Summary
Murine blæren svulster er indusert med N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine karsinogen (BBN). Blæren er svulst heterogene; Derfor er en nøyaktig vurdering av svulst byrde nødvendig før randomisering å eksperimentell behandling. Her presenterer vi en rask, pålitelig MRI protokoll for å vurdere tumor størrelse og scene.
Abstract
Murine blæren svulst modeller er avgjørende for vurdering av nye behandlingsalternativer. Blæren tumorer indusert med N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine (BBN) karsinogen er en fordel over cellen linje-baserte modeller fordi de tett replikere menneskelig svulster genomisk profiler, og i motsetning til celle modeller og xenografts, de gir en god mulighet for studiet av immunotherapies. Men er blæren svulst generasjon heterogene; Derfor er en nøyaktig vurdering av svulst byrde nødvendig før randomisering å eksperimentell behandling. Beskrevet her er BBN musemodell og protokollen evaluere blære kreft svulst byrden i vivo med en rask og pålitelig magnetisk resonans (MR) sekvens (sann FISP). Denne metoden er enkel og pålitelig fordi, i motsetning til ultralyd, MR er uavhengig av operatør og gjør at direkte etter oppkjøp bildebehandling og gjennomgang. Bruke aksial bilder av blæren, analyse av regioner av interesse langs blæren veggen og svulst tillate beregningen av blæren veggen og svulst området. Målingen samsvarer med ex vivo blæren vekt (rs= 0,37, p = 0,009) og svulst (p = 0.0003). Avslutningsvis BBN genererer heterogene svulster som er ideelle for evaluering av immunotherapies, og Mr kan raskt og pålitelig vurdere svulst byrden før randomisering å eksperimentell behandling armene.
Introduction
Blærekreft er den femte vanligste kreften samlet, ansvarlig for ca 80 000 nye tilfeller og 16 000 dødsfall i USA i 20171. Etter ca 30 år uten betydelige fremskritt i systemisk behandling av blæren cancer2, har siste anti-PD-1 og anti-PD-L1 checkpoint hemmer forsøk vist spennende og noen ganger holdbar responser hos pasienter med avansert urothelial karsinom3,4,5. Imidlertid bare ca 20% av pasientene viser en objektive svar på disse behandlingene, og videre studier er nødvendig å utvide effektiv bruk av immunterapi hos pasienter med blærekreft.
Murine blære kreft modeller er viktige verktøy i preklinisk evaluering av romanen behandlinger6,7. For å kontrollere for tumor størrelse tilfeldiggjøring av mus til forskjellige behandlinger, må svulst byrden vurderes og kontrollert mellom behandlingsgrupper. Tidligere studier har brukt ultralyd eller bioluminescens evaluere orthotopic celle linjebasert blære kreft modeller8,9,10,11. Men presenterer begge teknikkene flere ulemper. Ultralyd målinger kan være påvirket av ferdigheter av operatør og mangler tredimensjonale funksjoner og høy romlig oppløsning. Bioluminescens metoder kan bare gi semi kvantitativ vurdering av kreftceller og tillater ikke for visualisering av blæren anatomi og morfologi. Videre kan bioluminescens bare brukes med cellen linje-baserte modeller, som uttrykker bioluminescent gener i hairless mus eller mus med hvit frakker.
Magnetisk resonans imaging (MRI), derimot, gir enestående fleksibilitet i oppkjøpet av anatomiske oppløsning, viser et bredt spekter av vev kontrast som muliggjør nøyaktig visualisering og kvantitativ vurdering av svulst byrden uten å uttrykke bioluminescent egenskaper. MR bilder er mer å reprodusere med riktig analyse rørledninger og garantert 3-D visualisering av blæren. Største begrensningene av Mr er tiden som er nødvendig for en eksamen og tilknyttede høye kostnader som begrenser høy gjennomstrømning analyser. Imidlertid har flere studier vist at MR sekvenser kan gi diagnostisk bilder av høy kvalitet som kan brukes effektivt oppdage og overvåke celle linjebasert blæren svulster; Dermed kan de brukes for høy gjennomstrømning analyse9,12.
Her beskriver vi en ikke-invasiv MR-basert metode som pålitelig og effektivt betegner kreftfremkallende stoff-indusert blæren svulster i mus. Dette bruker vi en rask bildebehandling med steady state presesjon MR teknikk (sann FISP), som garanterer kort skanning økter samtidig som høy kvalitet og høy romlig oppløsning (~ 100 mikron) av måling av blæren svulster13. Videre, for å bekrefte nøyaktigheten av denne ikke-invasiv MRI-analysen, vi beskriver sammenhengen mellom MRI-avledet parametere og ex vivo blæren vekt samt pathologically bekreftet svulst scenen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle metodene som er beskrevet her er godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk Committee (IACUC) av Northwestern University.
1. induksjon av svulster med BBN
- Få mannlige C57/BL6 mus, hver minst 6 uker gamle.
Merk: Mannlige mus utvikle blærekreft raskere og mer konsekvent enn kvinnelige mus14,15. - Legge til N-nitrosobutyl(4-hydroxybutyl) Amin (BBN) på en dose på 0,05% i drikkevannet. Oppbevares i en ugjennomsiktig beholder og gir det annonse libitum som drikkevann til mus16.
Merk: Lagre BBN løsningen i en klar beholder vil svekke de kreftfremkallende17. - Endre 0,05% BBN vannet to ganger per uke.
- Overvåke dyrene ved inspeksjon for underskriver av smerte forbundet med blæren svulster inkludert hematuria, fast blære og massene. Inspisere musene to ganger per uke eller lokale IACUC retningslinjer.
- Forvent svulstene å utvikle mellom 16 og 24 uker av eksponering18.
2. MRI oppsett
- Utføre en subcutaneous injeksjon av sterilt saltvann (0,1-0,2 mL bruker en 25-27 G p og 1 mL sprøyte) 10 min før Mr å lette blæren fylling.
- Bedøve hver mus med en gassblanding av 100% O2 og isoflurane (2-4% etter behov). Kontroller en tilstrekkelig fly av anestesi ved å teste den uttak refleks (toe knip) før du fortsetter. Bruke sterile øye ointment dyret.
- Overføre musen for bildebehandling innehaveren utstyrt med en nosecone for levering av inhalert isoflurane (0,5%-3%).
- Overvåke kroppstemperatur og respirasjon bruker en endetarms temperatur probe koblet til fysiologiske opptak datamaskinen.
Merk: Normal kroppstemperatur (36-37 ° C) opprettholdes bruker resirkulerende varmtvann krets bygget inn i dyr MR holderen. Temperaturen er målt gjennom en endetarms sensor og registrert på fysiologiske overvåking datamaskinen bruker dedikert fysiologiske overvåkingsprogram. Det samme systemet brukes til å registrere åndedrett og elektrokardiogram signaler målt gjennom en pneumatisk pute plassert under ribbeinet buret og via 3-avledningers elektrokardiogram elektroder. Respirasjon signalet brukes også for å utløse MRI oppkjøp og redusere gjenstander knyttet åndedrett bevegelse.
3. MRI bildeopptak
- Benytte en quadrature kroppen coil for eksitasjon.
- Plass en 4-kanals mottaker coil på nedre del av magen av mus som skannes for å aktivere optimalisert gjenkjenning av signaler fra regionen rundt.
- Starte automatiske justeringer gjennom den integrerte bildebehandlingsprogramvare å erverve en tri-aksiale sett med bilder av hele musen kroppen. Fra denne referansen angitt av bilder, identifisere regionen rundt (i dette tilfellet regionen blæren).
- Få tre sett med ortogonale-snittet bilder langs aksial koronale og sagittal flyene bruker radiologisk referanserammer.
- Utnytte den sanne FISP imaging sekvens (inkludert som en av funksjonene i den integrerte bildebehandlingsprogramvare) med følgende MR parametere: TR = 900 MS, TE = 2 ms, FA = 70, 14 gjennomsnitt.
Merk: Dette settet med parametere tillater rask bildebehandling med høy diagnostiske kvalitet, inkludert T1/T2 vekting i < 10 min per musen. - Romlig oppløsning og bit tykkelsen bestemmes av geometriske parameterne som er valgt av det grafiske grensesnittet av integrert tenkelig plattformen. Dette resulterer i en rekke skiver over hele blæren av 0,5 mm tykkelse med en i-flyet oppløsning på 0.148 mm.
4. MR bildeanalyser
- Identifisere skiver av 0,5 mm tykkelse og i-flyet oppløsning 0.148 mm dekker hele blæren.
- Eksportere til medisinske bildet analyseprogramvare ved å velge mappen med tilsvarende bilder i analyser-format.
- Velg "representant aksial view" i midten av blæren for kvantitativ analyse ved å bla gjennom de genererte bildene og identifisere en bit på midtpunktet av blæren, hvilke innrømmer for visualisering av blæren muren og lumen.
Merk: Center skive bør være valgt en med største diameter. - Nøye avgrense regionen rundt (ROI) av manuelt sporing grensene rundt ytterkanten av blæren (BLAut) og rundt den indre lumen (BLAi) av blæren (se skjematisk og representant figurer i figur 2) i den valgte representative aksial visningen.
- Trekk den indre lumen fra den ytre kanten til å beregne arealet av blæren veggen.
BLAveggen = BLAut - BLAi
Merk: Arealet av en kontroll blæren med ingen svulst forventes å være mindre enn det med en blære svulst.
5. euthanasia og Disseksjon av blæren
- Etter 20 uker BBN eksponering, euthanize mus ved hjelp av standard operasjonsprosedyrer lokale IACUC retningslinjer.
- Rengjør området på snitt med 70% etanol, og forstå og løft bukveggen huden med tang.
- Gjøre en midtlinjen snitt fra kjønnshår symphysis til xiphoid prosessen.
- Kraftig incise bukhulen ved å gripe med tang og incising med saks.
- Identifisere blæren, som ligger i midtlinjen nedre del av magen.
- Identifisere og kuttet median umbilical ligament koble kuppelen på blæren til navlen og bukveggen.
- Forstå kuppelen på blæren med tang countertraction og dissekere blæren fra omkringliggende strukturer, inkludert sædblærene, endetarmen og fett.
- Identifisere urinlederne inn blæren og klippe med saks nær blæren.
- Løfting blæren cephalad, klippe urinrøret med saks og fjerne blæren.
- Umiddelbart veie blæren etter rense den med PBS.
6. histologic undersøkelse av blæren vev
- Fastsette blæren vevet i 10% nøytral bufrede formalin 36 – 48 h ved romtemperatur (RT).
- Bygge vevet i parafin blokker kuttet lysbilder for påfølgende eksamen og flekken lysbildene med hematoxylin og eosin for mikroskopisk undersøkelse som beskrevet tidligere19,20.
- Utføre en mikroskopisk undersøkelse av musen blæren på lav (2,5 x og 10 x) og høy (20 x og 40 x) forstørrelser undersøke for makroskopisk lesjoner, hyperplasi, karsinom i situ, papillomas, papillary svulster og invasiv neoplasms19 , 21.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bruker protokollen beskrevet (figur 1), ble blære svulster indusert i C57/B6 mannlige mus. Mr ble utført 16 uker, og mus var euthanized på 20 uker. Ex vivo blæren vekter (BW) for hver mus ble registrert. Lysbilder var farget med hematoxylin og eosin, og alle histology lysbildene ble gjennomgått for svulst scenen.
Analysere svulst byrden med MR, blære veggen indre lumen (BLAi) ble trukket fra blæren veggen ytre lumen (BLAut) til å beregne tykkelsen på blæren veggen (BLAvegg) (figur 2). Representant sant FISP MR bilder, blære veggen 3D rekonstruksjoner og patologisk bilder av en kontroll mus (dvs. ingen tumor) er vist i figur 3A-F, og en mus med en stor svulst vises i Figur 3 g-L.
Parameteren MRI-avledet BLAveggen korrelerer svakt med ex vivo BW (rs = 0,37, p = 0,009; Figur 4). Undersøkelse av MRI-avledet BLAveggen parameteren og BW dataene viser en tilknytning til tumor scenen (Kruskal-Wallis teste Mr p = 0.0003, figur 5A; BW p = 0.0006; Figur 5B), samt en tilknytning når stratifying patologi av ikke-muskel-invasiv blærekreft og muskel-invasiv blærekreft (Mann-Whitney U teste Mr p = 0.0002, figur 5C; BW p < 0,0001, figur 5 d). BLAveggen og BW å bestemme muskel-invasiv blærekreft vises i figur 5E. Området under kurven (AUC) for BLAveggen (AUC = 0,81, 95% CI 0,68-093) er statistisk lik AUC for BW (AUC = 0.89, 95% CI 0,80-0,98, p = 0,30).
Figur 1: skjemaet for blæren svulst induksjon med BBN og timing av Mr og euthanasia. BBN er administrert annonse libitum i en konsentrasjon av 0,05% i drikkevann. Mus gjennomgå MRI for 16 ukens. Mus euthanized på 20 uker og blærer hver undersøkes med immunohistochemistry. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Skjematisk grafisk fremstilling av måten å oppnå BLAveggen og representativt MR bilde med tilsvarende skisserer. Bruker intensiteten av Mr bilder, ytterveggen av en blære ble identifisert og disposisjoner ble trukket i rødt (BLAut). Hyperintense blæren lumen ble skissert i grønt (BLAi), og tilsvarende blæren lumen området ble innhentet. Subtraksjon av disse to mengder gitt BLAveggen parameteren som tilsvarer lys grå disken i grafisk bilde. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: representant sant FISP MR bilder, blære veggen 3D rekonstruksjoner og patologisk bilder av en kontroll mus (dvs. ingen tumor) (A-F) og en mus med en stor svulst (G-L). (A) representant MR bilde av en mus med ingen svulst. (B) segmentering av blæren veggen område (BLAveggen), markert i rødt, definert som området mellom blære lumen (BLAi) og ytre blæren veggen (BLAut). (C) 3D-gjengivelse av blæren veggen fra kontroll mus, generert ved å definere BLAveggen på hver sektor gjennom blæren. Grønne pilene illustrerer blæren på et 2D-bilde oversatt til 3D-gjengivelse. (D) 3D-gjengivelse av et kutt-ut av BLAveggen fra en kontroll mus. (E) strømsparingsmodus (2,5 x) og (F) høy effekt (10 x) bilder av samme musen blæren. (G) representant MR bilde av en mus med en stor svulst. (H) segmentering av blæren veggen område (BLAveggen), markert i rødt, definert som området mellom blære lumen (BLAi) og ytre blæren veggen (BLAut). (I) 3D-gjengivelse av blæren veggen av en mus med en stor svulst. (J) 3D-gjengivelse av et kutt-ut av blæren med musen med en stor svulst, generert ved å definere BLAveggen på hver sektor gjennom blæren. Grønne pilene illustrerer blæren på et 2D-bilde oversatt til 3D-gjengivelse. (K) strømsparingsmodus (2,5 x) og (L) høy effekt (10 x) bilder av samme musen blæren. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: Spearman sammenheng mellom MRI-avledet BLAveggen og endelige blæren vekt. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5: Sammenligninger av patologisk scenen og MRI-avledet parameteren BLAveggen i 47 mus. (A) sammenligning patologisk stadier og MRI BLAveggen (Kruskal-Wallis test). (B) sammenligning alle patologisk stadier og blæren vekt (Kruskal-Wallis test). (C) sammenligning av ikke-muskel-invasiv blærekreft (scenen ≤T1) og muskel-invasiv blærekreft (scenen ≥T2) med Mr BLAveggen (Mann-Whitney U test). (D) sammenligning av ikke-muskel-invasiv blærekreft (scenen ≤T1) og muskel-invasiv blærekreft (scenen ≥T2) med blæren vekt (Mann-Whitney U test). (E) ROC kurven av MRI-avledet blæren området og endelige blæren vekt å bestemme muskel-invasiv blærekreft (scenen ≥T2). Den oppførte p-verdien er forskjellen mellom de to AUC. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Nøyaktig avbildning av svulst modeller er nødvendig for riktig pre euthanasia regi og dyr randomisering før innvielsen av eksperimentell behandling. Ved hjelp av prosedyren som presenteres her, viser vi metodikk for å (1) generere blæren svulster med BBN karsinogen og (2) stratify blæren svulst byrden ved hjelp av MR. en MR-avledet området måling (BLAvegg) korrelerer betydelig med ex vivo blæren vekt og er forbundet med patologisk svulst scenen.
Ved å vedta en rask bildebehandling tilnærming med kort oppkjøpet tid høy romlig oppløsning (sann FISP) og diagnostiske høykvalitets, kan vi utføre høy gjennomstrømning analyser av mus på mellomliggende stadier av tumor utvikling, før behandling tilfeldig. Rapporten stemmer overens med tidligere rapporter av MR imaging celle linjebasert svulst implantater9,12 og bekrefter sitt potensial som et verktøy for å optimalisere stor emne nummer medikament studier.
I denne MRI-protokollen er det avgjørende å image musen med en full blære skaffer høy kvalitet profilen og avgrense forskjellene mellom svulst og blære lumen. Vi finner at injisere hver musen med saltvann 10 minutter før imaging gir tilstrekkelig bildebehandling av blæren. Videre omfatter kritiske trinnene pålitelig utløser av Mr oppkjøp med åndedrett signalet oppdaget med en pneumatisk pute plassert under musen ribbeinet buret og anskaffelse av et tilstrekkelig antall MR skiver som gir dekning av hele blæren.
Andre alternativer for bildebehandling utvikling og progresjon av murine blæren svulster inkluderer ultralyd8 og bioluminesens10,11. Mikro-ultralyd imaging implantert MBT-2 celler oppdaget svulster i 15 mus, 13 som ble histologisk bekreftet for å ha svulster8. Ultralyd volum korrelert betydelig med stereoskopisk volumet av svulst, men svulst vekt og scenen var ikke undersøkt8. Bioluminescens er brukt til å nøyaktig skjermen celle linjebasert svulst implantater, men den kan ikke brukes til å overvåke kreftfremkallende stoff-indusert kreft uten transplanting karsinogen-avledet svulster i en mus til en annen. Evnen til å nøyaktig skjermen kreftfremkallende stoff-indusert kreft er avgjørende som disse modellene har flere fordeler sammenlignet med cellen modeller. Cellen linje-baserte modeller er genetisk homogent og avledet fra svulster som allerede har unngått immunosurveillance, og implantert svulster vokser raskt uten en kronisk inflammatorisk microenvironment22. BBN modellen har vært brukt med hell i over 30 år, og det er fortsatt en viktig modell for forståelsen av blære kreft utvikling og behandling23,24,25. Videre BBN modellen viser mutational og genuttrykk profiler ligner menneskelige blærekreft, stund fremdeles retaining intakt immunsystemet til å tillate for studier av potensielle immunterapeutisk agenter26,27 .
Tilgjengeligheten av dedikert liten dyr MRIs som delte ressurser på flere institusjoner gjør denne teknikker fordelaktig og praktisk for grunnforskning og screening av romanen terapi. Det er imidlertid noen begrensninger. Mus ble fotografert bare på en timepoint, ikke kontinuerlig under utviklingen av svulster. Men foreslår basert på våre statistiske resultater, vi at enkelt timepoint verdien er i stand til nøyaktig stratify mus i grupper av tumor størrelse og scenen, og det representerer en ideell, ikke-invasiv parameter å klassifisere og tilordne fag til ulike grupper. Flere svulst etapper ble generert ved hjelp av BBN, mellom Ta T4. Men dette kan være stratifisert (som foreslått i figur 5C-D) som muskel-invasiv (T2 eller større) og ikke-invasiv (T1 eller mindre), da dette er standard ledelse i human blære kreft28.
En annen potensiell begrensning er at parameteren BLAveggen var avledet ved hjelp av et enkelt stykke gjennom hver blære og ikke alle tilgjengelige skiver dekker den. Disse kriteriene ble valgt å redusere rørledning krav (dvs. krav for flere ROIs over flere stykker) og anses tilstrekkelig for en rask, kvantitative analysen. Mer omfattende volumetric analyse kan gjennomføres på fag (dvs. vist veiledende i Figur 3) men uunngåelig krever mer innsats og kostnader. Automatisert image bearbeiding algoritmer kan brukes automatisk avgrensning av blæren regionen. men metodene lider iboende variasjon av blæren form og størrelse blant enkelte mus og krever betydelige testing og validering før pålitelig adopsjon i en prekliniske studie29.
Kvalitativ vurdering av volumetriske data tyder på at denne enkelt skive metoden er tilstrekkelig for denne analysen. Det er imidlertid mulig at mer avanserte analyser kan kreve dette ekstra dataavbildning behandlingstrinnet. Fra oppkjøpet synspunkt er det flere flere skanninger som kunne skaffes, som kan øke muligheten til å forutsi utviklingen av svulster mens også avslørende mer subtile svulst microenvironment endringer. Disse ekstra teknikker inkluderer dynamisk kontrast forbedret MRI, diffusjon vektet MRI og andre sekvenser30 at omfattende, multi parametrisk karakteristikk av blæren veggen. Vurdering av kostnader og effektivitet førte oss til å begrense våre analysen til beskrevet i denne protokollen.
Avslutningsvis beskriver vi metodene for T1/T2-vektet rask bildebehandling MR sekvenser (sann FISP) hente flere skive bilder som dekker hele musen blæren. Viser vi at disse bildene kan brukes til å fastslå omfanget av svulst i et karsinogen-basert modell for murine blærekreft. Mr data samsvarer med blæren vev vekter og er forbundet med svulst scenen. Disse resultatene støtter bruk av denne rask og pålitelig MRI analysen å stratify mus før eksperimentell behandling tilfeldig.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
J. J. M. er finansiert av veteraner helse administrasjon fortjeneste gi BX0033692-01. J. J. M. støttes også av John P. Hanson Foundation for kreftforskning på Robert H. Lurie omfattende Cancer Center av Northwestern University. Vi takker sentrum for translasjonsforskning Imaging gir MRI oppkjøpet og behandling. Finansiering kilder ikke hadde noen rolle i skriving av manuskriptet eller beslutningen om å sende publikasjonen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 664 | Mice |
| N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine carcinogen (BBN) | TCI American | B0938 | Carcinogen |
| 0.9% normal saline | Hospira, Inc | NDC 0409-488-02 | |
| Isoflurane | Piramal HealthCare | 60307-120-25 | Anesthetic |
| 7Tesla ClinScan MRI | Bruker | NA | Dedicated Small Animal Imaging MRI |
| Syngo | Siemens | NA | MR Integrated Imaging Software |
| Model 1030 Monitoring & Gating System | Small Animal Instruments, Inc. (SAII) | NA | Small animal physiologic monitoring |
| Formalin, Neutral Buffered, 10% | Sigma | HT501128 | Fixative |
| Eosin Y | Fisher Scientific | NC1093844 | Histologic staining agent |
| Hematoxylin | Fisher Scientific | 23-245651 | Histologic staining agent |
| Jim7 | Xinapse Systems | NA | Medical image analysis software |
| GraphPad Prism v7.04 | Graphpad | NA | Graphing software |
| R v3.4.2 | The R Project for Statistical Computing | NA | Statistical software |
| R package pROC v1.10.0. | The R Project for Statistical Computing | NA | ROC analysis |
References
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A.
- Abdollah, F., et al. Incidence, survival and mortality rates of stage-specific bladder cancer in United States: a trend analysis. Cancer Epidemiology. 37 (3), 219-225 (2013).
- Rosenberg, J. E., et al. Atezolizumab in patients with locally advanced and metastatic urothelial carcinoma who have progressed following treatment with platinum-based chemotherapy: a single-arm, multicentre, phase 2 trial. The Lancet. 387 (10031), 1909-1920 (2016).
- Sharma, P., et al. Nivolumab monotherapy in recurrent metastatic urothelial carcinoma (CheckMate 032): a multicentre, open-label, two-stage, multi-arm, phase 1/2 trial. The Lancet Oncology. 17 (11), 1590-1598 (2016).
- Bellmunt, J., et al. Pembrolizumab as Second-Line Therapy for Advanced Urothelial Carcinoma. New England Journal of Medicine. 376 (11), 1015-1026 (2017).
- Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. Mouse orthotopic models for bladder cancer research. BJU International. 104 (9), 1286-1291 (2009).
- Zhang, N., Li, D., Shao, J., Wang, X. Animal models for bladder cancer: The model establishment and evaluation (Review). Oncology Letters. 9 (4), 1515-1519 (2015).
- Patel, A. R., et al. Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study. Urology. 75 (4), 799-804 (2010).
- Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants. The Journal of Urology. 145 (6), 1297-1301 (1991).
- Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model. BJU International. 101 (1), 120-124 (2008).
- Vandeveer, A. J., et al. Systemic Immunotherapy of Non-Muscle Invasive Mouse Bladder Cancer with Avelumab, an Anti-PD-L1 Immune Checkpoint Inhibitor. Cancer Immunology Research. 4 (5), 452-462 (2016).
- Kikuchi, E., et al. Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging. Journal of Urology. 170, 1375-1378 (2003).
- Chung, H. W., et al. T2-weighted fast MR imaging with true FISP versus HASTE: comparative efficacy in the evaluation of normal fetal brain maturation. American Journal of Roentgenology. 175 (5), 1375-1380 (2000).
- Miyamoto, H., et al. Promotion of bladder cancer development and progression by androgen receptor signals. Journal of the National Cancer Institute. 99 (7), 558-568 (2007).
- Bertram, J. S., Craig, A. W. Specific induction of bladder cancer in mice by butyl-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine and the effects of hormonal modifications on the sex difference in response. European Journal of Cancer. 8 (6), 587-594 (1972).
- Nagao, M., et al. Mutagenicity of N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine, a bladder carcinogen, and related compounds. Cancer Research. 37, 399-407 (1977).
- Hirose, M., Fukushima, S., Hananouchi, M., Shirai, T., Ogiso, T. Different susceptibilities of the urinary bladder epithelium of animal species to three nitroso compounds. Gan. Gann; The Japanese Journal of Cancer Research. 67 (2), 175-189 (1976).
- Shin, K., et al. Cellular origin of bladder neoplasia and tissue dynamics of its progression to invasive carcinoma. Nature Cell Biology. 16 (5), 469-478 (2014).
- Epstein, J. I. Chapter 17: Immunohistology of the Bladder, Kidney, and Testis. Diagnostic Immunohistochemistry. , Fifth Edition, 624-661 (2019).
- Cohen, S. M., Ohnishi, T., Clark, N. M., He, J., Arnold, L. L. Investigations of rodent urinary bladder carcinogens: collection, processing, and evaluation of urine and bladders. Toxicologic Pathology. 35 (3), 337-347 (2007).
- Wood, D. P. Jr Tumors of the bladder. Campbell-Walsh Urology. 11 (92), 2184-2204 (2016).
- Zitvogel, L., Pitt, J. M., Daillere, R., Smyth, M. J., Kroemer, G.
- Kaneko, S., Li, X. X chromosome protects against bladder cancer in females via a KDM6A-dependent epigenetic mechanism. Science Advances. 4 (6), eaar5598 (2018).
- Smilowitz, H. M., et al. Biodistribution of gold nanoparticles in BBN-induced muscle-invasive bladder cancer in mice. International Journal of Nanomedicine. 12, 7937-7946 (2017).
- Dai, Y. C., et al. The interaction of arsenic and N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine on urothelial carcinogenesis in mice. PLoS One. 12 (10), e0186214 (2017).
- Williams, P. D., Lee, J. K., Theodorescu, D. Molecular Credentialing of Rodent Bladder Carcinogenesis Models. Neoplasia. 10 (8), (2008).
- Fantini, D., et al. A Carcinogen-induced mouse model recapitulates the molecular alterations of human muscle invasive bladder cancer. Oncogene. 37 (14), 1911-1925 (2018).
- Network, N. C. C. NCCN Guidelines in Clinical Oncology - Bladder Cancer 5.2018. , Available from: https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/bladder.pdf (2018).
- Costa, M. J., Delingette, H., Novellas, S., Ayache, N. Automatic segmentation of bladder and prostate using coupled 3-D deformable models. Medical Image Computing and Computer-Assisted Intervention. 10 (Pt 1), 252-260 (2007).
- Rosenkrantz, A. B., et al. Utility of quantitative MRI metrics for assessment of stage and grade of urothelial carcinoma of the bladder: preliminary results. American Journal of Roentgenology. 201 (6), 1254-1259 (2013).
