Murine modell av metastatisk leverskader svulster i innstillingen av iskemi reperfusion skade

Summary

Vi beskriver i detalj en klinisk relevant tykktarmskreft leveren metastaser (CRLM) tumor modell og påvirkning av leveren ischemia reperfusion (I/R) i tumor vekst og metastasering. Denne modellen kan bidra til å bedre forstå mekanismene underliggende kirurgi-indusert fremme av leveren metastatisk vekst.

Abstract

Liver iskemi og reperfusion (I/R) skade, en felles klinisk utfordring, er fortsatt en uunngåelig patofysiologiske prosess som har vist å indusere flere vev og organskade. Til tross for nylige fremskritt og terapeutiske tilnærminger, har den generelle sykelighet forble utilfredsstillende, spesielt hos pasienter med underliggende parenkymatøs unormalt. I sammenheng med aggressiv kreft vekst og metastasering, kirurgisk I/R mistenkes for å være arrangøren regulere tumor tilbakefall. Denne artikkelen tar sikte på å beskrive en klinisk relevant murine modell av leveren I/R og tykk tarms leveren metastasering. Ved å gjøre det, har vi som mål å hjelpe andre etterforskere i å etablere og perfeksjonere denne modellen for deres rutine forskning praksis for å bedre forstå effekten av leveren i/R på å fremme leveren metastaser.

Introduction

Leveren er en av de vanligste stedene for utvikling av metastatisk sykdom¹. Dødelighet er nesten alltid skyldes komplikasjoner forbundet med tumor vekst i leveren. Hos pasienter med metastatisk solide svulster i leveren, er kirurgi fortsatt en avgjørende intervensjon for sykdomskontroll og en mulig helbredende tilnærming. Men det store flertallet av pasientene til slutt til stede med tilbakevendende sykdom, hovedsakelig i leveren^2,3. Under hepatic kirurgi, intraoperativ blødning er vanlig, ofte nødvendiggjør blodoverføring og ulike tekniske tilnærminger for kontroll av blødning, inkludert vaskulær spenn metoder. Men slike tiltak forårsaker hepatic iskemi/reperfusion (I/R) til leveren vev. De negative virkningene av i/R på leverfunksjonen har blitt godt dokumentert. Leveren I/R fornærmelse tenner inflammatorisk kaskader under restaurering av blodstrøm via inflammatoriske trasé⁴. Ikke bare lever I/R skade bidra til leversvikt, men dagens bevis viser også at jeg/R skade stimulerer tumor celle vedheft, og fremmer forekomsten av metastaser dannelse og vekst av eksisterende micrometastatic sykdom⁵. Vi har tidligere rapportert at kirurgisk stress induserer aktivering av immunceller som ikke bare bidrar i veksten av den primære svulsten, men også Letter metastaser ved å fange kreftceller i sirkulasjon⁶.

Her beskriver vi i detalj en teknikk for å etablere en lever metastasering mus tumor modell. I denne modellen presenterer vi også en metode for å indusere hepatic iskemi reperfusion skade som fungerer som et surrogat til kirurgisk stress stede klinisk under hepatectomies. Den kombinerte metoder for kreft injeksjon og hepatic i/R kan med hell tolke utviklingen av CRLM hos pasienter som har gjennomgått primære tumor reseksjon.

Protocol

Alle dyr protokoller er godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komiteen og levd opp til National Institutes of Health (NIH) retningslinjer. Instrumenter som brukes til alle kirurgiske inngrep ble grundig sterilisert. 1. innledende forberedelse Før injisere kreftceller i musen milt, autoklav og sterilisere alle instrumenter som skal brukes under inngrepet. Sterilisere og/eller autoklav en oppvarming pad, kirurgiske hansker, gasbind, par av saks, små klemmer, fart?…

Representative Results

Alle wildtype (C57BL6) mus (n = 20) ble utsatt for leveren metastaser modellen ved hjelp av protokollen beskrevet ovenfor. Alle injisert mus med eller uten iskemi reperfusion skade overlevde før datoen for offer. Det skjematisk diagram figur 1a av en kreft-injisert leveren illustrerer klemme av portalen triaden (hepatic arterien, Portal vene, og galle duct) som induserer en delvis leveren iskemiske (70%) fornærmelse mot medianen og venstre lateral fliker. En økning i antall leveren metast…

Discussion

Dyre modellen som er beskrevet i dette manuskriptet er basert på to store tilnærminger. Den første er å anerkjenne evnen til kreftceller å lokalisere og sprer i leveren fliker. Den andre er å studere effekten av hepatic iskemi reperfusion skade påvirke tumor vekst og metastaser. Denne modellen tillater relevant studie av leveren metastaser i fravær av sekundære metastaser i en immunkompetente mus. Modellen er nyttig for å håndtere spørsmålene om metastatisk effektivitet, for eksempel celle overlevelse extrav…

Materials

Dulbecco's Modified Eagle Medium	Lonza	12-614F
Fetal Bovine Serum	Lonza	900-108
L-Glutamin	Gibco	25030-081
Penicilin	Fisher scientific	15-140-122
Stretomysin	Fisher scientific	15-140-122
HEPES	Fisher Scientific	SH3023701
Trypsin	Hyclone	sh30042.02
Cell culture Flask 75cm	5 Cells Star	658170
15ml PP Conical Tubes	BioExcell	41021037
Trypan Blue Stain	Giibco	15250-061
Gauze	Fisherbrand	1376152
Cautry	Bovie	AA01
Microvascular clamp	Finescience tools	18055-03
Micro-Serrefine clamp applicator with lock	Fine science toosl	FST-18056-14
Spring scissor	Fine science toosl	FST-15021-15
Vessel Dilator	Fine science toosl	FST-00276-13
Magnetic fixator Retraction system	Fine science toosl	FST-18200020
Micro-Adson Forceps	Fine science toosl	FST-11019-12
Micro-Adson Forceps	Fine science toosl	FST-11018-12
4-0 polypropylene suture	Ethicon	K881H
Needle holder	Harvard Apparatus	72-8826
Heating Pad	Fisher scientific	1443915
Clipper	Oster	559A
Povidone-Iodine solution	Medline	MDS093945
Syringe 1ml 25G	BD safety Glide	305903
Insulin syringe 0.5 ml	BD insulin Syringes	32946
Cotton -Tipped Applicator	Fisher Scientific	23-400-101
Surgical Microscope	Leica	LR92240
Mycoplasma Elisa Kit	Roche	11663925910
Ketamine	Putney	#056344
Xylazine	NADA	#139-236
ALT strip	Heska	15809554
AST strip	Heska	15809542
LDH strip	Heska	15809607