Summary
Этот протокол описывает процедуры оптимизации в вирусной двойной флуоресценции помечены опухоли ксенотрансплантат модели с использованием личиночных зебр в качестве хостов. Эта неоднородная модель ксенотрансплантата имитирует состав тканей микроокружения рака поджелудочной железы in vivo и служит более точным инструментом для оценки лекарственных реакций в персонализированных моделях zPDX (зебрафиш пациента, полученных ксенотрансплантатом).
Abstract
Пациент полученных опухоли ксенотрансплантат (PDX) и клеточной опухоли ксенотрансплантата (CDX) являются важными методами для доклинической оценки, лекарства руководства и основных исследований рака. Поколения моделей PDX у традиционных мышей-хозяев отнимают много времени и работают только на небольшую часть образцов. В последнее время зебрафиш PDX (zPDX) стала уникальной системой хоста, с характеристиками мелкомасштабной и высокой эффективности. Здесь мы описываем оптимизированную методологию для создания двойной модели ксенотранспланта опухоли с двойной флуоресценцией для сравнительной химиотерапии в моделях zPDX. Опухолевые клетки и фибробласты обогащались из свежесобранной или замороженной ткани рака поджелудочной железы в различных условиях культуры. Обе группы клеток были помечены лентивирусом, выражающим зеленые или красные флуоресцентные белки, а также антиапоптозным геном BCL2L1. Трансинфицированные клетки были предварительно смешаны и совместно введены в 2 dpf личильных зебры, которые затем были выведены в модифицированной среде E3 при 32 градусах Цельсия. Модели ксенотрансплантата лечились химиотерапевтическими препаратами и/или ингибитором BCL2L1, и одновременно исследовались возможности как опухолевых клеток, так и фибробластов. Таким образом, этот протокол позволяет исследователям быстро генерировать большое количество моделей zPDX с разнородной микросредой опухоли и обеспечивает более длинное окно наблюдения и более точную количественную оценку в оценке эффективности кандидатов на наркотики.
Introduction
Точность онкологии стремится найти наиболее полезные терапевтические стратегии для отдельных пациентов1. В настоящее время, многочисленные доклинические модели, такие как в пробирке первичной культуры, в пробирке органоидной культуры2, и пациента полученных ксенотрансплантатов (PDX) у мышей до или после органоидной культуры предлагаются для диагностики и для проверки / оценки потенциала терапевтический выбор3. Модель PDX, генерируемая инъекцией первичных раковых клеток человека в иммунных мышей, является одним из наиболее перспективных инструментов для персонализированного скрининга наркотиков в клинической онкологии3,4. В отличие от культивируемой клеточной линии in vitro, модели PDX обычно сохраняют целостность и неоднородность опухолевой среды in vivo, лучше имитируя разнообразие и особенности различных опухолевых пациентов, и, следовательно, могут предсказать потенциальный медицинский исход пациентов4. Тем не менее, генерация моделей PDX у мышей требует высококачественных образцов пациентов и месяцев времени, чтобы собрать достаточное количество клеток и моделей для многогрупповых экспериментов, а клеточные/генетические композиции ксенотранспланта могут дрейфовать от исходных биопсии пациента. Уровень успеха для создания мышей PDX модель также низка, что затрудняет широкое внедрение в клинической практике. Для пациентов, перевозящих быстро прогрессирует рака, как рак поджелудочной железы, они не могут быть в состоянии получить ценную информацию из PDX экспериментов во времени.
