Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

Diagnosticering af Hirschsprungs sygdom ved immunofarvning rektal suge biopsier for Calretinin, S100 protein og protein gen produkt 9,5

Published: April 26, 2019 doi: 10.3791/58799
Automatic Translation
1, 1, 1, 2, 1
1Department of Pediatric Surgery, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, 2Division of Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, Cincinnati Children's Hospital Medical Center

Summary

Denne protokol beskriver processen med immunofarvning rektal suge biopsier for calretinin, S100 protein, og protein gen produkt 9,5. Denne roman adjuverende diagnostisk metode for Hirschsprungs sygdom har at foretrække følsomhed og specificitet satser.

Abstract

Hirschsprungs sygdom (HD) er en medfødt tarmsygdom, der er klinisk manifesteret som en manglende evne til at passere blandet mekoniumprøve udtaget hos spædbørn eller som langvarig forstoppelse hos børn. Rektal sugebiopsi (RSB) til bestemmelse af fravær af ganglion celler og neurale hypertrofi er den mest præcise test til diagnosticering af HS i øjeblikket. Traditionel hæmatooxylin-eosin farvning mangler følsomhed og specificitet. Acetylcholinesterase farvning kan ikke være almindeligt anvendt på grund af sin komplekse proces. Vores roman protokol af immun farvning for calretinin, S100 protein, og protein gen produkt 9,5 (PGP 9.5), som vi udførte på RSBs, udviser høj følsomhed og specificitet satser på 96,49% (95% konfidensinterval, 0,88-0,99) og 100% (95% tillid interval, 0,97-1,00). De HD-påvirkede segmenter ofte til stede som fraværet af udtrykket calretinin, S100 protein, og PGP 9.5, som er markører for neurale hypertrofi i submucosavævet væv. Denne protokol beskriver den detaljerede drifts proces for denne nye diagnosemetode.

Introduction

Hirschsprungs sygdom (HD) er en almindelig medfødt tarmsygdom karakteriseret ved mangel på ganglion celler i forskellige segmenter af den distale tarmkanalen1. Det humane enteriske nervesystem dannes, når invasionen af de embryonale neurale celler er afsluttet. Hvis der er en forstyrrelse af processen og invasionen undlader at fuldføre, den distale tarm af den nyfødte bliver aganglionic2. Denne potentielt dødelige tilstand kaldes Hirschsprungs sygdom. Spredning, motilitet, og tarm vækst er de tre vigtigste elementer i vellykket kolonisering.

Traditionelle hæmatatoxylin og eosin (H & E) farvning af en begrænset submucosavævet biopsi kan ikke opnå så tilfredsstillende resultat som H & E farvning af et væv af fuld tykkelse opnået ved kirurgi. Desuden, acetylcholinesterase (AChE) farvning af rektal sugevæv er teoretisk udfordrende på grund af sin utilstrækkelige følsomhed, som er 91%, og kompleks forarbejdning af frosne afsnit3,4. Flere andre immunohistokemiske markører af ganglion celler og nervefibre, der kan farves i formalin-faste og paraffin-indlejrede prøver er gradvist ved at blive mainstream HD diagnostik. Calretinin er et vitamin D-afhængigt calcium bindende protein, der ikke udtrykkes i den myenteriske og submucosale plexus af HS-påvirkede segmenter5. S100 protein udtrykkes i celler afledt af neurale crest, såsom nervefibre og gliale celler, som ofte præsenterer neurale hypertrofi i submucosale væv af HS-påvirkede segmenter6. Protein genprodukt 9,5 (PGP 9.5) pålideligt pletter nervefibre og ganglion celler; PGP 9.5 farvning fungerer som et supplement til calretinin farvning, især i tilfælde af isolerede hypoganglionosis. Dobbelt farvning med S100 og PGP 9.5 kan mindske den falsk-negative hastighed og øge følsomheden. Som en forudsætning har den nuværende undersøgelse til formål at sikre tilstrækkelig specificitet og høj følsomhed af denne nye diagnosemetode. Vores roman protokol brugte alle tre markører for forskelsbehandling af aganglioniske tarm og hypertrofisk nervefibre. En prospektiv undersøgelse af 318 børn blev udført af vores laboratorium og tidligere udgivet uden en detaljeret protokol7. Den detaljerede protokol og forholdsregler er beskrevet i denne artikel. Nyfødte, der har lidt et alvorligt afføring, siden fødslen eller børn med kronisk forstoppelse, bortset fra andre almindelige sygdomme, er potentielle kandidater til rektal sugebiopsi (RSB). Vores roman protokol er velegnet til farvning ikke kun RSBs, men også fuld-tykkelse biopsier eller kirurgiske prøver til at foretage en endelig diagnose.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Denne protokol blev godkendt af Forskningsetiske nævn på EU-hospitalet på Huazhong University of Science and Technology.

