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Cancer Research

इम्यूनोडिफिएंट चूहों में लिवर ऑर्थोटोपिक ह्यूमन यूवील मेलानोमा ज़ेनोबेड़ा प्लेटफॉर्म की पीढ़ी

doi: 10.3791/59941 Published: November 6, 2019

Summary

ऑर्थोटोपिक ह्यूमन लिवर मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा ज़ेनोबेड़ा माउस मॉडल को रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर का हिस्सा और सुई इंजेक्शन तकनीकों के साथ सर्जिकल ऑर्थोटोपिक इम्प्लांटेशन तकनीकों का उपयोग करके बनाया गया था।

Abstract

हाल के दशकों में, चमड़े के नीचे प्रत्यारोपित रोगी-व्युत्पन्न विद्वेष ट्यूमर या सुसंस्कृत मानव सेल लाइनों को पारंपरिक स्थापित मानव कोशिका की तुलना में इम्यूनोडेफिडेंट चूहों में मानव कैंसर का अध्ययन करने के लिए अधिक प्रतिनिधि मॉडल के रूप में तेजी से पहचाना गया है लाइनें इन विट्रो। हाल ही में, ऑर्थोटोपरिक रूप से प्रत्यारोपित रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर विद्वेष (पीडीएक्स) चूहों में मॉडल रोगी ट्यूमर की सुविधाओं को बेहतर ढंग से दोहराने के लिए विकसित किए गए हैं। एक जिगर ऑर्थोटोपिक विद्वेष माउस मॉडल एक उपयोगी कैंसर अनुसंधान मंच होने की उम्मीद है, जो ट्यूमर जीव विज्ञान और दवा चिकित्सा में अंतर्दृष्टि प्रदान करता है। हालांकि, लिवर ऑर्थोटोपिक ट्यूमर प्रत्यारोपण आम तौर पर जटिल है। यहां हम रोगी-व्युत्पन्न यकृत-मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा ट्यूमर के ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण के लिए हमारे प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। हमने मानव यकृत मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा सेल लाइनों को इम्यूनोडिफिजेंट चूहों में सुसंस्कृत किया। प्रोटोकॉल रोगी व्युत्पन्न यूवील मेलानोमा ट्यूमर या सुसंस्कृत मानव सेल लाइन के साथ एक सुई इंजेक्शन तकनीक के हिस्से के साथ या तो एक शल्य चिकित्सा ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण तकनीक का उपयोग कर लगातार उच्च तकनीकी सफलता दरों में परिणाम कर सकते हैं । हम आंतरिक यकृत ट्यूमर का पता लगाने के लिए सीटी स्कैनिंग के लिए प्रोटोकॉल का भी वर्णन करते हैं और फिर से एनग्राफमेंट प्राप्त करने के लिए क्रायोपआरक्षित ट्यूमर का उपयोग करके पुनः प्रत्यारोपण तकनीकों का वर्णन करते हैं। साथ में, ये प्रोटोकॉल ट्रांसलेशनल रिसर्च में लिवर मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा के लिवर ऑर्थोटोपिक ट्यूमर माउस मॉडल के लिए एक बेहतर मंच प्रदान करते हैं।

Introduction

उवेल मेलानोमा पश्चिमी दुनिया में वयस्कों के बीच सबसे आम इंट्राओकुलर घातक ट्यूमर है। पिछले 50 वर्षों के दौरान, संयुक्त राज्य अमेरिका1,2में यूवील मेलानोमा (प्रति मिलियन 5.1 मामले) की घटनाएं स्थिर बनी हुई हैं। उवील मेलानोमा आईरिस, सिलियरी शरीर या कोरॉयड में मेलानोसाइट्स से उत्पन्न होता है, और यह मेटास्टेसिस विकसित होने पर एक अत्यंत घातक बीमारी है। मेटाटैस के प्रारंभिक निदान के बाद यूवील मेलानोमा मेटास्तासिस के रोगियों की मृत्यु दर 1 वर्ष में 80% और 2 वर्षों में 92% थी। मेटाटैस और मृत्यु के निदान के बीच का समय आम तौर पर कम होता है, 6 महीने से कम, चिकित्सा3,4के संबंध में। कैंसर रक्त के माध्यम से फैलता है और जिगर (89-93%)4,5के लिए मुख्यरूप से मेटास्टेसाइज करने की आदत है । लिवर-मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा की आगे की जांच के लिए एक प्रभावी माउस मॉडल की तत्काल आवश्यकता होती है। ट्रांसलेशनल रिसर्च के लिए लिवर-लोकलाइज्ड मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा माउस मॉडल जेनरेट करने की स्पष्ट मांग है ।

रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर विद्वेष (पीडीएक्स) माउस मॉडल व्यक्तिगत दवा रणनीतियों प्रदान करने की उम्मीद कर रहे हैं। ये मॉडल नैदानिक परिणामों के भविष्य कहनेवाला हो सकते हैं, प्रीक्लिनिकल दवा मूल्यांकन के लिए उपयोगी हो सकते हैं, और ट्यूमर6के जैविक अध्ययन के लिए उपयोग किए जा सकते हैं। प्रतिनिधि पीडीएक्स मॉडल एक्टोपिक रूप से ट्यूमर-प्रत्यारोपित विद्वेष चूहों हैं, जिन्हें चमड़े के नीचे साइटों पर ट्यूमर है। अधिकांश शोधकर्ता 7,8विशेषअभ्यासके बिना चमड़े के प्रत्यारोपण के लिए सर्जरी कर सकते हैं । वे आसानी से चमड़े के नीचे ट्यूमर की निगरानी भी कर सकते हैं। हालांकि चमड़े के नीचे PDX मॉडल अनुसंधान चरण में लोकप्रिय हो गया, वे व्यावहारिक उपयोग करने के लिए जाने में कुछ बाधाएं हैं । चमड़े के प्रत्यारोपण रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर को ट्यूमर की उत्पत्ति से एक अलग माइक्रोएनवायरमेंट पर एनग्राफेट करने के लिए प्रेरित करते हैं, ताकि यह एनाग्राफमेंट विफलता और धीमी ट्यूमर वृद्धि 9,10,11की ओर लेजाए, 12,13,14. ऑर्थोटोपिक एनग्राफमेंट पीडीएक्स मॉडल के लिए अधिक आदर्श और तर्कसंगत दृष्टिकोण हो सकता है क्योंकि यह मूल ट्यूमर15,16के समान अंग का उपयोग करता है .

हाल ही में, हमने एनओडी में एक सुसंस्कृत मानव यकृत-मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा सेल लाइन के साथ रोगी-व्युत्पन्न यकृत-मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा ट्यूमर और सुई इंजेक्शन तकनीकों की सर्जिकल ऑर्थोटोपिक इम्प्लांटेशन तकनीकों के लिए प्रोटोकॉल विकसित किए। सीजी-पीआरकेडीसीसिडआईएल2आरजीtm1Wjl/SzJ(NSG) चूहों17,18। प्रोटोकॉल लगातार उच्च तकनीकी सफलता दर ों में परिणाम है । हमने सीटी स्कैनिंग तकनीकों की भी स्थापना की जो आंतरिक यकृत ट्यूमर का पता लगाने के लिए उपयोगी हैं, और हमने पीडीएक्स प्लेटफॉर्म में क्रायोप्आरक्षित ट्यूमर का पुनः प्रत्यारोपण विकसित किया। हमने पाया कि यूवील मेलानोमा ट्यूमर ज़ेनोबेड़ा मॉडल मूल रोगी यकृत ट्यूमर की विशेषताओं को बनाए रखते हैं, जिसमें उनके हिस्टोपैथोलॉजिकल और आणविक विशेषताएं शामिल हैं। साथ में, ये तकनीक ट्रांसलेशनल रिसर्च में यूवील मेलानोमा के लिए लिवर ऑर्थोटोपिक ट्यूमर मॉडल के लिए एक बेहतर मंच प्रदान करती है।

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Protocol

अध्ययन में नामांकित रोगियों को लिखित सहमति प्रदान करनी चाहिए अनुसंधान प्रयोजनों और आनुवंशिक अध्ययन के लिए त्याग सर्जिकल नमूनों के उपयोग की अनुमति, एक संस्थागत समीक्षा बोर्ड के अनुसार प्रोटोकॉल को मंजूरी दे दी । यह प्रोटोकॉल राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थानों की प्रयोगशाला पशुओं की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड में सिफारिशों के अनुसार सख्त ी से किया गया था और संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसयूसी) द्वारा अनुमोदित किया गया था ।

1. ताजा रोगी व्युत्पन्न ट्यूमर ऊतक का संग्रह

  1. सर्जरी या एक अस्पताल के ऑपरेटिंग कमरे में एक सुई बायोप्सी से रोगी व्युत्पन्न ट्यूमर ऊतक प्राप्त करें ।
  2. ट्यूमर ऊतक को 100 मिलीएल कंटेनर में रखें जिसमें हैंक्स के संतुलित नमक समाधान (एचबीएसएसएस) का समाधान बर्फ पर हो।
  3. ऊतक को प्रयोगशाला में एक बाँझ हुड (बायोसेफ्टी लेवल 2) में स्थानांतरित करें।
  4. जितनी जल्दी हो सके 2 कदम आगे बढ़ें।
    नोट: सुरक्षा कारणों से, ज्ञात एचआईवी या हेपेटाइटिस बी या सी संक्रमण वाले रोगियों को बाहर करें।

2. ताजा रोगी व्युत्पन्न ट्यूमर ऊतक की प्रसंस्करण

  1. ऊतक को 50 मिलीएल ट्यूब में रखें जिसमें बर्फ पर फॉस्फेट-बफर्ड लवण (पीबीएस) हो। ऊतक धोने के लिए, ट्यूब में पीबीएस जोड़ें और दो बार ट्यूब से पीबीएस को छोड़ दें।
  2. ऊतक को बर्फ पर पीबीएस युक्त पेट्री डिश में स्थानांतरित करें।
  3. बाँझ संदंश और कैंची का उपयोग करके, ऊतक के परिगलित हिस्सों को हटा दें। 2.3 से 2.5 चरणों के दौरान ऊतक नम और ठंडा रखें। सुई बायोप्सी नमूनों के लिए, चरण 2.3 और 2.5 को छोड़ दें, और नमूनों में कटौती न करें।
    नोट: परिगलित ऊतक अक्सर छुआ जब आसानी से अलग टूट जाता है ।
  4. सर्जिकल लिवर प्रत्यारोपण के लिए ऊतक को 1 मिमी3 क्यूब्स में काट लें।
  5. पेट्री डिश में बाकी टिश्यू को 2 एमएम क्यूब्स में काट लें।
  6. उन्हें हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण के लिए 4% फॉर्मेलिन के साथ 1.7 मिमी माइक्रोट्यूब पर और जीनोमिक और प्रोटेओमिक विश्लेषण के लिए एक और ट्यूब पर स्थानांतरित करें।
  7. माइक्रोट्यूब को लिक्विड नाइट्रोजन के साथ लिक्विड नाइट्रोजन जार में डाल दें। ट्यूबों को स्थायी भंडारण के लिए -80 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर में स्थानांतरित करें।
    नोट: रोगी और ऊतक प्रसंस्करण से नमूना हटाने के बीच का समय 30 किमी से अधिक नहीं होना चाहिए।