В последние несколько лет, зебрафиш, как сообщается, потенциальные хозяева не только CDX (клеточная опухоль xenograft) модели, но и МОДЕЛИ PDX5,6,7,8,9, 10. Как позвоночных модели животных, зебра гавани достаточно общего с млекопитающими в генетике и физиологии, с двумя значительными преимуществами: прозрачность и небольшой размер11. Зебрафиш также очень плодовитость, и сотни инбредных личинок могут быть получены в течение нескольких дней из одной пары взрослых12. Несколько исследований использовали зебры для создания трансгенных и ксенотрансплантата модели онкологических заболеваний13,14. По сравнению с мышами ксенотрансплантатов, зебрафиш ксенотрансплантатов позволяют отслеживать в одном разрешении клеток. Определенное количество человеческих тканей способен генерировать сотни моделей зебры PDX (zPDXs), в то время как может быть достаточно только для создания нескольких мышей PDX модели15,16. Кроме того, личинки зебры при 2-5 dpf уже развивают сядочечные системы кровообращения и метаболические органы, такие как печень и почки, но не иммунная система17, в то время как оставшийся желтковый мешок является естественной 3D-средой, идеально подходит для скрининга наркотиков, наркотиков тесты на устойчивостьи наблюдения миграции опухоли 6,18,19,20,21.
С конечной попыткой использовать zPDX в качестве скрининга / тестирования платформы для клинического использования, здесь, мы описываем оптимизированное предложение для zPDX модель рака поджелудочной железы, которая позволяет in vivo кандидат оценки наркотиков в течение короткого времени, используя меньше клеток при меньших затратах. По сравнению с предыдущими ссылками о zPDX6,9,10, мы ввели несколько оптимизаций, чтобы сделать систему более осуществимой и надежной для клинической персонализированной диагностики: 1) предварительной сортировки различных клеток группы в первичных опухолевых тканях и стабилизация первичных клеток в течение одной недели до дальнейших экспериментов; 2) маркировка клеток человека и повышение жизнеспособности клеток в ксенотрансплантате с помощью лентивирусной генетической модификации; 3) оптимизация состояния культуры зебры как в пищевых добавках (глюкоза и глутамин) и температуре; 4) количественная оценка лекарственных реакций различных типов клеток в сравнительной манере. Мы также внесли изменения в инъекционное решение, добавив несколько дополнительных материалов. В целом, эти улучшения дают возможность быстро генерировать более терпеливый ксенотрансвант в хостах зебры, которые могут быть использованы в качестве надежного инструмента для оценки реакции кандидатов наркотиков.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все процедуры животных были одобрены и следовали руководящим принципам Комитета по этике животных в Университете Фудан, и все образцы рака поджелудочной железы были получены из Фуданского университета Шанхайского онкологического центра. Этические утверждения были получены от комитета по этике FUSCC, и письменное информированное согласие было получено от каждого пациента.
1. Подготовка оборудования для микроинъекции
-
Подготовка пластины для инъекций.
- Приготовьте раствор 50 мл 1% агарозы, растворенного в растворе E3 (0,6 г/л аквариумной соли в двойной дистиллированной воде, 0,01 мг/л метилена синего). Отварить раствор до тех пор, пока агароза не растворится.
- Налейте 50 мл раствора агарозы в 10 см чашку Петри, а затем поместите форму фиксации эмбриона зебры на поверхности. Удалите плесень, когда раствор агарозы затвердевает.
- Добавьте 20 мл раствора E3 в пластину для впрыска и поддерживайте ее при 4 градусах По Цельсию для длительного хранения.
-
Подготовка инъекционных игл.
- Потяните 10 см стеклянный капилляр с внутренним размером 0,9 мм в две иглы на иглы шкива.
- Используйте щипкания, чтобы сократить конец иглы, чтобы создать отверстие под микроскопом.
2. Подготовка эмбрионов к трансплантации
- Поместите от 1 до 2 пар взрослых зебры в брачный бак в 7-9 вечера и собирать оплодотворенные яйца около 8 утра следующего утра.
- Перенесите оплодотворенные яйца из брачного резервуара в чашку Петри, содержащую 40 мл свежего раствора E3, и инкубировать при 28,5 градусах Цельсия.
- После 8 ч инкубации в растворе Е3 добавьте 0,03% 1-фенил-2-тиуры (ПТУ) в раствор E3, препятствующие пигментации. Инкубировать эмбрионы в растворе E3 с 0,03% PTU при 28,5 градусах Цельсия до 48 л.с. Этот шаг может быть опущен при использовании воспитанных каспермутов зебры.