1. rektal suge biopsi

  1. Udfør rektal suge biopsi af en veltrænet pædiatrisk kirurg og en assistent ved hjælp af en Rbi2 sugerektal biopsi system efter at have indhentet informeret samtykke fra værgen.
    1. Udfør RSB på patienter, der har følgende indikationer: manglende evne til at passere blandet mekoniumprøve udtaget hos spædbørn eller langvarig oppustethed med eller uden forstoppelse hos børn; børn med langvarig forstoppelse, der har brug for paraffinolie for at fuldføre afføring; intestinal obstruktion eller intestinal perforation af ukendte årsager hos børn, der gennemgår enteroomi.
      Bemærk: kontraindikationer for RSB er som følger: børn, der har svære symptomer, som er i dårlig fysisk tilstand, eller som ikke kan tåle RSB; børn med akut enterocolitis; børn, der gennemgår intestinal anastomose uden fuldstændig helbredelse.
  2. Udfør en normal saltvands retention lavement som tarm præparat 36 h før proceduren for at undgå løs afføring og overdreven ødem af slimhinden. Tilsæt magnesiumsulfat opløsning, hvis barnet har svær forstoppelse. Injicer vitamin K (1 mg/kg) til nyfødte.
    Bemærk: Udfør ikke præoperative blodprøver eller administration af antibiotika, da de ikke er påkrævede.
  3. Sæt patienten i litotomi-positionen. Coat overfladen af røret med paraffinolie. Sæt det stumpe rør 4-7 cm ind i endetarmen med side hullet vendt mod de bageste eller laterale vægge.
  4. Påfør forsigtigt Tryk på røret for at lette passende vedhæftning af side hullet til rektalvæggen. Tryk på udløseren, og træk værktøjet ud med det samme.
  5. Brug biopsi instrumentet til at opnå 4 sugebiopsier med en diameter på 2 mm ved 3 cm og 6 cm over tandfyldnings linjen, Anteriort og posteriorly. Brug en nål til at placere præparatet på gaze fugtet med saltvand.
  6. Overhold patienten indtil 2 timer efter proceduren for at udelukke rektal blødning. Undgå yderligere rektal-og analmanipulationer i de første 24 timer efter RSB.