3. रोगी व्युत्पन्न ट्यूमर ऊतक के साथ सर्जिकल लिवर प्रत्यारोपण

  1. 70% एथिल अल्कोहल के साथ सर्जरी के लिए हुड में आने वाली सभी वस्तुओं को स्प्रे करें।
    नोट: इसमें सर्जिकल इंस्ट्रूमेंट्स, हीटिंग पैड और एनेस्थीसिया मशीनें शामिल हैं।
  2. एक सूती झाड़ू और कपड़े की चादर के वजन को मापें।
  3. एनेस्थेटाइज माउस को इंडक्शन चैंबर में रखकर 3-5% आइसोफ्लोरीन वाष्पीकरण के साथ।
  4. एक बार माउस पूरी तरह से एनेस्थेटाइज्ड हो जाने के बाद इसे हीटिंग पैड पर सुपाइन पोजीशन में रखें। एनेस्थीसिया के रखरखाव के लिए 1.5-3% आइसोफ्लोरीन को श्वास लेने के लिए माउस के स्नाउट पर आइसोफ्लोरीन शंकु रखें।
    नोट: माउस को पूरी प्रक्रिया के दौरान हीटिंग पैड पर होने की जरूरत है। हीटिंग की कमी हाइपोथर्मिया का कारण बन सकती है।
  5. जब माउस का पैर अल्ट्राफाइन संदंश के साथ चुभता है तो कोई प्रतिक्रिया नहीं देकर उचित संज्ञाहरण की पुष्टि करें।
  6. सर्जरी से पहले एक माइक्रो सिरिंज पर 27 जी सुई का उपयोग कर पार्श्व पर buprenorphine (०.६ मिलीग्राम/kg) नीचे सुई ।
  7. पेट में 70% एथिल अल्कोहल लगाएं और फर को ऊपर की ओर और नीचे की ओर फैलाएं। फर फैलाने के बाद, एक आसान कटौती के लिए बाएं उपकोस्टल क्षेत्र के नीचे त्वचा के आसान दृश्य की पुष्टि करें। पेट से फर को शेव न करें।
    नोट: फर सर्जरी के बाद चीरा साइट को छिपा देगा और माउस को चीरा पोस्ट ऑपरेशन को खरोंचने से रोकेगा। हालांकि, आप संस्थागत मानकों के अनुसार चीरा साइट के संक्रमण को रोकने के लिए फर दाढ़ी कर सकते हैं।
  8. आयोडीन लगाएं और इसे त्वचा में अवशोषित कर लें।
  9. माउस पर 2 सेमी छेद के साथ एक बाँझ सर्जिकल कपड़ा रखें।
  10. घुमावदार अल्ट्राफाइन संदंश के साथ पेट की त्वचा को उठाएं और घुमावदार कैंची के साथ 1 सेमी ट्रांसवर्स बाएं सबकोस्टल त्वचा चीरा बनाएं।
  11. चीरा की त्वचा के नीचे घुमावदार कैंची की नोक डालें और त्वचा से पेरिटोनम को अलग करने के लिए उन्हें थोड़ा खोलें। बंद ब्लेड के साथ चीरा से कैंची वापस लेना।
    नोट: माउस के अंदर कैंची खोलना और बंद करना नुकसान और रक्तस्राव का कारण बन सकता है।
  12. पेरिटोनम के नीचे जिगर का पता लगाएं। पेरिटोनम के माध्यम से गहरे लाल रंग की पुष्टि करें।
  13. घुमावदार कैंची के साथ, पेरिटोनम में 1 सेमी ट्रांसवर्स चीरा बनाएं। यदि एक पेरिटोनियल धमनी अत्याधुनिक से खून बहता है, तो तुरंत कॉटरी के साथ रक्तस्राव को रोकें।
  14. एक हाथ से घुमावदार अल्ट्राफाइन संदंश का उपयोग करवसा ऊतक को पकड़ो, बाएं जिगर की पालि के नीचे एक सूती झाड़ू के किनारे डालें और जिगर को बाहर लाने के लिए दूसरे हाथ से झाड़ू को नीचे की ओर रोल करें।
    नोट: वसा ऊतक हथियाने के लिए कपास झाड़ू से चिपके से वसा ऊतक रखने के लिए महत्वपूर्ण है ।
  15. कपास झाड़ू पर जिगर बाहरी और एक गैर बुना शोषक कपड़े की चादर पर जिगर जगह है ।
    नोट: कपड़े की चादर जिगर को स्थिर करने और नकसीर को अवशोषित करने में दो आवश्यक भूमिकाएं निभाती है।
  16. कपास झाड़ू के साथ चीरा साइट को धीरे-धीरे दबाते हुए परेंचिमा में जेब बनाने के लिए बाँझ नंबर 11 स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करके चौड़ाई और गहराई में एक चीरा 5 मिमी बनाएं।
    1. ब्लेड को यकृत की सतह के समानांतर डालें और क्षैतिज रूप से काट लें।
    2. किसी भी नकसीर को रोकने के लिए सूती झाड़ू के साथ चीरा साइट दबाएं।
      नोट: ब्लेड को वर्टिकल न रखें, नहीं तो आप लिवर के जरिए टूट जाएंगे और लिवर के बीच में बड़े बर्तनों को घायल कर देंगे।
  17. चीरा साइट खोलने के लिए कपास झाड़ू ऊपर की ओर रोल करें और घुमावदार अल्ट्राफाइन संदंश के साथ जेब में ट्यूमर ऊतक के 1 मिमी3 घन प्रत्यारोपित करें। रिवर्स रोटेशन में कपास झाड़ू रोलिंग और नीचे दबाने के दौरान संदंश वापस लेना।
    नोट: सूती झाड़ू के साथ चीरा साइट पर नीचे दबाने जबकि संदंश वापस लेने के लिए जेब के अंदर ट्यूमर के विस्थापन को रोकने में मदद करता है ।
  18. प्रत्यारोपण के बाद चीरा साइट से कपास झाड़ू धीरे ले लो । जितनी जल्दी हो सके 3.19 कदम आगे बढ़ें।
  19. चीरा साइट पर एक अवशोषित hemostat रखो।
  20. हेमोस्टेसिस की पुष्टि करें। यदि रक्तस्राव जारी रहता है, तो चीरा साइट पर अधिक हेमोस्ता जोड़ें।
  21. संदंश (अधिमानतः कुंद समाप्त) के साथ कपड़े की चादर से जिगर छील और जिगर पेट गुहा में वापस डाल दिया ।
  22. 5-0 अवशोषक सीवन का उपयोग करडबल लिगेचर के साथ सीवन पेरिटोनम।
  23. 5-0 अवशोषित सीवन का उपयोग कर ट्रिपल लिगेचर के साथ सीवन त्वचा।
    नोट: ट्रिपल लिगामेंट सर्जिकल चीरा विकृति को रोकने में मदद करता है।
  24. माउस को पूरी तरह से जागने तक निरीक्षण करें और इसे वापस पिंजरे में रखें।
  25. सर्जरी के दौरान रक्तस्राव की मात्रा के लिए रक्त के साथ कपास झाड़ू और कपड़े की चादर के वजन को मापें। सर्जरी से पहले उनकी मूल वजन से तुलना करें। माउस में रक्त की मात्रा को प्रसारित करने के 10% से कम करने के लिए सर्जरी के दौरान रक्तस्राव को कम करें।

