يصف هذا البروتوكول عمليه الخزعات شفط المستقيم المناعي لكالريتينين ، S100 البروتين ، والبروتين المنتج الجينات 9.5. هذه الطريقة التشخيصية المساعد الرواية لمرض هيرشسبرونغ لديها حساسية المفضلة ومعدلات الخصوصية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تشخيص مرض هيرشسبرونغ من خلال الخزعات شفط المستقيم المناعي لكالريتينين ، S100 البروتين والبروتين الجينات المنتج 9.5
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مرض هيرشسبرونغ (HD) هو مرض معوي خلقي يتجلى سريريا كعدم قدره علي اجتياز المينيوم عند الرضع أو كامساك طويل الأجل عند الأطفال. خزعة شفط المستقيم (RSB) لتحديد عدم وجود خلايا العقدة وتضخم العصبية هو الاختبار الأكثر دقه لتشخيص HD في الوقت الحاضر. تلطيخ الهييوكسيلين التقليدية-ايوسين يفتقر إلى الحساسية والخصوصية. لا يمكن استخدامها علي نطاق واسع لتلطيخ استيل بسبب عمليه معقده. لدينا بروتوكول رواية من المناعي لكالريتينين ، S100 البروتين ، والبروتين الجينات المنتج 9.5 (PGP 9.5) ، والتي أجريناها علي RSBs ، معارض عاليه الحساسية ومعدلات الخصوصية من 96.49 ٪ (95 ٪ فاصل الثقة ، 0.88-0.99) و 100 ٪ (95 ٪ الثقة الفاصل الزمني ، 0.97-1.00) ، علي التوالي. الشرائح HD المتضررة غالبا ما تكون موجودة كغياب للتعبير عن كالريتينين, S100 البروتين, و PGP 9.5, وهي علامات لتضخم العصبية في الانسجه تحت المخاطية. يصف هذا البروتوكول عمليه التشغيل التفصيلية لطريقه التشخيص الجديدة هذه.
المقدمة
مرض هيرشسبرونغ (HD) هو اضطراب الأمعاء المعوية الخلقية الشائعة التي تتميز بعدم وجود خلايا العقدة في أجزاء مختلفه من الأمعاء البعيدة1. يتم تشكيل الجهاز العصبي المعوي البشري عندما يتم الانتهاء من غزو الخلايا العصبية الجنينية. إذا كان هناك اضطراب في العملية وفشل الغزو لإكمال ، والأمعاء البعيدة من الوليد يصبح عقد2. وتسمي هذه الحالة المميتة المحتملة بمرض هيرشسبرونغ. ان الانتشار والحركية ونمو الأمعاء هي المكونات الثلاثة الرئيسية للاستعمار الناجح.
التقليدية الهيسوكسيلين و ايوسين (H & E) تلطيخ من خزعة تحت المخاطية محدوده لا يمكن ان تصل إلى مرضيه من نتيجة كما H & E تلطيخ من نسيج كامل السماكة التي تم الح....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة علي هذا البروتوكول من قبل مجلس أخلاقيات البحوث في مستشفي الاتحاد بجامعه هوازهونغ للعلوم والتكنولوجيا.
1. خزعة شفط المستقيم
- اجراء خزعة شفط المستقيم من قبل جراح الأطفال المدربين تدريبا جيدا ومساعد باستخدام Rbi2 شفط المستقيم خزعة النظام بعد الحصول علي موافقه مستنيرة من الوصي.
- تنفيذ RSB علي المرضي الذين لديهم المؤشرات التالية: عدم القدرة علي تمرير المينيوم في الرضع أو النفخ علي المدى الطويل مع أو بدون الإمساك في الأطفال. الأطفال مع الإمساك علي المدى الطويل الذين يحتاجون إلى زيت البارافين لإكمال التغوط. انسداد معوي أو انثقاب معوي مع أسباب غير معروفه لدي الأطفال الذين يخضعون لفغر الأمعاء.
ملاحظه: موانع لل RSB هي ....
