Summary
Hier beschrijven we stap voor stap een gedetailleerd protocol voor het uitvoeren van echocardiografie in het konijn-model. We laten zien hoe de verschillende echocardiografische weergaven en beeldvormings vlakken correct kunnen worden verkregen, evenals de verschillende beeldvormings modi die beschikbaar zijn in een klinisch echocardiografie systeem dat routinematig wordt gebruikt bij menselijke en veterinaire patiënten.
Abstract
Grote diermodellen zoals het konijn zijn waardevol voor translationeel preklinisch onderzoek. Konijnen hebben een soortgelijke cardiale elektrofysiologie in vergelijking met die van de mens en die van andere grote diermodellen zoals honden en varkens. Het model konijn heeft echter het extra voordeel van lagere onderhoudskosten in vergelijking met andere grote diermodellen. De longitudinale evaluatie van de hartfunctie met behulp van echocardiografie, wanneer op de juiste wijze geïmplementeerd, is een nuttige methodologie voor de preklinische beoordeling van nieuwe therapieën voor hartfalen met een verminderde ejectiefractie (bijv. cardiale regeneratie). Het juiste gebruik van deze niet-invasieve tool vereist de implementatie van een gestandaardiseerd examen protocol volgens internationale richtlijnen. Hier beschrijven we stap voor stap een gedetailleerd protocol onder toezicht van veterinaire cardiologen voor het uitvoeren van echocardiografie in het konijn-model, en laten zien hoe de verschillende echocardiografische views en imaging Planes correct kunnen worden verkregen, evenals de verschillende beeldvormings modi beschikbaar in een klinisch echocardiografie systeem dat routinematig wordt gebruikt bij menselijke en veterinaire patiënten.
Introduction
Longitudinale evaluatie van de hartfunctie in grote diermodellen is een robuuste onderzoeksmethode die vaak wordt gebruikt voor de beoordeling van de effecten van nieuwe therapieën voor de behandeling van ischemische en niet-ischemische cardiomyopathie. Onder de verschillende cardiovasculaire beeldvormingstechnieken beschikbaar voor preklinisch onderzoek, echocardiografie is uitgebreid gebruikt vanwege de niet-invasieve en draagbare kenmerken. In ervaren handen is echocardiografie ook een zeer reproduceerbare beeldvormings techniek om cardiale anatomie te bestuderen, evenals systolische en diastolische functie van het hart.
Grote preklinische diermodellen zoals varkens, honden en konijnen, zijn van essentieel belang voor preklinisch translationeel onderzoek1,2,3. Het potentiële voordeel van nieuwe therapieën zoals cardiale regeneratieve geneeskunde in de setting van cardiomyopathie vereist immers uitgebreide hypothese testen in grote preklinische modellen voordat ze kunnen worden overwogen voor menselijk gebruik2,4 . In vergelijking met andere grote preklinische modellen biedt het konijnen model enkele voordelen, waaronder de lage onderhoudskosten, die vergelijkbaar zijn met die van muizen en ratten. In tegenstelling tot muizen en ratten zijn het CA+ 2 -transportsysteem en de cardiale elektrofysiologie echter vergelijkbaar bij konijnen als die van mensen, en die van andere grote diermodellen zoals honden en varkens, waardoor het translationele potentieel van het konijn toeneemt model1,5. Daarom heeft het konijn, als een groot experimenteel preklinisch model, een uitzonderlijk evenwicht tussen kosten en reproduceerbaarheid voor preklinisch translationeel onderzoek.
Het konijn heeft het bijkomend voordeel van zijn geschiktheid voor echocardiografische beeldvorming met behulp van klinische ultrasone eenheden die routinematig worden gebruikt bij menselijke en veterinaire patiënten, waardoor gebruik wordt gemaakt van de superioriteit van harmonische beeldvorming en State-of-the-art Technologie. Hiervoor hebben sector transducers (ook bekend als Phase array) van relatief hoge frequentie (tot 12 MHz), zoals die worden gebruikt in neonatale/pediatrische cardiologie, de voorkeur. Echocardiografisch onderzoek in het preklinische model van konijnen maakt de volledige evaluatie van de systolische en diastolische functie mogelijk met behulp van meerdere views en verschillende modi beschikbaar in moderne echocardiografische eenheden (bijv. continue Golf Doppler (CWD), Pulsed-Wave Doppler (PWD), en weefsel Doppler Imaging (TDI)).
Echocardiografie is een operator afhankelijke techniek en vereist daarom uitgebreide training en kern kennis van de techniek in overeenstemming met internationale richtlijnen. Een deel van deze training kan worden vergemakkelijkt met de visualisatie van Video's waarin gedetailleerd wordt uitgelegd hoe verschillende echocardiografische views kunnen worden verkregen. De verwezenlijking van een hoge competentie in echocardiografische beeldvorming, evenals de ontwikkeling van een gestandaardiseerd protocol en de juiste techniek, zijn essentieel om de invloed van de exploitant te minimaliseren en betrouwbare kwantitatieve gegevens te genereren, zoals vereist in strenge wetenschappelijk onderzoek.
Sommige overwegingen zijn nodig met betrekking tot het systeem en laboratorium Setup gebruikt voor echocardiografie bij konijnen en andere grote dierlijke modellen. Voor een standaard transthoracale ECHO cardiografische evaluatie van de hartfunctie, moet het ultrasone systeem de volgende modaliteiten bevatten: bi-dimensionale modus (B-modus of 2D), bewegings modus (M-modus), kleur Doppler, evenals CWD, PWD en TDI. Bovendien moet de machine volledige cardiale analyse-en meetsoftware hebben geïnstalleerd, evenals voldoende interne ruimte op de harde schijf om voldoende digitale stilstaande beelden en video lussen van hoge kwaliteit op te slaan voor offline analyse. Sommige systemen gebruiken lineaire array transducers; echter, voor de beste beeldvorming van het hart, gefaseerde array sector transducers met een kleine scan hoofd diameter hebben de voorkeur, omdat deze een gemakkelijkere passage van de ultrasone golven door de nauwe intercostale ruimten toestaan. Voor konijnen gebruiken we relatief hoge frequentie transducers (tot 12 MHz). De positie van het dier voorbeeld vorming is van het allergrootste belang om beelden van goede kwaliteit te verwerven. Zo worden zowel rechter-als linker laterale ligposities aanbevolen om alle standaard beeldvormings vlakken te verkrijgen tijdens een echocardiografisch onderzoek. Hiervoor is een tafel met een inkeping die samenvalt met het hart gebied van de borstkas aan te raden (Figuur 1a). Deze getande tafel vergemakkelijkt de toegang met de transducer tot het gebied van de borstkas dat zal worden gescand, en zorgt daarom voor vrije mobiliteit van de hand van de machinist die de beste scan positie van het dier handhaaft. Positionering van het dier in een laterale liggende positie resulteert in een val van het hart naar de transducer en de hoogte van de longen, evenals verbreding van het toegangsvenster van de ultrasone straal door de intercostale ruimten, waardoor de algehele beeldvorming wordt verbeterd kwaliteit (Figuur 1a). Het echocardiografisch onderzoek dient te worden uitgevoerd op een blinde manier en volgens de richtlijnen van de echocardiografie Commissie van het American College of veterinaire interne geneeskunde en de American Society of echocardiografie/European Koppeling voor cardiovasculaire beeldvorming6,7,8.
Een deel van ons wetenschappelijk team wordt geassocieerd met de cardiologie dienst van een veterinair onderwijzend ziekenhuis dat dagelijks aanwezig is bij diergeneeskundige patiënten (bijv. honden en katten), waarvoor het de relevante opleiding en accreditatie heeft in de veterinaire cardiologie en echocardiografie, en de verschillende beeldvormings modaliteiten, evenals uitgebreide ervaring in het beeldvorming van verschillende maten van dier patiënten en thoracische conformaties met deze techniek. Daarnaast gebruiken we vaak echocardiografie voor longitudinale evaluatie van de hartfunctie in een konijnen model van cardiomyopathie geïnduceerd door antracyclines9. Hier beschrijven we een stap voor stap echocardiografie protocol voor evaluatie van de hartfunctie met behulp van een klinische ultrasone eenheid in een groot preklinisch model zoals het konijn. Dit protocol is aangepast voor de huidige internationale richtlijnen8, en bevat praktische aanbevelingen op basis van onze eigen ervaringen in klinische en experimentele instellingen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De hierin beschreven experimenten werden goedgekeurd door de ethische onderzoekscommissie van de Universiteit van Murcia, Spanje, en werden uitgevoerd in overeenstemming met richtlijn 2010/63/EU van de Europese Commissie. De beschreven stappen zijn uitgevoerd onder standaard besturings protocollen die deel uitmaken van het werkplan en zijn niet uitsluitend uitgevoerd met het oog op het filmen van de begeleidende video op dit papier.
1. voorbereiding van het konijn
- Voordat u doorgaat, moet u beginnen met het injecteren van een combinatie van ketamine (10 mg/kg) gehomogeniseerd in dezelfde spuit met Medetomidine (200 μg/kg) om het dier te verdoven, wat de stress van de procedure voor het konijn zal verminderen.
Opmerking: het gebruik van anesthesie vermindert ook de hartslag op een voorspelbare manier, waardoor de Inter-individuele variabiliteit afneemt en het extra voordeel heeft van het verbeteren van de algehele beeldkwaliteit. Zoals getoond in de video, bedekken het hoofd met een chirurgische deken om te helpen houden het dier kalm tijdens de injectie van anesthesie.- Controleer of het dier volledig verdouseerd is binnen 10-20 min, door bevestiging van de aanwezigheid van spier flaccidity, afwezigheid van palpebrale reflex, mandibulaire bewegingen en snuiven. De aanwezigheid van de laatste twee tekenen (mandibulaire bewegingen en snuiven), zijn op zijn beurt de vroegste tekenen van verminderde verdoving diepte. Hoewel het zelden nodig is, moet herdoseren worden overwogen (bijv. de helft van de initiële anesthetische dosiscombinatie), indien een langdurige vertraging wordt verwacht om de procedure te voltooien.
Opmerking: Hoewel het dier snel in slaap valt binnen de eerste ~ 5 minuten na de injectie, wordt het aanbevolen om een dieper vlak van anesthesie toe te staan voordat het dier wordt gemanipuleerd. Deze vertraging zal voorkomen dat het konijn schrijnende, dat anders waarschijnlijk tachycardie zal produceren en nadelige invloed op de beeld nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid van bepaalde parameters tijdens het echocardiografisch onderzoek (bv. mitralisklep instroom analyses). - Zodra het dier is verdoofd, gebruik een Hair Clipper om het haar te verwijderen uit de huid van de thorax. Begin onder de neklijn en ga verder naar het niveau van zowel rechts-als linker hypochondrisch gebieden, evenals de sub-xiphoid regio in de middelste lijn (Figuur 1b).
- Scheren 1-3 cm2 van het inwendige gezicht van de rechter voorzijde, evenals de mediotibiale gebieden van zowel linker-als rechter achterpoten (Figuur 1b).
- Controleer of het dier volledig verdouseerd is binnen 10-20 min, door bevestiging van de aanwezigheid van spier flaccidity, afwezigheid van palpebrale reflex, mandibulaire bewegingen en snuiven. De aanwezigheid van de laatste twee tekenen (mandibulaire bewegingen en snuiven), zijn op zijn beurt de vroegste tekenen van verminderde verdoving diepte. Hoewel het zelden nodig is, moet herdoseren worden overwogen (bijv. de helft van de initiële anesthetische dosiscombinatie), indien een langdurige vertraging wordt verwacht om de procedure te voltooien.
- Na het plaatsen van het konijn op een thermische deken of verwarming pad om hypothermie tijdens de procedure te voorkomen, breng een geschikte geleidende gel aan op de elektroden en plaats deze in de geschoren gebieden van de ledematen. Bevestig de elektroden met chirurgische tape.
- Controleer of er een correct ECG-signaal op het scherm van het systeem wordt weergegeven. meestal is een gelijktijdige 1-lead elektro cardiografische tracering voldoende om het hartritme tijdens het hele echocardiografische onderzoek synchroon te bewaken (Figuur 1a en figuur 1c).
Opmerking: naast de hartslag, Controleer de ademhalingsfrequentie en de temperatuur. De ademhalingsfrequentie kan visueel worden gecontroleerd of door de incidentie van thoracale bewegingen in het echocardiografisch beeld, terwijl de temperatuur via de rectale sonde moet worden bewaakt. Deze parameters moeten worden bewaakt aan het begin, vervolgens elke 10 min en aan het einde van de procedure. Konijnen hebben niet de neiging om te braken tijdens anesthesie10,11; Daarom wordt het vasten van de konijnen niet routinematig aanbevolen voor een echo cardiografisch onderzoek.
Figuur 1 . Voorbereiding en positionering van het konijn voor echocardiografie. A) tabel met inkeping die samenvalt met het hart gebied dat moet worden afgebeeld. B) Verwijder het haar van de borst. C) Sluit de ECG-elektroden aan om het hart te bewaken. D) positionering van de bediener tijdens het voor vormen van echocardiografisch onderzoek. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
2. parasternal lange as (Sagittaal) uitzicht op het hart
- Om een parsternal Long Axis (PSLAX) uitzicht van het hart te verkrijgen, plaatst u het konijn in de rechter laterale liggende positie, met de voorvoet buiten de thorax, met chirurgische tape (Figuur 1a en figuur 1c).
- Om de beste beeldkwaliteit mogelijk te maken, is het belangrijk om de huid van het thoracische gebied zo plat mogelijk te houden om de penetratie te vergroten en de algehele beeldkwaliteit te verbeteren terwijl het dier wordt verbeeld. Houd hiervoor de voorpoten uit de buurt van de thorax met één hand, terwijl u de vrije hand gebruikt om eventuele huidplooien en zakken te identificeren, deze van boven naar beneden af te vlakken en elke huid van de borstkas naar de zijkant en achterkant van het konijn te verplaatsen. Dit is vooral belangrijk voor oudere en grotere konijnen waarvan de overmatige huid en het onderhuidse vetweefsel de beeldkwaliteit kunnen verminderen.
Opmerking: het hart oppervlak van de borstkas moet op de uitsparing in de tabel worden geplaatst. Houd er echter rekening mee dat, in deze positie, de buik een natuurlijke neiging heeft om naar de inkeping te gaan, en creëert een positieve druk die het hart cranially verbeweegt, wat dan interfereert met een goede ECHO cardiografische beeldvorming. Om dit te voorkomen, is het belangrijk dat de buik volledig op de tafel ligt en om dit te bereiken, is het nuttig om de buikorganen voorzichtig te verplaatsen naar het caudale gebied van het dier door middel van zachte massage (Figuur 1a en figuur 1c).
- Om de beste beeldkwaliteit mogelijk te maken, is het belangrijk om de huid van het thoracische gebied zo plat mogelijk te houden om de penetratie te vergroten en de algehele beeldkwaliteit te verbeteren terwijl het dier wordt verbeeld. Houd hiervoor de voorpoten uit de buurt van de thorax met één hand, terwijl u de vrije hand gebruikt om eventuele huidplooien en zakken te identificeren, deze van boven naar beneden af te vlakken en elke huid van de borstkas naar de zijkant en achterkant van het konijn te verplaatsen. Dit is vooral belangrijk voor oudere en grotere konijnen waarvan de overmatige huid en het onderhuidse vetweefsel de beeldkwaliteit kunnen verminderen.
- Voor echocardiografische beeldvorming houdt u de transducer met de rechterhand vast, terwijl u de linker hand gebruikt om de besturingselementen van het echocardiografie systeem te bedienen, zoals weergegeven in afbeelding 1d.
- Om een goed contact met de huid te behouden, breng onverdund ethanol aan op de huid en vervolgens voldoende ultrasone transmissie gel aan de kop van de transducer.
- Plaats de transducer vervolgens nauw op de huid van de rechter hemithorax, op het niveau van de tweede tot derde intercostale ruimte en op ongeveer 1-3 cm afstand van de rechter parasternale lijn, waarbij het oriëntatie teken van de transducer naar de rechter schouder van het dier wijst en onder een hoek van ongeveer 30 ° ten opzichte van de middenlijn (Figuur 2a). Dit moet een beeld van de juiste PSLAX van het hart te produceren (Zie representatieve resultaten).
- Zodra de 2D-hart beelden op het scherm worden weergegeven, is de volgende stap het aanpassen van de besturingselementen van de ultrasone eenheid om optimale beelden te verkrijgen. De belangrijkste zijn:
- Diepte-en zoom regelaars: gebruik deze besturingselementen om het interessegebied te optimaliseren. De diepte van het beeld moet voldoende zijn zodat de cardiale structuren op elk beeld kunnen worden gezien. Gebruik het gereedschap Zoomen voor een betere beoordeling van de structuren van belang, bijvoorbeeld de integriteit van kleppen en folders.
- Totale winst-en tijdversterkings compensatie (d.w.z. versterkingsinstellingen op verschillende diepten in real-time): beheer grijs schalen en winsten handmatig om achtergrondruis te minimaliseren en de afbakening van cardiale structuren te maximaliseren. Deze parameters zijn vooral belangrijk bij konijnen vanwege de slechte echogeniciteit van het ventriculaire myocardium.
- Dynamisch bereik of compressie: gebruik dit besturingselement om het aantal grijstinten aan te passen dat door de afbeelding wordt weergegeven. Stel het dynamische bereik in zodat de bloed pool donker is en het weefsel helder is. Dit zal resulteren in betere endocard grens definitie, die belangrijk is voor het verkrijgen van linker ventriculaire volumes.
- Sector breedte: begin het examen met een brede sector (90 °) en na een overzicht van het hart, verminder dan de sector breedte als specifieke gebieden beter moeten worden gefotografeerd. Het verkleinen van de sectorgrootte verbetert de tijdelijke resolutie door de framesnelheid te verhogen. Dit is vooral belangrijk wanneer 2D echocardiografie wordt gebruikt om Doppler-onderzoek te begeleiden.
- Om de positie van de transducer te behouden tijdens het beeldvorming van het konijn en om de vermoeidheid van de bediener te verminderen, gebruikt u de wijsvinger om de hand aan de tafel of de borst van het dier te verankeren, terwijl de andere vingers de transducer vasthouden (Figuur 2a).
- Verkrijg twee belangrijke beeldvormings vlakken van het hart in de rechter PSLAX-weergave.
- Zoek een beeldvormings vlak dat in de lengterichting van het hart en waar alle vier de kamers van het hart (twee atria en twee ventrikels) kunnen worden geïdentificeerd; ook, wanneer een breed gezichtsveld wordt gebruikt, moet de Apex van het hart ook in beeld komen aan de linkerkant van het beeld (Zie representatieve resultaten sectie).
- Voer subtiele bewegingen van de transducer uit, zoals vegen, schommelen en roteren, ten opzichte van de intercostale ruimte, evenals de craniocaudal en dorsoventral hoek van de ultrasone straal om het andere beeldvormings vlak van de parasternal Long Axis View te verkrijgen ( Afbeelding 2A,B). In het andere beeldvormings vlak kunnen de linker ventriculaire uitstroom baan (LVOT) en de aorta worden geïdentificeerd (Zie representatieve resultaten).
- Beeldoriëntatie: Houd er rekening mee dat de basis van het hart zich aan de rechterkant van de sector afbeelding bevindt.
