Summary
في هذه الدراسة، قمنا بتعديل أسلوب تجريبي موجود للحصول على المزيد من النتائج استنساخه، بوضع نموذج ماوس (ماكاو) انسداد شريان دماغي الأوسط. الإدارة عن طريق الفم من الرقم الأساسي جليسيرهيزاي et جذمور (GR) استخراج الميثانول (جر)، عقب التعريفي السكتة الدماغية، وتناقص حجم احتشاء مجموع مقارنة بمجموعة التحكم غير المعالجة.
Abstract
الاسكيمية تليها ضخه تدفق الدم الدماغي بعد السكتة دماغية يؤدي إلى موت الخلايا العصبية وفقدان أنسجة الدماغ. نموذج الحيوان الأكثر استخداماً لدراسة السكتة الدماغية هو النموذج (ماكاو) انسداد الشريان الدماغي الأوسط. وأفادت الدراسات البحثية السابقة احتشاء مختلفة الأحجام حتى عندما كان يستخدم نفس الأنواع الحيوانية التجريبية ماكاو في ظروف مماثلة. ولذلك، قمنا بتطوير طريقة تجريبية محسنة لمعالجة هذا التناقض. الفئران تعرضوا إلى ماكاو باستخدام خيوط كمادة انسداد لتقليد الشروط السكتة الدماغية البشرية وسمك الشعيرة الأمثل لإنشاء المزيد من حجم احتشاء استنساخه. استخراج الفئران تعامل مع ميثانول من الرقم الأساسي جليسيرهيزاي et جذمور (جر) عقب التعريفي السكتة الدماغية أظهرت وحدة تخزين احتشاء مجموع انخفض إلى حد كبير وزيادة عدد الباقين على قيد الحياة الخلايا مقارنة بمجموعة التحكم غير المعالجة. وهذا تعديل البروتوكول التجريبي بنجاح وتكاثر أثبتت الآثار المفيدة لجر على السكتة الدماغية.
Introduction
تلف في المخ بسبب الاسكيمية وضخه من تدفق الدم الدماغي يؤدي إلى موت الخلايا العصبية وفقدان أنسجة الدماغ. وتواصل هذا النوع من تلف الدماغ تزيد مع تزايد انتشار الأمراض المخية الوعائية نتيجة لانتشار الأمراض الأيضية مثل السمنة وارتفاع ضغط الدم ومرض البول السكري1،2. العدد المطلق للمرضى المسنين مع السكتة الدماغية زاد زيادة كبيرة في جميع أنحاء العالم، وتكلفة الرعاية الطبية لهؤلاء المرضى، الذين كثيرا ما تترك ذوي الإعاقة طويلة الأمد، عبء مجتمعية رئيسية. ولذلك، ينبغي تخفيف الإعاقات الثانوية إلى أقصى حد ممكن للحد من العبء الاقتصادي1،2.
نموذج احتشاء دماغي القوارض الأكثر استخداماً هو النموذج (ماكاو) انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCA)، التي تغطي هيئة مكافحة الاحتكارات مع خيوط سوتورينج جراحية المغلفة بالسليكون لمنع تدفق الدم، مما تسبب في إصابة بالسكتة الدماغية3، 4-استخدام خيوط من المواد انسداد يتيح مراقبة انسداد الوقت والدوام عن طريق التلاعب في مدة الإدراج داخل لومينال الشعيرة.
وقد أظهرت الدراسات السابقة أن حتى عندما يتم استخدام نفس نموذج مكاو القوارض، يختلف الحجم الإجمالي لاحتشاء الدماغية بين التجارب، مما تسبب في انخفاض إمكانية تكرار نتائج الدراسات. لتحسين إمكانية تكرار نتائج، نحن الأمثل سمك منت الشعيرة التي استخدمت في التجربة. نتائج دراسة أولية لفترة السكتة الدماغية واحتشاء المستحث أظهرت أن فترة الدماغية أطول من 60 دقيقة سمح المنطقة الحجمي لتلف أنسجة المخ مراعاتها وتقديرها كمياً.