4. संस्कारी मानव यकृत मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा सेल लाइन का संग्रह और प्रसंस्करण

  1. सुसंस्कृत कोशिकाओं को तैयार करें।
  2. कोशिकाओं को इकट्ठा करें और सेल काउंटर का उपयोग करके सेल नंबर की गणना करें।
  3. 15 मीटर ट्यूब में 10.0 x 106 कोशिकाओं के लिए सेल निलंबन की उचित राशि तैयार करें।
  4. कमरे के तापमान पर एक अपकेंद्रित्र में 5 मिन के लिए 300 x ग्राम पर ट्यूब स्पिन।
  5. 15 mL ट्यूब में अधिस्थान निकालें। सेल पैलेट को ट्यूब के नीचे छोड़ दें।
  6. आरपीएमआई 1640 मीडियम के 50 माइक्रोन को 1.7 एमएल ट्यूब में जोड़ें।
  7. टिप खोलने को बड़ा करने के लिए कैंची के साथ 200 माइक्रोन टिप की नोक काटें।
  8. 1.7 एमएल ट्यूब में कटौती टिप के साथ एक पिपेट का उपयोग कर तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स के 60 μL जोड़ें जिसमें आरपीएमआई है।
  9. 1.7 मिलीट्यूब में आरपीएमआई और मैट्रिक्स मिलाएं। भंवर यह।
  10. 15 mL ट्यूब में सेल पैलेट में मिश्रण के 110 μL जोड़ें। सेल निलंबन को एक नई 1.7 एमएल ट्यूब में स्थानांतरित करें।
  11. सुई इंजेक्शन से पहले ट्यूब को बर्फ पर रखें।

5. लिवर में संस्कारी ह्यूमन लिवर मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा सेल लाइन की सर्जिकल सुई प्रत्यारोपण

  1. उपरोक्त प्रोटोकॉल का पालन 3.1 से 3.15 तक करें।
  2. 27 जी सुई के साथ एक माइक्रोसिरिंग के साथ सेल निलंबन ले लीजिए।
  3. यकृत की सतह के साथ सुई डालें और सुई की नोक 5 मिमी गहरी अग्रिम।
  4. लिवर में सेल सस्पेंशन के 20 माइक्रोन इंजेक्ट करते हैं।
  5. इंजेक्शन कोशिकाओं को लीक होने से रोकने के लिए जिगर के सम्मिलन बिंदु को कॉटरीइज़ करें। हेमोस्टेसिस की पुष्टि करें।
  6. उपरोक्त प्रोटोकॉल का पालन 3.21 से 3.24 तक करें।

