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Stimare i tassi di denitrificazione sedimento utilizzando core e N2O microsensori

Published: December 6, 2018 doi: 10.3791/58553
Automatic Translation
1, 2, 1,3
1Campus UAB, CREAF, 2Center for Advanced Studies of Blanes, (CEAB, CSIC), 3CSIC

Summary

Questo metodo calcola tassi di denitrificazione di sedimento in carote di sedimento utilizzando le misurazioni acetilene tecnica e microsensor di inibizione del accumulato N2O. Il protocollo descrive le procedure per la raccolta i nuclei, calibrare i sensori, eseguendo l'inibizione di acetilene, l'accumulo di N2O di misura e calcolo del tasso di denitrificazione.

Abstract

Denitrificazione è il processo principale di biogeochimico rimozione dell'azoto dalla biosfera. La valutazione quantitativa di questo processo è diventato particolarmente rilevante per valutare il ciclo dell'azoto globale antropogenico alterato e l'emissione di gas serra (cioè, N2O). Diversi metodi sono disponibili per la misurazione di denitrificazione, ma nessuno di loro sono completamente soddisfacenti. Problemi con i metodi esistenti comprendono la loro sensibilità insufficiente, e la necessità di modificare i livelli di substrato o alterare la configurazione fisica del processo utilizzando disturbato campioni. Questo lavoro descrive un metodo per stimare i tassi di denitrificazione di sedimento che combina carotaggio, inibizione di acetilene e microsensor misurazioni del accumulato N2O. I principali vantaggi di questo metodo sono una bassa dispersione della struttura dei sedimenti e la raccolta di una registrazione continua di accumulo di N2O; Questi consentono stime dei tassi di denitrificazione affidabile con valori minimi fino a 0,4-1 µmol N2O m-2 h-1. La capacità di manipolare fattori chiave è un ulteriore vantaggio per ottenere approfondimenti sperimentali. Il protocollo descrive le procedure per la raccolta i nuclei, calibrare i sensori, eseguendo l'inibizione di acetilene, l'accumulo di N2O di misura e calcolo del tasso di denitrificazione. Il metodo è appropriato per la stima di tassi di denitrificazione in qualsiasi sistema acquatico con carote di sedimento possono essere recuperate. Se la concentrazione di2O N è sopra il limite di rilevamento del sensore, il passo di inibizione di acetilene può essere omesso per stimare l'emissione di2O N invece di denitrificazione. Vi mostriamo come stimare entrambi i tassi di denitrificazione effettivi e potenziali, aumentando la disponibilità di nitrato, come pure la dipendenza di temperatura del processo. Illustriamo la procedura utilizzando sedimenti del Lago di montagna ed discutere i vantaggi e le debolezze della tecnica rispetto ad altri metodi. Questo metodo può essere modificato per scopi particolari; per esempio, può essere combinato con 15N traccianti per valutare la nitrificazione e denitrificazione o campo in situ misurazioni dei tassi di denitrificazione.

Introduction

Antropogeniche alterazione del ciclo dell'azoto è uno dei problemi più impegnativi per il sistema di terra1. Attività umana è almeno raddoppiato i livelli di azoto reattivi disponibile per la biosfera2. Tuttavia, permangono grandi incertezze per quanto riguarda come viene valutato il ciclo globale del N. Alcune stime di flusso sono state quantificate con meno di errore del ± 20%, e molti hanno incertezze di ± 50% e più grande3. Queste incertezze indicano la necessità di accurate stime dei tassi di denitrificazione attraverso gli ecosistemi e la comprensione dei meccanismi di fondo di variazione. Denitrificazione è un'attività microbica, attraverso il quale gli ossidi azotati, principalmente nitrati e nitriti, sono ridotti a gas di dinitrogen, N2O e N24. La via è molto rilevante per la disponibilità della Biosfera di azoto reattivo perché è il principale processo di rimozione5. N2O è un gas serra con un potenziale di riscaldamento quasi 300 volte quello di CO2 oltre 100 anni ed è la corrente principale causa di riduzione dell'ozono stratosferico a causa delle grandi quantità essendo emessa6,7.

Di seguito, presentiamo un protocollo per la stima di tassi di denitrificazione di sedimento utilizzando core e N2O microsensori sperimentalmente (Figura 1). Tassi di denitrificazione sono stimati utilizzando l'acetilene inibizione metodo8,9 e misurazioni dell'accumulo di N2O durante un periodo definito (Figura 2 e Figura 3). Dimostriamo il metodo applicandolo ai sedimenti del Lago di montagna. Questo studio finalizzato evidenzia le prestazioni del metodo per la rilevazione tassi relativamente bassi con il minimo disturbo alla struttura fisica dei sedimenti.

Denitrificazione è particolarmente difficile da misurare10. Ci sono diversi metodi, ciascuno con vantaggi e svantaggi e approcci alternativi. Gli svantaggi di metodi disponibili comprendono l'uso di risorse costose, sensibilità insufficiente e la necessità di modificare i livelli di substrato o alterare la configurazione fisica del processo utilizzando campioni disturbati10. Una sfida ancora più fondamentale per N2 di misura è i suoi livelli elevati sfondo nell' ambiente10. La riduzione di N2O N.2 è inibita da acetilene (C2H2)8,9. Così, denitrificazione può essere quantificato misurando l'accumulato N2O in presenza di C2H2, che è fattibile a causa di bassi livelli ambientali di2O N.

L'uso di C2H2 per misurare i tassi di denitrificazione in sedimenti è stato sviluppato circa 40 anni fa11e l'incorporazione di sensori2O N si è verificato circa 10 anni più tardi12. L'approccio più ampiamente applicata per acetilene è il "nucleo statico". L'accumulato N2O è misurato durante un periodo di incubazione fino a 24 h dopo l'aggiunta di spazio di testa del sedimento sigillato core10C2H2 . Il metodo qui descritto segue questa procedura con alcune innovazioni. Aggiungiamo il C2H2 di gorgogliare il gas nella fase acquosa del nucleo per alcuni minuti, e abbiamo riempire tutto lo spazio di testa con acqua campione prima di misurare l'accumulo di N2O con un microsensor. Abbiamo anche un sistema di agitazione che impedisce la stratificazione dell'acqua senza risospendere il sedimento. La procedura quantifica il tasso di denitrificazione per area di superficie del sedimento (ad es., µmol N2O m-2 h-1).