2. klargøring af RSB-sektioner

  1. Placer rektal suge biopsier i 4% PARAFORMALDEHYD i 6 timer for at fastgøre vævet. Brug en fikativ volumen 5 gange mere end vævet volumen.
  2. Dehydrerer vævet ved hjælp af patologisk vævs dehydrator i 11 timer. Hele den programmerede proces består af følgende 5 trin:
    1. Anbring vævet i formaldehyd og fastgør den til 1 time.
    2. Anbring vævet i 75% ethanol i 4 timer.
    3. Læg vævet i absolut ethanol (to ændringer, 1 h hver).
    4. Læg vævet i absolut ethanol (to ændringer, 30 min hver).
    5. Læg vævet i xylen (tre ændringer, 1 h hver).
  3. Anbring vævet i paraffinvoks (58-60 °C) (tre ændringer, 1 h hver). Integrer RSB-vævet i paraffinblokke.
  4. Trim paraffin blokkene ved hjælp af en mikrotom, indtil vævet er helt eksponeret med et komplet sektionsplan.
  5. Skær blokkene i 0,4 μm sektioner med en mikrotom.
  6. Anbring sektionerne i 45-50 °C vand i et par sekunder for at lade sektionerne sprede sig til en flad plade.
  7. Overfør paraffin sektionerne til lysbilleder.
  8. Bag slides i en 60 °C ovn til 3-5 h. undgå at bage for længe, hvilket kan føre til tab af antigener.
  9. Placer de afparaffinerede dias i xylen (2 ændringer, 15 min hver).
  10. De slides i absolut ethanol, 95%, 80%, og 75% ethanol for 5 min hver. Derefter skylles dem i omvendt osmose (RO)-renset vand til yderligere 5 min.

3. genfinding af antigen

  1. Der fortyndes med 4 mL EDTA antigen-genfindings buffer med 200 mL RO-renset vand. Gør arbejds fortyndinger til S100 og PGP 9.5 genfinding ved at blande 1 mL citronsyre natriumcitrat buffer (100x) med 99 mL RO-renset vand.
    Bemærk: Calretinin kan hentes fortrinsvis ved EDTA-genfindings løsning. Men, citronsyre natriumcitrat buffer er mere velegnet til hentning af S100 og PGP 9.5.
  2. Anbring diasene i en coplin farvning krukke. Fyld krukken med genfindings opløsning, og anbring den i et forvarmet kogende vandbad. Efter kogning i 20 min, Fjern krukken fra vandbad og lad den køle af til stuetemperatur. Afkølings processen tager ca. 10 min. Fjern diasene og skyl dem forsigtigt én gang med fosfat-buffer (PBS).
  3. Tegn en cirkel med en markør pen rundt om vævet og Forbered en våd kasse til følgende procedurer.

4. blokering af

  1. Der blandes i arbejds fortyndinger ved at blande 3 mL 30% H2O2 med 27 ml ro-renset vand.
  2. Tilsæt to eller tre dråber 3% H2O2 Solution dråbevis på vævet for at blokere peroxidaterne. Tilføj H2O2 -løsningen med det samme for at sikre, at opløsningen ikke løber ud af cirklen. Udfør blokering af peroxidater i en 37 °C-inkubator i 20 min.
  3. Skyl slidene forsigtigt med PBS (tre skyller, 5 min hver).
  4. Slidene blokeres i 20 min ved 37 °C med 5% bovint serumalbumin (BSA, tilberedt ved at blande 1,5 g BSA-pulver med 30 mL RO-renset vand).
    Bemærk: blokering med 3% H2O2 kan forhindre 95% af uspecifikke farvning og blokering med 5% BSA kan forhindre de øvrige 5% af uspecifikke farvning. Kombiner de to metoder for at opnå et pålideligt resultat.

5. antigen-antistof-reaktion

  1. Fjern 5% BSA og tilsæt 50 μL af det primære antistof (calretinin, S100 eller PGP 9.5) til sliden. Der inkueres natten over ved 4 °C.
  2. Vask sliden med PBS (tre gange, 3 min hver).
  3. Der tilsættes 50 μL polymer forstærker (reagens A; Se tabel over materialer) til afsnittet, og det inkurueres i 20 min i en 37 °c-inkubator. Vask derefter sliden med PBS (tre gange, 3 min hver).
  4. Der tilsættes 50 μL sekundært antistof B (ged anti-kanin/mus IgG sekundært antistof) til sektionen, og der inkubieres i 30 min i en 37 °C-inkubator. Vask sektionen med PBS (tre gange, 5 min hver).