6. सीटी स्कैन

  1. जाग स्थिति में माउस को एक निरोधक में रखें।
  2. पूंछ को डिइंफेक्शन और वासोडिलेशन के लिए बाँझ अल्कोहल पैड से पोंछ लें।
  3. 1 मिलीग्राम सिरिंज पर 27 जी सुई के साथ पूंछ की नस के माध्यम से सीटी कंट्रास्ट एजेंट के 100 माइक्रोन इंजेक्ट करें।
  4. सीटी स्कैन लेने से पहले इंजेक्शन के बाद 4 घंटे तक इंतजार करें।
    नोट: यह 4 घंटे लेता है जब तक एजेंट जिगर कुफर कोशिकाओं द्वारा लिया जाता है ।
  5. इंजेक्शन के चार घंटे बाद, ट्यूमर युक्त माउस को इंडक्शन कक्ष में रखकर 3-5% वाष्पीकृत आइसोफ्लोरीन के साथ एनेस्थेट करें।
  6. एक बार माउस पूरी तरह से एनेस्थेटाइज्ड हो जाने के बाद, इसे सीटी पर प्रवण स्थिति में रखें। एनेस्थीसिया के रखरखाव के लिए 1.5-3% आइसोफ्लोरीन को श्वास लेने के लिए माउस के स्नाउट पर आइसोफ्लोरीन शंकु रखें।
  7. जब माउस का पैर अल्ट्राफाइन संदंश के साथ चुभता है तो कोई प्रतिक्रिया नहीं देकर उचित संज्ञाहरण की पुष्टि करें।
  8. 15 मिन के लिए सीटी स्कैन लें।
  9. सुनिश्चित करें कि माउस जब तक यह सीटी स्कैन के बाद पूरी तरह से जागृत है और इसे वापस पिंजरे में डाल दिया।
  10. ट्यूमर के अस्तित्व के लिए मूल्यांकन और सीटी छवियों पर ट्यूमर के आकार को मापने।
    नोट: कंट्रास्ट एजेंट सामान्य यकृत पैरान्चिमा को बढ़ाता है ताकि असंवर्धित ट्यूमर को पहचानना आसान हो। पित्ताशय की थैली और पेट को ट्यूमर के रूप में गलत न करें।

7. हार्वेस्टिंग और प्रोसेसिंग टिश्यू

  1. सीओ2 का उपयोग कर चूहों इच्छामृत्यु के बाद खोपड़ी के पीछे तर्जनी और अंगूठे रखकर और पूंछ के आधार से शरीर को खींचकर गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था। जितनी जल्दी हो सके 7.2 कदम के लिए आगे बढ़ें।
  2. माउस को एक सुपेन स्थिति में रखें और पेट को 70% एथिल अल्कोहल के साथ स्प्रे करें।
  3. पेट के अंगों को बेनकाब करने के लिए xiphoid प्रक्रिया के नीचे 3-सेमी ट्रांसवर्स चीरा बनाने के लिए बाँझ संदंश और बाँझ कैंची का प्रयोग करें।
  4. ट्यूमर ऊतक को उत्पादित करें और चरण 2.1 से 2.2 करते हैं।
  5. पेट्री डिश में ट्यूमर के बाकी हिस्सों को 2 एमएम क्यूब्स में काट लें।
  6. क्रायोप्रिजर्वेशन के बाद फिर से प्रत्यारोपण के लिए क्रायोमीडियम के साथ उन्हें क्रायोजेनिक ट्यूब पर स्थानांतरित करें।
  7. ट्यूबों को आइसोप्रोपेनॉल से भरे क्रायोजेनिक फ्रीजिंग कंटेनर में रखें।
  8. कंटेनर को अस्थायी भंडारण के लिए -80 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर में स्थानांतरित करें। क्रायोमीडियम के साथ क्रायोट्यूब को सीधे लिक्विड नाइट्रोजन टैंक में न डालें। ट्यूमर ऊतक को संरक्षित करने के लिए -1 डिग्री सेल्सियस/मिन की शीतलन दर पर उन्हें धीरे-धीरे फ्रीज करें।
  9. अगले दिन, ट्यूबों को स्थायी भंडारण के लिए तरल नाइट्रोजन टैंक में स्थानांतरित करें।

8. पुनः प्रत्यारोपण

  1. ऊतक प्रत्यारोपण के लिए तैयार होने तक तरल नाइट्रोजन नाइट्रोजन के साथ तरल नाइट्रोजन जार में ट्यूबों को जमे रहें। व्यवहार्यता बनाए रखने और engraftment की संभावना को बढ़ाने के लिए कमरे के तापमान के लिए ऊतक के जोखिम को कम करें।
  2. 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में गल क्रायोपआरक्षित ट्यूब।
  3. 2.2-2.4 कदम प्रदर्शन करें।
  4. 3.1-3.24 चरणों में वर्णित चूहों में गल ट्यूमर प्रत्यारोपण।