L'elevata variazione spaziale e temporale di denitrificazione presenta un'altra difficoltà nella sua quantificazione accurata10. Di solito, accumulo di N2O è misurata in sequenza mediante gascromatografia di campioni dello spazio di testa che vengono raccolti durante l'incubazione. Il metodo descritto fornisce migliore monitoraggio della variazione temporale dell'accumulo2O N, perché il microsensor fornisce un segnale continuo. Il multimetro microsensor è un amplificatore digitale microsensor (picoammeter) che si interfaccia con i sensori e il computer (Figura 1a). Il multimetro permette diversi N2O microsensori essere utilizzato allo stesso tempo. Per esempio, fino a quattro sedimento nuclei dallo stesso sito di studio possono essere misurate simultaneamente per tenere conto della variabilità spaziale.

L'approccio di base a malapena disturba la struttura di sedimento rispetto ad alcuni altri metodi (ad esempio, fanghi). Se l'integrità dei sedimenti è alterata, questo porta a denitrificazione irrealistico tariffe13 che sono solo sufficienti per i confronti relativi. Tassi più elevati sono sempre ottenuti con metodi di liquami rispetto al nucleo metodi14, perché quest'ultimo conserva la limitazione di denitrificazione di substrato diffusione15. Misure di liquami non possono essere considerati rappresentativo di in situ tariffe16; Essi forniscono misure relative per i confronti eseguiti con la stessa procedura.

Il metodo descritto è appropriato per la stima di tassi di denitrificazione in qualsiasi tipo di sedimento che può essere animato. Consigliamo in particolare il metodo per eseguire manipolazioni sperimentali di alcuni dei fattori guida. Esempi sono esperimenti che modificare la disponibilità di nitrato e temperatura come necessario per stimare l'attivazione di energia (Eun) di denitrificazione17 (Figura 2).

Figure 1
Figura 1 : Messa a punto sperimentale. (un) generale messa a punto sperimentale per stimare i tassi di denitrificazione sedimento utilizzando N2O microsensori e anime. La camera di incubazione assicura condizioni di (± 0,3 ° C) di oscurità e temperatura controllata. Cinque carote di sedimento intatta possono essere elaborati contemporaneamente utilizzando i loro rispettivi sensori2O N. (b) N2O camera di calibrazione sensore. Abbiamo adattato con tappi di gomma e siringhe per mescolare il N2O acqua (Vedi protocollo punto 3.4.3). C'è un termometro per controllare la temperatura dell'acqua. (c) Close-up di un campione di nucleo di sedimento con il sensore inserito nel foro centrale del coperchio in PVC e i giunti sigillati con nastro adesivo. L'agitatore è appeso nell'acqua, e l'elettromagnete è vicino ad esso e fissata alla parte esterna del tubo acrilico. punta (d), close-up della N2O microsensor protetto da un pezzo di metallo. (e) un nucleo di sedimento che è appena stato recuperato. È stata campionata da una barca in un lago profondo; il tubo acrilico con il nucleo è ancora fissato al Messaggero-adattato gravità corer19. Vedi la Tabella materiali per tutti gli elementi necessari per eseguire questo metodo. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Protocol

1. preparazione

Nota: Questo iniziano il giorno prima le misurazioni.

  1. Assemblare la configurazione di misura (Figura 1un, vedere la Tabella materiali).
    Nota: Per garantire un'alimentazione costante e di alta qualità, il dispositivo di misurazione è collegato alla presa tramite un uninterruptible power supply (UPS) che può anche agire come un backup. Nel caso di un'interruzione dell'alimentazione di lunga durata, una batteria per auto servono come fonte di alimentazione supplementare.
  2. Avviare il software del sensore e applicare un -0,8 V tensione di polarizzare i microsensori di O2N. Il segnale indica una discesa rapida e un conseguente aumento, poi infine diminuisce fino a quando è bassa e stabile.
    Nota: Il produttore microsensor raccomanda polarizzazione almeno una notte (o più) per garantire la stabilità del segnale del sensore. Un'altra raccomandazione è di tenere il sensore polarizzato se misure sono previste per il multiplo o giorni consecutivi18.
  3. Accendere la camera di incubazione e regolare le condizioni sperimentali (per esempio, luce selezionata fuori e temperatura impostata per essere simile a quello previsto nel campo). Posizionare un contenitore con acqua deionizzata all'interno della camera in modo che l'acqua è disponibile successivamente alla temperatura di misurazione per la taratura dei sensori.
    Nota: Questo passaggio può essere fatto lo stesso giorno delle misure previste, prima della partenza per raccogliere le carote. Per misure standard, si consiglia di utilizzare condizioni di oscurità.
  4. Imballare il nucleo di campo raccolta materiali: dispositivo corer, tubi, tappi di gomma, Rubinetti di cloruro di polivinile (PVC), cacciavite, unità di sistema (GPS) di posizionamento globale, termometro, Sonar di palmare, trampoliere e barca gonfiabile di campionamento (vedere la tabella di di Materiali). Utilizzare un elenco di controllo per garantire che tutti i materiali sono inclusi.