3. Изоляция и культура первичных клеток человека из свежих хирургических рака поджелудочной железы Specimen или замороженные ткани
- Получить образцы ткани рака поджелудочной железы человека размером около 1 см3 во время операции на брюшной полости, и немедленно передать ткани в среду роста (DMEM с 10% плода крупного рогатого скота сыворотки (FBS), 10 мкм Y-27632, 100 мкг /мЛ примокина, 10 мкг /мЛ putrescine дигидрохлорид, 10 мМ никотинамид и 1% пенициллин стрептомицин).
- Перенесите образец рака поджелудочной железы в чашку Петри и удалите окружающую некротические ткани, жировую ткань и соединительную ткань.
- Промыть раковую ткань в 5-6 раз с фосфатным буфером (PBS) и разрезать ткань на 1 мм3 штук с помощью скальпелей.
- Перенесите измельченные ткани в 5 мл HBSS в трубку 50 мл и добавьте коллагеназы IV типа, гиалуронидаза и DNase I при конечной концентрации 200 единиц/мл, 100 мг/л и 20 мг/л соответственно. Pipette смесь вверх и вниз, чтобы хорошо перемешать.
- Инкубировать смесь при 37 градусах Цельсия в 5% инкубатора углекислого газа в течение 15-20 мин. Pipette смесь вверх и вниз несколько раз каждые 5 мин.
- Добавьте 7 мл DMEM в трубку и центрифугу при 110 х г в течение 5 мин при 4 градусах По Цельсию, когда пищеварение будет завершено.
- Декант супернатант и повторно приостановить опухолевой смеси в DMEM.
- Плита смесь в 6 см Петри блюдо в 3 мл полного роста средств массовой информации (DMEM с 10% FBS, 20 мкг/мл инсулина, 100 нг/мл bFGF, 10 нг/мл EGF, 10 мкм Y-27632, 100 мкг/мЛ примоцин, 10 мкг/мЛ putrescine дигидрохлорид, 10 мМ никотинамид , 1% пенициллин стрептомицин). Разделите ячейки на две группы.
- В группе I, добавить 100x ингибитор фибробластов рака поджелудочной железы в среду после 48 ч, чтобы удалить заросшие фибробласты, оставляя раковые клетки в качестве основных типов клеток;. В группе II фибробласты перерастут раковые клетки в течение недели.
- Культура обеих групп клеток в течение 1-2 недель в зависимости от плотности клетки / чистоты и изменить средства массовой информации каждые три дня. Ожидаемые типы клеток в обеих группах I и II могут занимать более 98% в пропорции в типическом успешном эксперименте.
4. Маркировка клеток с лентивирусом, выражающим антиапоптоз Гена BCL2L1 (BCL-XL) и различных флуоресцентных белков отдельно
-
Производство лентивирусов
- Плита 3 х 106 HEK 293T клетки с полным DMEM среды (DMEM поставляется с 10% FBS) в 10 см блюд и культуры на ночь при 37 градусов по Цельсию в 5% инкубатора двуокиси углерода. Замените носитель 6 мл безсыворотки до трансфекции.
- Подготовить решение A: 8 мкг BCL2L1-содержащихлентивирных векторов (pCDH-EF1-mKate2-E2A-BCL2L1-WPRE или pCDH-EF1'-eGFP-E2A-BCL2L1-WPRE), 2,4 мкг pVSVG, 4 мкг pMDL (Gag/Pol), 1,6 мкг PREV и безсыворотки DMEM в общем объеме 500 л. Мягко пипетка смесь несколько раз, и поместите его при комнатной температуре в течение 5 минут.
- Подготовьте раствор B: 40 л ПЭИ (полиэтиленеимин) в 460 мл сыворотки без DMEM. Поместите его при комнатной температуре в течение 5 мин.
- Медленно добавьте раствор B в раствор А и оставьте трубку при комнатной температуре в течение 30 мин.