6.3, 3-diaminobenzidin og Hematoxylin farvning

  1. Der tilsættes 850 μL RO-renset vand til et 1,5 mL rør, og der tilsættes farvnings reagenser (Se tabel over materialer) i rækkefølgen a, B og C. Tilsæt 50 μl af hver reagens for at opnå i alt 1 ml 3, 3-diaminobenzidin (DAB) arbejdsopløsning. Hvis der er bundfald, skal opløsningen anvendes efter filtrering.
  2. Tilsæt en dråbe DAB-arbejds løsning til vævs sektionen og bejdsning i 3-10 min. Inkuperer diasene i DAB ved stuetemperatur, indtil der opdages brunfarvning. Overvåg forsigtigt med et skygge felt mikroskop. Hold DAB-arbejdsopløsningen væk fra lyset. Vask derefter sliden med PBS i 5 min.
  3. Tilsæt en dråbe hematoxylinlegemer til at modvirke kerner i ca. 1 min. Hold derefter coplin krukken og vask den under en strøm af vand i ca. 30-40 s, indtil det overskydende farvestof fjernes. Pas på ikke at beskadige vævs afsnittene.
  4. Nedsænk RSB-diasene i en coplin krukke med PBS til 25-30 s. Derefter differentieres i 1% saltsyre-ethanol i 10 s. vask slidene med PBS i 1 min.
  5. Dehydrerer diasene i omvendt rækkefølge af hydrering: 75%, 80%, 95% og absolut ethanol (5 min hver).
  6. Udsæt diasene for xylen (2 ændringer, 5 min hver).
  7. Monter dæksedlen ved hjælp af ultraclean montering. Tillad, at slides tørrer før visualisering ved hjælp af et mikroskop.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

I alt 318 patienter blev indskrevet i vores undersøgelse. Alle patienterne gennemgik RSB, og vævene blev plettet for calretinin, S100 og PGP 9.5. Diagnosen baseret på vores roman protokol var HD i 97 tilfælde, ikke-HD i 213 tilfælde, og mistænkt HD i 8 tilfælde. Blandt de 132 kirurgiske patienter blev 99 patienter diagnosticeret med HS ved immunofarvning af prøver af fuld tykkelse efter operationen. S100 og PGP 9.5 farvning viste, at 92% og 93% af de 99 patienter, henholdsvis havde hypertrophied nerve Trunks. Den anden 83 af de 186 patienter gennemgik fuld-tykkelse biopsier og viste ganglion celler. I alt 103 patienter blev klinisk helbredt af konservative behandlinger, og HS blev ekskluderet. Af de 8 patienter med formodet HS blev 3 patienter kategoriseret som kort segment HS, og de øvrige 5 patienter blev kategoriseret som non-HD.

Ifølge vores resultater, 97 patienter blev diagnosticeret af RSB i første omgang. Nærmere oplysninger fremgår af tabel 1. Protokollen om immunhistokemisk farvning af calretinin, S100 og PGP 9.5, som vi udførte på RSBs, har en høj følsomhed og specificitets satser på 96,49% (95% konfidensinterval [CI], 0,88-0,99) og 100% (95% CI, 0,97-1,00) hhv. Den positive prædiktiv værdi er 94,3% (95% CI, 0.87-0,99), og den negative forudsigende værdi er 99,1% (95% CI, 0,95-1,00).

Figur 1a og 1b repræsenterer typiske resultater efter immunofarvning af calretinin. Mange ganglion celler, som udtrykker calretinin, kan findes i det normale væv. Men, ingen ganglion celler blev påvist i noget område af vævet fra HD-segmentet. Som vist i figur 1c-F, S100 og PGP 9.5 immun farvning viser hypertrophied nerve kufferter i submucosa, mens kun granuleret farvning af nogle små nerve kviste blev observeret i den normalt innerverede tarm. I vores undersøgelse er Hypertrofiske nerve trunke nervefibre med en diameter på ≥ 40 μm.