2. sedimento Core Collection

  1. A seconda della profondità dell'acqua, seguire 2.1.1 o 2.1.2.
    1. Per i corpi di acqua profonda
      1. Utilizzare un carotiere a gravità messaggero-adattato19 da una barca o una piattaforma (Figura 1e).
      2. Fissare il tubo di campionamento (acrilico, ø 6,35 cm, lunghezza ≥ 50 cm) per il carotiere con un cacciavite.
      3. Selezionare il punto di campionamento secondo gli obiettivi di indagine. Prendere nota della posizione (ad es., utilizzando le coordinate GPS) e profondità di misura (ad es., usando un ecoscandaglio palmare). Se campionamento da una barca, è possibile utilizzare un ancoraggio (ad es., un sacchetto con le pietre) per evitare alla deriva durante collezione core.
      4. Distribuire il sistema di carotaggio finché il tubo di campionamento ~ 1 m dal sedimento. Utilizzare una corda con segni regolari (ad es., intervalli di 1 m) per controllare la posizione di profondità dell'apparecchiatura di campionamento.
      5. Stabilizzare l'apparecchiatura di campionamento per 60 s (ad esempio, per ridurre al minimo il movimento della barca). In tal modo la penetrazione di sedimento corretta e il recupero di un nucleo di sedimenti a malapena disturbato.
      6. Rilasciare ~ 1 m più corda, in modo che il tubo di campionamento penetra il sedimento. Essere consapevoli del fatto che se il tubo di campionamento penetra troppo, può disturbare l'interfaccia acqua/sedimento.
      7. Rilasciare il Messaggero durante il tentativo di mantenere la tensione nella corda affinché il carotiere rimane fissa e in una posizione verticale. Quando il Messaggero gli impatti del carotiere, una piccola differenza può essere sentita nella tensione della corda. A quel tempo, chiudere il carotiere per generare il vuoto che consente il recupero del nucleo di sedimento.
      8. Recupero del carotiere tirando la corda, costantemente e delicatamente.
      9. Una volta che il nucleo è vicino alla superficie, ma ancora interamente sommersa (compresa la parte di gomma del carotiere che assicura il vuoto), mettere un tappo di gomma sul fondo del tubo di campionamento. Ispezionare l'interfaccia acqua/sedimento; dovrebbe essere chiaro e non visibilmente disturbati (Figura 1e). Se questo non è il caso, scartare il nucleo, pulire il tubo e ripetere i passi 2.1.1.4-9.
      10. Elevare l'intero sistema di carotaggio dall'acqua. Sganciare il tubo di campionamento del carotiere e posizionare una copertura in PVC sulla parte superiore. Sigillare con nastro adesivo. Evitare la formazione di spazio aereo.
    2. Per habitat del litorale e dei corpi idrici superficiali
      1. Abito in un trampoliere per il campionamento in acque molto basse (< 0,6 m).
      2. Utilizzare lo snorkeling o immersioni attrezzi per campionamento più profondo (fino a 3 m).
      3. Selezionare il punto di campionamento secondo gli obiettivi di indagine. Prendere nota della posizione (ad esempio, le coordinate GPS). Manualmente, inserire il tubo di campionamento (per esempio, acrilico, ø 6,35 cm) nel sedimento.
      4. Posto un tappo di gomma nella parte superiore del tubo di campionamento per ottenere un vuoto.
      5. Rimuovere il nucleo dai sedimenti e introdurre rapidamente un altro tappo di gomma nella parte inferiore del tubo.
        Nota: È necessario lavorare con il tubo sott'acqua in ogni momento; in siti molto superficiale, si consiglia di accorciare il tubo fino a 20 cm. A volte il sedimento ha un elevato contenuto di acqua e scarichi quando il tubo è rimosso dal letto dei sedimenti. In questo caso, è necessario introdurre il tappo inferiore senza edificante il nucleo fuori il sedimento. Per effettuare questa operazione, immergere il tappo nel sedimento intorno al tubo e manualmente posizionare attentamente per chiudere il fondo del tubo.
      6. Fuori dall'acqua, sostituire il tappo di gomma Fesa con coperchio in PVC e sigillare la giunzione con nastro adesivo.
  2. Proteggere il nucleo durante il suo trasferimento al laboratorio minimizzando rotazioni ed agitazione.

3. taratura dei microsensori di protossido di azoto (N2O)

  1. Uso del computer (strip chart, software del sensore), verifica che il segnale del sensore è stabile e basso (< 20 mV).
  2. Creare un nuovo file (ad esempio, con la data ed il luogo di campionamento (130903_Redon_Lake)) per registrare i valori di taratura e i segnali del sensore.
    Nota: I segnali del sensore sono sensibili alla temperatura (Figura 4). Utilizzare la stessa temperatura per le misurazioni e la taratura del sensore. Il sensore risponde linearmente tra 0% - 2,5% N2O20. Di conseguenza, una calibrazione a due punti è sufficiente18.
  3. Per la calibrazione del valore con zero protossido di azoto, leggere il segnale del sensore mantenendo la punta del sensore immerso in N2O senza acqua (deionizzata).
  4. Calibrare con N2O acqua alla concentrazione desiderata.
    Nota: Preparare l'acqua con una concentrazione di2O N definita, che sarà leggermente superiore alla concentrazione massima prevista durante l'incubazione. Usiamo ~ 25 µM N2O come il valore di taratura. Essere consapevoli di non superare la concentrazione di gamma massima sensore di 500 µM di2O N.
    1. Ottenere N2O saturi d'acqua gorgogliante N2O in acqua deionizzata per pochi minuti.
      Nota: La solubilità in acqua2O N dipende dalla temperatura e salinità21; vedere la tabella nell'appendice del manuale sensore18.
    2. Diluire il N2O saturata di acqua aggiungendo un certo volume di acqua satura di2O N in un volume di acqua deionizzata. Ad esempio, a 20 ° C, aggiungere 0,3 mL di acqua satura di2O di N, che ha una concentrazione di 28,7 mM N2O, per un totale di 375 mL di acqua per ottenere una concentrazione di O2di 22,9 µM N. Nota che 375 mL è il volume totale di camera di calibrazione (Figura 1b).
    3. Dopo aver mescolato delicatamente il N2O acqua satura con acqua deionizzata nella nave di calibrazione per diluirla fino alla concentrazione desiderata, leggere il segnale del sensore quando è costante. Questo è il valore di calibrazione con acqua2O X µM N. Quando la soluzione di miscelazione, essere attenti a non generare bolle, come questo eliminerebbe N2O dalla soluzione di taratura.
      Nota: Tenere presente che il N2O nell'acqua sfuggirà lentamente nell'aria; così, la soluzione di taratura preparata utilizzabile solo per pochi minuti.

