Summary
आमतौर पर, माउस गर्दन इंजेक्शन मॉडल pruritogen प्रेरित खरोंच व्यवहार का मूल्यांकन करने के लिए प्रयोग किया जाता है. हालांकि, मॉडल केवल खुजली पर जानकारी प्रदान करता है, दर्द नहीं. यहाँ, एक गाल इंजेक्शन मॉडल चूहों में पेश किया है जो एक साथ दर्द और खुजली से संबंधित व्यवहार को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Abstract
खुजली को 1941 में रोथमैन द्वारा "एक अप्रिय त्वचीय सनसनी" के रूप में परिभाषित किया गया था जो खरोंच करने की इच्छा को उत्तेजित करती है। माउस मॉडल में, खरोंच bouts आम तौर पर pruritogens द्वारा प्रेरित खुजली का मूल्यांकन करने के लिए गिना जाता है. हालांकि, पिछले रिपोर्टों से पता चला है कि algesic पदार्थ भी एक माउस गर्दन इंजेक्शन मॉडल है, जो सबसे आम व्यवहार खरोंच के लिए प्रयोग किया जाता है परीक्षण में scratching व्यवहार प्रेरित. इस खोज के कारण चूहों में खुजली का अध्ययन करना मुश्किल हो जाता है। इसके विपरीत, capsaicin, एक आम algogen, कुछ गर्दन इंजेक्शन प्रयोगों में खरोंच व्यवहार कम. इसलिए, खरोंच व्यवहार पर दर्द का प्रभाव स्पष्ट नहीं रहता है। इस प्रकार व्यवहार परीक्षणों का उपयोग करके खुजली और दर्द की अनुभूति की जांच करने के लिए एक विधि विकसित करना आवश्यक है। यहाँ, एक गाल इंजेक्शन मॉडल पेश किया है जो एक साथ दर्द को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है- और खुजली से संबंधित व्यवहार. इस मॉडल में, pruritogens खरोंच व्यवहार प्रेरित करते हुए algesic पदार्थ पोंछते व्यवहार प्रेरित. इस मॉडल का उपयोग करना, लाइसोफॉस्फेटिक एसिड (एलपीए), खुजली के साथ cholestatic रोगियों में पाया एक खुजली मध्यस्थ, विशेष रूप से खुजली प्रेरित लेकिन दर्द नहीं दिखाया गया है. हालांकि, माउस मॉडल में, LPA दोनों एक pruritogen और एक algogen होने की सूचना दी गई है. एक माउस गाल इंजेक्शन मॉडल में LPA के प्रभाव में जांच से पता चला कि LPA केवल खरोंच प्रेरित, लेकिन व्यवहार पोंछते नहीं. यह इंगित करता है कि LPA चूहों और मनुष्यों में इसी तरह एक pruritogen के रूप में कार्य करता है, और खुजली अनुसंधान के लिए एक गाल इंजेक्शन मॉडल की उपयोगिता को दर्शाता है.
Introduction
खुजली मूल रूप से एक सनसनी है जो त्वचा की सतह से हानिकारक सामग्री को दूर करने के लिए व्यवहार खरोंच लाती के रूप में विशेषता थी. हालांकि, खुजली एटोपिक जिल्द की सूजन, न्यूरोजेनिक घावों, और कोलेस्टेसिस1जैसे कई रोगों के कारण अप्रिय संवेदनाओं के लिए उपचारों का ध्यान केंद्रित किया गया है। इन मामलों में, खुजली दर्द के समान एक गंभीर अप्रिय सनसनी है। इसलिए, खुजली एक महत्वपूर्ण अनुसंधान लक्ष्य का प्रतिनिधित्व करता है। खरोंच व्यवहार पशु प्रयोगों में खुजली का प्राथमिक सूचक है, और खरोंच व्यवहार उनकी गर्दन पर त्वचा में pruritogens इंजेक्शन द्वारा चूहों में प्रेरित किया जा सकता है2,3. हालांकि, एक पिछले अध्ययन से पता चला है कि capsaicin, एक algogen, भी एक गर्दन इंजेक्शन मॉडल4में व्यवहार खरोंच लाती है, यह मुश्किल इस मॉडल में दर्द से खुजली भेदभाव करने के लिए कर रही है. इसके विपरीत, यह पाया गया है कि capsaicin एक गर्दन इंजेक्शन मॉडल में खरोंच व्यवहार कम, यह दर्शाता है कि खरोंच व्यवहार पर दर्द का प्रभाव जटिल है और प्रयोगात्मक स्थितियों पर निर्भर करता है. इसलिए, दर्द और खुजली से संबंधित व्यवहार के एक साथ माप pruritogens और algogens के सटीक विश्लेषण सक्षम होगा. स्टीवन जी Shimada और रॉबर्ट एच LaMotte दर्द और खुजली से संबंधित व्यवहार के एक साथ माप में गर्दन से गाल4को बदलने के द्वारा सफल रहा. गाल इंजेक्शन मॉडल में, capsaicin प्रेरित पोंछते, लेकिन व्यवहार खरोंच नहीं है, जबकि हिस्टामाइन, एक pruritogen, केवल खरोंच व्यवहार प्रेरित. इसलिए, इस मॉडल खुजली और दर्द के स्वतंत्र मूल्यांकन सक्षम बनाता है, गाल इंजेक्शन खुजली अनुसंधान के लिए एक उपयोगी मॉडल बना रही है. जब एक परीक्षण पदार्थ एक pruritogen और / या एक algogen है यह निर्धारित करने की कोशिश कर रहा, इस मॉडल गर्दन इंजेक्शन मॉडल से अधिक जानकारी प्रदान करता है. यह लेख गाल इंजेक्शन प्रदर्शन और खरोंच या पोंछते के bouts गिनती के लिए एक व्यावहारिक विधि का वर्णन करता है, और lysophosphatidic एसिड (LPA) द्वारा प्रेरित खरोंच व्यवहार के मूल्यांकन के लिए इस विधि की उपयोगिता से पता चलता है.
Protocol
पशुओं की देखभाल और उपयोग से संबंधित सभी प्रक्रियाओं को राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान संस्थान (16A074) की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था और राष्ट्रीय संस्थान के दिशानिर्देशों के अनुसार किया गया था शारीरिक विज्ञान.
नोट: मूल प्रोटोकॉल स्टीवन जी Shimada और रॉबर्ट एच LaMotte4द्वारा रिपोर्ट किया गया था , और वर्तमान रिपोर्ट कई संशोधनों के साथ इन तरीकों का वर्णन, एक स्क्रीन के अलावा एक दूसरे को देखने से जानवरों को रोकने के लिए सहित, एक की अनुपस्थिति दर्पण, रिकॉर्डिंग प्रति चूहों की संख्या, माउस तनाव, पिंजरे का आकार, और रिकॉर्डिंग समय.
1. गाल इंजेक्शन मॉडल
-
प्रयोग तैयारी
- पिंजरा
- चित्र 1में दर्शाए अनुसार कैमरे के नीचे चार पिंजरों को सेट करें. चूहों को एक-दूसरे को देखने से रोकने के लिए एक स्क्रीन सेट करें. प्रत्येक पिंजरे के लिए प्रत्येक माउस में रखो और चूहों के भागने को रोकने के लिए एक एक्रिलिक ढक्कन सेट. ध्यान दें कि रिकॉर्डिंग एक वातावरण में प्रदर्शन किया जाना चाहिए जिसमें तापमान, आर्द्रता और ध्वनि नियंत्रित कर रहे हैं.
नोट: व्यवहार भी एक ढक्कन के बिना दर्ज किया जा सकता है अगर पिंजरे पर्याप्त रूप से अधिक है.
- चित्र 1में दर्शाए अनुसार कैमरे के नीचे चार पिंजरों को सेट करें. चूहों को एक-दूसरे को देखने से रोकने के लिए एक स्क्रीन सेट करें. प्रत्येक पिंजरे के लिए प्रत्येक माउस में रखो और चूहों के भागने को रोकने के लिए एक एक्रिलिक ढक्कन सेट. ध्यान दें कि रिकॉर्डिंग एक वातावरण में प्रदर्शन किया जाना चाहिए जिसमें तापमान, आर्द्रता और ध्वनि नियंत्रित कर रहे हैं.
- सुई और सिरिंज
- परीक्षण पदार्थों के इंजेक्शन के लिए 0.5 एमएल सिरिंज से जुड़ी 29 जी या 30 जी सुई का उपयोग करें। यदि परीक्षण पदार्थ समाधान अत्यधिक चिपचिपा है, बड़ी सुइयों की आवश्यकता है. हालांकि, बड़ी सुइयों अतिरिक्त शारीरिक दुष्प्रभाव मुद्रा कि कृपया ध्यान दें.
नोट: पॉलीथीन ट्यूब के साथ सिरिंज से जुड़ी सुई का इस्तेमाल किया जा सकता है।
- परीक्षण पदार्थों के इंजेक्शन के लिए 0.5 एमएल सिरिंज से जुड़ी 29 जी या 30 जी सुई का उपयोग करें। यदि परीक्षण पदार्थ समाधान अत्यधिक चिपचिपा है, बड़ी सुइयों की आवश्यकता है. हालांकि, बड़ी सुइयों अतिरिक्त शारीरिक दुष्प्रभाव मुद्रा कि कृपया ध्यान दें.
- वीडियो कैमरा
- खरोंच bouts और पोंछते व्यवहार की माप के लिए अपेक्षाकृत उच्च संकल्प के साथ पर्याप्त रूप से बड़े फ्रेम दर (30-60 फ्रेम /
- वीडियो विश्लेषण के लिए सॉफ्टवेयर
- वीडियो प्लेबैक और विश्लेषण के लिए वीडियो संपादन सॉफ़्टवेयर का उपयोग करें. ध्यान दें कि एक तेजी से आगे मोड और एक फ्रेम द्वारा फ्रेम प्लेबैक मोड सटीक विश्लेषण के लिए आवश्यक हैं.
- पिंजरा
चित्र 1: वीडियो कैमरा और पिंजरे सेट अप. एक्रिलिक lids के साथ चार एक्रिलिक पिंजरों, चूहों के भागने को रोकने के लिए, और संक्रामक खुजली को रोकने के लिए एक स्क्रीन का उपयोग किया जाता है. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
-
इंजेक्शन और रिकॉर्डिंग
- प्रयोग से एक दिन पहले, बाल क्लिपर के साथ माउस के गाल पर फर दाढ़ी (मूवी 1). शेविंग से पहले, चूहों को नियंत्रित नहीं करते हैं।
नोट: CD-1 या C57BL/6 चूहों ज्यादातर इस मॉडल4,5में इस्तेमाल किया गया. इस लेख में, पुरुष 6-12 सप्ताह पुराने C57BL/6N चूहों का इस्तेमाल किया गया. ध्यान दें कि रसायनों की संवेदनशीलता विभिन्न माउस उपभेदों3,6,7के बीच भिन्न हो सकती है . - शेविंग के बाद एक दिन, माउस को रिकॉर्डिंग स्थितियों के लिए 1 एच के लिए रिकॉर्डिंग पिंजरे में ले जाएँ। एक सामयिक आवेदन का उपयोग किया जाता है, तो यह इस acclimateation अवधि के दौरान लागू होते हैं।
नोट: इस रिपोर्ट में, नमक में 2% (w/v) डाइफेनहाइड्रामाइन हाइड्रोक्लोराइड नमक के 10 $L को रिकॉर्डिंग से पहले 30 मिनट तक लगाया गया था। - पिंजरे के ऊपर एक वीडियो कैमरा सेट करें, और परीक्षण पदार्थ इंजेक्शन से पहले वीडियो रिकॉर्डिंग शुरू करें। परीक्षण पदार्थ के एक 10 डिग्री एल समाधान को जाग तीजाक परिस्थितियों में मुंडा गाल में intradermally इंजेक्शन (मूवी 2) . इंजेक्शन के बाद, रिकॉर्डिंग पिंजरे में माउस वापस.
नोट: इस रिपोर्ट में 50 ग्राम/10 एल हिस्टामाइन, 40 ग्राम/10 एल कैप्सासिन या वाहन (7% ट्वीन 80 नमकीन में) को परीक्षण पदार्थों के रूप में उपयोग किया गया था। - पिंजरे का ढक्कन बंद करें और 30 मिनट के लिए वीडियो रिकॉर्डिंग जारी रखें।
नोट: कुल रिकॉर्डिंग समय प्रयोगात्मक शर्तों पर निर्भर करेगा.
- प्रयोग से एक दिन पहले, बाल क्लिपर के साथ माउस के गाल पर फर दाढ़ी (मूवी 1). शेविंग से पहले, चूहों को नियंत्रित नहीं करते हैं।
-
व्यवहार विश्लेषण
- गिनती खरोंच bouts और पोंछते व्यवहार, क्रमशः. चूहे गाल की ओर एक पिछले पैर उठाने और एक या कुछ सेकंड से अधिक कई बार खरोंच, तो उनके पैर नीचे रख दिया. कार्यों की इस श्रृंखला में एक खरोंच मुक्केबाज़ी के रूप में गिना जाता है. अन्य क्षेत्रों की खरोंच की गणना नहीं की जानी चाहिए। चूहे पोंछते और सौंदर्य के लिए दोनों forelegs के लिए एक ही foreleg का उपयोग करें. इन क्रियाओं को विशिष्ट किया जाना चाहिए। केवल पोंछते व्यवहार दर्द से संबंधित व्यवहार के रूप में गिना जाता है.
नोट: प्रत्येक क्रिया चित्र 2, मूवी 3, मूवी 4और मूवी 5में दिखाई जाती है .
- गिनती खरोंच bouts और पोंछते व्यवहार, क्रमशः. चूहे गाल की ओर एक पिछले पैर उठाने और एक या कुछ सेकंड से अधिक कई बार खरोंच, तो उनके पैर नीचे रख दिया. कार्यों की इस श्रृंखला में एक खरोंच मुक्केबाज़ी के रूप में गिना जाता है. अन्य क्षेत्रों की खरोंच की गणना नहीं की जानी चाहिए। चूहे पोंछते और सौंदर्य के लिए दोनों forelegs के लिए एक ही foreleg का उपयोग करें. इन क्रियाओं को विशिष्ट किया जाना चाहिए। केवल पोंछते व्यवहार दर्द से संबंधित व्यवहार के रूप में गिना जाता है.
चित्र 2: रिकॉर्डिंग केदौरान विशिष्ट माउस गतिविधि. पैनलए ए-सी सही फोरलेग (ए) के साथ पोंछते व्यवहार का प्रतिनिधित्व करने वाले चित्र हैं , दाएं पिछले पैर (बी) के साथ व्यवहार को खरोंचते हुए और दोनों फोरलेग (सी) के साथ व्यवहार को संवारने के लिए । चूहे गाल की ओर एक पिछले पैर बढ़ा और एक या कुछ सेकंड से अधिक कई बार खरोंच, तो उस पैर नीचे रख दिया. कार्यों की इस श्रृंखला में एक खरोंच मुक्केबाज़ी के रूप में गिना जाता है. अन्य क्षेत्रों की खरोंच की गणना नहीं की जानी चाहिए। चूहे पोंछते और सौंदर्य के लिए दोनों forelegs के लिए एक ही foreleg का उपयोग करें. इन क्रियाओं को विशिष्ट किया जाना चाहिए। केवल पोंछते व्यवहार दर्द से संबंधित व्यवहार के रूप में गिना जाता है. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
2. गर्दन इंजेक्शन मॉडल
-
इंजेक्शन और रिकॉर्डिंग
- प्रयोग से एक दिन पहले, 2-3 मिनट के लिए लगभग 5% isoflurane साँस लेना के बाद बाल क्लिपर के साथ माउस की गर्दन की झपकी पर फर दाढ़ी.
- शेविंग के बाद एक दिन, माउस को रिकॉर्डिंग स्थितियों के लिए 1 एच के लिए रिकॉर्डिंग पिंजरे में ले जाएँ।
- पिंजरे के ऊपर एक वीडियो कैमरा सेट करें (चित्र 1),और परीक्षण पदार्थ इंजेक्शन से पहले वीडियो रिकॉर्डिंग शुरू करते हैं। जाग की स्थिति में परीक्षण पदार्थ के एक 10 डिग्री एल समाधान intradermally मुंडा गर्दन में इंजेक्शन. इंजेक्शन के बाद, रिकॉर्डिंग पिंजरे में माउस वापस.
नोट: इस लेख में, 50 g/10 [L हिस्टामाइन, 10 g/10 ]L या 40 डिग्री ग्राम/10 $L capsaicin, या वाहन (7% tween 80 नमकीन में) परीक्षण पदार्थ के रूप में इस्तेमाल किया गया. - पिंजरे का ढक्कन बंद करें और 30 मिनट के लिए वीडियो रिकॉर्डिंग जारी रखें।
नोट: कुल रिकॉर्डिंग समय प्रयोगात्मक शर्तों पर निर्भर करेगा.
-
व्यवहार विश्लेषण
- गिनती खरोंच मुक्केबाज़ी व्यवहार. चूहे गर्दन की ओर एक पिछले पैर बढ़ाने के लिए और एक या कुछ सेकंड से अधिक कई बार खरोंच, तो उस पैर नीचे रख दिया. कार्यों की इस श्रृंखला में एक खरोंच मुक्केबाज़ी के रूप में गिना जाता है. अन्य क्षेत्रों की खरोंच की गणना नहीं की जानी चाहिए।
नोट: खरोंच की कार्रवाई गाल इंजेक्शन मॉडल में है कि के समान है, सिवाय इसके कि खरोंच के स्थान गर्दन को स्थानांतरित कर दिया है.
- गिनती खरोंच मुक्केबाज़ी व्यवहार. चूहे गर्दन की ओर एक पिछले पैर बढ़ाने के लिए और एक या कुछ सेकंड से अधिक कई बार खरोंच, तो उस पैर नीचे रख दिया. कार्यों की इस श्रृंखला में एक खरोंच मुक्केबाज़ी के रूप में गिना जाता है. अन्य क्षेत्रों की खरोंच की गणना नहीं की जानी चाहिए।
Representative Results
गर्दन इंजेक्शन मॉडल में, हिस्टामाइन प्रेरित मजबूत खरोंच व्यवहार (चित्र 3)। वाहन (7% नमकीन में 80 ट्वेन 80) भी खरोंच व्यवहार प्रेरित किया. पिछली रिपोर्ट में बताया गया था कि केराटिनोसाइट्स8से हिस्टामाइन उत्पादन से डिटर्जेंट खुजली को प्रेरित करता है . ट्वीन 80 इसी तरह के तंत्र द्वारा खुजली पैदा कर सकता है, जबकि capsaicin कम वाहन प्रेरित खरोंच व्यवहार, एक पिछली रिपोर्ट के विपरीत4. यह संभव है कि माउस तनाव मतभेद इन विभिन्न परिणामों के लिए खाते सकता है. इन निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि खरोंच व्यवहार पर दर्द का प्रभाव जटिल है. इसलिए, दर्द और खुजली से संबंधित व्यवहार का एक साथ माप pruritogens और algogens के सटीक विश्लेषण सक्षम हो सकता है. गाल इंजेक्शन मॉडल में, कैप्सेसिन ने खरोंच व्यवहार को प्रेरित नहीं किया और केवल पोंछते व्यवहार को प्रेरित किया, जो दर्द9,10,11 (चित्र 4) से संबंधित माना जाता है। Capsaicin इंजेक्शन भी सौंदर्य व्यवहार में वृद्धि हुई (डेटा नहीं दिखाया). गाल में इंजेक्शन के बाद, हिस्टामाइन मुख्य रूप से कमजोर पोंछते व्यवहार के साथ खरोंच व्यवहार प्रेरित. एक विरोधी histamine अभिकर्मक, diphenhydramine, बाधित खरोंच के आवेदन. इस परिणाम से पता चलता है कि हिस्टामाइन प्रेरित खरोंच व्यवहार हिस्टामाइन रिसेप्टर्स पर हिस्टामाइन की कार्रवाई के कारण होते हैं। यहाँ, एक उदाहरण के रूप में, गाल इंजेक्शन मॉडल में LPA के प्रभाव दिखाए जाते हैं (चित्र 5). एलपीए खुजली के साथ cholestatic रोगियों में पाया एक खुजली मध्यस्थ है. हालांकि, माउस मॉडल में एलपीए को एक प्रोरिटोजेन और एक एल्गोजन12,13,14,15के रूप में सूचित किया गया था। इसलिए, LPA के प्रभाव एक गाल इंजेक्शन मॉडल में जांच की गई और परिणाम से पता चला कि LPA खरोंच प्रेरित, लेकिन व्यवहार पोंछते नहीं. यह इंगित करता है कि LPA एक pruritogen है, लेकिन नहीं एक algogen, चूहों में मनुष्यों में इसके प्रभाव के समान.
चित्रा 3: गर्दन इंजेक्शन मॉडल में हिस्टामाइन और कैप्सैसिन के प्रभाव. ()वाहन के इंजेक्शन से प्रेरित व्यवहार (7% ट्वीन 80 में नमकीन, ओपन स्क्वायर), हिस्टामाइन (50 डिग्री/ 10 [g/10 $L प्रति साइट, खुला त्रिकोण; 40 g/10 $L प्रति साइट, भरा त्रिकोण) गर्दन में 30 मिनट की कुल के लिए हर 5 मिनट मूल्यांकन किया गया (बी) पैनल में 30 मिनट की अवधि के दौरान खरोंच व्यवहार के मात्रात्मक विश्लेषण ए . ]पी एंड एलटी; 0.01 ANOVA द्वारा Bonferroni द्वारा पीछा किया गया सुधार. डेटा माध्य के रूप में दर्शाया गया है - SEM (द र् 6-8)। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र ााला4 : एक प्रूरिटोजेन के प्रभाव और गाल इंजेक्शन मॉडल में एक एल्गोजेन। Wiping (एक) और खरोंच (बी) वाहन के इंजेक्शन से प्रेरित व्यवहार (7% नमकीन में 80 ट्वेन 80, खुले वर्ग), हिस्टामाइन (50 डिग्री/ 30 मिनट की कुल के लिए हर 5 मिनट का मूल्यांकन किया. खुले हलकों के रूप में दिखाया गया समूह के साथ इलाज किया गया था 10 $L 2% (w/v) diphenhydramine हाइड्रोक्लोराइड नमक (DHHCL) percutaneously 30 मिनट से पहले हिस्टामाइन इंजेक्शन (50 g/ डीएचएचसीएल को नमकीन में भंग कर दिया गया था। पैनल ए और बी में 30 मिनट की अवधि के दौरान पोंछते (सी) और खरोंच (डी) व्यवहार का मात्रात्मक विश्लेषण; द प्रति समूह 8 जंतु। [P]lt; 0.05, ]पी एंड एलटी; 0.01 ANOVA द्वारा Bonferroni सुधार के बाद. डेटा को माध्य के रूप में दिखाया गया है - SEM. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 5:LPA खरोंच लाती है, लेकिन गाल इंजेक्शन मॉडल में व्यवहार पोंछते नहीं. खरोंच (ए) और पोंछते (बी) वाहन के इंजेक्शन से प्रेरित व्यवहार (सैलीन, खुले वर्गों) या LPA (100 nmol/10 $L प्रति साइट, भरा हलकों) चूहों के दाहिने गाल में 30 मिनट की कुल के लिए हर 5 मिनट मूल्यांकन किया गया. पैनल ए और बी में 30 मिनट की अवधि के दौरान खरोंच (सी) और पोंछते (डी) व्यवहार; द वाहन के लिए 17 और एल.पी.ए. के लिए द 20। [P]lt; 0.05, ]पी एंड एलटी; 0.01 वेल्च के टी परीक्षण द्वारा। डेटा मतलब के रूप में दिखाए जाते हैं - SEM. यह आंकड़ा Kittaka एट अल से संशोधित किया गया है 5. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
मूवी 1: फिल्म का प्रदर्शन कैसे एक माउस गाल दाढ़ी के लिए. कृपया यहाँ क्लिक करें इस वीडियो को देखने के लिए. (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)
मूवी 2: एक माउस गाल में इंजेक्शन का प्रदर्शन फिल्म. कृपया यहाँ क्लिक करें इस वीडियो को देखने के लिए. (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)
मूवी 3: फिल्म ठेठ पोंछते व्यवहार का प्रदर्शन. यह फिल्म 25% की गति से दिखाई गई है। कृपया यहाँ क्लिक करें इस वीडियो को देखने के लिए. (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)
Movie 4: Movie of typical scratching behavior. कृपया इस वीडियो को देखने के लिए यहां क्लिक करें. (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)
मूवी 5: ठेठ सौंदर्य व्यवहार की फिल्म. यह फिल्म 25% की गति से दिखाई गई है। कृपया यहाँ क्लिक करें इस वीडियो को देखने के लिए. (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)
Discussion
इस लेख में, एक गाल इंजेक्शन मॉडल पेश किया है और दर्द और खुजली से संबंधित व्यवहार के विश्लेषण के लिए उपयोगी होना दिखाया गया है.
पिछली रिपोर्ट में बताया गया था कि अल्जेसिक पदार्थ माउस गर्दन इंजेक्शन मॉडल4में खरोंच व्यवहार को प्रेरित करते हैं . इसके विपरीत, कैप्सेसिन ने अन्य गर्दन इंजेक्शन प्रयोगों में खरोंच व्यवहार को कम किया (चित्र 3)। इसलिए, खरोंच व्यवहार पर दर्द का प्रभाव स्पष्ट नहीं रहता है। इस प्रकार व्यवहार परीक्षणों के माध्यम से दर्द और खुजली की समवर्ती जांच करने के लिए एक विधि विकसित करना आवश्यक है। एक गाल इंजेक्शन मॉडल का उपयोग करके, दर्द और खुजली दोनों पर एक पदार्थ के प्रभाव का मूल्यांकन किया जा सकता है।
यह पहले से सूचित किया गया है कि intracellular LPA सीधे LPA प्रेरित खुजली5के एक तंत्र के रूप में TRPV1 और TRPA1 सक्रिय करता है. तदनुसार, एलपीए प्रेरित खुजली हिस्टामाइन स्वतंत्र हो सकता है। एक पिछले अध्ययन से यह भी पता चला है कि एक गाल इंजेक्शन मॉडल हिस्टामाइन स्वतंत्र खुजली16के मूल्यांकन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इसलिए, इस मॉडल दोनों हिस्टामाइन पर निर्भर और स्वतंत्र खुजली के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
इस प्रयोग में महत्वपूर्ण चरणों में से एक इंजेक्शन है. क्योंकि यह एक तीव्र व्यवहार परीक्षण है, संज्ञाहरण इंजेक्शन कदम में इस्तेमाल नहीं किया जा सकता है क्योंकि यह इन व्यवहार को प्रभावित कर सकता है. इसलिए, माउस सुरक्षित रूप से आयोजित करने के लिए एक सटीक इंजेक्शन प्रदर्शन करने की जरूरत है. जब पशु पर पकड़ सुरक्षित नहीं है, खासकर जब मजबूत algogens इंजेक्शन, चूहों संघर्ष कर सकते हैं, एक गलत इंजेक्शन मात्रा और गहराई के लिए अग्रणी, परिणामों की व्याख्या करने में कठिनाई के बाद. जब एक माउस से निपटने, अंगूठे और तर्जनी के बीच झपकी पर त्वचा खींच माउस के आंदोलन को बाधित करने के लिए.
एक और महत्वपूर्ण कदम व्यवहार विश्लेषण है. क्योंकि खरोंच बहुत तेजी से है, वीडियो को ध्यान से देखा जाना चाहिए. इसके अलावा, पोंछते सौंदर्य से अलग करने के लिए मुश्किल हो सकता है। इसलिए, पहले प्रयोग के दौरान कैप्सेसिन जैसे सकारात्मक नियंत्रण रसायनों के उपयोग की सिफारिश की जाती है। रिकॉर्डिंग और फिर से खेलना शर्तों को भी दोनों व्यवहार की गिनती को प्रभावित कर सकते हैं. यदि व्यवहार का स्पष्ट रूप से निरीक्षण करना कठिन है, तो देखने के कोण4को बढ़ाने के लिए पिंजरों के चारों ओर दर्पणों का उपयोग किया जा सकता है।
यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि गाल इंजेक्शन मॉडल गर्दन इंजेक्शन मॉडल की तुलना में परीक्षण रसायनों के लिए कम मात्रात्मक सटीकता दिखा सकते हैं. जैसा कि चित्र ामाल 3 और चित्रा 4में दिखाया गया है, हिस्टामाइन की समान मात्रा ने गाल मॉडल की तुलना में गर्दन मॉडल में अधिक खरोंच व्यवहार को प्रेरित किया, और गर्दन इंजेक्शन मॉडल में छोटी भिन्नता दिखाई। एक बार एक परीक्षण पदार्थ गाल इंजेक्शन मॉडल के साथ कम algesic प्रभाव के साथ एक pruritogen होना दिखाया गया है, गर्दन इंजेक्शन मॉडल अतिरिक्त मात्रात्मक विश्लेषण के लिए सिफारिश की है. यहां तक कि इन सीमाओं के साथ, गाल इंजेक्शन मॉडल परीक्षण पदार्थों के सटीक मूल्यांकन के लिए उपयोगी है, विशेष रूप से खुजली अनुसंधान के क्षेत्र में.
Disclosures
लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
हम Drs. स्टीवन जी Shimada और रॉबर्ट एच LaMotte (येल विश्वविद्यालय स्कूल ऑफ मेडिसिन, कनेक्टिकट) जिसका तरीकों (संदर्भ 4) इस तकनीक अनुकूलित किया गया था के लिए आभारी हैं। हम भी माउस चित्र बनाने के लिए श्री Kentaro Miyahara धन्यवाद. इस अध्ययन को जापान में शिक्षा, संस्कृति, खेल, विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय (सं. 15H02501 और 15H05928 से एम.टी., और एच.के. को 16K21691) और Uehara मेमोरियल फाउंडेशन (एच.के.) से वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था। हम येल विश्वविद्यालय में प्रो LaMotte द्वारा गाल इंजेक्शन विधि की शुरूआत की सराहना करते हैं.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Capsaicin | Sigma | M2028 | |
| Diphenhydramine hydrochloride | Wako | 044-19772 | |
| Histamine | Sigma | H7125 | |
| iMovie | Apple | ||
| Lysophosphatidic acid | Avanti Polar Lipids | 325465-93-8 | |
| Myjector | Terumo | ss-05M2913 | |
| Tween-80 | Sigma | P4780 | |
| Video camera | Panasonic | VX985M |
References
- Ikoma, A., Steinhoff, M., Stander, S., Yosipovitch, G., Schmelz, M. The neurobiology of itch. Nature Reviews Neuroscience. 7 (7), 535-547 (2006).
- Kuraishi, Y., Nagasawa, T., Hayashi, K., Satoh, M. Scratching behavior induced by pruritogenic but not algesiogenic agents in mice. European Journal of Pharmacology. 275 (3), 229-233 (1995).
- Kuraishi, Y., Yamaguchi, T., Miyamoto, T. Itch-scratch responses induced by opioids through central mu opioid receptors in mice. Journal of Biomedical Science. 7 (3), 248-252 (2000).
- Shimada, S. G., LaMotte, R. H. Behavioral differentiation between itch and pain in mouse. Pain. 139 (3), 681-687 (2008).
- Kittaka, H., Uchida, K., Fukuta, N., Tominaga, M. Lysophosphatidic acid-induced itch is mediated by signalling of LPA5 receptor, phospholipase D and TRPA1/TRPV1. The Journal of Physiology. 595 (8), 2681-2698 (2017).
- Maekawa, T., Nojima, H., Kuraishi, Y. Itch-associated responses of afferent nerve innervating the murine skin: different effects of histamine and serotonin in ICR and ddY mice. The Japanese Journal of Pharmacology. 84 (4), 462-466 (2000).
- Inagaki, N., et al. Scratching behavior in various strains of mice. Skin Pharmacology and Applied Skin Physiology. 14 (2), 87-96 (2001).
- Inami, Y., et al. Topical surfactant-induced pruritus: involvement of histamine released from epidermal keratinocytes. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 344 (2), 459-466 (2012).
- Vos, B. P., Hans, G., Adriaensen, H. Behavioral assessment of facial pain in rats: face grooming patterns after painful and non-painful sensory disturbances in the territory of the rat's infraorbital nerve. Pain. 76 (1-2), 173-178 (1998).
- Yeo, J. F., Ong, W. Y., Ling, S. F., Farooqui, A. A. Intracerebroventricular injection of phospholipases A2 inhibitors modulates allodynia after facial carrageenan injection in mice. Pain. 112 (1-2), 148-155 (2004).
- Yeo, J. F., Ling, S. F., Tang, N., Ong, W. Y. Antinociceptive effect of CNS peroxynitrite scavenger in a mouse model of orofacial pain. Experimental Brain Research. 184 (3), 435-438 (2008).
- Hashimoto, T., Ohata, H., Momose, K. Itch-scratch responses induced by lysophosphatidic acid in mice. Pharmacology. 72 (1), 51-56 (2004).
- Kremer, A. E., et al. Lysophosphatidic acid is a potential mediator of cholestatic pruritus. Gastroenterology. 139 (3), 1008-1018 (2010).
- Alemi, F., et al. The TGR5 receptor mediates bile acid-induced itch and analgesia. Journal of Clinical Investigation. 123 (4), 1513-1530 (2013).
- Nieto-Posadas, A., et al. Lysophosphatidic acid directly activates TRPV1 through a C-terminal binding site. Nature Chemical Biology. 8 (1), 78-85 (2011).
- Akiyama, T., Carstens, M. I., Carstens, E. Differential itch- and pain-related behavioral responses and µ-opoid modulation in mice. Acta Dermato-Venereologica. 90 (6), 575-581 (2010).