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Representative Results

लिवर पॉकेट विधि का उपयोग करके सर्जिकल ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण छह महीने के भीतर 80% की उच्च सफलता दर के साथ माउस लिवर में मानव यकृत मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा ट्यूमर प्रत्यारोपण कर सकता है। ज़ेनोबेड़ा ट्यूमर बेटी नोड्यूल्स के बिना एक अकेले ट्यूमर के रूप में जिगर में engrafts(चित्रा 1 और चित्रा 3A)। माइक्रोनीडल्स का उपयोग करके जिगर में सर्जिकल ऑर्थोटोपिक इंजेक्शन तकनीक सभी मामलों में जिगर में सफलतापूर्वक सुसंस्कृत मानव यकृत-मेटास्टैटिक यूवील मेलानोमा कोशिकाओं को एनग्राफेड करती है(चित्रा 2 और चित्रा 3B)। हालांकि, कुछ मामलों में मुख्य ट्यूमर के आसपास प्रसार था । कंट्रास्ट एजेंट सीटी पर जिगर में ट्यूमर का पता लगाता है, जिसमें 1 मिमी आकार(चित्रा 3B)के छोटे ट्यूमर शामिल हैं। क्रायोपआरक्षित ट्यूमर के पुनः प्रत्यारोपण सफलतापूर्वक उच्च सफलता दरों के साथ माउस जिगर में उन्हें स्थापित किया। क्रायोप्रिजर्वेशन के बाद फिर से प्रत्यारोपित विद्वेष ट्यूमर मूल रोगी ट्यूमर और पूर्व क्रायोपआरक्षित ट्यूमर की विशेषताओं को बनाए रखता है।

Figure 1
चित्रा 1: सर्जिकल ऑर्थोटोपिक लिवर इम्प्लांटेशन द्वारा रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर ज़ेनोबेड़ा माउस मॉडल। माउस ट्यूमर प्रत्यारोपण के बाद 6 महीने के बाद इच्छामृत्यु थी। पिगमेंक्त ब्लैक ट्यूमर (काला तीर) यूवील मेलानोमा है। ट्यूमर जिगर की बाईं पालि में संजोया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: लिवर ऑर्थोटोपिक ह्यूमन सेल लाइन-व्युत्पन्न ट्यूमर विद्वेष माउस मॉडल सुई इंजेक्शन विधि का उपयोग कर। माउस ट्यूमर इंजेक्शन के 8 सप्ताह बाद इच्छामृत्यु थी। पिगमेंक्त ब्लैक ट्यूमर (काला तीर) यूवील मेलानोमा है। ट्यूमर जिगर की बाईं पालि में संजोया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: जिगर के बाईं पालि में जिगर ट्यूमर की सीटी छवियां। लिवर ट्यूमर बढ़ाया सीटी पर पता चला रहे हैं सामान्य जिगर के ऊतकों को कंट्रास्ट एजेंट द्वारा बढ़ाया जाता है। सफेद तीर जिगर के बगल में पेट का संकेत देते हैं। (A)ट्यूमर (काला तीर) जो पहले चित्रा 1में दिखाया गया था । सर्जिकल ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण एक अकेले ट्यूमर बनाता है। (ख) फिगर 2में पहले दिखाए गए ट्यूमर (काला तीर) । सुई इंजेक्शन विधि कई छोटे ट्यूमर का एक क्लस्टर बनाती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4: जिगर की जेब विधि के लिए तकनीकी सुझाव। (ए-सी) जिगर के बाएं पालि (सफेद तीर) एक 1 सेमी चीरा के माध्यम से एक कपास झाड़ू (काले तीर) का उपयोग कर पेट से बाहर उजागर किया जा सकता है । चीरा चौड़ा करने के लिए एक रिट्रैक्टर की आवश्यकता नहीं है। (D)कपास झाड़ू चीरा धीरे पर दबाता है । स्केलपेल (हरे तीर) द्वारा चीरा लगाने के बाद यह हेमोस्टेसिस प्राप्त करता है। (ई)कपास झाड़ू ऊपर की ओर रोल (घुमावदार लाल तीर) । यह चीरा खोलने के लिए जिगर परन्चिमा को लिफ्ट करता है। ट्यूमर पीला तीर) अल्ट्राफाइन संदंश (नीले तीर) द्वारा चीरा के माध्यम से जिगर की जेब में डाला जाता है। (एफ)कपास झाड़ू नीचे (घुमावदार लाल तीर) रोल करने के लिए बाहर का समर्थन करने से जेब में एक डाला ट्यूमर को रोकने के लिए । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