4. core preparazione e inibizione di acetilene

  1. Cambia il coperchio PVC situato nella parte superiore di ogni core di sedimento da un'altra copertura con un buco al centro e un agitatore magnetico appeso. Richiudere e sigillare la giunzione con nastro adesivo.
  2. Ridurre la fase di acqua di ogni campione per un'altezza approssimativa di 12 cm (volume ≈ 380 mL). Per questo, prima di inserire un tubo di silicone nel foro centrale. Mettere al centro di sedimenti in un cilindro, quindi spingere il tappo inferiore per creare pressione. Il tappo ed il campione di sedimento salire, e l'acqua in eccesso passa attraverso il tubo. Raccogliere l'acqua in un recipiente di destinatario.
    Nota: I campioni con granularità grossolana possono essere problematici durante questo passaggio. Particelle di sedimento collocate tra il tappo e il tubo possono deformare il tappo e aprire un foro attraverso cui l'aria bolle possono passare e disturbare il campione. Per evitare questo problema, mettere il cilindro al centro del tappo inferiore e cercare di spingere con una forza costante. La giunzione tra il tubo di silicone utilizzato per evacuare l'acqua in eccesso e la copertura in PVC è costituita da una parte solida (ad es., una punta di pipetta 5ml senza relativa estremità più stretta) inserita nel tubo in silicone.
  3. Eseguire l'inibizione di acetilene pullulante di gas acetilene nella fase acquosa del nucleo per circa 10 min. Evitare risospendere il sedimento.
    Nota: Come un'eventuale modifica del metodo, aggiungere un substrato (nitrato) attraverso un mezzo liquido concentrato prima di bubbling di acetilene per potenziali misure di denitrificazione (ad es., come in Figura 3b, c).

5. denitrificazione (N2O accumulo di misura)

  1. Riempire tutto lo spazio di aria nel campione con l'acqua residua precedente. Posizionare il sensore nel nucleo del sedimento attraverso il foro centrale del coperchio superiore in PVC. La punta del sensore deve trovarsi in fase di acqua sopra l'agitatore (Figura 1c).
    Nota: Tutte le giunzioni del tubo acrilico di campionamento devono essere sigillate per evitare perdite di gas e acqua durante la misurazione (Figura 1a, c). Nella parte inferiore del tubo, il tappo di gomma è sufficiente per questo. La parte superiore di tenuta è più difficile. La copertura in PVC deve essere sintonizzata. Esso deve essere riscaldata con una torcia; quindi, quando il materiale diventa flessibile ma non è bruciato, il coperchio è inserito nel tubo affinché la sua forma può essere modellata. Dopo il raffreddamento, la copertura ha bisogno di ulteriori modifiche (ad eccezione di copertura utilizzato per trasportare i campioni al laboratorio in passaggi 2.1.1.10 o 2.1.2.6). Il foro centrale dove è inserito il sensore deve essere eseguito. L'agitatore può essere tenuto con una linea di pesca, che a sua volta è rispettata con la colla all'interno del coperchio, affinché l'agitatore si blocca sulla lenza in acqua (Figura 1c). Inoltre, tutti i giunti (tubo di copertura in PVC e PVC copertura sensore) sono sigillati con nastro adesivo. Posizionare il nastro adesivo elastico per regolare il diametro del sensore al fine di sigillare la superficie di contatto tra il foro centrale del coperchio in PVC e il sensore (Figura 1c).
  2. Accendere il circuito di impulso elettromagnetico che è parte del sistema di agitazione.
    Nota: Il sistema di agitazione impedisce la stratificazione della fase acqua senza disturbare (ematico) il sedimento. Il sistema di agitazione è costituito da un circuito che accende / spegne l'elettromagnete che attrae/rilasci l'agitatore magnetico (Vedi la Tabella materiali per una descrizione dettagliata).
  3. Spostare l'elettromagnete intorno alla parte esterna del tubo acrilico fino a quando l'agitatore si muove continuamente e poi fissarlo con del nastro adesivo (Figura 1c).
  4. Chiudere la camera di incubazione per garantire una temperatura costante (ad es., variazione di ± 0,3 ° C).
  5. Premere il pulsante di registrazione (software del sensore) per avviare la registrazione del segnale del sensore. Letture sono in genere registrate ogni 5 min.
  6. Premere il pulsante stop alla fine del periodo di misurazione.

6. passi di misura finale

  1. Aspettare almeno ~ 10 min con punta del sensore immerso nell'acqua gratuita-N2O (deionizzata) prima di leggere il segnale della zero misura Taratura2O N.
  2. Eseguire una Calibrazione sensore finale. Per questo, è necessario ripetere la calibrazione del sensore, seguendo la sezione 3, ma a partire dal passaggio 3.3.
  3. Salvare il file (software del sensore).

7. denitrificazione calcoli di tasso

  1. Iniziare con il file di output tabulare generato dal sensore software che contiene il record del segnale del sensore in mV e µM N2O i dati di calibrazione.
  2. Tracciare il segnale del sensore contro il tempo per visualizzare il trend di accumulo di N2O(ad esempio, nella figura 2a).
  3. Utilizzare solo l'intervallo di tempo con un accumulo lineare, escluso il periodo di acclimatazione iniziale del campione e una saturazione di finale possibile a causa di limitazione del substrato (ad esempio, Figura 2b). Creare un modello lineare del segnale sensore (µM) nel tempo (h).
    Nota: La pendenza è il tasso di denitrificazione (µM N2O core-1 h-1), che, se diviso per l'area del nucleo (πr2), trasforma il tasso in µM N2O m-2 h-1e moltiplicato per il volume (πr2h, dove h è l'altezza della fase acquosa e r è il raggio interno del tubo acrilico, in questo caso 0,12 m e m 0,03175, rispettivamente) dell'acqua trasforma il tasso in µmol N2O m-2 h-1.

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Representative Results

Un totale di 468 tassi di denitrificazione sono state stimate utilizzando il protocollo sopra nei sedimenti da laghi di montagna dei Pirenei per il periodo 2013-2014. Vi mostriamo alcuni di questi risultati per illustrare la procedura (Figura 2 e Figura 3). In generale, il modello lineare tra la concentrazione di N2O e ora ha buona correlazione (R2 ≥ 0,9). Il pendio del rapporto fornisce una stima del tasso di denitrificazione (punto 7.3; ad esempio, Figura 2d). Se l'attività di denitrificazione è molto bassa, rumore elettronico del sensore diventa più importante e la bontà dell'aderenza diminuisce (ad es., sensori 4 e 5 in Figura 2b e Figura 3a). Sebbene il limite di rilevamento basale di N2O ~0.1 µM in acqua22, che è un intermedio valore riguardanti metodi alternativi23, la possibilità di accumulare migliaia di misurazioni continue per filtrare il rumore consente stime al prezzo relativamente basso di denitrificazione, fino a ~ 1 µmol N2O m-2 h-1 (Figura 2 e Figura 3). Tassi più bassi (cioè, ~0.4 µmol N2O m-2 h-1) può essere stimato restringendo la fase di acqua del campione core ad un'altezza di 8 cm (Vedi protocollo punto 4.2).