- Добавьте окончательную смесь в блюдо heK 293T клеточной культуры, приготовленное в шаге 4.1.1 и инкубируйте при 37 градусах Цельсия в 5% инкубаторе углекислого газа. После 12 ч добавьте еще 5 мл полной среды DMEM. После 48 ч собираем среду, содержащую лентивирус.
- Фильтр супернатанта с помощью стерильного фильтра 0,45 мкм, добавить супернатант в столбец концентрации, центрифугу при 6000 х г в течение 25-30 мин при 4 градусах По Цельсию. Аликоты лентивирусного аликота по 100 л на трубку производятся и хранятся при -80 градусов по Цельсию.
-
Инфекция первичных клеток
- Семя клетки (группа I и II), чтобы быть инфицированы в 12-хорошо пластины с плотностью 30-40% и культуры клеток на ночь при 37 градусов по Цельсию в 5% инкубатора двуокиси углерода.
- Замените среду 500 л среды, свободной от сыворотки, содержащей 8 мкг/мл полибрена на 4 ч. Затем добавьте еще 100 qL лентивирусв в среду (eGFP-E2A-BCL2L1 для группы I или mKate2-E2A-BCL2L1 для группы II). После 12 ч замените среду на 1 мл полной среды.
- Проверьте флуоресценции маркеров после 48 ч.
- Урожай инфицированных клеток и смешать их в соотношении 1:1 с окончательной концентрацией 106/мл.
- Центрифуги клетки на 110 х г в течение 5 мин и повторно приостановить клеточной смеси в 50 зл инъекционного раствора (1640 средних с 10% FBS, 0,05% гиалуроновой кислоты соли натрия, 0,05% метилцеллюлозы).
5. Инъекционные Смешанная подвеска клеток в зебрафиш
- Добавьте 10-кратный раствор трикаина в воду E3, чтобы обезопасить личинки зебры и перенести личинки (от шага 2.3) в пластину для инъекций, заполненную модифицированной E3 (E3 с глюкозой 1 г/л и 5 ммоль/L-глутамамином).
- Заполните 25 зл смешанной клеточной суспензии в микро капилляры иглы и вставьте иглу в микро-инъекции манипулятора.
- Установите давление инъекций и время. Впрысните 50-80 клеток (8 нл) в желтковый мешок 48 л.с. зебры.
6. Культура ксенопригированных зебрафиш (модель zPDX)
- Перенесите послексенопритированные личинки зебры в 40 мл раствора смеси (раствор E3 с глюкозой 1 г/л и 5 ммоль/л L-глютамина) при 32 градусах Цельсия.
7. Управление по лекарственным препаратам на ксенопригированных зебрафиш и оценка опухолевых клеток / Фибробласты Viabilities
-
Определение оптимальной концентрации гемцитабина/навитоклакса.
- Поместите 10 эмбрионов зебры дикого типа на 48 л.с. в каждый колодец из 12-колодецпластинной пластины.
- Добавьте различные концентрации гемцитабина или навитоклакса в каждую скважину и инкубировать при 32 градусах Цельсия в течение двух дней.
- После 2 дней, рассчитать максимальную дозу толерантности (МТД) гемцитабина и навитоклакса, при котором личинки зебры не показывают значительные пороки развития и ненормальное поведение, и рабочие концентрации устанавливаются ниже МТД.
-
Лечение моделей zPDX с гемцитабином/навитоклаксом.
- Поместите 10 ксеноприжированных личинок в каждый колодец 12 хорошо пластины.
- Разделите личинки на четыре группы, обработайте контрольную группу в E3, содержащую 0,1% DMSO, и обработайте другие группы гемцитабином 5 мкг/мл и/или 50 мкм навитоклакса, и инкубируйте при 32 градусах По Цельсию в течение двух дней.
-
Оценка клеточной виспособности и клеточного состава в моделях zPDX.
- Анестезируйте ксеноприжированные личинки после лечения и поместите их в 3% метилцеллюлозы.
- Изображение личинок с бокового зрения с помощью флуоресцентного микроскопа или конфокального микроскопа.
