Murina urinblåsan tumörer induceras med den N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamin cancerframkallande (BBN). Urinblåsan tumör generation är heterogen; Därför behövs en korrekt bedömning av tumör börda före randomisering till experimentell behandling. Här presenterar vi en snabb, tillförlitlig MRI-protokoll för att bedöma tumörens storlek och scenen.
Murina urinblåsan tumör modeller är kritiska för utvärdering av nya behandlingsalternativ. Urinblåsan tumörer inducerad med den N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamin (BBN) cancerframkallande är fördelaktiga över cell linje-baserade modeller eftersom de nära replikera de genetiska profilerna av tumörer, och, till skillnad från cellmodeller och xenograft, de ger en bra tillfälle för studien av immunterapi. Men är blåsan tumör generation heterogen; Därför behövs en korrekt bedömning av tumör börda före randomisering till experimentell behandling. Beskrivs här är en BBN musmodell och protokoll att utvärdera urinblåsan cancer tumör börda i vivo med en snabb och tillförlitlig magnetresonans (MR) sekvens (sant FISP). Denna metod är enkel och tillförlitlig eftersom, till skillnad från ultraljud, MR är operatörsoberoende och kan enkelt efter förvärvet bildbehandling och granskning. Använder axiella bilder av blåsan, analys av regioner av intresse längs blåsväggen och tumör möjliggör beräkning av urinblåsan vägg och tumör område. Denna mätning korrelerar med ex vivo urinblåsan vikt (rs= 0,37, p = 0,009) och tumörstadium (p = 0.0003). Sammanfattningsvis, BBN genererar heterogena tumörer som är idealiska för utvärdering av immunterapier, och MRI kan snabbt och tillförlitligt bedöma tumör bördan före randomisering till experimentella behandlingsarmarna.
Cancer i urinblåsan är den femte vanligaste cancerformen övergripande, ansvarig för cirka 80 000 nya fall och 16.000 dödsfall i USA i 20171. Efter ungefär 30 år utan betydande framsteg vid Systemisk behandling av urinblåsan cancer2visat senaste checkpoint anti-PD-L1- och anti-PD-1 hämmare prövningar spännande och ibland hållbara svar hos patienter med avancerad Urothelial cancer3,4,5. Dock endast cirka 20% av patienterna visar ett objektivt svar på dessa behandlingar, och ytterligare studier behövs för att expandera en effektiv användning av immunterapi hos patienter med cancer i urinblåsan.
Murina urinblåsan cancer modeller är viktiga verktyg i preklinisk utvärdering av nya behandlingar6,7. För att kontrollera för tumörens storlek när randomisera möss till olika behandlingar, måste tumör börda bedömas och kontrolleras mellan behandlingsgrupperna. Tidigare studier har använt ultraljud eller mareld för att utvärdera ortotop cell linje-baserade urinblåsan cancer modeller8,9,10,11. Men presenterar båda teknikerna flera nackdelar. Ultraljud mätningar kan påverkas av kompetensen hos operatören och saknar tredimensionella funktioner och hög rumslig upplösning. Mareld metoder kan endast ge semikvantitativt utvärdering av tumörcellerna och möjliggör inte visualisering av urinblåsan Björndjurens. Mareld kan dessutom bara användas med cell linje-baserade modeller, som uttrycker självlysande gener hos hårlösa möss eller möss med vita rockar.
Magnetisk resonanstomografi (MRT), däremot, erbjuder unika flexibilitet i förvärvet av högupplösta anatomiska bilder, uppvisar ett brett spektrum av vävnad kontrast som möjliggör korrekt visualisering och kvantitativ bedömning av tumör börda utan att behöva uttrycka självlysande boenden. Herr bilderna lättare reproducerbara med lämplig analys rörledningarna och garanteras 3D-visualisering av blåsan. De största begränsningarna av MRI är tidsperiod som är nödvändig för en granskning och höga kostnader som begränsar hög genomströmning analyser. Flera studier har dock visat att MR ordnar kan ge hög kvalitet diagnostiska bilder som kan användas för att effektivt identifiera och övervaka cell linje-baserade urinblåsan tumörer; Således kan de användas för hög genomströmning analys9,12.
Här, beskriver vi en icke-invasiv herr-baserad metod för att tillförlitligt och effektivt präglar cancerframkallande-inducerad urinblåsan tumörer hos möss. För att åstadkomma detta använder vi en snabb bildbehandling med distansträning precession herr teknik (sant FISP), vilket garanterar korta skanning sessioner samtidigt som det ger hög kvalitet och hög rumslig upplösning (~ 100 mikrometer) för detektering och mätning av urinblåsan tumörer13. Dessutom för att bekräfta riktigheten av denna icke-invasiva MRI analys, beskriver vi sambandet mellan MRI-derived parametrar och ex vivo urinblåsan vikt samt patologiskt-bekräftade tumörstadium.
Korrekt avbildning av tumör modeller är nödvändigt för lämplig före dödshjälp Förproduktion och djur randomisering innan experimentell behandling. Använda proceduren presenteras här, visar vi metod för att (1) generera urinblåsan tumörer med hjälp av BBN cancerframkallande och (2) stratifiera urinblåsan tumör bördan med hjälp av Mr An herr-derived området mätning (BLAvägg) korrelerar signifikant med ex vivo urinblåsan vikt och associeras med patologisk tumörstadium.
<p cla…The authors have nothing to disclose.
J. J. M. finansieras av Veterans Health Administration förtjänsten bevilja BX0033692-01. J. J. M. stöds också av John P. Hanson Foundation för cancerforskning vid Robert H. Lurie omfattande Cancer Center i nordvästra universitetet. Vi tackar centrum för translationell Imaging för MRI förvärvet och handläggning. Finansieringskällor hade ingen roll i skrivandet av manuskript eller beslutet att publicera.
C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 664 | Mice |
N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine carcinogen (BBN) | TCI American | B0938 | Carcinogen |
0.9% normal saline | Hospira, Inc | NDC 0409-488-02 | |
Isoflurane | Piramal HealthCare | 60307-120-25 | Anesthetic |
7Tesla ClinScan MRI | Bruker | NA | Dedicated Small Animal Imaging MRI |
Syngo | Siemens | NA | MR Integrated Imaging Software |
Model 1030 Monitoring & Gating System | Small Animal Instruments, Inc. (SAII) | NA | Small animal physiologic monitoring |
Formalin, Neutral Buffered, 10% | Sigma | HT501128 | Fixative |
Eosin Y | Fisher Scientific | NC1093844 | Histologic staining agent |
Hematoxylin | Fisher Scientific | 23-245651 | Histologic staining agent |
Jim7 | Xinapse Systems | NA | Medical image analysis software |
GraphPad Prism v7.04 | Graphpad | NA | Graphing software |
R v3.4.2 | The R Project for Statistical Computing | NA | Statistical software |
R package pROC v1.10.0. | The R Project for Statistical Computing | NA | ROC analysis |