Figure 2
Figura 2 : Calcoli di tasso di denitrificazione in un esperimento di dipendenza di temperatura. Effettivo (a e b) e potenziali misure di denitrificazione (c–f) vengono visualizzate. Quando la temperatura della misura è in diminuzione (c), al primo si raffredda il campione e il segnale del sensore, che è dipendente dalla temperatura, declina. (un) A evento simile si verifica all'inizio dell'incubazione nella misurazione effettiva denitrificazione; l'ambiente di laboratorio più caldo per quanto riguarda le condizioni di incubazione produce un raffreddamento del campione, ancora una volta accompagnato da un declino nel segnale del sensore. (e) quando la temperatura è aumentata, in un primo momento caldo i campioni e il segnale del sensore aumenta in modo esponenziale invece linearmente. Quando i campioni raggiungono una temperatura costante, il segnale del sensore aumenta linearmente come al solito. In tutti i casi, è possibile calcolare i tassi di denitrificazione semplicemente utilizzando il periodo di accumulo di2O N lineare (b, de f). (b) inattivo campione 3 non viene visualizzata. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figure 3
Figura 3 : Esempi di denitrificazione valuta calcoli. Effettivo (un) e tassi di denitrificazione potenziale (b e c) sono stati stimati. Abbiamo usato solo l'intervallo di tempo con un'accumulazione di2O N lineare per calcolare il tasso di denitrificazione (pendenza del modello lineare). Tuttavia, in (un), per scopi didattici, vi mostriamo tutte le misurazioni (modelli) con più e meno successo; Abbiamo scarterebbero campione 3 a causa dell'elevata instabilità del sensore e del campione 2 a causa della saturazione nell'accumulazione2O N. (un) campioni 4 e 5 con i tassi di 0,5 e 0,7 µmol N2O m-2 h-1, rispettivamente, sono i casi di misure vicino al limite di rilevazione del metodo. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Discussion

I principali vantaggi del metodo descritto sono l'uso di campioni di carote di sedimento minimamente disturbato e la registrazione continua dell'accumulo2O N. Queste permettono la stima dei tassi di denitrificazione relativamente basso che rischiano di simili a quelle che si verificano in situ. Tuttavia, alcuni aspetti riguardanti il carotaggio, le prestazioni del sensore e potenziali miglioramenti sono discussi.

Un passaggio apparentemente semplice ma fondamentale del metodo è recupero di buon core. L'interfaccia acqua/sedimento deve soddisfare tre criteri: (i) nessuna modifica nella sua composizione chimica o costituente, (ii) nessuna alterazione nel rapporto Sub o il contenuto di acqua e (iii) nessuna struttura pertubation24. Le dispersioni meno sofferto dal campione durante l'intero protocollo, il più realistico e più vicino a in situ condizioni volontà essere la denitrificazione misurato. Ci sono diversi dispositivi/tecniche per il sedimento core collection25, e la loro selezione dipende dalla profondità dell'acqua. Usiamo un messaggero-adattato gravità corer19 per profondi campioni (Figura 1e) perché è un dispositivo abbastanza leggero e può recuperare rapidamente Core breve25 (un sedimento di nucleo di ≥ 10 cm di lunghezza è più che sufficiente per comprendere gli strati ossica e denitrificanti nei sedimenti26,27,28). Nel carotaggio gergo, "sentire" è spesso definito come la capacità di conoscere la posizione del carotiere (se è ancora nella colonna d'acqua o già nel sedimento) e se è aperto o chiuso il25. Per profondità d'acqua intermedio (5-50 m), solitamente ci sono difficoltà con sentimento. Si verifica una perdita di sensazione in acque più profonde (> 50 m) perché i movimenti della colonna d'acqua possono mascherare la posizione del carotiere25. Sentimento può essere perso anche in acque poco profonde (< 3 m) a causa di inclinazione laterale e onda azione25; Ecco perché usiamo un metodo diverso in acque poco profonde, sia manuale diretto carotaggio di immersioni subacquee o vestirsi in un trampoliere. Con questo sistema, la persona che effettua il campionamento può vedere il sedimento e scelga il posto esatto prima di carotaggio; Questo consente, ad esempio, il campionamento di un nucleo di sedimento che contiene un macrofite. Dopo il campionamento, il ricercatore deve continuare a lavorare attentamente per disturbare minimamente il campione di nucleo di sedimento durante il resto del protocollo, soprattutto quando si esegue l'inibizione acetilene dalla bollitura.

Alcuni dettagli devono essere considerati quando si utilizza N2O microsensori. Il software del sensore offre una visualizzazione continua (grafico) del sensore segnale (frequenza di sfondo di 1000 Hz)29. Questi dati non elaborati e il grafico di striscia(ad esempio, nella figura 2a) possono essere salvati. È necessario verificare il comportamento corretto del sensore dopo la sua polarizzazione (ad es., quando tornando dalla raccolta di campi prima di passaggio 4). In particolare, un basso (< 20 mV) e costante segnale di base è previsto quando è sommerso in N2O senza acqua. Ricalibrare il sensore poco (~ 2 h) dopo aver avviato l'uso; Se è già stato utilizzato per alcuni giorni, l'intervallo può essere esteso (~ 24 h)18. Per ridurre al minimo ritarature, tenere il sensore polarizzato a meno che non viene utilizzato per diversi giorni18. Nel corso del tempo, un cambiamento nel segnale sensore può verificarsi, fino al 50% in mesi, che è a causa di una diversa permeabilità della sua membrana18. Più è basso l'interferenza elettronica in laboratorio, la più costante e stabile sarà il segnale del sensore. In questo senso, utilizzando un UPS migliora la qualità dell'energia elettrica che raggiunge il dispositivo di misurazione filtrando le fluttuazioni di tensione. L'intervallo di campionamento, selezionata nella scheda Logger, è diversa dalla frequenza di sfondo. Ogni punto registrato è generato dalla media di molte misurazioni. L'intervallo di campionamento (fino a 10 s) indica la frequenza con cui viene registrato un punto dati. Il numero di misurazioni per unità di tempo utilizzata nella media è definito dalla priorità bassa frequenza29. Per esempio, se impostiamo una frequenza di campionamento di 5 s e una frequenza di sfondo di 500 misurazioni al secondo, quindi i dati sono registrati ogni 5 s e la media di 500 campioni al secondo è misurata durante il precedente 5 s. Registriamo il segnale del sensore ogni 5 min (intervallo di campionamento) e impostare la frequenza di sfondo a 1000 misurazioni al secondo. Il sistema di studio deve essere nota per selezionare l'intervallo di campionamento corretta senza fluttuazioni attese "in media". In sistemi altamente attivi, intervalli di campionamento breve sono raccomandati, mentre gli intervalli più lunghi consentono l'ottimizzazione memoria29 del computer. Alcuni possibili sostanze interferenti (H2S, NO e CO2) possono influenzare di segnale del sensore2O N22. Il sensore è calibrato con acqua deionizzata, ma i campioni possono contenere sostanze interferenti e modificare il segnale di riferimento del sensore. Questa situazione potrebbe spiegare perché i valori negativi vengono visualizzati in campioni 2 e 5 in Figura 2b e 3a Figura, rispettivamente. Tuttavia, quando l'obiettivo è quello di stimare il tasso di denitrificazione, il livello esatto di N2O non è il parametro chiave. Che cosa è la chiave è la pendenza del modello lineare (evidenziando un accumulo lineare di N2O). Infine, è necessario lavorare con una temperatura fissa perché la risposta del sensore2O N cambia con la temperatura (Figura 4).