- Количественная оценка интенсивности красных и зеленых сигналов флуоресценции с помощью программного обеспечения ImageJ и GraphPad.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Схематизированный контур процедуры представлен на рисунке 1. Короче говоря, первичные клетки раковой ткани были посеяны в полной среде после пищеварения с или без добавления ингибиторов фибробластов рака поджелудочной железы. Раковые клетки и фибробласты обогащались как две различные популяции, которые фибробласты доминировали без ингибиторов, и рост раковых клеток преобладал после добавления ингибиторов(рисунок 2). Были построены два векторных lentiviral упаковки, которые выражали зеленые или красные флуоресцентные белки и BCL2L1, как показано на рисунке 3. Вирусная флуоресцентная маркировка также представляла состояние выживания клеток. Смешанные раковые клетки и фибробласты были введены в желток зебрафиш акс на 48 л.с. и лечились гемцитабином и/или навитоклаками в течение двух дней. Клеточная виспособность в разных популяциях и клеточный состав ксенотрансплантата были изменены в ответ на медикаментозное лечение(рисунок 4).
Рисунок 1: Схематическая диаграмма поколения и оценка препарата модели ксенотранспланта зебры, полученной от рака поджелудочной железы. Хирургически удаленные ткани у пациентов с раком поджелудочной железы свиты и перевариваются, а затем культура в двух различных условиях, один из которых добавляется ингибитором фибробластов, а другая группа не является. После 1-2 недель, первичные клетки были генетически модифицированы, чтобы выразить анти-апоптотический белок BCL2L1 и различные флуоресцентные белки. После этого, две популяции были смешаны и совместно введены в 48 л.с. личинки зебры для оценки воздействия химиотерапевтических препаратов. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 2: Культура и обогащение раковых клеток поджелудочной железы и фибробластов. Изображения раковых клеток и фибробластов, обогащенных от трех различных больных раком поджелудочной железы после 10-дневной культуры. Шкала бар, 100 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 3: Структура лецивирусного вектора, выражающего BCL2L1 и различные флуоресцентные белки. Схематическая диаграмма двух лентивирных векторов, постоянно выражающих mKate2-E2A-BCL2L1 или eGFP-E2A-BCL2L1, соответственно. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 4: Влияние на ксенотрансплантат гемцитабином. (A) Боковой вид ксенотрансплантата в желток мешке личинки зебры на 3 ч после трансплантации (hpt). (B) Репрезентат изображения ксенотрансвантов в личинки зебры на 60 hpt, обработанные DMSO или гемцитабин. (C) Представитель 3D рендеринга ксенотрансвтатов на 60 hpt. (D) Статистика интенсивности флуоресценции ксенотрансплантата до и после гемцитабина и/или лечения ингибитором BCL2L1. N - 10 евро на группу для каждого асссе. Шкала бар 100 мкм; NS, не значительные; -П Злт; 0,05; П Злт; 0.0001; означает SD, со статистическими различиями, определяемыми односторонней ANOVA. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Оба модели PDX и CDX являются жизненно важными платформами в области биологии опухоли22, и критический шаг успешной межвидовой трансплантации является улучшение выживания ксенотрансплантата. Недавно некоторые исследования показали, что переходное выражение BCL2L1 (BCL-XL) или BCL2 может значительно улучшить жизнеспособность эмбриональных стволовых клеток человека у мышей, не влияя на клеточные идентичности и судьбы23 , 24 , 25. В нашей рукописи мы помечали клетки лентивирусом, постоянно выражающим антиапоптозген BCL2L1 (BCL-XL),а также флуоресцентные белки. Введение BCL2L1 значительно увеличило время выживания клеток человека в зебрафиш, чтобы продлить окно наблюдения для исследований, в то время как флуоресцентные сигналы не только этикетки клеток, но и сообщить о жизненном состоянии клетки, как мы обнаружили, что флуоресценция быстро исчезает с клеточной смерти. Между тем, мы в настоящее время изменения зебры в качестве лучшего хозяина для человека xenografts. С одной стороны, rag2 и prkdc выбиваются с помощью технологии CRISPR/Cas9 для подготовки комбинированной иммунной зебры, которая была похожа на комбинированных иммунодефицитных мышей, чтобы сделать старые личинки зебры также совместимы с человеческими клетками и тканями26. С другой стороны, зебрафиш была также модифицирована для выражения человеческих белков, таких как IGF1 и INS, чтобы лучше поддерживать выживание и пролиферацию имплантированных человеческих клеток с помощью трансгенной технологии Tol2, опосредованной трансгенной. Кроме того, zPDX также не имеет человека, как функциональная иммунная система, и взаимодействия между человеческими стромальными клетками и иммунной системой, и в будущем, мы можем попытаться совместно инъекционных иммунных клеток человека, чтобы восстановить краткосрочные гуманизированной иммунной среды у зебры.