Figure 1
Figur 1: immunofarvning af rektal suge biopsier for calretinin, PGP 9.5 og S100. Immunofarvning af calretinin i HS-påvirket væv (a) og i ganglion celler af myenteriske plexusser i normalt innerveret væv (B). Der blev ikke påvist nogen calretinin farvning i den myenteriske plexuserne af det HS-påvirkede segment. PGP 9.5 farvning i HS-påvirket væv viste tætte Hypertrofiske nervefibre i submucosa (C) i modsætning til nervefibre i det normale væv (D). (E) tæt og fremtrædende S100 immunofarvning viste Hypertrofiske nerve stammer i submucosa i HS-påvirket væv. (F) normale nervefibre i submucosa. Klik her for at se en større version af dette tal.

protein markører HD (99) Ikke-HD (219)
ganglion celler (+) Hypertrofiske nerve trunke (+) ganglion celler (+) Hypertrofiske nerve trunke (+)
calretinin 2 — 214 af —
S100 — 91 af — 3
PGP 9.5 — 92 af — 4

Tabel 1: Immunohistokemiske farvnings score for de tre protein markører i rektal suge biopsier.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Her beskrev vi en procedure, hvor der blev brugt tre forskellige immunohistokemiske antistoffer til at plette RBS-sektioner til diagnosticering af HS. Følsomheden af vores diagnostiske protokol var 96,49% (95% CI, 0,88-0,99), og specificiteten var 100% (95% CI, 0,97-1,00).

De mest kritiske trin i protokollen er RSB og antigen-antistof reaktion. Størrelsen af Biopsien afgør nøjagtigheden af farvning. En lille biopsi vil ikke give nok væv til at foretage en præcis diagnose, mens en stor biopsi fører til en højere risiko for blødning. Som et spørgsmål om erfaring, biopsier med en diameter på 2 mm er den optimale størrelse. For antigen-antistof-reaktionen kan korrekt konservering af antistoffet ikke ignoreres. Efter protokollen trin for trin og forsigtigt arbejde er nødvendige. Omvendt osmose-renset vand anbefales i alle trin, giver et klarere felt til observation og gør det lettere for patologer til at foretage en præcis diagnose.

Kontrast lavement, Anorektal manometri, og biopsi med histologi er tre præoperative diagnostiske metoder, der har været anvendt i de seneste år. Ifølge Takawira et al.' s forskning, biopsi med histologi har den højeste følsomhed og specificitet8. Meier-ruge et al. rapporterede først brugen af acetylcholinesterase (AChE) farvning på frossen rektal suge væv til at hjælpe med at diagnosticere HD i 19729. Denne farvnings metode detekterer Hypertrofiske nerve trunke i submucosa. Efter denne rapport begyndte mange institutioner rundt om i verden at bruge denne metode som et supplement til diagnosticering af HS. på grund af sine diagnostiske begrænsninger begyndte forskerne at koncentrere sig om andre markører, der også kan plette ganglion cellerne og nervefibrene i formalin-faste og paraffin-indlejrede prøver. I 2004, Barshack et al. fandt, at tabet af calretinin udtryk kan hjælpe med at diagnosticere aganglioniske segmenter i HD10. Kapur et al. og Guinard-Samuel et al. gentog protokollen i 2009 og konkluderede, at immunohistokemisk farvning af calretinin var bedre end farvning af acetylcholinesterase11,12. I 1988 blev S100 immunofarvning til diagnosticering af HS først introduceret af Robey et al. 13. Monforte-Muñoz et al. gentog metoden i 1998 og fandt, at 90% af deres 20 Hirschsprung tilfælde havde nervefibre bredere end 40 μm14. Derfor kan S100 immunofarvning fungere som en accessorisk diagnostisk metode i tilfælde uden ganglion celler. Desuden bemærkede Bachmann et al. , at immunohistokemisk farvning af MAP2, calretinin, GLUT1 og S100 kunne opnå et pålideligt resultat så nøjagtigt som frosne sektions teknikker15. Men, i 1992, Sams et al. evalueret værdien af PGP 9.5 i DIAGNOSEN af HD16. Selv om S100 kan detektere mere laminat propria nervefibre, det har en højere falsk-negative sats. Derfor valgte vi at bruge PGP 9.5 og S100 sammen til den immunohistokemiske diagnose af HS, som tidligere undersøgelser anbefalede. Mange tilfælde af farvning for neuron-specifikke enolase i overgangszoner viste også positive ganglion celler i den myenteriske og submucosavævet plexus, men disse celler var sparsom og små12. Tilsvarende er calretinin-positive ganglion celler små og har en klyngedannelse. En tidligere undersøgelse indikerede, at nogle let fortyrede nerve kufferter også kunne påvises i de midlertidige segmenter af HS, men med total Colon aganglionose kan nerve stammerne være inden for normale grænser (< 40 μm)17. Vi bør analysere resultaterne i hvert enkelt tilfælde og kombinere disse resultater med kliniske manifestationer for at undgå fejldiagnose.