Semplici modifiche o aggiunte al protocollo consentono anche (i) caratterizzazione delle condizioni ambientali controllare i tassi di denitrificazione misurato, (ii) la stima dei tassi di denitrificazione potenziale simulando la risposta a una guida gradiente (ad es., nitrati) e (iii) stima dei tassi di emissione sedimento N2O saltando l'inibizione di2 C2H a seconda degli obiettivi di studio, possono essere effettuate diverse misurazioni complementari: (i) solo dopo aver recuperato il nucleo, condizioni in situ , ad esempio, temperatura; (ii) prima della misurazione, campioni della fase dell'acqua, per esempio, [n.3–]; e (iii) dopo la misurazione, estrusioni e fette del nucleo alle differenti risoluzioni (mm-cm)25,30, seguendo le procedure spiegate dal P. T. Schwing et al. 30.

Per misurare i tassi di denitrificazione potenziale, è possibile aggiungere nitrato alla fase di acqua del nucleo (ad esempio, Figura 2 e Figura 3) come descritto in C. Palacin-Lizarbe, Camarero L. e J. catalano17. Se in questo modo, è possibile aggiungere il nitrato prima C2H2 inibizione (punto 4.3). Inoltre, se viene aggiunto il nitrato, si consiglia di aggiungere anche il carbonio (C; ad esempio, acetato) e fosforo (P) per mantenere le proporzioni stechiometriche in situ di C, N e P (per esempio, nel sedimento superficiale). Ciò impedirà la limitazione di denitrificazione di questi elementi31,32e anche a mantenere il rapporto c/n che possa influenzare la dominanza del processo di consumo di nitrato (cioè, denitrificazione contro riduzione del Vivarese nitrato di ammonio (DNRA))4. Anossia può essere fissato dalla bollitura di una miscela di2 N -CO2per pochi minuti dopo l'aggiunta di nitrato, per evitare l'interferenza dell'ossigeno con denitrificazione; Si noti tuttavia che questo conduce ad un bloccaggio della nitrificazione. Per calcolare i tassi di emissione O di sedimento N2, omettere l'inibizione di2 H di C2(punto 4.3). Tuttavia, tenere presente che, per quanto è attualmente noto negli ecosistemi acquatici, N2O le emissioni sono proporzionalmente basse rispetto ad N2 emissioni (0% - 4,3%)33, quindi è possibile che l'accumulato N2O sarà inferiore il limite di rilevazione. Se questo è il caso, un'opzione consiste nell'aggiungere nitrato per aumentare l'emessa N2O, calcolare potenziali emissioni di2O N.

La principale debolezza del metodo è l'inibizione della nitrificazione da C2H210,34. Durante l'incubazione, questa inibizione della nitrificazione e l'incompleta inibizione della riduzione di N2O potrebbe diventare evidente, come entrambi sono molto dipendente dal tempo. Per esempio, il tasso di accumulo di partenza N2O deve rivelare il tasso reale di denitrificazione e progressivamente decadere come la disponibilità di nitrato gocce e N2O diffonde nella zona indenne nitrato, dove è ridotto35. Di conseguenza, un tasso di denitrificazione stimato può essere considerato valido solo se le letture mostrano un accumulo lineare di N2O10.

Il metodo descritto stima un tasso di denitrificazione per zona che integra l'attività di intero sedimento. A questo proposito, c'è qualche incertezza circa il raggio d'azione dell'inibizione acetilene quando ribolle il gas nella fase acquosa del campione. Si presume che, almeno, l'inibizione dello strato superficiale del sedimento si verifica, che è quella con il più alto denitrificazione tariffe26,27.

Possibili miglioramenti a questo metodo sono l'utilizzo combinato con 15N traccianti e modifiche che potrebbero consentire la misura di denitrificazione in situ. 15 N tracciante metodi possono essere utilizzati per determinare la proporzione di nitrificazione-denitrificazione accoppiamento che si verificano nel campioni36, ed essa può anche conto di altri processi di flusso N oltre denitrificazione (ad es., anammox e Vivarese riduzione del nitrato di ammonio (DNRA))13,37. Tuttavia, questi metodi hanno lo svantaggio di cambiare il substrato concentrazione10. R. Behrendt, D. de Beer e P. Stief 26 utilizzare un metodo di combinazione di N2O microsensori, C2H2 inibizione e 15N traccianti per analizzare la distribuzione verticale attività di riduzione del nitrato Vivarese processi (denitrificazione e DNRA) nei sedimenti. Ci hanno fatto profili verticali nel sedimento penetrando il sedimento con i sensori. La principale difficoltà nella misurazione denitrificazione in situ è la capacità di gestire un ambiente di temperatura non costante. È necessario registrare l'accumulazione2O N e temperatura simultaneamente e quindi correggere il segnale del sensore2O N dalla dipendenza di temperatura durante i calcoli di tasso di denitrificazione. Questa correzione richiede una precedente analisi della dipendenza dalla temperatura del segnale2O N per ogni sensore. I sensori sono fatti a mano, e ognuno reagisce in modo diverso alla temperatura (ad es., sensore 1 Mostra una dipendenza di temperatura più alta rispetto agli altri nella Figura 2c, e).

