توجد الخلايا الأديبية في مستودعات منفصلة ولها أدوار متنوعة داخل بيئاتها الدقيقة الفريدة. ومع الكشف عن الاختلافات الإقليمية في طابع ووظيفة الخلايا الأديبية، فإن تحديد المستودعات وعزلها بشكل موحد أمر حاسم للنهوض بالميدان. هنا، نقدم بروتوكول مفصل للختان من مختلف مستودعات الماوس الدهنية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الأنسجة الدهنية هي أعضاء معقدة مع مجموعة واسعة من الوظائف، بما في ذلك تخزين وتعبئة الطاقة استجابة للاحتياجات المحلية والعالمية، وفصل التمثيل الغذائي لتوليد الحرارة، وإفراز adipokines لتنظيم التوازن الجسم كله و الاستجابات المناعية. البحوث الناشئة هو تحديد الاختلافات الإقليمية الهامة في الملامح التنموية والجزيئية والوظيفية للخلايا الأديبية الموجودة في مستودعات منفصلة في جميع أنحاء الجسم. خصائص مختلفة من المستودعات ذات الصلة طبيا منذ الأمراض الأيضية غالبا ما تظهر آثار مستودع محددة. وسيوفر هذا البروتوكول للمحققين أطلسا تشريحيا مفصلا ودليلا تشريحيا لتحديد الأنسجة الدهنية المتنوعة واستئصالها. وسيسمح تشريح موحد للمستودعات الدهنية المنفصلة بإجراء مقارنات مفصلة لخصائصها الجزيئية والأيضية ومساهماتها في الحالات المرضية المحلية والمنهجية في ظل مختلف الظروف التغذوية والبيئية.
المقدمة
تلعب الأنسجة الدهنية أدوارًا حاسمة في التوازن في الجسم كله، بما في ذلك تخزين الطاقة وإطلاقها استجابة للاحتياجات المحلية والعالمية، والتنظيم الحراري، وإفراز الأديبوكينات لتنظيم توازن الطاقة، والتمثيل الغذائي، والاستجابات المناعية1 , 2.يتم توزيع Adipocytes في جميع أنحاء الجسم في مستودعات منفصلة، وفي بعض الحالات تخدم أدوارمتخصصة داخل البيئات الدقيقة 3،4،5. تاريخيا، تركزت دراسة الأنسجة الدهنية على الأنسجة الدهنية البيضاء (WAT)، ودورها في الحفاظ على التوازن الطاقة. يتم توزيع معظم الخلايا الأديبية في جميع أنحاء الجسم في مست....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يتم تنفيذ جميع الإجراءات الحيوانية بموافقة اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC) من جامعة ميشيغان.
1- القتل الرحيم
ملاحظة: لأغراض بروتوكول الفيديو هذا، يتم استخدام الفئران C57BL/6J البالغة من العمر 4 إلى 6 أشهر.
- ضع الماوس في غرفة مرذاذ الأيسوفلوران واضبط معدل تدفق الأيسوفلوران إلى 5% أو أكثر. استمر في التعرض للأيسوفلوران حتى دقيقة واحدة بعد توقف التنفس. ثم إزالة الماوس من غرفة المرذاذ وتأكيد القتل الرحيم باستخدام تدبير الثانوية المعتمدة.
ملاحظة: وتختلف التدابير الثانوية المعتمدة باختلاف المؤسسات والبروتوكول الحيواني، وقد تشمل خلع عنق الرحم أو قطع رأسه.<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويمكن تحقيق النجاح في تحديد وعزل مختلف مستودعات الماوس الدهنية باستخدام البروتوكول الموصوف أعلاه. وترد في الشكل 2المواقع التشريحية الإجمالية لمستودعات تحت الجلد (ألف وهاء - واو) والبني (باء) والحشوي (C وD وG-J) ومستودع البوبليتال (K).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ومع تزايد الاعتراف بأهمية الخصائص الجزيئية والوظيفية المتنوعة للمجموعات المنفصلة من الخلايا الأديبية، من الأهمية بمكان أن يقوم المحققون في الميدان بتحديد المستودعات الدهنية واستئصالها بشكل موحد لإجراء مزيد من التحليلات. وحتى الآن، لا توجد سوى بروتوكولات قليلة للتوطين الموحد وعزل مجموعة واسعة من مستودعات الماوس الدهنية. وتتركز الأساليب المنشورة سابقا في المقام الأول على واحد أو اثنين من المستودعات وتفتقر إلى التفاصيل اللازمة لتحديد الهوية الموحدة والختان من قبل مختلف المحققين18،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
O.A.M. مدعوم ة من قبل المعهد الوطني للصحة المنح DK062876 و DK092759; ويدعم برنامج تدريب العلماء الطبيين في جامعة ميشيغان (T32GM007863)، وبرنامج التدريب في تكوين الأعضاء بجامعة ميشيغان (T32HD007605)، وزمالة جامعة ميشيغان راكهام للجدارة، وزمالة تايلينول للرعاية المستقبلية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10٪ فورمالين محايد | مخزن فيشر Scientific | 22-110-869 | |
| ألواح 24 بئرا ، غير معالجة | Sigma-Aldrich | CLS3738 | |
| 70٪ إيثانول (مخفف من 95٪) فيشر | Scientific | 04-355-226 | |
| الملقط بأطراف منحنية | VWR | 89259-946 | |
| تشريح | عموم شركة كارولينا للتوريد | 629004 | |
| مقص تشريح (طرف حاد / حاد) | VWR | 82027-588 | |
| إسفنج شاش | Vitality Medical | 2634 | Curity 4 بوصة × 4 بوصة إسفنجة شاش ، 12 رقائق |
| Handi-Pins لتشريح | شركة Carolina Biological Supply | Company 629132 | |
| مقص القزحية (مستقيم) | VWR | 470018-890 | |
| Isoflurane | VetOne | 501017 | |
| مشرط | VWR | 100499-578 | مقبض مشرط ريشة مع شفرة ، يمكن التخلص |
المراجع
- Cinti, S. The adipose organ at a glance. Disease Models & Mechanisms. 5 (5), 588-594 (2012).
- Rosen, E. D., Spiegelman, B. M. What we talk about when we talk about fat. Cell. 156 (1-2), 20-44 (2014).
- Sanchez-Gurmaches, J., Guertin, D. A.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
استكشف المزيد من المقالات