Denne protokol kunne ikke repræsentere den endelige patologiske diagnose, så vi udførte mindst et års grundig klinisk opfølgning for hvert barn. Derudover kræver denne protokol flere prøver for at bevise dens pålidelighed.

Afslutningsvis, diagnosticering af HD ved RSB er en bekvem metode, der giver en ideel histologisk diagnose med acceptabel minimal skade. Følsomheden er nært beslægtet med, om prøveudtagningsstedet er korrekt. Immunohistokemisk farvning af RSB for calretinin, S100 og PGP 9.5 er følsom og specifik i påvisning af ganglion celler og Hypertrofiske nerve stammer. Kombinationen af disse tre markører giver en mere pålidelig diagnosemetode til HD.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har intet at afsløre.

Acknowledgments

Forfatterne takker Weibing tang for hans store hjælp med at levere optagelserne Lab. Denne artikel er støttet af den offentlige Velfærdsforskning, og særlige midler blev modtaget fra den nationale sundhed og familieplanlægning i Kina (Grant No. 201402007).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
calretinin antibody MXB Biotechnologies MAB-0716 170416405c antibody: primary antibody
S-100 antibody MXB Biotechnologies Kit-0007 antibody: primary antibody
PGP9.5 antibody Shanghai long island antibody Co. Ltd R-0457-03 antibody: primary antibody
enhancer reagent MXB Biotechnologies KIT-9902-A 170416405a antibody: secondary antibody A
Goat anti-Rabbit/Mouse IgG Secondary Antibody MXB Biotechnologies KIT-9902-B antibody: secondary antibody B
DAB staining kit (containing reagent A B and C) MXB Biotechnologies DAB-0031 staining kit
Heat incubator Shanghai yiheng instrument Co. Ltd DHP-9082 instrument
Rbi2 suction rectal biopsy system Aus Systems Pty Ltd, South Australia, Australia CP1200 HP1000 SS1000 instrument
microtome Leica leica RM2016 instrument
citric acid sodium citrate buffer(100X) MXB Biotechnologies MVS-0101 antigen retrieval buffer
pathological tissue dehydrator wuhan junjie electronic Co. Ltd JT-12F instrument