Figure 4
Figura 4 : Dipendenza dalla temperatura della risposta microsensor2O N. I diversi versanti del modello lineare del sensore segnale contro la temperatura a ciascuna concentrazione di O2N viene illustrato l'effetto della temperatura sul segnale del sensore. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Disclosures

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Acknowledgments

Il governo spagnolo ha fornito fondi attraverso il Ministerio de Educación come una borsa di studio di dottorato al calderone-L. (FPU12-00644) e assegni di ricerca del Ministerio de Economia y Competitividad: NitroPir (CGL2010-19737), Lacus (CGL2013-45348-P), Transfer ( CGL2016-80124-C2-1-P). Il progetto REPLIM (INRE - programma INTERREG. EUUN - Unione europea. EFA056/15) supportata la scrittura finale del protocollo.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Messenger-adapted gravity corer - - Reference in the manuscript. Made by Glew, J.
Sampling tube - - Acrylic. Dimensions: 100 cm (h) × 6.35 cm (d) × 6.50 cm (D). Sharpen the edge of the sampling tube that penetrates into the sediment to minimize the disturbance in the recovered sediment core sample.
Handheld sounder Plastimo 38074 Echotest II Depth Sounder.
Rubber stopper VWR DENE1012114 With two holes, used to mix the N2O-water in the calibration chamber. Dimensions: 20 mm (h) × 14 mm (d) × 18 mm (D) (3 mm hole (D)).
Rubber stopper VWR 217-0125 To seal the bottom part of the methacrylate tube and to sample in shallow water bodies. Dimensions: 45 mm (h) × 56 mm (d) × 65 mm (D).
Rubber stopper VWR 217-0126 Place the rubber stopper in the top side of the sampling tube to obtain a vacuum for sampling in littoral zones and shallow water bodies. Dimensions: 50 mm (h) x 60 mm (d) x 70 mm (D).
PVC cover - - To seal the top side part of the acrylic tube. Dimensions: 45 mm (h) × 56 mm (d) × 65 mm (D). Dimensions: 65 mm (D).
Adhesive tape - - Waterproof. To ensure all joints (PVC cover sampling tube and PVC cover sensor) and to avoid water leaks.
Thermometer - - Portable and waterproof, to measure the temperature in the water overlying the sediment just after sampling the cores.
GPS - - To save the location of a new sampling site or to arrive at a previous site.
Wader - - For littoral or shallow site samplings.
Boat - - An inflatable boat is the best option for its lightness if the sampling site is not accessible by car.
Rope - - Rope with marks showing its length (e.g., marked with a color code to distinguish each meter).
N2O gas bottle and pressure reducer Abelló Linde 32768-100 Gas bottle reference.
C2H2 gas bottle and pressure reducer Abelló Linde 32468-100 Gas bottle reference.
Tube used to evacuate the excess of water - - Consists of a solid part (e.g., a 5 ml pipette tip without its narrowest end) inserted in a silicone tube.
Nitrous Oxide Minisensor w/ Cap Unisense N2O-R We use 4 sensors at a time.
Microsensor multimeter 4 Ch. 4 pA channels Unisense Multimeter Picoammeter logged to a laptop. The standard device allows for 2 sensor picoammeter connections (e.g., N2O sensor), one pH/mV and a thermometer. We ordered a device with four picoammeter connections, allowing the use of 4 N2O sensors simultaneously.
SensorTrace Basic 3.0 Windows software Unisense Sensor data acquisition software.
Calibration Chamber incl. pump Unisense CAL300 Calibration chamber. We tuned it with rubber stoppers and syringes to mix the N2O-water without making bubbles.
Incubation chamber Ibercex E-600-BV Indispensable equipment for working at a constant temperature (±0.3 °C). It also allows control of the photoperiod.
Electric stirrer - - Part of the stirring system. It hangs in the water, overlying the sediment subject, by a fishing line that is hooked to the PVC cover.
Electromagnet - - Part of the stirring system. It is fixed to the outside of the acrylic tube, approximately at the same level as the stirrer. It is activated episodically (ca. 1 on-off per s) by a circuit, attracting the stirrer when it is on and releasing it when it is off, thereby generating the movement that agitates the water.
Electromagnetic pulse circuit - - Part of the stirring system. It is connected by wires to the electromagnet and sends pulses of current that turn the electromagnet on and off.
Uninterruptible power supply (UPS) - - It improves the quality of the electrical energy that reaches the measurement device, filtering the highs and low of the voltage, thereby ensuring a more constant and stable N2O sensor signal.

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References

  1. Rockstrom, J., et al. A safe operating space for humanity. Nature. 461 (7263), 472-475 (2009).
  2. Erisman, J. W., Galloway, J., Seitzinger, S., Bleeker, A., Butterbach-Bahl, K. Reactive nitrogen in the environment and its effect on climate change. Current Opinion in Environmental Sustainability. 3 (5), 281-290 (2011).
  3. Gruber, N., Galloway, J. N. An Earth-system perspective of the global nitrogen cycle. Nature. 451 (7176), 293-296 (2008).
  4. Tiedje, J. M. Ch. 4. Ecology of denitrification and dissimilatory nitrate reduction to ammonium. Environmental Microbiology of Anaerobes. Vol. 717. Zehnder, A. J. B. , John Wiley and Sons. 179-244 (1988).
  5. Seitzinger, S., et al. Denitrification across landscapes and waterscapes: A synthesis. Ecological Applications. 16 (6), 2064-2090 (2006).
  6. Contribution of Working Group I to the fifth assessment report of the intergovernmental panel on climate change. IPCC. Climate Change 2013: The Physical Science Basis. , Cambridge University Press. (2013).
  7. Ravishankara, A. R., Daniel, J. S., Portmann, R. W. Nitrous Oxide (N2O): The Dominant Ozone-Depleting Substance Emitted in the 21st Century. Science. 326 (5949), 123-125 (2009).
  8. Balderston, W. L., Sherr, B., Payne, W. Blockage by acetylene of nitrous oxide reduction in Pseudomonas perfectomarinus. Applied and Environmental Microbiology. 31 (4), 504-508 (1976).
  9. Yoshinari, T., Knowles, R. Acetylene inhibition of nitrous-oxide reduction by denitrifying bacteria. Biochemical and Biophysical Research Communications. 69 (3), 705-710 (1976).
  10. Groffman, P. M., et al. Methods for measuring denitrification: Diverse approaches to a difficult problem. Ecological Applications. 16 (6), 2091-2122 (2006).
  11. Sorensen, J. Denitrification rates in a marine sediment as measured by the acetylene inhibition technique. Applied and Environmental Microbiology. 36 (1), 139-143 (1978).
  12. Revsbech, N. P., Nielsen, L. P., Christensen, P. B., Sorensen, J. Combined oxygen and nitrous-oxide microsensor for denitrification studies. Applied and Environmental Microbiology. 54 (9), 2245-2249 (1988).
  13. Jorgensen, K. S. Annual pattern of denitrification and nitrate ammonification in estuarine sediment. Applied and Environmental Microbiology. 55 (7), 1841-1847 (1989).
  14. Laverman, A. M., Van Cappellen, P., van Rotterdam-Los, D., Pallud, C., Abell, J. Potential rates and pathways of microbial nitrate reduction in coastal sediments. FEMS Microbiology Ecology. 58 (2), 179-192 (2006).
  15. Ambus, P. Control of denitrification enzyme-activity in a streamside soil. FEMS Microbiology Ecology. 102 (3-4), 225-234 (1993).
  16. Christensen, P. B., Rysgaard, S., Sloth, N. P., Dalsgaard, T., Schwærter, S. Sediment mineralization, nutrient fluxes, denitrification and dissimilatory nitrate reduction to ammonium in an estuarine fjord with sea cage trout farms. Aquatic Microbial Ecology. 21 (1), 73-84 (2000).
  17. Palacin-Lizarbe, C., Camarero, L., Catalan, J. Denitrification Temperature Dependence in Remote, Cold, and N-Poor Lake Sediments. Water Resources Research. 54 (2), 1161-1173 (2018).
  18. Nitrous Oxide sensor user manual. , UNISENSE A/S. (2011).
  19. Glew, J. Miniature gravity corer for recovering short sediment cores. Journal of Paleolimnology. 5 (3), 285-287 (1991).
  20. Andersen, K., Kjaer, T., Revsbech, N. P. An oxygen insensitive microsensor for nitrous oxide. Sensors and Actuators B-Chemical. 81 (1), 42-48 (2001).
  21. Weiss, R. F., Price, B. A. Nitrous oxide solubility in water and seawater. Marine Chemistry. 8 (4), 347-359 (1980).
  22. Nitrous Oxide Microsensors Specifications. , UNISENSE A/S. (2018).
  23. Koike, I. Ch. 18. Measurement of sediment denitrification using 15-N tracer method. Denitrification in Soil and Sediment 10.1007/978-1-4757-9969-9 F.E.M.S. Symposium Series. Revsbech, N. P., Sørensen, J. , Springer US. 291-300 (1990).
  24. Hvorslev, M. J. Subsurface Exploration and Sampling of Soils for Civil Engineering Purposes. , American Society of Civil Engineers, Waterways Experiment Station, Corps of Engineers, U.S. Army. 521 (1949).
  25. Glew, J. R., Smol, J. P., Last, W. M. Ch. 5. Sediment Core Collection and Extrusion. Tracking Environmental Change Using Lake Sediments: Basin Analysis, Coring, and Chronological Techniques. Last, W. M., Smol, J. P. 1, Springer. Netherlands. 73-105 (2001).
  26. Behrendt, A., de Beer, D., Stief, P. Vertical activity distribution of dissimilatory nitrate reduction in coastal marine sediments. Biogeosciences. 10 (11), 7509-7523 (2013).
  27. Laverman, A. M., Meile, C., Van Cappellen, P., Wieringa, E. B. A. Vertical distribution of denitrification in an estuarine sediment: Integrating sediment flowthrough reactor experiments and microprofiling via reactive transport modeling. Applied and Environmental Microbiology. 73 (1), 40-47 (2007).
  28. Melton, E. D., Stief, P., Behrens, S., Kappler, A., Schmidt, C. High spatial resolution of distribution and interconnections between Fe- and N-redox processes in profundal lake sediments. Environmental Microbiology. 16 (10), 3287-3303 (2014).
  29. SensorTrace BASIC 3.0 user manual. , UNISENSE A/S. (2010).
  30. Schwing, P. T., et al. Sediment Core Extrusion Method at Millimeter Resolution Using a Calibrated, Threaded-rod. Journal of visualized experiments. (114), 54363 (2016).
  31. Bernhardt, E. S. Ecology. Cleaner lakes are dirtier lakes. Science. 342 (6155), 205-206 (2013).
  32. Finlay, J. C., Small, G. E., Sterner, R. W. Human influences on nitrogen removal in lakes. Science. 342 (6155), 247-250 (2013).
  33. Seitzinger, S. P. Denitrification in fresh-water and coastal marine ecosystems- ecological and geochemical significance. Limnology and Oceanography. 33 (4), 702-724 (1988).
  34. Seitzinger, S. P., Nielsen, L. P., Caffrey, J., Christensen, P. B. Denitrification measurements in aquatic sediments - a comparison of 3 methods. Biogeochemistry. 23 (3), 147-167 (1993).
  35. Christensen, P. B., Nielsen, L. P., Revsbech, N. P., Sorensen, J. Microzonation of denitrification activity in stream sediments as studied with a combined oxygen and nitrous-oxide microsensor. Applied and Environmental Microbiology. 55 (5), 1234-1241 (1989).
  36. Peter, N. L. Denitrification in sediment determined from nitrogen isotope pairing. FEMS Microbiology Ecology. 9 (4), 357-361 (1992).
  37. Risgaard-Petersen, N., Nielsen, L. P., Rysgaard, S., Dalsgaard, T., Meyer, R. L. Application of the isotope pairing technique in sediments where anammox and denitrification coexist. Limnology and Oceanography-Methods. 1, 63-73 (2003).

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Palacin-Lizarbe, C., Camarero, L., Catalan, J. Estimating Sediment Denitrification Rates Using Cores and N2O Microsensors. J. Vis. Exp. (142), e58553, doi:10.3791/58553 (2018).

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