В моделях мышей PDX условия ксенотрансплантата традиционно отслеживались путем прямого наблюдения за узлами видимого размера, для разработки которых требуется длительное время. В прозрачных моделях zPDX для сравнения, ксенотрансвтат может быть исследован под микроскопом в режиме реального времени. Тем не менее, было трудно оценить изменение числа клеток в одноцветной популяции без надлежащего контроля, и идея ввести две популяции клеток различной флуоресценции значительно улучшает количественную оценку жизнеспособности клеток. Смешивая и вводя различные клетки при фиксированных соотношениях, мы не только имитируем микроокружение опухоли, но и можем точно количественно оценивать реакцию препарата, сравнивая две группы клеток. Хотя первоначальное соотношение раковых клеток к фибробластам в первичных тканях сильно отличается, здесь мы начали с соотношения 1:1, и влияние медикаментозного лечения на тот же клеточный состав другого соотношения будет исследовано в будущем. Кроме того, влияние 32 градусов по Цельсию вместо инкубаций 37 градусов по Цельсию на поведение клеток человека также требует детальных сравнительных исследований. Наконец, стратегия пациента полученных неоднородных ксенотрансплантата модели рака поджелудочной железы для сравнительной оценки наркотиков также могут быть применены к другим видам твердых раковых заболеваний. Этот подход особенно полезен для PDX с использованием личинок зебры в качестве хозяев, которые кристально чисты и осуществимы для анализа в одноклеточном разрешении.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Потенциальных конфликтов интересов не разглашать.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая 81402582, Фондом естественных наук Шанхая 12D-2295100, 14YF1400600 и 18'1404500
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | GIBCO | C11995500BT | |
| FBS | Hyclone | sv30087.03 | |
| Y-27632 | Cliniscience | Y0503 | Rho kinase inhibitor |
| Primocin | invivogen | ant-pm-1 | an antibiotic for primary cell cultures |
| Putrescine dihydrochloride | Sigma | P5780 | |
| Nicotinamide | Sigma | N3376 | |
| Penicillin streptomycin | GIBCO | 15140122.00 | |
| Phosphate buffer (PBS) | GIBCO | C10010500CP | |
| HBSS | GIBCO | 14170112.00 | |
| Collagenase type IV | GIBCO | 17104019.00 | |
| Hyaluronidase | Sigma | H3884 | |
| Dnase I | Sigma | D5025 | |
| Insulin | Sigma | I9278 | |
| b-FGF | GIBCO | PHG0264 | |
| EGF | GIBCO | PHG0314 | |
| Pancreatic cancer fibroblasts inhibitor | CHI Scientific | FibrOUT | |
| 0.45 μm sterile filter | Millipore | SLHV033RB | |
| Concentration column | Millipore | Millipore UFC910008 | Concentrate the virus |
| Polybrene | Sigma | H9268 | |
| Hyaluronic Acid Sodium Salt | Sigma | H7630 | |
| L-glutamine | GIBCO | 21051024.00 | |
| Gemcitabine | Gemzan | ||
| Methylcellulose | Sigma | M0262 | |
| Navitoclax(ABT-263) | Selleck | S1001 | Bcl-xL inhibitor |
| Equipment | |||
| Microinjector | NARISHIGE | ||
| Stereomicroscope | OLYMPUS | MVX10 | |
| Confocal Microscope | LEICA | SP8 | 0.00 |
References
- Collins, D. C., Sundar, R., Lim, J. S. J., Yap, T. A. Towards Precision Medicine in the Clinic: From Biomarker Discovery to Novel Therapeutics. Trends in Pharmacological Sciences. 38 (1), 25-40 (2017).