वर्तमान ऑर्थोटोपिक ज़ेनोबेड़ा मॉडल श्रम-गहन, समय लेने वाले और बनाने के लिए महंगे हैं। लिवर कैंसर के लिए ऑर्थोटोपिक ट्यूमर ज़ेनोबेड़ा माउस मॉडल दो दशक पहले19,20,21से अधिक स्थापित किए गए थे । हालांकि, यह तकनीक जटिल है और इसके लिए विशेष उपकरणों के उपयोग की आवश्यकता होती है, जैसे माइक्रो-सुई धारक और 6-0 से 8-0 एक माइक्रोस्कोप के नीचे ठीक टांके। ट्यूमर और सामान्य यकृत ऊतक को सावधानी से सिलना चाहिए ताकि सीवन नाजुक यकृत ऊतक को नुकसान न पहुंचा ए। पारंपरिक तकनीकों से हेमेटोमा और परिगलन22जैसी जटिलताएं होती हैं। हाल ही में, इन समस्याओं को हल करने के लिए एक संशोधित तकनीक विकसित की गई थी यह संशोधित तकनीक जिगर की सतह पर ट्यूमर को कवर करने के लिए सीवन के बजाय अवशोषित हीमोस्टैटिक सामग्री का उपयोग करती है। हालांकि, यह संशोधित विधि पूरी तरह से जिगर parenchyma के भीतर ट्यूमर को कवर नहीं करता है। ट्यूमर का एक हिस्सा बाहर के संपर्क में आता है। हमने एक सर्जिकल ऑर्थोटोपिक इम्प्लांटेशन तकनीक विकसित की- यकृत की जेब विधि- ट्यूमर को पूरी तरह से परेंचिमा18के अंदर घर में ले जाने के लिए। हमारी विधि ट्यूमर के लिए एक प्राकृतिक वातावरण प्रदान करने के लिए जिगर में एक जेब बनाता है। जिगर की जेब विधि पारंपरिक तकनीक की तुलना में सरल है, जिससे हमें ऑपरेशन की शुरुआत से कुछ मिनटों के भीतर जिगर में प्रत्यारोपण खत्म करने की अनुमति मिलती है। इस विधि के परिणामस्वरूप यकृत में एक अकेले ट्यूमर का गठन होता है और मेटाटैस को ट्रिगर नहीं करता है, कम से कम जब तक हमने चूहों को देखा, जबकि एक ही कोशिका निलंबन की सुई इंजेक्शन इंट्रा-हेपेटिक मेटाएस्टेस17के रूप में प्रसारित होता है। एक अकेले ट्यूमर ट्यूमर के विकास का मूल्यांकन करने के लिए और अधिक उपयुक्त है और एक दवा परीक्षण में प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए उपयोगी होगा ।

मूल जिगर की जेब विधि18की तुलना में, हमने प्रत्यारोपण की तकनीकों को बढ़ाने के लिए अपने तरीकों को संशोधित किया है। सबसे पहले, चीरा के आकार को कम करने के लिए सर्जरी के दौरान एक रिट्रैक्टर का उपयोग नहीं किया गया था। जब चीरा छोटा होता है, तो हम सर्जरी में सिलाई समय को छोटा कर सकते हैं। पेट में 1 सेमी चीरा लगाकर, हम आसानी से बाईं पालि को कपास झाड़ू(चित्र4A-सी)के साथ बाहर ला सकते हैं। दूसरा, एक कपास झाड़ू जिगर की जेब बनाने के बाद hemostasis रोक कर तीन महत्वपूर्ण भूमिकानिभाता निभाता है, जिगर की जेब खोलने के लिए एक ट्यूमर हिस्सा डालने और ट्यूमर वापस धक्का के बिना जेब में ट्यूमर का हिस्सा बनाए रखने में सक्षम हो(चित्र4D- एफ)। औसत रक्तस्राव की मात्रा चूहों में रक्त की मात्रा को प्रसारित करने के लगभग 10% से कम थी। कम रक्तस्राव सर्जरी में महान विश्वास प्रदान की है। तीसरा, पेट के बाहर जिगर की पालि को ठीक करने के लिए एक कपड़े की चादर उपयोगी है। जिगर की पालि चादर से चिपक जाती है और इस प्रकार यह पेट में वापस फिसलने से पालि को रोकता है(चित्रा 4C)। एक आसानी से एक स्केलपेल के साथ जिगर की सतह में कटौती और जिगर की सतह के लिए एक सुई सुई सुई कर सकते हैं । नतीजतन, नाजुक जिगर के ऊतकों को घायल नहीं है।

हम मौजूद इस विधि के लिए दो समस्या निवारण सुझाव है । सबसे पहले, जब एक छोटी सी चीरा साइट का उपयोग किया जाता है, तो कभी-कभी एक बाईं पालि दिखाई नहीं देती है। इस स्थिति में बायां पालि वाले डायफ्राम से चिपके रहने की संभावना है। पालि छील करने के लिए बाईं पालि और डायाफ्राम के बीच कुंद-किनारे संदंश डालें। दूसरा, जब एक ट्यूमर हिस्सा संदंश के साथ जिगर की जेब में रखा जाता है, ट्यूमर संदंश से चिपके रहते हैं और इसके साथ वापस खींच सकते हैं। संदंश को पीछे हटते हुए सूती झाड़ू के साथ चीरा दबाएं। यह जेब से ट्यूमर के अव्यवस्था को रोकने के लिए अच्छी तरह से काम करता है।

ज़ेनोग्राफ्ट ट्यूमर माउस ऊतक से घिरे होते हैं, भले ही वे ऑर्थोटोपिक रूप से प्रत्यारोपित किए जाते हैं। रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर में मानव स्ट्रोमल कोशिकाओं को अनिवार्य रूप से माउस स्ट्रोमल कोशिकाओं द्वारा प्रतिस्थापित किया जाता है। आदर्श रूप में, माउस मॉडल बेहतर ट्यूमर के आसपास मानव स्ट्रोमल ऊतक प्रदान किया था । चिमेरिक मानवीकृत जिगर माउस या मानवीकृत प्रतिरक्षा माउस मॉडल यूवील मेलानोमा के engraftment का अध्ययन करने और यह मूल्यांकन करने में सहायक होंगे कि क्या दवा चयापचय मानव-यकृत या मानव-प्रतिरक्षा वातावरण24,25के समान है।