Radix جليسيرهيزاي et ريزوما (GR)، يعرف أيضا باسم عرق السوس، وتتألف من الجذور المجففة وجذور من أورالينسيس غلابرا و العرقسوس غ. قد استخدمت في الطب التقليدي الصيني والكوري لأغراض مختلفة بما في ذلك المضافات الغذائية وطبي5،6،7.
في سابق دراسة8، معالجة المسبقة مع استخراج الميثانول الموارد الوراثية (جريكس) وأظهرت تأثير apoptotic مكافحة الفئران مكاو، بما في ذلك منع كبير من هذا الانخفاض في تعبير البروتين من سرطان الغدد الليمفاوية الخلية-ب 2 (Bcl-2) وخارج كبيرة Bcl (Bcl-xL). أجريت هذه الدراسة تحسين إمكانية تكرار نتائج نموذج الماوس ماكاو التقليدية عن طريق تقييم كفاءته في تحديد ما إذا كان العلاج ما بعد احتشاء بجر فعالية خفض حجم احتشاء في الأضرار الدماغية الناجمة عن ماكاو.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات بموافقة لجنة الأخلاقيات التابعة لجامعة بوسان الوطنية (رقم الاعتماد، بنو-2016-1087). ويرد في الشكل 1نظرة عامة رسومية لهذه الدراسة.
1-إعداد وإدارة لجر
ملاحظة: الموارد الوراثية المستخدمة في هذه الدراسة تم شراؤها من شركة تجارية للأدوية.
- 200 جرام من الموارد الوراثية في مل 2,000 من الميثانول واحتضان في درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية) لمدة 5 أيام.
- تصفية هذا الخليط باستخدام ورق الترشيح مع سمك 0.26 مم و 5 حجم المسام ميكرومتر، ثم قم بإزالة المادة طافية. إضافة مل 1,000 من الميثانول إلى بقايا غرام وتصفية مرة أخرى.
- الجمع بين سوبيرناتانتس اثنين وتصفيتها من خلال تصفية الورق والتركيز تحت الفراغ وثم فريزيدري بقايا لإنتاج جر.
- حل جريكس في ثنائي ميثيل سلفوكسيد ([دمس])، مخفف مع المحلول الملحي الفيزيولوجي 0.9%، وتصفية من خلال عامل تصفية حقنه 0.45 ميكرومتر. ثم ضبط تركيز النهائية [دمس] < 5%.
- إدارة جر (300 ملغ/كغ من وزن الجسم) ح 1 بعد ضخه من ماكاو عبر تزقيمية الشفوي. إدارة [دمس] مخففة في المحلول الملحي الفسيولوجي (10 مل/كغ من وزن الجسم) فقط إلى المجموعة العادية ومجموعات المراقبة، على التوالي.
ملاحظة: تركيز جر المستخدمة في هذه التجربة مصممة وفقا لتركيز التي كانت نشطة من خلال موقعنا الدراسة السابقة8.
2-الفأرة النموذجي من ماكاو
- استخدام الفئران C57BL/6 الذكور الذين تتراوح أعمارهم بين 6 أسابيع ووزنها 22-25 غ. توفر جميع الحيوانات مع حرية الوصول إلى تشو القياسية، والمياه، والبيت لهم في بيئة ذات حرارة مضبوطة (22 ± 1 درجة مئوية) ودائرة ضوء/الظلام ح 12.
- قم بتقسيم الفئران إلى مجموعات من الفئران ستة كل، التي ينبغي أن تتكون من العادي تعمل بالشام، والتحكم، وجر معاملة الجماعات.
- إجراء عمليات جراحية ماكاو (تعديل أسلوب كويزومي et al. 9) المتعلقة بمراقبة وجر معاملة مجموعات باستخدام مجهر ستيريو.
