CMHs के लिए प्रेरित और पता लगाने के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं, जो रोगजनन के CMHs पर भविष्य में अनुसंधान जांच में उपयोग किया जा सकता है ।
Abstract
मस्तिष्क microhemorrhages (CMHs) वृद्ध रोगियों में आम है और विभिन्न neuropsychiatric विकारों के लिए संबंधित हैं । CMHs के एटियलजि जटिल है, और neuroinflammation अक्सर एक सह घटना के रूप में मनाया जाता है । यहाँ, हम एक उप-तीव्र CMHs चूहे lipopolysaccharide द्वारा प्रेरित मॉडल का वर्णन (एलपीएस) इंजेक्शन, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से CMHs का पता लगाने के लिए एक विधि. प्रणालीगत एलपीएस इंजेक्शन अपेक्षाकृत सरल, किफायती, और लागत प्रभावी है । एलपीएस इंजेक्शन का एक प्रमुख लाभ इसकी स्थिरता सूजन पैदा करने के लिए है । CMHs एलपीएस इंजेक्शन की वजह से सकल प्रेक्षण, hematoxylin और eosin (वह) धुंधला, पर्ल प्रशिया धुंधला, इवांस ब्लू (EB) डबल लेबलिंग, और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग-संवेदनशीलता भारित इमेजिंग (एमआरआई-SWI) प्रौद्योगिकी द्वारा पता लगाया जा सकता है । अंत में, अपने फायदे और/या नुकसान सहित CMHs पशु मॉडल, विकसित करने के अंय तरीकों पर भी इस रिपोर्ट में चर्चा कर रहे हैं ।
Introduction
शास्त्रीय सेरेब्रल microhemorrhages (CMHs) मस्तिष्क1में लाल रक्त कोशिकाओं से hemosiderin जैसे रक्त क्षरण उत्पादों के छोटे perivascular जमा करने के लिए देखें । रॉटरडैम स्कैन अध्ययन के अनुसार, CMHs 60 आयु वर्ग के व्यक्तियों के लगभग १७.८% में पाया जा सकता है-69 साल और ८० साल से अधिक उन में ३८.३%2। बुजुर्गों में CMHs की व्यापकता अपेक्षाकृत अधिक है, और CMHs और संज्ञानात्मक और neuropsychiatric रोग के संचय के बीच एक संबंध स्थापित किया गया है3,4. CMHs के कई एनिमल मॉडल्स को हाल ही में रिपोर्ट किया गया है, जिसमें टाइप IV collagenase stereotaxic इंजेक्शन5, एप ट्रांसजेनिक6, β-N-methylamino-L-alanine एक्सपोज़र7, और हाइपरटेंशन8, एक सबसे अच्छी तरह से स्वीकार किए जाते है विकल्पों में से एक के रूप में प्रणालीगत सूजन द्वारा प्रेरित CMHs के साथ । फिशर एट अल । 9 पहले साल्मोनेला typhimurium से व्युत्पंन एलपीएस एक तीव्र CMHs माउस मॉडल विकसित करने के लिए इस्तेमाल किया । बाद में, एक ही समूह एक उप-एक्यूट CMHs माउस एक ही दृष्टिकोण2का उपयोग कर मॉडल के विकास की सूचना दी ।
एलपीएस intraperitoneal इंजेक्शन के माध्यम से एक मानकीकृत भड़काऊ उत्तेजना के रूप में माना जाता है । पिछले अध्ययनों की पुष्टि की है कि एलपीएस इंजेक्शन neuroinflammation के रूप में पशु मॉडल2,10में microglia और astrocyte सक्रियण की बड़ी मात्रा से प्रतिबिंबित पैदा कर सकता है । इसके अलावा, neuroinflammation सक्रियण के सक्रियकरण और CMHs की संख्या के बीच एक सकारात्मक संबंध स्थापित किया गया है2,10। इन पिछले अध्ययनों के आधार पर, हम एलपीएस के intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा एक CMHs चूहा मॉडल विकसित करने के लिए प्रेरित किया गया ।
पता लगाने की प्रौद्योगिकियों में अग्रिम CMHs पर अनुसंधान जांच की संख्या में वृद्धि हुई है । CMHs का पता लगाने के सबसे व्यापक रूप से स्वीकार तरीकों hematoxylin और eosin द्वारा लाल रक्त कोशिकाओं का पता लगाने में शामिल (वह) धुंधला, प्रशिया नीले दाग9, EB द्वारा इवांस ब्लू (इम्यूनोफ्लोरेसेंस) जमाव का पता लगाने के द्वारा घाट लोहे का पता लगाने इमेजिंग, और ७.० टेस्ला चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग-संवेदनशीलता भारित इमेजिंग (एमआरआई-SWI)10. वर्तमान अध्ययन CMHs के लिए स्क्रीनिंग की एक विधि का विकास करना है ।
Protocol
Representative Results
Discussion
CMHs पर शोध अध्ययनों में पिछले कुछ वर्षों में वृद्धि हुई है । हालांकि, CMHs का तंत्र अस्पष्ट रहता है, वैज्ञानिकों को संकेत है कि इस विशेष स्थिति अनुकरण पशु मॉडल स्थापित करने के लिए । उदाहरण के लिए, Hoffmann एट अल.…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम शिक्षक जीआईपी फेंग लेई और एमआरआई के दौरान मार्गदर्शन के लिए राजधानी चिकित्सा विश्वविद्यालय से सहकर्मियों को धन्यवाद । हम भी Jing Zeng के न्यूरोलॉजी विभाग, तकनीकी सहायता प्रदान करने के लिए यिचांग के दूसरे लोगों के अस्पताल से धंयवाद ।
Materials
| LPS | Sigma-Aldrich | L-2630 | for inflammation induction |
| EB | Sigma-aldrich | E2129 | for EB leakage detection |
| DAPI dying solution | Servicbio | G1012 | count medium for IF |
| Perl’s Prussian staining | Solarbio | G1424 | Kit for Prussian staining |
| HE staining | Solarbio | G1120 | Kit for HE staining |
| chloral hydrate | Sigma-Aldrich | 47335U | For anesthesia |
| phosphate buffer saline (PBS) | Solarbio | P1022 | a kind of buffer solution commonly used in experiment |
| 0.9% saline solution | Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China | solution for perfusion | |
| paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | a kind of solution commonly used for fixation |
| 20% sucrose solution | Solarbio | G2461 | a kind of solution commonly used for fixation |
| 30% sucrose solution | Solarbio | G2460 | a kind of solution commonly used for fixation |
| vet ointment | Solcoseryl eye gel, Bacel, Switzerland | for rat's eyes protection |
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