- تنفيذ RSB علي المرضي الذين لديهم المؤشرات التالية: عدم القدرة علي تمرير المينيوم في الرضع أو النفخ علي المدى الطويل مع أو بدون الإمساك في الأطفال. الأطفال مع الإمساك علي المدى الطويل الذين يحتاجون إلى زيت البارافين لإكمال التغوط. انسداد معوي أو انثقاب معوي مع أسباب غير معروفه لدي الأطفال الذين يخضعون لفغر الأمعاء.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في المجموع ، 318 المرضي المسجلين في دراستنا. خضع كل من المرضي RSB ، وكانت ملطخه الانسجه لكالريتينين ، S100 ، و PGP 9.5. وكان التشخيص علي أساس بروتوكول روايتنا HD في الحالات 97 ، غير HD في 213 الحالات ، ويشتبه HD في 8 حالات. ومن بين المرضي الجراحيين 132 ، تم تشخيص 99 المرضي مع هد عن طريق تحصين العينات كامل سمك بعد الجراحة. وأظهرت S100 و pgp 9.5 تلطيخ ان 92 ٪ و 93 ٪ من المرضي 99 ، علي التوالي ، كان جذوع الأعصاب متضخما. وخضعت ال83 الأخرى من 186 مريضا لخزعات كامله السماكة وأظهرت خلايا العقدة........
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا وصفنا اجراء باستخدام ثلاثه أجسام مضاده مناعي مختلفه لوصمه عار أقسام RBS لتشخيص هد. وكانت حساسية بروتوكول التشخيص لدينا 96.49 ٪ (95 ٪ CI ، 0.88-0.99) ، وكانت الخصوصية 100 ٪ (95 ٪ CI ، 0.97-1.00).
الخطوات الأكثر اهميه في البروتوكول هي RSB ورد فعل مستضد الأجسام المضادة. يحدد حجم الخزعة دقه التلطيخ. والخزعة الصغيرة لا توفر ما يكفي من الانسجه لاجراء تشخيص دقيق ، في حين ان الخزعة الكبيرة تؤدي إلى زيادة خطر النزيف. كمساله من الخبرة ، والخزعات التي يبلغ قطرها 2 ملم هي الحجم الأمثل. لرد فعل مستضد ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
شكر وتقدير
ويشكر المؤلفون وييبينغ تانغ علي مساعدته الكبيرة في توفير مختبر التصوير. وهذه المادة مدعومة ببحوث الرفاه العام ، ووردت أموال خاصه من الصحة الوطنية وتنظيم الاسره في الصين (المنحة رقم 201402007).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الجسم المضاد كالريتينين | MXB Biotechnologies | MAB-0716 170416405C | الجسم المضاد: الجسم المضاد الأساسي |
| S-100 الجسم المضاد | MXB Biotechnologies | Kit-0007 | الجسم المضاد: الجسم المضاد |
| الأساسي PGP9.5 الجسم | المضاد شنغهاي لونغ آيلاند الأجسام المضادة المحدودة | R-0457-03 | الجسم المضاد: كاشف محسن الأجسام المضادة |
| الأساسي MXB Biotechnologies | KIT-9902-A 170416405a | الجسم المضاد: الجسم المضاد الثانوي A | |
| الماعز المضاد للأرانب / الفأر IgG الجسم المضاد | الثانوي MXB Biotechnologies | KIT-9902-B | الجسم المضاد: الجسم المضاد الثانوي B |
| طقم تلطيخ DAB (يحتوي على الكاشف A و B و C) | طقم تلطيخ | MXB Biotechnologies | DAB-0031 |
| حاضنة الحرارة | شنغهاي Yiheng أداة المحدودة | DHP-9082 | أداة |
| Rbi2 خزعة المستقيم شفط نظام | Aus Systems Pty Ltd ، جنوب أستراليا ، أستراليا | CP1200 HP1000 SS1000 | أداة |
| ميكروتوم | Leica leica | RM2016 | أداة |
| حامض الستريك سترات الصوديوم عازلة (100X) | MXB Biotechnologies | MVS-0101 | مستضد استرجاع عازلة مجفف |
| الأنسجة المرضية | ووهان جونجي الالكترونية المحدودة | JT-12F | أداة |
المراجع
- Tam, P. K. Hirschsprung's disease: A bridge for science and surgery. Journal of Pediatric Surgery. 51 (1), 18-22 (2016).
- Heanue, T. A., Pachnis, V. Enteric nervous system development and Hirschsprung's disease: advance....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