- حمل التخدير استنشاق في الفئران باستخدام إيسوفلوراني 2% في 70% ن2س و 30% O2. ويعتبر التخدير كافية عندما يصبح الماوس لا يستجيب للتحفيز الميكانيكية المطبقة على ذيله. الحفاظ على درجة حرارة الجسم للفئران عند 36.5 ± 0.5 درجة مئوية استخدام جسم درجة الحرارة-عقد شامل متصل بمقياس حرارة.
- إزالة جميع شعر صدورهم واعناق الفئران بحلق متبوعاً باستخدام كريم لإزالة الشعر، تطهير الموقع الجراحي للجلد مع فرك تدين بالتناوب مع الكحول لمرتين، ومن ثم جعل شق من 2 سم تقريبا منذ فترة طويلة مع العمليات الجراحية شفرة في وسط العنق. عزل بعناية الشريان السباتي المشترك الأيسر (لككا) والشريان السباتي الخارجي، وفرع الشريان السباتي الداخلي من الأنسجة الضامة المحيطة.
- سد الشريان السباتي الخارجي والشريان السباتي المشترك مع خياطة جراحية (خياطة الحرير 4-0، عقبة نصف عقده) مؤقتاً عرقلة تدفق الدم في الشريان السباتي الداخلي أثناء العملية.
- إدراج خياطة نايلون المغلفة بالسيليكون (شعيرات 8-0، 11 مم طويل) عن طريق الشريان السباتي الداخلي لمنشأ MCA الأيسر. ضبط سمك الجزء المغلفة بالسيليكون للشعيرة إلى طائفة من 0.10-0.12 ملم.
- قياس الانخفاض في تدفق الدم الدماغي النسبي (rCBF) في هيئة مكافحة الاحتكارات باستخدام مقياس دوبلر التدفق على ليزر. وسيتم تأكيد مكاو عندما يحتفظ rCBF في < 20% من القيم شرط يستريح خلال كامل الفترة الدماغية.
- إصلاح خيوط المدرج للأوعية الدموية ح 2 بينما هو تغطي الشريان الدماغي، وثم سحب خيوط لاستعادة تدفق الدم ح 22 من ضخه بعناية. خياطة الجلد بالخياطة في أماكن 5 (3-0 خياطة الحرير، عقده اثنين نصف عقبات) والسماح لكل الماوس توقظ من التخدير.
- في المجموعة العادية، القيام بعملية شام اتباع نفس الإجراء أعلاه (حتى 2.4)، مع الاستثناء التالي. سد الشريان السباتي المشترك وخياطة قطعي العضلات والجلد.
3-قياس حجم الأنسجة التالفة في المخ
- بعد القتل رحيم الفئران لقياس تلف المخ مع استنشاق أول أكسيد الكربون2 ، العقول المكوس الماوس 24 ساعة بعد البداية ماكاو باستخدام مقص جراحي آيريس والملقط الزاوية.
- بعد إزالة الرأس باستخدام مقص، جعل شق في الجلد خط الوسط من الرأس إلى الوجه عبر الجلد من الجمجمة.
- كسر عظام الجداري مع الملقط الزاوية، تقشير قبالة بلده دوراً مهما في الوقت نفسه، وثم عزل الدماغ بعناية من الجمجمة.
- قطع الأنسجة قصت إلى أقسام (1 مم) باستخدام مصفوفة الدماغ ماوس، وثم وصمة عار المقاطع ل 17 دقيقة في محلول من كلوريد 2,3,5-تريفينيلتيترازوليوم 2% (عقاري).
- إصلاح المقاطع في الفورمالين 10% على الأقل من 2 ح وثم التقاط صور لهم باستخدام كاميرا رقمية. وسيتبع عقاري وصمة عار أحمر الأنسجة قابلة للحياة بينما ستكون مناطق نخرية بيضاء.
- تحليل وتحديد منطقة احتشاء دماغي من كل قسم باستخدام إيماجيج.