- Huang, L., et al. Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell- and patient-derived tumor organoids. Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).
- Pauli, C., et al. Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine. Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).
- Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).
- Jung, J., Seol, H. S., Chang, S. The Generation and Application of Patient-Derived Xenograft Model for Cancer Research. Cancer Research and Treatment. 50 (1), 1-10 (2018).
- Fior, R., et al. Single-cell functional and chemosensitive profiling of combinatorial colorectal therapy in zebrafish xenografts. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (39), E8234-E8243 (2017).
- Chen, L., et al. A zebrafish xenograft model for studying human cancer stem cells in distant metastasis and therapy response. Methods in Cell Biology. 138, 471-496 (2017).
- Gaudenzi, G., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in neuroendocrine tumors. Endocrine. 57 (2), 214-219 (2017).
- Lee, J. Y., Mazumder, A., Diederich, M. Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts. Journal of Visualized Experiment. (136), (2018).
- Zhang, M., et al. Adipocyte-Derived Lipids Mediate Melanoma Progression via FATP Proteins. Cancer Discovery. 8 (8), 1006-1025 (2018).
- Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
- Lieschke, G. J., Currie, P. D. Animal models of human disease: zebrafish swim into view. Nature Reviews: Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).
- Guo, M., et al. U0126 inhibits pancreatic cancer progression via the KRAS signaling pathway in a zebrafish xenotransplantation model. Oncology Reports. 34 (2), 699-706 (2015).
- Yao, Y., et al. Canonical Wnt Signaling Remodels Lipid Metabolism in Zebrafish Hepatocytes following Ras Oncogenic Insult. Cancer Research. 78 (19), 5548-5560 (2018).
- Veinotte, C. J., Dellaire, G., Berman, J. N. Hooking the big one: the potential of zebrafish xenotransplantation to reform cancer drug screening in the genomic era. Disease Models & Mechanisms. 7 (7), 745-754 (2014).
- Zon, L. I., Peterson, R. The new age of chemical screening in zebrafish. Zebrafish. 7 (1), 1 (2010).
- Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study. Developmental & Comparative Immunology. 28 (1), 9-28 (2004).
- Mercatali, L., et al. Development of a Patient-Derived Xenograft (PDX) of Breast Cancer Bone Metastasis in a Zebrafish Model. International Journal of Molecular Sciences. 17 (8), (2016).
- Wu, J. Q., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in gastric cancer. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 36 (1), 160 (2017).
- Tulotta, C., et al. Imaging Cancer Angiogenesis and Metastasis in a Zebrafish Embryo Model. Advances in Experimental Medicine and Biology. 916, 239-263 (2016).
- Yao, Y., et al. Screening in larval zebrafish reveals tissue-specific distributions of fifteen fluorescent compounds. Disease Model& Mechanisms. , 028811 (2017).
- Tentler, J. J., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews: Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).
- Charo, J., et al. Bcl-2 overexpression enhances tumor-specific T-cell survival. Cancer Research. 65 (5), 2001-2008 (2005).
- Wang, X., et al. Human embryonic stem cells contribute to embryonic and extraembryonic lineages in mouse embryos upon inhibition of apoptosis. Cell Research. 28 (1), 126-129 (2018).
- Boise, L. H., et al. bcl-x, a bcl-2-related gene that functions as a dominant regulator of apoptotic cell death. Cell. 74 (4), 597-608 (1993).
- Moore, J. C., et al. Single-cell imaging of normal and malignant cell engraftment into optically clear prkdc-null SCID zebrafish. Journal of Experimental Medicine. 213 (12), 2575-2589 (2016).