- Na het verkrijgen van de juiste beeldvormings vlakken, gebruikt u B-modus om de algehele functie van het hart te evalueren en gebruikt u kleurdoppler om de bloedstroom over alle kleppen te beoordelen, evenals de integriteit van het interventriculaire septum (IVS).
Opmerking: Sla afbeeldingen van de verschillende views en Planes altijd op voor offline analyse.
Figuur 2 . Hoe een PSLAX weergave van het hart te verkrijgen. (a-B) Positionering van de transducer om de twee verschillende vlakken van de PSLAX-weergave van het hart te verkrijgen (zie beschrijving in de tekst). Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
3. parasternal korte as weergave van het hart
- Met de transducer op dezelfde locatie in de borst terwijl een goed uitgelijnde PSLAX wordt weergegeven, voert u een linksom rotatie van de transducer van ongeveer 90 ° (Figuur 3a) uit om een rechter parasternale korte as (PSSAX)-weergave te verkrijgen. Deze keer moet het oriëntatie teken van de transducer naar de linker schouder van het konijn wijzen.
Opmerking: als u de transducer in dezelfde locatie van de borstkas wilt houden terwijl u de transducer draait, gebruikt u de linkerhand om de rotatie van het snoer van de transducer uit te voeren, zoals weergegeven in Figuur 3b. - In de korte asweergave van de parasternal verkrijgt u drie beeld vlakken door de transducer langs de as van het hart te vegen: de mid-ventriculaire, de mitralisklep en de hoge basis met de longslagader (PA) en de aortaklep (AoV) in beeld.
- In het mid-ventriculaire beeldvlak, dat het hart van de papillaire spieren en tendineae tendineae niveau (figuren 3c), visualiseert de rechter ventrikel (RV) aan de bovenkant en de linker ventrikel (LV) aan de onderkant van de afbeelding (Zie representatieve resultaten).
- Gebruik B-modus om radiale en omtrek contractie en ontspanning van de LV te evalueren en te controleren op afwijkingen van de regionale wand beweging.
- Gebruik M-modus en met behulp van de track Ball Beweeg de cursor in real-time over de 2D-afbeelding en plaats de cursor in het midden van de LV, tussen beide papillaire spieren, loodrecht op de IVS en linker ventriculaire vrije muur (FW) (figuur 3c). Zodra de M-modus beelden op het scherm worden weergegeven, slaat u afbeeldingen op voor offline analyse. Bij konijnen met hoge hartfrequenties, gebruik hogere sweep snelheden om cardiale gebeurtenissen tijdens de hart cyclus beter te scheiden (bijv. 150 mm/sec).
- Door de transducer naar de kopborststuk-regio (figuur 3D) te vegen, verkrijgt u een mitralisklep (MV) vlak. Gebruik B-modus en M-modus om de integriteit en beweeglijkheid van de MV-folders te evalueren. Plaats de cursor langs het midden van de LV, loodrecht op de IVS (figuur 3e), om gedetailleerde informatie te verkrijgen over de excursie van de MV ten opzichte van de IVS.
- Veeg de transducer verder cranially om te resulteren in een beeldvormings vlak op het niveau van de hoge basis (ook bekend als AoV-vlak; Figuur 3F - H), waar de AOV en zijn folders, de rechter ventriculaire UITSTROOM baan (RVOT), de PA en de rechter en linker atria (La) kunnen worden geïdentificeerd (Zie representatieve resultaten).
- Beeldoriëntatie: merk op dat de PA aan de rechterkant van de sector afbeelding staat.
- Om de PA en de bifurcatie volledig te visualiseren, gebruikt u een grotere Angulatie en soms een craniale verplaatsing van de transducer (een intercostale ruimte).
- Gebruik B-modus voor evaluatie van de grootte en vorm van deze structuren (bv. de grootte van de linker atriale wordt verhoogd bij congestief hartfalen), en gebruik kleur Doppler en PWD om de snelheid van de bloedstroom (uitstroom) op het PV-niveau op te nemen, door het monstervolume net onder de opening van de PV-folders (figuur 3G). Gebruik ten slotte de M-modus en plaats de cursor langs de AoV en LA (afbeelding 3H).
- Gebruik de volgende hoofd controles en aanpassingen om adequate kleuren stroom Doppler-afbeeldingen te verkrijgen:
- Met de kleur sector gepositioneerd in het gebied van belang, de hoek tussen de sector en de bloedstroom richting zo veel mogelijk te verminderen.
- Kleur sector breedte: Stel dit in op het ventiel gebied, om de framesnelheid te verhogen en de kleur stroom informatie te verbeteren.
- Baseline en Pulse herhalingsfrequentie (PRF): pas de basislijn op de kleurenbalk en de PRF aan, zodat hogere snelheden kunnen worden weergegeven. Een getal boven en onder aan de kleurenbalk staat voor de maximale detecteerbare snelheid voordat kleur-aliasing plaatsvindt.
Opmerking: aliasing komt vaker voor in kleurstroom processingdan spectrale gepulseerde Doppler, omdat een deel van de pulsen wordt toegewezen om cross-sectionele afbeeldingen te verkrijgen in nadeel van de informatie over de Doppler van de kleur stroom. - Kleurversterking: ten eerste, verhoog dit tot het punt dat het net begint met het maken van achtergrondruis en verlaag vervolgens tot een niveau dat de kleur stroom Imaging optimaliseert.
- Gebruik de volgende hoofd bedieningen om adequate spectrale Doppler-afbeeldingen te verkrijgen:
- Cursor positie: Maak deze parallel aan de richting van de bloedstroom; Houd in ieder geval onder een hoek < 30 °.
- Poort positie: het is een marker in de cursor lijn die overeenkomt met de bemonsteringsplaats. Plaats het na de aorta-en pulmonaire kleppen en op de folder tips van de atrioventriculaire kleppen.
- Poort grootte: gebruik de minimale instelling behalve voor het verkrijgen van kleine regurgitant stromen.
- Baseline: Selecteer de baseline afhankelijk van de richting van de bloedstroom. Plaats deze aan de bovenkant wanneer de bloedstroom tegen de transducer (bijv. pulmonale en aorta stromen), of onderaan wanneer het bloed naar de transducer stroomt (bv. Atrioventriculaire kleppen stroomt).
- Schaal: Selecteer dit volgens de snelheid van de bloedstroom, doorgaans, 25% hoger dan de verkregen snelheid.
- Doppler Gain: gebruik dit om de Doppler signalen te intensiveren. Verhoog de versterking tot de kleur wordt weergegeven.
- Inkleuring van het Doppler-signaal: gebruik magenta kleur wanneer het Doppler-spectrum zwak is, omdat het de snelheid scherper maakt.
- Wand filter: Hiermee verlaagt u de hoeveelheid laagfrequente ruis die door de hart wanden wordt geproduceerd.
- Sweep snelheid: gebruik hogere sweep snelheden om tijdmetingen te vergemakkelijken.
Figuur 3 . Hoe u een PSSAX-weergave en de verschillende beeldvormings vlakken verkrijgen. A) positie van de transducer om een PSSAX-aanzicht op het niveau van de papillaire spieren te verkrijgen. B) demonstratie van de rol van de linkerhand om de transducer te helpen roteren bij het overschakelen van een PSLAX naar een pssax-weergave. C) plaats van de cursor van de M-modus in de papillaire spieren vlak van het PSSAX-aanzicht. D) positie van de transducer om een PSSAX-aanzicht van het hart bij het mitralisklep vlak te verkrijgen. (E) plaats van de cursor van de M-modus in het mv-vlak van de PSSAX-weergave. F) positie van de transducer om het AV-vlak in de PSSAX-weergave te verkrijgen. G) demonstratie van kleur Doppler en positionering van het pwd-monstervolume om de uitstroom van de PV te evalueren. H) locatie van de cursor van de M-modus in het AOV-vlak van de PSSAX-weergave. LV = linker ventrikel; RV = rechter ventrikel; FW = LV vrije muur; AoV = aortaklep; RVOT = rechter ventriculaire uitstroom baan; PV = pulmonale klep; PA = longslagader; LA = linker Atrium; RA = rechter Atrium. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
4. apical 4 kamers uitzicht op het hart
- Om een Apical 4 kamers (AP4C) weergave te verkrijgen, plaatst u het konijn in de linker laterale liggende positie met de voorvoet uit de thoracale regio door middel van een chirurgische tape ( figuur 4a). Houd de huid van de thorax plat op een vergelijkbare manier als hierboven beschreven (stap 2.1.1). Het hart gebied van de borstkas moet worden gepositioneerd over het uitgesneden gedeelte van de tafel. Evenzo, de buik moet goed worden ondersteund op de tafel na het verplaatsen van caudally de buikorganen door middel van zachte masserende.
- Breng echografie gel aan op de transducer, en vervolgens toegang tot het hart door de inkeping in de tabel en Positioneer het nauw aan de huid van de linker hemithorax, op het niveau van de 4th-5th intercostale ruimte met de midclaviculaire lijn, met de oriëntatie markering van de transducer die naar de achterkant van het konijn wijst (in de richting van de linker scapula) (figuur 4b). Op deze manier is de transducer orthogonaal met de Apex van het hart en de ultrasone straal is gericht naar de basis van het hart.
- Vanuit deze positie, indien nodig, verplaats de transducer omhoog één intercostale ruimte op een tijdstip tot de ~ 4e intercostale ruimte (een manoeuvre vaak "Window shopping" genoemd).
- Bij het bereiken van de juiste intercostale ruimte (die kan variëren naargelang de grootte en/of leeftijd van het konijn), observeer een beeld van het hart van de Apex naar de basis van het hart, de typische hart vorm waar alle vier de kamers kunnen worden gezien, met de linker-en rechter ventrikels aan de bovenkant en beide atria aan de onderkant van de afbeelding (Zie figuur 4c,D en representatieve resultaten).
- Beeldoriëntatie: Houd er rekening mee dat de LV zich aan de rechterkant van de sector afbeelding bevindt.
- Vermijd het voor inkorten van de Apex in deze weergave, zodat de typische AP4C-weergave van het hart een kogel vormig beeld van de LV met de IVS in het midden moet geven (figuur 4c,D). Als de Apex afgerond is, is de LV waarschijnlijk ingekort; Verplaats de transducer daarom naar beneden één intercostale ruimte en/of Tilt van de transducer.
- Gebruik de B-modus om te controleren op afwijkingen van de regionale wand beweging en een globaal beeld van de LV-functie te hebben. Gebruik kleur Doppler om de stroming over de atrioventriculaire kleppen te evalueren en gebruik pwd en plaats het monstervolume op het niveau van de MV-folder tips om beelden van het mv-instroom-spectrum te verkrijgen (figuur 4c).
- Gebruik de TDI-modus en plaats het monstervolume aan de septale en laterale zijden van de mitralisklep annulus (figuur 4D).
- Gebruik M-modus en plaats de cursor uitgelijnd met de laterale MV annulus om de mitralisklep ring vlak systolische excursie (MAPSE) te verkrijgen. Sla afbeeldingen op in elk van deze modi voor offline analyse van de hartfunctie.
Figuur 4 . Hoe de AP4C en AP5C uitzicht op het hart te verkrijgen. (A) positionering van het konijn in linker laterale decubitus voor een AP4C beeld van het hart. B) positie van de transducer om een AP4C beeld van het hart te verkrijgen. C) plaats van het monstervolume op de MV Leaflet tips om de INSTROOM van MV te evalueren. D) plaats van het monstervolume voor de TDI-analyse van myocardiale snelheden aan de laterale zijde van de MV annulus. E) positie van de transducer om een AP5C beeld van het hart te verkrijgen. F) plaats van het monstervolume voor de PWD-analyse van de uitstroom over de AOV. LV = linker ventrikel; RV = rechter ventrikel; MV = mitralisklep; LA = linker Atrium; RA = rechter Atrium; AoV = aortaklep. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
5. apical 5 kamers uitzicht op het hart
- Beginnend met de transducer op dezelfde locatie als in AP4C View, voer een zachte kantelbare caudally (figuur 4e) totdat de lvot en AOV in beeld komen, dit is de apicale 5 kamers uitzicht (AP5C) van het hart (Zie representatieve resultaten).
- Gebruik B-mode om de LVOT, de beweging van de AoV-folders, evenals de grootte en functie van de LV-holte te evalueren.
- Gebruik de kleur Doppler-modus voor de evaluatie van de uitstroom over de AoV en gebruik PWD om de stromingssnelheid over deze klep te bepalen door het monstervolume net achter de AoV te plaatsen (figuur 4F).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Parasternal lange as weergave van het hart
Figuur 5a toont een beeldvormings vlak van de rechter PSLAX-weergave waar de 4 kamers van het hart duidelijk worden onderscheiden. U in deze weergave de rechter ventrikel (RV), tricuspidalisklep (TV), IVS, LV, FW en de mitralisklep (MV) identificeren. Wanneer de Apex duidelijk zichtbaar is aan de linkerzijde van de afbeelding in deze weergave en de LV niet ingekort is, is het mogelijk om het LV-volume nauwkeurig te schatten met behulp van de dubbeldekker-methode van schijven (gewijzigde Simpson-regel) zoals weergegeven in Figuur 5b,C8 , die voor nauwkeurigheid moet worden gecombineerd met een vergelijkbare meting van het LV-volume in de AP4C-weergave, vooral als het konijn-model gebruikt presenteert met afwijkingen van de wand beweging. Figuur 5d toont het andere beeldvormings vlak van de rechter PSLAX waar de lvot en de aorta (AO) ook in beeld komen. De locatie voor het plaatsen van de remklauwen voor een nauwkeurige meting van de LVOT wordt ook weergegeven in figuur 5d.
Figuur 5 . Beeldvormings vlakken verkregen in een PSLAX-weergave van het hart. A) beeldvormings vlak dat de 4 kamers van het hart demonstreert. B) eind diastolische en (C) afkant systolische beelden, die de methode van Simpson voor analyse van de LV. (D) Imaging Plane waar de lvot en aorta in beeld komen in de pslax-weergave van het hart. LV = linker ventrikel; RV = rechter ventrikel; IVS = interventriculair septum; Ao = aorta; LVOT = linker ventriculaire uitstroom spoor; LA = linker Atrium; RA = rechter Atrium; MV = mitralisklep; TV = tricuspidalisklep; FW = vrije wand van de LV; PC = pericardium. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Parasternal korte as weergave van het hart
In Figuur 6awordt een rechter pssax-aanzicht van het hart op het niveau van de papillaire spieren en het tendineae tendineae-vlak getoond. Het is mogelijk om in deze weergave de RV, IVS, LV en FW te identificeren, evenals de anterolaterale (AL) en posteromedial (PM) papillaire spieren (Figuur 6a). In deze weergave wordt het gereedschap gebieds tracering gebruikt om het omtrek gebied te meten in de eind diastole (CAd) (Figuur 6b), en in end-systole (CAS) (figuur 6c), waarmee de berekening van het totale OMVINGSGEBIED (CSA) met behulp van de Formule:
CSA = CAd-CAs/CAd × 100.
Een voorbeeld van een M-mode-trace in de PSSAX op het niveau van de papillaire spieren wordt weergegeven in figuur 6d, waar ook de plaatsing van remklauwen, Leading Edge naar Leading Edge, voor de verschillende metingen van de structuren van de LV wordt aangetoond. Deze metingen bieden nuttige informatie over de grootte van de LV-structuren. Zo kan het meten van de LV-eind diastolische diameter (LVDd) en de LV-eindsystolische diameter (LVDs) uit drie opeenvolgende hartslagen de berekening van de LV-inkorten fractie (% SF) met behulp van de formule:
SF% = LVDd-LVDs/LVDd
Naast de LV systolische en diastolische volumes (LVVd, Lvv's), met behulp van de formule Teichholz:
(7 × (LVD)3)/(2.4 + LVD)
De LV ejectiefractie (LVEF (%)) wordt vervolgens berekend volgens de formule LVEF = (LVVd-LVVs)/(LVVd × 100).
Een M-modus-trace op het niveau van het MV-vlak in de PSSAX-weergave wordt weergegeven in figuur 6e, waar ook de locatie van de remklauwen voor het meten van het E-punt op septale scheiding (EPSS) van de mitralisklep wordt getoond. Een voorbeeld van een PSSAX-weergave van het hart op het AoV-vlak niveau wordt weergegeven in figuur 6F, waar de locatie van de remklauwen voor het meten van de aorta-wortel diameter (AOD), evenals de linker atriale dimensie (LAD) worden aangetoond.
Een voorbeeld van de PV-uitstroom analyse met zowel kleur Doppler als gepulseerde Golf Doppler wordt weergegeven in figuur 6G. Let op de blauw gekleurde uitstroom door de PV met kleur Doppler, die aangeeft dat de waargenomen stroom wordt verplaatst van de transducer. Voorbeelden van het kwantificen van de pre-ejectieperiode van de PV (PEP PV), evenals de PV-uitstroom met behulp van de volume time Integral (VTI), worden weergegeven in afbeelding 6h.
Figuur 6 . Imaging-vlakken die zijn verkregen in de PSSAX-weergave. A) representatief beeld van een PSSAX-aanzicht op het vlak van de papillaire spieren. B) eind diastolische en (C) End systolische tracering van de endocard-grens om de totale CSA te meten. (D) M-modus-Trace verkregen in een PSSAX-weergave op het niveau van de papillaire spieren. E) een voorbeeld van een M-modus-Trace verkregen in een PSSAX-weergave op het niveau van de MV. F) representatief 2D-beeld van een PSSAX-vie in het vlak van de AV. (G) Color DOPPLER-geleide pwd-tracering van de PV-uitstroom. H) demonstratie van een VTI-tracering met behulp van het pwd-signaal dat is verkregen uit de PV-uitstroom. LV = linker ventrikel; RV = rechter ventrikel; IVS = interventriculair septum; FW = vrije wand van de LV; AL = anterolaterale papillaire spier; PM = posteromedial papillaire spier; LVDd = linker ventriculaire diameter aan het einde-diastole; LVDs = linker ventriculaire diameter aan het einde-systole; PC = pericardium; EPSS = E-punt naar septale scheiding; AoD = aorta wortel diameter; LAD = linker atriale dimensie; MV = mitralisklep; TV = tricuspidalisklep; PEP PV = pre-ejectieperiode van de pulmonaalklep; ET PV = ejectietijd van de pulmonaalklep; VTI PV = volume tijd integraal van de pulmonaalklep. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Apical 4 kamers uitzicht
Een voorbeeld van MV-instroom met Color Doppler in een AP4C-weergave wordt weergegeven in afbeelding 7A. Noteer de overheersende rode kleur van de MV-instroom die aangeeft dat de stroom naar de transducer beweegt. Zo is een nuttige Mnemonic te beschrijven en te leren hoe bloed stroomt over de structuren van het hart is het acroniem BART (blauw weg, rood naar de transducer). Met behulp van pwd kan het mv-instroom-spectrum worden beoordeeld zoals weergegeven in figuur 7b, waar de vroege (E) en late (A) vullende golven tijdens diastole gemakkelijk kunnen worden gedifferentieerd. Voorbeelden van myocardiale weefsel snelheden van de MV annulus zoals beoordeeld door TDI op zowel de laterale als de septale wanden zijn weergegeven in figuur 7C en figuur 7d, respectievelijk. De systolische component wordt aangeduid door de S golf, terwijl de E ' en een ' golven corresponderen met myocardiale beweging van de mitralisklep annulus tijdens vroege vulling (E ') en late vulling (A ') componenten van diastole.
Apical 5 kamers uitzicht
Afbeelding 7e toont een voorbeeld van kleur Doppler gepositioneerd op de lvot in een apicale 5 kamers uitzicht. Merk op dat, in lijn met de hierboven beschreven BART Mnemonic, de blauwe kleur die wordt waargenomen, aangeeft dat de bloedstroom van de transducer wegbeweegt. Afbeelding 7F toont een voorbeeld van hoe de AOV-uitstroom te Kwantificeer met behulp van pwd-signaal om de VTi van de AOV, systolische ejectietijd (et) en de pre-ejectieperiode van de AOV (PEP AOV) te evalueren.
Figuur 7 . De AP4C en AP5C uitzicht. A) een voorbeeld van kleur Doppler in een AP4C-weergave. B) representatief beeld van het pwd-signaal van de MV-instroom in een AP4C, waarbij E-Wave overeenkomt met vroege diastolische vulling en een overeenkomt met de atriale contractie component tijdens diastole. (C-D) Representatieve beelden van myocardiale snelheids signalen verkregen uit de laterale (C) en Septale (D) segmenten van de MV annulus met TDI in een AP4C View. S komt overeen met systole, terwijl E ' correspondeert met vroege vulfase en een ' met late vulfase tijdens diastole. E) een voorbeeld van een kleur Doppler-signaal verkregen uit de AOV in een AP5C-weergave. F) demonstratie van een VTI-tracering met behulp van het pwd-signaal dat uit de AOV-uitstroom is verkregen. AoV = aortaklep; VTI = volume tijd integraal; PEP = pre-ejectieperiode; ET = ejectietijd. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
We hebben een protocol beschreven voor het echocardiografisch onderzoek van cardiale functieparameters in het konijn, dat een groot preklinisch model1,2,3vertegenwoordigt. De stap voor stap methodologie die hierin wordt beschreven, moet worden beschouwd als leidraad, die met een complementaire studie van de basisprincipes van echocardiografie, en een basiskennis van ultrasone beeldvorming, zal helpen de onderzoeker te verkrijgen, door middel van de praktijk en complementaire en deskundige begeleiding, gegevens van goede kwaliteit in relatief korte tijd.
Er zijn verschillende kritieke stappen om de waarde en reproduceerbaarheid van de resultaten te verhogen tijdens het gebruik van het hier beschreven echocardiografie protocol. Zorg er eerst voor dat de huid van de thorax haar vrij en schoon is; Hiervoor raden we aan om de huid te reinigen met ethanol om overtollig natuurlijk huid vet te verwijderen voordat u de ultrasone gel aanbrengt. Vervolgens, hoewel het mogelijk is om de borst in een liggende positie te plaatsen, de longen hebben de neiging om te blazen en te verminderen een al moeilijk te beeld borstwand met slechte echogeniteit, dus, een linker of rechter liggende positie van het konijn en de toepassing van de transducer op de borst door de cut-out inkeping van een speciaal gebouwde Imaging tabel is de beste manier om de algehele beeldkwaliteit te verbeteren. Dan, de onderzoeker die het echografie-systeem te besteden enige tijd het creëren van cardiale Imaging presets met geoptimaliseerde Imaging-instellingen, die essentieel zijn voor het verbeteren van de algehele beeldkwaliteit in alle weergaven en zal ook het verkorten van uw Imaging tijd in de toekomst Imaging sessies. Enkele van de belangrijkste controle-instellingen om te beheersen zijn totale winst en tijdwinst compensatie, gezien de slechte beeldvorming van de borst van het konijn (zie stap 2.4.2). Het is ook belangrijk om systematisch te zijn en het echocardiografische onderzoek altijd op ordelijke wijze uit te voeren. Voor dit, het krijgen van de gewoonte van het verwerven van alle Imaging views en imaging Planes in dezelfde volgorde zal voorkomen dat het missen van belangrijke informatie tijdens het uitvoeren van de studie. Bovendien wordt tijdens Imaging analyse aanbevolen om alle metingen uit te voeren in ten minste drie opeenvolgende hart cycli in de verworven beelden voor elke modaliteit. Ten slotte is de blindering van de waarnemer tijdens beeldvorming en tijdens de offline analyse belangrijk om bias te voorkomen en de waarde van de resultaten voor translationele geneeskunde te verhogen. Rekening houdend met alle bovengenoemde overwegingen, zal samen met de toepassing van de beginselen van beeldvorming en analyse overeenkomstig de huidige richtsnoeren7,8, zorgen voor de reproduceerbaarheid van het onderzoek met behulp van longitudinale evaluatie van de cardiale functie via echocardiografie in een groot diermodel zoals het konijn.
Gezien de variabiliteit in lichaamsgrootte en vetsamenstelling bij verschillende leeftijden van de konijnen en de specifieke experimentele instellingen, zullen sommige variaties van de techniek nodig zijn, zoals subtiele bewegingen van de transducer (bijv. vegen, rotatie) ten opzichte van de intercostale ruimte, om de gewenste beeldvormings vlakken te bereiken. Daarom moet het hier beschreven protocol worden geïnterpreteerd als een uitgangspunt dat moet worden aangepast aan de specifieke doelstellingen van het onderzoeksprogramma met betrekking tot deze techniek.
Hoewel klinische echocardiografie systemen op grote schaal beschikbaar zijn in de meeste onderzoekscentra, zijn er enkele beperkingen aan de hierin beschreven techniek. Inderdaad, de kwaliteit van de beelden verkregen uit echocardiografische studies hangt in grote mate af van de verfijning en technologie van de ultrasone machine, de vaardigheden en expertise van de exploitant, en de individuele patiëntkenmerken. De minimale technische kenmerken waaraan de ultrasone apparatuur moet voldoen, zijn beschreven in de inleiding. Ontoereikende apparatuur (bijv. een lineaire array-transducer) vormt dus een fundamentele beperking voor het gebruik van de echocardiografische techniek in het konijnen model. Bovendien worden de echo cardiografische techniek en de resultaten ervan sterk beïnvloed door de operator. Daarom kan een operator zonder voldoende ervaring en praktische training het verkrijgen van gestandaardiseerde beelden van passende kwaliteit drastisch beperken. Evenzo kunnen onervaren operators ook fouten maken bij het verkrijgen van metingen, zelfs als ze worden uitgevoerd op echocardiografische beelden van uitstekende technische kwaliteit. Bovendien, zoals hierboven vermeld, sommige van de beperkingen zijn inherent aan het konijn-model, zoals leeftijd en, meer in het bijzonder, door de grootte en lichaamsvet samenstelling van de konijnen bestudeerd via echocardiografie. In onze ervaring hebben jonge konijnen met een gewicht tot 2,5 kg lage subcutane en intra-thoracische vetafzettingen. Deze fenotypische podium biedt de beste akoestische Vensters en biedt scherpere en scherper echocardiografische beelden en zeer weinig artefacten. Naarmate de samenstelling van grootte en lichaamsvet toeneemt, wordt de kwaliteit en nauwkeurigheid van het echocardiografisch onderzoek beperkt, en de vaardigheden van de operator zullen uiteindelijk een fundamentele rol spelen bij het bereiken van de best mogelijke beeldvorming onder deze omstandigheden.
We gebruiken momenteel echocardiografie voor longitudinale evaluatie van de hartfunctie in een konijnen model van cardiomyopathie geïnduceerd door antracyclines en om stamcel therapieën te testen voor deze aandoening9,12,13. De hier beschreven techniek kan ook worden gebruikt in andere Preklinische studies waarbij ischemie of valvulaire hartziekte.
Een andere cardiovasculaire beeldvormings techniek is cardiale magnetische resonantie (CMR), waarvan het belangrijkste voordeel is beter endocardial-myocardiale definitie, wat zich vertaalt in een nauwkeurigere schatting van LV-volumes en systolische functie14. Echter, CMR is beperkt door zijn hoge kosten en het gebrek aan overdraagbaarheid en daarom zijn beperkte beschikbaarheid in de meeste onderzoekscentra. Evenzo heeft CMR relatief slechte prestaties voor de analyse van de diastolische functie, waardoor echocardiografie een betere algemene keuze is voor longitudinale evaluatie van systolische en diastolische functie van het hart15.
In onze ervaring, de verdoving regime gebruikt in het protocol beschreven hierin is veilig en behaalt reproduceerbare resultaten zonder significante depressie van myocardiale functie toe te schrijven aan de anesthesie9. Het is echter belangrijk om het verdovings regime in elk laboratorium te standaardiseren om te zorgen voor reproduceerbare resultaten voor uw specifieke experimentele instellingen. Na het induceren van anesthesie, in ervaren handen het echocardiografisch onderzoek kan worden voltooid binnen 15 minuten.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Dit werk werd deels gesteund door: Fundación Séneca, Agencia de Ciencia y Tecnología, Región de Murcia, Spanje (JT) (subsidie nummer: 11935/PI/09) en de Universiteit van Reading, Verenigd Koninkrijk (AG, GB) (centrale financiering). De financiers hadden geen rol in het studie ontwerp, het verzamelen en analyseren van gegevens, het besluit om te publiceren of de voorbereiding van het manuscript.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bluesensor | Medicotest | 13BY1062 | Disposable adhesive ECG lectrodes |
| Domtor (Medetomidine) | Esteve | CN 570686.3 | Veterinary prescription is necessary |
| HD11 XE Ultrasound System | Philips | 10670267 | Echocardiography system. |
| Heating Pad | Solac | CT8632 | |
| Imalgene (Ketamine) | Merial | RN 9767 | Veterinary prescription is necessary |
| Omnifix-F 1 ml syringe | Braun | 9161406V | |
| S12-4 | Philips | B01YgG | 4-12 MHz phase array transducer |
| Ultrasound Transmision Gel (Aquasone) | Parker laboratories Inc. | N 01-08 |
References
- Pogwizd, S. M., Bers, D. M.
- Gandolfi, F., et al. Large animal models for cardiac stem cell therapies. Theriogenology. 75, 1416-1425 (2011).
- Harding, J., Roberts, R. M., Mirochnitchenko, O. Large animal models for stem cell therapy. Stem Cell Research & Therapy. 4, 23 (2013).
- Chong, J. J., Murry, C. E. Cardiac regeneration using pluripotent stem cells--progression to large animal models. Stem Cell Research. 13, 654-665 (2014).
- Del, M. F., Mynett, J. R., Sugden, P. H., Poole-Wilson, P. A., Harding, S. E. Subcellular mechanism of the species difference in the contractile response of ventricular myocytes to endothelin-1. Cardioscience. 4, 185-191 (1993).
- Sahn, D. J., DeMaria, A., Kisslo, J., Weyman, A. Recommendations regarding quantitation in M-mode echocardiography: results of a survey of echocardiographic measurements. Circulation. 58, 1072-1083 (1978).
- Thomas, W. P., et al. Recommendations for standards in transthoracic two-dimensional echocardiography in the dog and cat. Echocardiography Committee of the Specialty of Cardiology, American College of Veterinary Internal Medicine. Journal of Veterinary Internal Medicine. 7, 247-252 (1993).
- Lang, R. M., et al. Recommendations for cardiac chamber quantification by echocardiography in adults: an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging. European Heart Journal Cardiovascular Imaging. 16, 233-270 (2015).
- Talavera, J., et al. An Upgrade on the Rabbit Model of Anthracycline-Induced Cardiomyopathy: Shorter Protocol, Reduced Mortality, and Higher Incidence of Overt Dilated Cardiomyopathy. BioMed Research International. 2015, 465342 (2015).
- Borkowski, R., Karas, A. Z. Sedation and anesthesia of pet rabbits. Clinical Techniques in Small Animal Practice. 14, 44-49 (1999).
- Cantwell, S. L. Ferret, rabbit and rodent anesthesia. The Veterinary Clinics of North America. Exotic Animal Practice. 4, 169-191 (2001).
- Giraldo, A., et al. Percutaneous intramyocardial injection of amniotic membrane-derived mesenchymal stem cells improves ventricular function and survival in non-ischaemic cardiomyopathy in rabbits. European Heart Journal. 36, 149 (2015).
- Giraldo, A., et al. Allogeneic amniotic membrane-derived mesenchymal stem cell therapy is cardioprotective, restores myocardial function, and improves survival in a model of anthracycline-induced cardiomyopathy. European Journal of Heart Failure. 19, 594 (2017).
- Bellenger, N. G., et al. Comparison of left ventricular ejection fraction and volumes in heart failure by echocardiography, radionuclide ventriculography and cardiovascular magnetic resonance; are they interchangeable? European Heart Journal. 21, 1387-1396 (2000).
- Flachskampf, F. A., et al. Cardiac Imaging to Evaluate Left Ventricular Diastolic Function. Journal of the American College of Cardiology Cardiovascular Imaging. 8, 1071-1093 (2015).