4-توضع وويوزين (H & E) وكريسيل تلطيخ البنفسجي من أقسام نسيجية
- Euthanize الفئران لدراسة نسيجية باستنشاق أول أكسيد الكربون2 ونتخلل لهم ترانسكارديالي مع 10 مل من المحلول الملحي مخزنة الفوسفات (PBS)، تليها 10 مل من 4% بارافورمالدهيد (منهاج عمل بيجين). عزل الدماغ باستخدام نفس الإجراءات أعلاه (3.1) وتزج في الدماغ في 10 مل من محلول السكروز 30% بين عشية وضحاها.
- تضمين أنسجة المخ في قطع الأمثل درجة الحرارة (OCT) مركب وشريحة التاج إلى أقسام 15-ميكرومتر-سميكة من كريوستات باستخدام. تحميل المقاطع على الشرائح الزجاجية، متبوعاً بتلوين الهيماتوكسيلين وويوزين (H & E) أو البنفسجي كريسيل.
- تزج الشرائح الزجاجية في الإيثانول 80% لمدة 1 دقيقة تليها تلطيخ في الحل توضع لمدة 5 دقائق.
- تراجع الشرائح في الكحول حمض 1% مرتين، وتزج في محلول كربونات الليثيوم مشبعة لمدة 30 s، أغسل بماء الصنبور عن 30 ثانية، ثم كونتيرستين في الحل ثم لمدة 30 ثانية.
- شطف الشرائح في ماء الصنبور، نقع في 95% والإيثانول المطلقة تباعا.
- أيردري الشرائح، واضحة لهم في زيلين نفط لمدة 10 دقيقة على الأقل، ومن ثم تحميل كوفيرسليبس استخدام المتوسط المتصاعدة.
- ضع الشرائح الزجاجية على شريحة الأكثر دفئا على الأقل 1 ح، متبوعاً بالانغماس في الإيثانول 50% المخفف مع كلوروفورم بين عشية وضحاها.
- وصمة عار الشرائح مع 0.1% كريسيل البنفسجي لمدة 10 دقيقة في فرن جافة 40 درجة مئوية.
- تزج في الإيثانول 95% لمدة 30 دقيقة، ثم يذوي في الإيثانول المطلقة لمرات 2.
- قم بمسح 2 مرات في زيلين نفط لمدة 5 دقائق، ثم جبل مع تصاعد المتوسطة بعد تجفيف الهواء.
- استخدام مجهر، لاحظ النسيجي التغييرات التي حدثت بعد إصابة في الدماغ الناجم عن ماكاو.
5-إحصائية تحليل
- التعبير عن النتائج التجريبية كوسائل ± الانحراف المعياري وتحديد الدلالة الإحصائية بين المجموعات اتجاه واحد تحليل تباين (ANOVA) تليها تحليل توكي الوظائف المخصصة باستخدام برنامج تحليل بيانات باستخدام.
- تعيين الدلالة الإحصائية في فقيمه < 0.05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
من الملاحظ لا احتشاء دماغي في المجموعة العادية تعمل بالشام، بينما يلاحظ في مجموعة مراقبة، مجموعة واسعة نسبيا من المناطق المتضررة. ويلاحظ تدار 300 ملغ/كغ جر في ماكاو نموذج المجموعة، انخفاض يعتد به إحصائيا في المنطقة المتضررة في الفئران (الشكل 2).
وتحقق تغيرات نسيجية تلطيخ أقسام الدماغ الدماغية مع البنفسجي ح & ه أو كريسيل. ح & ه تلطيخ يوفر المعلومات الهيكلية ومعلومات وظيفية محددة حول الخلايا10، بينما كريسيل البنفسجي تلطيخ تستخدم لتقدير العدد الكلي للخلايا العصبية هيبوكامبال11. هكذا، البنفسجي ح & ه أو كريسيل كثافة، كما تم قياسها باستخدام برنامج إيماجيج (الشكل 3أ)، يوفر فهرس لبقاء الخلية. ح & البنفسجي ه وكريسيل تلطيخ كثافة إلى حد كبير الانخفاض في السيطرة على المجموعة بالنسبة للمجموعة العادية (الشكل 3ب، 3 ج). يظهر المجموعة المعالجة بجر أكبر سلامة غذائها، مما يعني أقل من موت الخلايا العصبية، من السيطرة على المجموعة (الشكل 3ج). تشير هذه النتائج إلى أن جر آثاراً قوية محصن ضد الإصابة الدماغية الاسكيمية/الاكسجينيه-المستحث.