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Tam, P. K. Hirschsprung's disease: A bridge for science and surgery. Journal of Pediatric Surgery. 51 (1), 18-22 (2016).
  2. Heanue, T. A., Pachnis, V. Enteric nervous system development and Hirschsprung's disease: advances in genetic and stem cell studies. Nature Reviews Neuroscience. 8 (6), 466-479 (2007).
  3. Setiadi, J. A., Dwihantoro, A., Iskandar, K., Heriyanto, D. S., Gunadi, The utility of the hematoxylin and eosin staining in patients with suspected Hirschsprung disease. BMC Surgery. 17 (1), 71 (2017).
  4. Agrawal, R. K., et al. Acetylcholinesterase histochemistry (AChE) - A helpful technique in the diagnosis and in aiding the operative procedures of Hirschsprung disease. Diagnostic Pathology. 10 (1), 208 (2015).
  5. Kacar, A., Arikok, A. T., Azili, M. N., Ekberli Agirbas, G., Tiryaki, T. Calretinin immunohistochemistry in Hirschsprung's disease: An adjunct to formalin-based diagnosis. The Turkish Journal of Gastroenterology. 23 (3), 226-233 (2012).
  6. Bachmann, L., et al. Immunohistochemical panel for the diagnosis of Hirschsprung's disease using antibodies to MAP2, calretinin, GLUT1 and S100. Histopathology. 66 (6), 824-835 (2015).
  7. Jiang, M., et al. S100 and protein gene product 9.5 immunostaining of rectal suction biopsies in the diagnosis of Hirschsprung' disease. American Journal of Translational Research. 8 (7), 3159 (2016).
  8. Takawira, C., D'Agostini, S., Shenouda, S., Persad, R., Sergi, C. Laboratory procedures update on Hirschsprung disease. Journal of Pediatric Gastroenterology & Nutrition. 60 (5), 598 (2015).
  9. Meier-Ruge, W., et al. Acetylcholinesterase activity in suction biopsies of the rectum in the diagnosis of Hirschsprung's disease. Journal of Pediatric Surgery. 7 (1), 11-17 (1972).
  10. Barshack, I., Fridman, E., Goldberg, I., Chowers, Y., Kopolovic, J. The loss of calretinin expression indicates aganglionosis in Hirschsprung's disease. Journal of Clinical Pathology. 57 (7), 712-716 (2004).
  11. Kapur, R. P. Can We Stop Looking? Immunohistochemistry and the Diagnosis of Hirschsprung Disease. American Journal of Clinical Pathology. 126 (1), 9-12 (2006).
  12. Guinardsamuel, V., et al. Calretinin immunohistochemistry: a simple and efficient tool to diagnose Hirschsprung disease. Modern Pathology. 22 (10), 1379-1384 (2009).
  13. Robey, S. S., Kuhajda, F. P., Yardley, J. H. Immunoperoxidase stains of ganglion cells and abnormal mucosal nerve proliferations in Hirschsprung's disease. Human Pathology. 19 (4), 432-437 (1988).
  14. Monforte-Muñoz, H., Gonzalez-Gomez, I., Rowland, J. M., Landing, B. H. Increased submucosal nerve trunk caliber in aganglionosis: a "positive" and objective finding in suction biopsies and segmental resections in Hirschsprung's disease. Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 122 (8), 721-725 (1998).
  15. Bachmann, L., et al. Immunohistochemical panel for the diagnosis of Hirschsprung's disease using antibodies to MAP2, calretinin, GLUT1 and S100. Histopathology. 66 (6), 824-835 (2015).
  16. Sams, V. R., Bobrow, L. G., Happerfield, L., Keeling, J. Evaluation of PGP9.5 in the diagnosis of Hirschsprung's disease. Journal of Pathology. 168 (1), 55 (1992).
  17. Huang, Y., Anupama, B., Zheng, S., Xiao, X., Chen, L. The expression of enteric nerve markers and nerve innervation in total colonic aganglionosis. International Journal of Surgical Pathology. 19 (3), 303 (2011).

Tags

Neurovidenskab Hirschsprungs sygdom rektal suge biopsi calretinin S100 protein protein genprodukt 9,5 immun farvning
Diagnosticering af Hirschsprungs sygdom ved immunofarvning rektal suge biopsier for Calretinin, S100 protein og protein gen produkt 9,5
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chi, S., Fang, M., Li, K., Yang, L., … More

Chi, S., Fang, M., Li, K., Yang, L., Tang, S. t. Diagnosis of Hirschsprung's Disease by Immunostaining Rectal Suction Biopsies for Calretinin, S100 Protein and Protein Gene Product 9.5. J. Vis. Exp. (146), e58799, doi:10.3791/58799 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter