Summary
Il protocollo presentato descrive una facile rimozione chirurgica dell'appendice (patch caecale) in un topo seguita dall'induzione del cancro colorettale associato alla malattia intestinale infiammatoria. Questo modello di appendicosa murina consente lo studio del ruolo biologico dell'appendice nella patogenesi della malattia gastrointestinale umana.
Abstract
L'appendice umana è stata recentemente implicata per svolgere importanti ruoli biologici nella patogenesi di varie malattie complesse, come il cancro del colon-retto, la malattia infiammatoria intestinale e il morbo di Parkinson. Per studiare la funzione dell'appendice, è stato stabilito un modello di appendicia murina associata alla malattia intestinale e il suo protocollo passo-passo è descritto qui. Questa relazione introduce un protocollo facile per la rimozione dei cerotti ceecali nei topi seguito dall'induzione chimica del cancro colorettale associato alla colite cronica utilizzando una combinazione di sodio solfato di dextran (DSS) e azoxymetatano (AOM). Cellule specifiche IgA e concentrazione di IgA sono state significativamente ridotte al momento della rimozione del cerotto caecale nei topi C57BL/6 maschi rispetto a quelli del gruppo sham. Somministrazione simultanea 2% DSS e AOM ha provocato quasi 80% mouse sopravvivenza in entrambi i gruppi di farsa e appendicia senza significativa perdita di peso corporeo. I risultati istologici hanno confermato l'infiammazione colonica e diversi gradi di adenocarcinoma. Questo modello può essere utilizzato per lo studio del ruolo funzionale dell'appendice nel mantenimento dell'omeostasi del microbiota intestinale e della patogenesi della colite intestinale e delle neoplasie, nonché per lo sviluppo potenziale di terapie di targeting per farmaci.
Introduction
L'appendicosa clinica è una procedura chirurgica standard che comporta la rimozione dell'appendice principalmente a causa di infiammazione (ad esempio, appendicite)1,2,3. Tuttavia, la funzione biologica dell'appendice umana vermiforme rimane controversa4 ,5,6. L'appendice è stata considerata come un residuo vestigiale che si proietta dal cecum nell'intestino crasso. Fino a poco tempo fa, studi evolutivi, immunologici, morfologici e microbiologici hanno suggerito che l'appendice può possedere funzioni distinte. Questi ruoli includono la produzione di immunoglobini (ad esempio, IgA e IgG), una varietà di cellule B e cellule T critiche per le risposte immunitarie adattive all'interno dei tessuti linfoidi associati all'intestino (GALT), e il rifornimento dell'intestino grande con microbiota commensale 6 È possibile: , 7 (in questo stato , 8 (IN vio , 9 (in vie , 10 del sistema , 11 Del sistema di , 12.
Studi epidemiologici clinici su pazienti con appendicitomia precedente o appendicite acuta hanno anche rivelato i suoi potenziali ruoli nella patogenesi delle malattie umane, come la malattia infiammatoria intestinale (IBD), il cancro colorettale e (ad esempio, il morbo di Parkinson e la malattia cardiovascolare)13,14,15,16,17,18. Ad esempio, un grande studio di coorte di popolazione asiatica con 75.979 pazienti con appendicosa ha recentemente mostrato una significativa associazione tra l'appendicia e il successivo sviluppo del cancro colorettale, una delle neoplasie più comuni con un'alta incidenza e mortalità14,19. Di conseguenza, stabilire un modello adatto di appendicia animale che assomiglia a un essere umano sarà utile per studiare le funzioni biologiche e i meccanismi molecolari dell'appendice nella patogenesi della malattia.
Molti mammiferi possiedono un'appendice o un organo simile ad un'appendice, tra cui primati, lagomorfi (ad esempio, conigli), alcuni roditori e marsupiali20. Per gli animali da laboratorio piccoli e comunemente utilizzati, il coniglio possiede l'appendice vermiforme morfologicamente simile all'uomo21,22, ma il GALT nel coniglio è estremamente grande rispetto a quello degli esseri umani, poiché la maggior parte dei Tessuti linfoidi si trovano anche nelle macchie di Peyer situati sia nell'intestino piccolo che in quello grande21. Inoltre, il coniglio mostra una diversa struttura follicolare linfoide, distribuzione delle cellule T e densità di immunoglobulina dall'uomo, il che rende lo studio delle loro appendici inappropriato21.
I topi sono il modello animale più comunemente usato per studiare la fisiopatologia umana e testare i vari e nuovi terapuetici esistenti e nuovi23,24,25. Il singolo ammasso bianco grande linfoide all'apice del caecum nei topi, noto come la patch ceecale, è pensato per eseguire funzioni simili all'appendice umana26,27,28. Eppure, è praticamente difficile separare la patch ceecale dal caecum nei topi. Finora, le procedure chirurgiche comuni per indurre l'appendicite in un modello murino comportano un'incisione relativamente grande (ad esempio, 1–2 cm) attraverso la parete addominale per ottenere l'accesso all'intero caecum (tabellasupplementare )29, 30,31,32,33,34,35,36.
Qui, per generare un modello di appendicia associato alla malattia gastrointestinale, questo rapporto presenta un facile protocollo chirurgico per la rimozione della patch caecale nei topi. Questo è seguito dalla somministrazione combinata dell'agente genotossico AOM e agente pro-infiammatorio DSS per l'induzione del cancro colorettale associato alla colite simile a quello osservato negli esseri umani. IBD ha dimostrato di essere un fattore di rischio di cancro intestinale37,38. La combinazione di cancro colorettale cronico indotto da AOM/DSS è stata consolidata e i lettori possono fare riferimento a Neufert et al., e Thaker et al. per procedure dettagliate39,40. Questo modello di appendicia murinamia riproducibile e rapida può essere utilizzato per studiare l'infiammazione intestinale modulata dall'appendice e il microbiota del colon, in particolare nello sviluppo e nella progressione dell'IBD e del cancro colorettale.
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Protocol
Tutte le procedure sugli animali sono state approvate dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Università dello Jiaotong di Xi'an (n. XJTULAC2019-1023).
1. Appendicosa ai topi
- Casa 8-10-settimana-vecchio C57BL/ 6 topi maschi in un ambiente certificato specifico-agente patogeno libero (SPF) per 1 settimana prima dell'intervento chirurgico.
- Preparare i seguenti strumenti chirurgici sterili: una coppia di microforbici, una coppia di micro-pinze, due dimensioni (4-0 e 8-0) di suture sterilizzate non assorbibili, una penna di coagulazione elettrica con portaa ad ago, 75% alcol medico, scrub a base di iodio ( entoiodina), e un pacchetto di tamponi di cotone sterile.
- Riempire una siringa da 10 mL con una salina fisiologica preriscaldata dello 0,9% per il colore addominale e l'idratazione durante l'intervento chirurgico.
- Anestesizzare un topo non digiunato per via intraperitamente (i.p.) con 1% pentobarbital di sodio ad una dose di 100 mg/kg. Controllare la profondità dell'anestesia per la mancanza di risposta ai riflessi del pedale.
NOTA: Viene somministrata una singola dose anestetica per garantire un effetto sedativo completo nel mouse. In circostanza di procedure brevi, 50 mg/kg di pentobarbital di sodio i.p. possono essere sufficienti. - Rade delicatamente i capelli addominali con un rasoio elettrico.
- Posare il mouse sul pad di riscaldamento per prevenire l'ipotermia.
- Fissare il mouse su una piattaforma in posizione supina posizionando quattro strisce di nastro adesivo medico attraverso gli arti per prevenire il movimento posturale durante l'intervento chirurgico.
- Toccare delicatamente l'intero addome per trovare la sensazione di un urto.
NOTA: Nella maggior parte dei casi, la sensazione di un urto indica sempre la posizione esatta del caecum. Per evitare possibili danni al resto dell'intestino, questa pre-localizzazione del caecum prima dell'incisione addominale è importante. - Coprire con un drappo sterile e disinfettare l'area rasata dell'addome applicando scrub chirurgici alternati di soluzione a base di iodio e 75% alcol. Ripetere il processo 2x.
- Fare un'incisione longitudinale che va da 0,5 a 1,0 cm nella linea mediana dell'addome.
- In base alla posizione predeterminata del caecum, raggiungere il caecum ed esternalizzare delicatamente (1 cm) per identificare la patch caecale. Utilizzare una soluzione salina sterile e preriscaldata di pH fisiologico per idratare l'intestino.
NOTA: La macchia ceecale di un topo fa parte del caecum e caratterizzata dalla presenza di follicoli ovoidi bianchi sulla superficie. - Per prevenire potenziali complicazioni del sanguinamento e dell'infezione post-operatoria, legiare i vasi sanguigni mestenei del caecum utilizzando il sutura. Idratare il caecum con salina sterile.
- Contrassegnare la regione di resezione utilizzando la sutura 4-0 con un anello aperto vicino all'apice del caecum al colon prossimale.
NOTA: Contrassegnare il caecum con un anello aperto impedisce anche la fuoriuscita di contenuto ceecale dal taglio. - Tagliare il cerotto sotto la resezione marcata utilizzando microforbici e spazzare via il contenuto di caecal residuo con tamponi di cotone medicale. Quindi, disinfettare il ceppo di caecum con scrub a base di iodio.
- Chiudere il ceppo con la sutura di corsa utilizzando il sutura.
- Rimuovere con attenzione il loop di filo 4-0 precedentemente utilizzato per contrassegnare la resezione al ceppo del caecum.
- Sterilizzare la posizione suturata con scrub a base di iodio. Reidratare il sito chirurgico con la salina di nuovo.
- Chiudere lo strato di muscolatura con la sutura in esecuzione con 8-0 filo di sutura.
- Chiudere gli strati della pelle utilizzando suture interrotte con filo di sutura 4-0.
- Disinfettare il taglio chirurgico 2x con scrub a base di iodio, quindi rimuovere lo iodio utilizzando il 75% di alcol medico.
- Capovolgere delicatamente il mouse indietro, sottocutaneamente (s.c.) iniettare 0,1 mg/kg peso corporeo di buprenorfina e 0,4 mL di salina fisiologica e lasciare che il mouse poggiare sul pad di calore fino a tornare alla coscienza.
- Rimettere il mouse nella gabbia sterile e monitorare attentamente i segni di dolore per 3 giorni dopo l'intervento chirurgico per garantire il recupero.
NOTA: l'applicazione post-operatoria di 0,05 mg/kg di buprenorphine può essere necessaria per alleviare il dolore del singolo topo. Lasciare che i topi si riprendano per 7 giorni dopo l'intervento chirurgico per un'ulteriore induzione del cancro colorettale associato alla colite.
2. Induzione del cancro colorettale cronico associato alla colite con AOM e DSS
NOTA: eseguire questa procedura 7 giorni dopo l'appendimento.
- Preparare la soluzione stock AOM sciogliendo 25 mg di AOM in 2,5 mL di 0,9% salina sterile ad una concentrazione di 10 mg/mL.
NOTA: L'AOM è sensibile alla luce.- Aliquota 2,5 mL di soluzione stock AOM preparata in tubi di vetro da 5 mL avvolti con un foglio di alluminio e conservate a -20 gradi centigradi ogni volta che al momento dell'uso.
- Scongelare una delle aliquote dell'AOM una volta e diluirla a una concentrazione di 1 mg/mL con 0,9% salina sterile (rapporto 1:10).
SOPMONDO: l'AOM è estremamente cancerogeno; quindi, eseguire l'intera procedura di preparazione in una cappa di fumi.
- Sciogliere 4 g di polvere DSS in 200 mL di acqua autoclave per preparare la soluzione DSS 2% (w/v).
NOTA: la concentrazione di DSS può variare a seconda del ceppo del topo, del sesso e del ciclo di induzione; 3% DSS può essere utilizzato per altri ceppi di topi. - Somministrare contemporaneamente l'AOM/DSS appena preparato ai topi. A tale scopo, attenersi alla seguente procedura.
- Intraperitonealmente iniettare 0,01 mL/g di soluzione di lavoro AOM appena preparata per ogni mouse e sostituire l'acqua autoclaved con 2% soluzione DSS per 5 giorni ad libitum.
NOTA: ogni gabbia contiene cinque topi; controllare regolarmente la bottiglia da bere DSS per assicurarsi che non si verifichi alcun precipitato durante il periodo di trattamento. - Peso e monitorare attentamente ogni mouse ogni giorno.
NOTA: Durante la somministrazione di topi con fino al 20% di perdita di peso rispetto al suo peso iniziale o segni di huddle, strabismo, ipotermia, e scarsa attività.
- Intraperitonealmente iniettare 0,01 mL/g di soluzione di lavoro AOM appena preparata per ogni mouse e sostituire l'acqua autoclaved con 2% soluzione DSS per 5 giorni ad libitum.
- Fornire una bottiglia fresca di acqua autoclave il giorno 6 post-AOM/DSS somministrazione fino al giorno 21 (Figura 1B).
NOTA: Questo è un ciclo completo che comprende 21 giorni. - Ripetere i passaggi da 2,3 a 2,4 per altri due cicli e sacrificare i topi il giorno 70.
3. Valutazione dell'infiammazione colonica e del tumore (70 giorni dopo la somministrazione dell'AOM)
- Sacrificare i topi per inalazione di CO2 ad un tasso di riempimento del 10% nella camera di eutanasia seguita da lussazione cervicale.
- Raccogliere l'intero colon dall'alto della giunzione ileo-colica all'ano.
- Esporre il lato del lume aprendo il colon longitudinalmente. Tagliare l'intero colon in pezzi lunghi 10 cm e fissare il tessuto del colon in formalina al 10% per 72 h per la colorazione ematossia e eosina (H&E).
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Representative Results
Istituzione del modello di appendicittomia murine
Questo modello di appendicosa murina del cancro colorettale cronico associato alla colite può essere generato seguendo le fasi chirurgiche e di induzione sequenziali, come illustrato nella Figura 1. Le posizioni più frequenti di caecum sono nella fossa iliaca sinistra e destra seguita dalla linea mediana dell'addome (Figura 2). Il tasso di successo di pre-localizzazione del caecum prima dell'incisione dell'addome utilizzando il metodo palpazione è di quasi il 70% (Informazioni supplementari, tabella S2). Le procedure di accodamento comprendono principalmente sei passaggi importanti (Figura 3). Durante l'intervento chirurgico di appendicia, un'incisione mediana di lunghezza ridotta a 0,5–1,0 cm è fondamentale per ridurre al minimo il trauma chirurgico (Figura 3A). In caso di perdite intraperitali, sono necessari recipienti mesangiali che legano e chiudono il ceppo del caecum, utilizzando suture in esecuzione invece di semplice legatura (Figura 3B,C,D,E).
Valutazione dell'IgA come biomarcatore nei topi dell'appendicia
Per confermare l'appendicosa, l'intestino crasso dei topi e il contenuto fecale sono stati raccolti dopo l'intervento chirurgico per determinare i livelli di cellule plasmatiche specifiche dell'IgA e concentrazioni di IgA secretoria (sIgA). I topi dell'appendicia hanno mostrato una significativa riduzione della percentuale di cellule plasmatiche specifiche B220-IgA rispetto al gruppo sham (Figura 4A,B). Inoltre, rispetto al proprio stato iniziale prima dell'intervento chirurgico, i topi sham hanno mantenuto la concentrazione fecale sIgA nell'arco di 14 giorni dopo l'intervento chirurgico, mentre il gruppo di appendici ha mostrato una significativa riduzione della slgA nel giorno 14 (Figura 4C).
Convalida del cancro colorettale associato alla colite nei topi dell'appendicia
Rispetto al 3% DSS, in cui la maggior parte dei topi del gruppo appendicia ha mostrato gravi complicazioni e significativa perdita di peso corporea (Figura 5A), 2% DSS in combinazione con AOM ha fornito l'80% del tasso di sopravvivenza in entrambi i gruppi di farsa e appendicosa, con ragionevole cambiamenti di peso corporeo (Figura 5E). Alla fine di tre cicli di trattamento, l'intestino crasso a tutta lunghezza è stato raccolto per la valutazione patologica. L'ispezione visiva e la colorazione H&E hanno mostrato i tumori colonici con infiammazione del colon e diversi gradi di adenocarcinomi (adenocarcinomi (ben, moderati e scarsamente differenziati adenocarcinomi) nei topi trattati con 2% AOM/DSS (Figura 6).
Figura 1: Illustrazione schematica della creazione del modello di appendicosa murina del cancro colorettale associato alla colite cronica.
(A) Diagramma di flusso dei principali passaggi chirurgici (i primi tre sono critici) della procedura di appendicia. ((B)Induzione del cancro colorettale. Sette giorni dopo l'appendicia, AOM e DSS sono stati somministrati contemporaneamente. I pesi dei topi sono stati registrati in vari momenti (triangolo rosso). Al giorno 70 post-chirurgia, i topi sono stati sacrificati e i tessuti intestinali sono stati raccolti per ulteriori valutazioni. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2: Predeterminazione della posizione della patch caecale nei topi prima dell'incisione addominale.
(A) Riepilogo della probabilità di trovare la posizione di caecum. Immagini anatomiche di tre posizioni più comuni del caecum al (B) basso a destra, (C) centrale e (D) basso addome sinistro del mouse. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3: Passaggi critici dell'appendicosa murina.
(A) Piccola incisione disposta 0,5–1,0 cm; (B) Estrarre la porzione esatta del cerotto caecal dopo la preposizionamento del caecum. (C) Ligazione di recipienti mesconerici che accompagnano il caecum. (D) Marcatura della regione di taglio del caecum con la sutura 4-0. (E) Chiudere il ceppo con suture in funzione utilizzando il sutura. (F) Chiudere lo strato muscolare con suture interrotte utilizzando il sutura. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4: Quantificazione delle cellule plasmatiche specifiche IgA e concentrazione fecale sIgA dopo l'appendicia.
(A) Rappresentazione dot plots per le cellule macchiate con anti-IgA e B220 in tutto l'intestino crasso di topo e appendicitomia topi 1 giorno e 14 giorni dopo l'intervento chirurgico. I linfociti in lamina propria erano appena preparati e macchiati con L'antitopo FITC IgA, l'anti-topo CD45R/B220 per la citometria di flusso. I numeri all'interno dei grafici indicano percentuali di celle nelle rispettive aree; (B) Determinazione quantitativa delle cellule plasmatiche specifiche dell'IgA nei gruppi di farsa e appendicosa. I dati rappresentano media : SD; n - 5-8 topi; < 0,05, p < 0,01 e < 0,001. (C) Concentrazioni fecali di SIgA prima e dopo l'intervento chirurgico. I contenuti fecali sono stati raccolti a cuneo designati, e i livelli di sIgA sono stati testati da ELISA. Ogni punto di colore rappresenta lo stesso mouse per un periodo di 14 giorni. L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando un testt-test non accoppiato, con p < 0,05 considerato statisticamente significativo. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 5: Stato di sopravvivenza animale del modello di murino colorettale associato alla colite cronica indotta dalla combinazione AOM/DSS dopo l'appendictomia.
(A) La curva di sopravvivenza ottenuta utilizzando il 3% di DSS per l'induzione della colite nei gruppi di farsa e appendicosa. Gravi complicazioni del prolasso anale (B) e dell'ascesso murale indicavano il punto finale dell'animale (C). (D) La curva di sopravvivenza ottenuta utilizzando il 2% di DSS per l'induzione della colite nei gruppi di farsa e appendicosa; (E) Cambio medio del peso corporeo dei topi nell'arco di 70 giorni. I dati rappresentano i topi medi, SD, n e 6. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 6: Immagini di tumori colorettali cronici associati alla colite indotti dal trattamento combinato del 2% DSS e 10 mg/kg di AOM.
Fotografie del colon sezionato con tumori sotto (A) ispezione visiva e (B) microscopio di funzionamento animale. H&E colorazione immagini di tessuti colonici che mostrano (C) infiammazione colonica, (D) adenocarcinoma ben differenziato, (E) adenocarcinoma moderatamente differenziato, e (F) adenocarcinoma altamente differenziato. Freccia nera indica l'ulcera mucosale, la punta della freccia nera indica adenocarcinoma, la freccia bianca indica l'infiltrazione dei neutrofili tra le ghiandole. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Tabella supplementare 1: Sintesi documentale dei metodi chirurgici utilizzati per l'induzione dell'appendicite nei ceppi di topi di uso comune. Fare clic qui per scaricare questo file.
Tabella supplementare 2: Ubicazione del caecum nei topi dopo laparotomia. L'organo esposto dopo l'incisione indica l'organo trovato direttamente nella posizione pre-localizzata dopo la laparotomia. La posizione del caecum mostra la posizione del caecum rispetto alla regione addominale/la posizione del caecum rispetto all'intestino. Esposto indica che il caecum era sotto lo strato muscolare dell'addome e sopra altre parti dell'intestino. Incorporato indica che il caecum era coperto dall'intestino. Fare clic qui per scaricare questo file.
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Discussion
Un modello di appendicittomia murina di cancro colorettale associato alla colite è stato ottenuto utilizzando passaggi chirurgici con un alto tasso di sopravvivenza nei topi. Nella maggior parte dei casi, poiché il cedello era posizionato sotto la parete addominale (supplementary Table 1, Supplementary Table 2e Figura 2), era difficile pregiudicare la sua posizione senza laparotomia. In questo protocollo chirurgico, è stato introdotto un passo facile di toccare il dosso, e la valutazione quantitativa della posizione cecum è stata fornita anche come guida per aumentare la precisione per la pre-localizzazione del cecum (Figura 2). Lo sfruttamento delle caratteristiche anatomiche per rimuovere il cerotto ceecale ha ridotto al minimo la rottura delle parti indesiderate dell'intestino, diminuendo così il tasso di potenziali complicanze dell'appendicia e infezione della cavità addominale.
In questo modello sono coinvolti tre passaggi critici. In primo luogo, l'esame visivo e la palpazione prima della laparotomia possono essere utili per determinare la posizione generale del caecum. Nonostante il fatto che il caecum sia molto probabilmente presente nella regione iliaca sinistra dell'addome, la macchia caecale che sporge dall'apice del caecum è spesso dissociativa (cioè, muoversi o incorporato) ed è più probabile che si trovi sotto il peritoneo centrale ( figura 2). In secondo luogo, è preferibile una piccola incisione nella linea mediana dell'addome e un'accurata esposizione del cerotto caetale. Questo perché c'è un punto sottile nella linea mediana dell'addome, in cui il taglio in questa posizione può diminuire la potenziale lesione dello strato di muscolatura addominale. Inoltre, per evitare il volvulus su appendicia, che è dannoso per i topi, l'esposizione accurata del cefalea ceeminica riduce al minimo il disturbo involontario dell'intestino, riducendo il rischio di insorgenza di volvulus. Inoltre, un'esposizione minima della cavità addominale può garantire che l'intestino rimanga incontaminato, caldo e umido; in caso contrario, un'esposizione eccessiva può causare una significativa perdita di calore e l'essiccazione dei tessuti41.
In terzo luogo, la disinfezione e la chiusura del ceppo cesareo con suture di corsa invece di semplice legatura sono necessarie per prevenire potenziali sanguinamento e disinfezione del contenuto ceecale del ceppo. Il livello di cellule plasmatiche specifiche di IgA e sIgA fecale nell'intestino grande dei topi sono significativamente ridotti da un'appendicia, suggerendo che la patch ceecale è il sito principale per la produzione di IgA almeno nel periodo iniziale33. Nell'intestino grande, sIgA funziona come un difensore della salute mucosale stabilizzando la normale colonizzazione della flora commensale e contrastando microbi patogeni42. La rimozione dell'appendice riduce la produzione di IgA e può interrompere l'omeostasi mucosale.
L'alto tasso di mortalità e i segni clinici di induzione eccessiva della colite (ad esempio, feci sanguissuolute gravi, prolasso anale e ascesso addominale43,44) sono stati osservati nei topi trattati con 3% DSS (Figura5). Tuttavia, 2% induzione DSS dopo tre cicli ha causato nessuna di queste complicazioni, e il tasso di sopravvivenza è stato mantenuto sopra 80%. Ciò indica che l'uso combinato di DSS e AOM deve essere convalidato, poiché la mancanza di integrità dei GAL può, in una certa misura, ridurre la tolleranza dei topi alla combinazione AOM e DSS. Gli studi osservazionali da prove cliniche suggeriscono che l'appendice è fortemente associata allo sviluppo di IBD e cancro colorettale14,45,46. Tuttavia, le funzioni biologiche e i meccanismi sottostanti dell'appendice nella patogenesi delle malattie intestinali croniche non sono ancora chiari. Sembra che l'appendice funga da parte importante dei GALT e come serbatoio per la flora intestinale commensale per regolare la salute o stati malati17,18,31. Stabilire questo modello ripetibile e conveniente murine murineummy può essere utilizzato per studiare i ruoli dell'appendice in IBD e cancro colorettale nel contesto dell'omeostasi microbiota, prevenzione del cancro e immunoterapia.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Acknowledgments
Questo lavoro è parzialmente sostenuto da Fondi di Ricerca fondamentali per l'Università Centrale (G2018KY0302), Fondo di Sviluppo Ricerca Fondamentale dell'Università (KT00062), National Natural Science Foundation of China (81870380) e Clinical Research Award del Primo ospedale affiliato di Xi'an Jiaotong University in Cina (NO. XJTU1AF-CRF-2015-029). Gli autori ringraziano il Dr. Chengxin Shi per i suoi suggerimenti tecnici durante la fase di esplorazione iniziale del modello di appendicectomia murina, così come il patologo Dr. Xi Liu per la valutazione dei risultati di colorazione H&E di colite e tumori colorettali. Y.L. eseguì la dimostrazione chirurgica, fece analisi dei dati e scrisse la bozza del manoscritto; J.L., G.L., .P., e Y.M. hanno preso parte alla preparazione chirurgica, collezioni di tessuti, e la produzione video; La citometria di flusso e L'ELISA hanno eseguito la citometria di flusso e l'ELISA; Q.W. e H.X. hanno fornito il supporto tecnico per generare un modello murino clinicamente rilevante; La R.X.z. progettò lo studio, supervisionò la ricerca, scrisse e ne fu oggetto di prova; J.S. ha esaminato il manoscritto.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Azoxymethane(AOM) | Sigma-Aldrich,Inc. | A5486 | |
| Dextran Sulfate Sodium Salt(DSS) | MP Biomedicals,Inc. | 160110 | |
| Entoiodine | Shanghai likon high technology disinfection co. LTD | 310102 | |
| digital caliper | Ningbo yuanneng trading co. LTD | 4859263 | |
| 4-0 Silk Sutures | Yuanlikang co. LTD | 20172650032 | |
| 8-0 Prolene Sutures | Yuanlikang co. LTD | 20172650032 | |
| Electric coagulation pen | Chuang mei medical equipment co. LTD | 28221777292 | |
| disposable syringe 1ml | Shengguang medical products co. LTD | 3262-2014 | |
| disposable syringe 10ml | Shengguang medical products co. LTD | 3262-2014 | |
| 75% Medicinal alcohol | Shandong anjie high-tech disinfection technology co. LTD | 371402AAJ008 | |
| Pentobarbital sodium salt | Sigma-Aldrich,Inc. | 57-33-0 | |
| Physiological Saline | Shandong qidu pharmaceutical co. LTD | H37020766 | |
| Absorbent Cotton Swab | Henan ruike medical co., LTD | RK051 | |
| Surgical Instruments-Ophthalmic | Jinzhong Shanghai co.LTD | WA3050 |
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