الشكل 1 . مخطط نموذج (ماكاو) انسداد الشريان الدماغي الأوسط والمعاملة مع استخراج الميثانول من الرقم الأساسي جليسيرهيزاي et جذمور (جر). الفئران تعامل مع 300 ملغ/كغ من جر 1 ح بعد ضخه ماكاو، الذي أبقى 2 حاء الفئران كانت euthanized 24 ساعة بعد أن بدأت ماكاو، وثم كانت مخزنة في تجميد عميق مقايسة البروتين شرائح المخ المقطوع أو الملون مع الحل عقاري لاحتشاء القياس. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 . صور الممثل لمقاطع (A) الدماغ تظهر آثار الميثانول مقتطف من الرقم الأساسي جليسيرهيزاي et جذمور (جر) العلاج في انسداد الشريان الدماغي الأوسط بعد (ماكاو)-الناجم عن أحجام احتشاء الدماغ وعلاج (ب) واحد مع 300 ملغ/كغ 1 جر ح بعد أن قمعت ضخه ماكاو إلى حد كبير حجم احتشاء. يتم عرض النتائج كوسائل ± SDs. #p # # < المجموعة العادية مقابل 0.001، * * ف < مقابل 0.01 التحكم في الفريق؛ n = 6 كل مجموعة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 . صور الممثل (A) الهيماتوكسيلين وويوزين (H & E)-وأقسام الدماغ الملون البنفسجي كريسيل (ب، ج) اللون الكثافات، التي استخدمت لتقييم آثار استخراج الميثانول من الأساس جليسيرهيزاي و et جذمور (جريكس) في أدمغة الأوسط انسداد الشريان الدماغي (ماكاو)-إصابة الفئران. كانت الأضرار النزاهة والأنسجة النسيجي في أدمغة الفأر المقررة باستخدام (ب) ح & ضخه ماكاو بوست كريسيل البنفسجي تلطيخ ح 1 (ه) أو (ج). تلطيخ في ح & مقاطع ه الملون الأحمر يشير إلى الأضرار النووية. كانت الملون الخلايا العصبية مصبوغ ببنفسجي كريسيل الأرجواني. وأظهرت المجموعة المعالجة بجر أفضل سلامة غذائها مما فعلت مجموعة المراقبة، مما يشير إلى موت الخلايا العصبية أقل. من ح & الملون ه؛ ب، كريسيل الملطخة بالأشعة فوق البنفسجية؛ ج ود، والتوسعات و ب، على التوالي. النتائج هي وسائل ± SDs. #p # # < 0.001، و * p < مقابل 0.05 العادي ومجموعات المراقبة؛ n = 6 كل مجموعة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
مع تزايد انتشار أمراض التمثيل الغذائي مثل ارتفاع ضغط الدم المزمن، ومرض السكري، والدهون، وعوامل الخطر الرئيسية للسكتة الدماغية، منع السكتة الدماغية والعلاج قد أصبحت مجالاً هاما للبحوث الطبية12، 13-العجز في اللغة والحركة بعد السكتة دماغية ترتبط بقوة مع درجة الضرر الذي يصيب الدماغ الأنسجة14 ويسفر عن تدني نوعية حياة للمرضى و الأسر على15. من المهم استخدام نموذج حيوان مناسب من السكتة الدماغية التي تنطوي على نفس التغييرات المرضية كتلك التي تحدث في الأمراض البشرية لدراسة مدى فعالية العلاج بالعقاقير. يحاكي النموذج ماكاو السكتات الدماغية الخثاريه بعرقلة الأوعية الشريانية الدماغية. ويستخدم عادة لأنها نسبيا استنساخه وكسبها16،17،،من1819.
بيد مقارنة بين مجال احتشاء الدماغية التي يسببها ليستريح نفس الوقت أفاد باحثون عدة، يكشف عن أن حجم احتشاء مجموع يتراوح بين دراسات. خلصنا إلى أن ذلك يرجع إلى الاختلافات في الانسداد المواد المستخدمة وإجراء العمليات الجراحية. ولذلك، على الرغم من أن نموذج القوارض ماكاو يعتبر استنساخه بدرجة عالية، ليس دائماً ممكناً الحصول على إمكانية تكرار نتائج مثل هذه. ولذلك، نحن الأمثل سمك خيوط المستخدمة في نموذج ماكاو الماوس من خلال دراسة أولية و التقرير السابق8.
مقارنة النتيجة الأكثر تميزا هذه الدراسة الأولية إلى أن دراسات أخرى هي أن تلطيخ عقاري لم تكشف أي احتشاء دماغي عندما حملت في الاسكيمية لمدة 60 دقيقة (البيانات لا تظهر). حتى بعد 90 و 120 دقيقة من ماكاو في الفئران، أظهرت لنا نتيجة وحدة احتشاء أقل مقارنة بغيرها من الدراسات البحثية. حد واحد من هذه الدراسة أن نحن لم تحدد بعد السبب الدقيق لهذه النتائج؛ ومع ذلك، نحن نخطط لاستكشاف هذه الظاهرة بمزيد من الدراسات.
وأفاد العديد من الدراسات مؤخرا أن الموارد الوراثية أو مكوناته لديها الأنشطة الدوائية بما في ذلك آثار انتيتومور، ومضادات الميكروبات والالتهابات20،،من2122. وأفادت دراسة سابقة أن جر ما قبل المعالجة فعالة تحول دون تفعيل caspase-9 قبل upregulating تعبير البروتين Bcl-2 و Bcl-xL8. ومع ذلك، العلاجات الوقائية للسكتة الدماغية ذات الصلة سريرياً أقل من العلاج ما بعد السكتة الدماغية.
في هذه الدراسة، التي تقوم على دراسة سابقة8 تقييم فعالية جر بعد العلاج في طراز ماوس ماكاو. جريكس بعد العلاج كما هو مبين في المقطع النتائج التمثيلية، أظهرت آثار مفيدة في الحد من حجم إجمالي احتشاء والتخفيف من الأضرار التي لحقت بالهياكل الخلوية في إصابات الدماغ الناجمة عن مكاو في الفئران. وتفتقر إلى آليات عمل محددة لجر إصابة في الدماغ الدماغية فيما بعد في هذه الدراسة، ولكن أظهرت البروتوكولات التجريبية المستخدمة في هذه الدراسة بنجاح آثار هذا العلاج بالأعشاب عن طريق محاكاة الآثار البشرية لسكتة دماغية.
على الرغم من أن النتائج التجريبية التي لا تراعي في هذه الدراسة، إلى درجة العجز العصبية (NDS) وتم قياس في تجربتنا الأولى وذكر لا يوجد فرق كبير بين عنصر التحكم والمجموعات المعالجة بجر، الذي يفترض أن يكون راجعا لفترة مراقبة قصيرة مقارنة بشدة السكتة الدماغية. نحن نخطط لمراقبة آثار العلاج جريكس في مديرية الأمن الوطني لفترة طويلة بعد إلحاق أضرار متوسطة.
وفي الختام، تجلى أثر محصن من جر العلاج في نموذج ماكاو ماوس في هذه الدراسة بإمكانية تكرار نتائج جيدة. وينبغي دراسة البروتينات المشاركة في الآلية الأساسية في الدراسات المستقبلية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
غير قابل للتطبيق.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | |
| Qualitative filter paper | Advantec | Filter paper No. 2 | Qualitative filter paper |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma | D8418-250ML | Dimethyl sulfoxide (DMSO) |
| Syringe filter (0.45 µm) | Sigma | CLS431220 | Syringe filter (0.45 µm) |
| Stereo Microscope | Leica | M50 | Stereo Microscope |
| Stereo Microscope | Nikon | SMZ745 | Stereo Microscope |
| Laser Doppler | Moor Instrument | moorVMS-LDF | Laser Doppler |
| Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System | Harvard Appratus | 34-1352 | Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System |
| Homeothermic Monitoring System | Harvard Appratus | 55-7020 | Homeothermic Monitoring System |
| Digital Camera | Canon | Eos-M2 | Digital Camera |
| Cryostat | Leica | CM3050S | Cryostat |
| Microscope | Carl Zeiss | Zeiss Axio | Microscope |
| Data Analysis | Systat Software Inc. | SigmaPlot version 12 | Data Analysis |
| Data Analysis | NIH Image | ImageJ | Data Analysis |
| Mouse diet | Doo Yeol Biotech | Standard rodent chow | Mouse diet |
| Isoflurane | JOONGWAE | A02104781 | Isoflurane |
| Isoflurane | TROIKAA | ISOTROY 100 | Isoflurane |
| Silk suture (4-0 Black silk) | AILEE | SK47510 | Silk suture (4-0 Black silk) |
| Silk suture (3-0 White silk) | Baekjae | 57 | Silk suture (3-0 White silk) |
| Nylon suture (8-0 monofilament) | AILEE | NB825 | Nylon suture (8-0 monofilament) |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma | T8877-25G | 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) |
| Formalin (Formaldehyde solution) | JUNSEI | 69360-1263 20KG | Formalin (Formaldehyde solution) |
| Hematoxylin (Harris Hematoxylin) | YD Diagnostics | EasyStain | Hematoxylin (Harris Hematoxylin) |
| Eosin (1% Eosin Y Solution) | MUTO PURE CHEMICALS | 3200-2 | Eosin (1% Eosin Y Solution) |
| Cresyl violet (acetate) | Sigma | C5042-10G | Cresyl violet (acetate) |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148-1KG | Paraformaldehyde |
| Sucrose | JUNSEI | 31365-0350 1KG | Sucrose |
| Optimum cutting temperature (OCT) compound | Scigen | 4583 | Optimum cutting temperature (OCT) compound |
| Disecting Knife | Fine Science Tools | 10055-12 | Disecting Knife |
| #4 Forcep | Fine Science Tools | 11241-30 | #4 Forcep |
| #5 Forcep | Fine Science Tools | 11254-20 | #5 Forcep |
| #6 Forcep | Fine Science Tools | 11260-20 | #6 Forcep |
| #7 Fine Forcep | Fine Science Tools | 11274-20 | #7 Fine Forcep |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 14001-12 | Surgical Scissors |
| Extra Fine Bonn Scissors | Fine Science Tools | 14084-08 | Extra Fine Bonn Scissors |
| Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors | Fine Science Tools | 15371-92 | Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors |
| Vessel Dilating Forcep | Fine Science Tools | 18153-11 | Vessel Dilating Forcep |
References
- Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered. Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).
- Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).
- Durukan, A., Tatlisumak, T. Animal models of ischemic stroke. Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).
- Kim, D. Animal Models of Stroke. Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).
- Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. A new exploration of licorice metabolome. Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).
- Zhu, Z., et al. Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species. Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).
- Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice. Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).
- Lim, C., et al. Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice. Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).
- Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).
- Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).
- Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods. Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).
- Alberts, M. J., Ovbiagele, B. Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies. Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).
- Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes. Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).
- Barlow, S. J. Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke. Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).
- Roth, S., Liesz, A. Stroke research at the crossroads - where are we heading. Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).
- Feuerstein, G. Z., Wang, X. Animal models of stroke. Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).
- Herson, P. S., Traystman, R. J. Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050. Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).
- Kumar, A., Gupta Aakriti, V. A review on animal models of stroke: an update. Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).
- O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. History of animal models of stroke. International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).
- Ji, S., et al. Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine. Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).
- Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. The pharmacological activities of licorice. Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).
- Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb. Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).