ऑर्थोटोपिक लिवर ट्यूमर ज़ेनोबेड़ा माउस मॉडल इमेजिंग अध्ययन के साथ ट्यूमर स्थापना के सत्यापन की आवश्यकता होती है। वाणिज्यिक रूप से उपलब्ध सीटी कंट्रास्ट एजेंट, माउस जिगर सीटी छवियों के लिए विकसित, सीटी पर जीवित राज्य में इंटीरियर जिगर ट्यूमर का पता लगाने की अनुमति देता है । कंट्रास्ट एजेंट विशेष रूप से सीटी पर सामान्य यकृत को बढ़ाता है। ट्यूमर की अएन्हांस्ड साइटको 26से अलग करना आसान है । एजेंट सीटी पर मुख्य ट्यूमर के आसपास छोटे ट्यूमर से कम 1 मिमी (बेटी पिंड) का पता लगाता है । एजेंट को माउस द्वारा सहन किया जा सकता है, और समय-समय पर यकृत ट्यूमर की निगरानी करना संभव बनाता है। एजेंट जिगर के खिलाफ कैंसर विरोधी दवाओं की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा-स्थानीय विद्वेष ट्यूमर ।

आम तौर पर, मूल रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर27,28,29की आनुवंशिक और हिस्टोलॉजिकल अखंडता के संरक्षण के लिए अपेक्षाकृत कम मार्ग संख्या (10 से कम) पर पीडीएक्स मॉडल को बनाए रखने की सिफारिश की जाती है। अधिकांश शोधकर्ता मार्ग और जानवरों की संख्या को कम करने के लिए पीडीएक्स मॉडल के कई मार्ग बनाने से परहेज करते हैं। एक बार रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर अस्थायी रूप से फ्रीजर में संरक्षित होते हैं, तो हम चूहों को बर्बाद किए बिना कम मार्ग संख्या पर पीडीएक्स मॉडल को नियंत्रित करने में सक्षम होते हैं। इसे बायोबैंकिंग स्ट्रैटजी कहा जाता है। कैंसर बायोबैंक ट्यूमर की विशेषताओं को बनाए रखने औरचूहोंकी संख्या 28,30को कम करने के लिए एक तर्कसंगत दृष्टिकोण है । एक उचित बायोबैंकिंग विधि स्थापित करने से भविष्य में रोगी की उपचार योजना या माउस दवा प्रभावकारिता परीक्षण को पूरा करने के लिए पीडीएक्स मॉडल की आपूर्ति को समायोजित किया जा सकता है। हमने कैंसर बायोबैंकिंग के लिए क्रायोपआरक्षित ट्यूमर का पुनः प्रत्यारोपण हासिल किया। हमें उम्मीद है कि यह सफलता निकट भविष्य में पीडीएक्स प्लेटफॉर्म उपयोग की सुविधा प्रदान करती है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

पांडुलिपि की समीक्षा के लिए हम एम ओहारा, के साइको और एम तराई के आभारी हैं। लेखक फॉक्स चेस कैंसर सेंटर में डॉ आर सातो द्वारा इस पांडुलिपि के संपादकीय और अंग्रेजी सहायता के लिए महत्वपूर्ण समीक्षा स्वीकार करते हैं । यहां वर्णित काम बोनी Kroll अनुसंधान कोष, मार्क Weinzierl अनुसंधान कोष, थॉमस जेफरसन विश्वविद्यालय में नेत्र मेलानोमा अनुसंधान कोष, ओसाका समुदाय फाउंडेशन, और JSPS KAKENHI अनुदान संख्या जेपी 18K15596 ओसाका सिटी में द्वारा समर्थित था विश्वविद्यालय. डॉ ए एप्लिन की प्रयोगशाला में अध्ययन ों को एनआईएच ग्रांट आर01 जीएम01 जीएम067893 द्वारा समर्थित किया गया था। इस परियोजना को डीन के परिवर्तनकारी विज्ञान पुरस्कार, थॉमस जेफरसन विश्वविद्यालय प्रोग्रामेटिक इनिशिएटिव अवार्ड द्वारा भी वित्त पोषित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Materials, tissues and animals
Buprenorphine
CO2 tank
Cryomedium
Exitron nano 12000 (Alkaline earth metal-based nanoparticle contrast agent) Miltenyl Biotec 130-095-700
HBSS 1x, with calcium & magnesium Corning 21-020-CM
Human liver metastatic uveal melanoma cell line
Human uveal melanoma tissue in the liver All tissue handling should be done in a Biosafety Level 2 hood. Be careful when working with human tissue; always use gloves and avoid direct skin contact. Assume patients may have been infected with HIV or other highly transmissible organisms. Do not process samples known to carry infections.
Iodine
Isoflurane Purdue Products 67618-150-17
Isopropanol Fisher scientific A416-1 Avoid direct contact to skin and eye and inhalation of anesthetic agent.
Liquid nitrogen
Matrigel HC BD 354248
NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) mice Jackson Lab 5557 4 to 8 weeks old
PBS 1x, without calcium and magnesium Corning 21-031-CM
RPMI 1640 Corning 10-013-CV
Sterile alcohol prep pad (70% isopropyl alcohol) Nice-Pak products B603
4% paraformaldehyde phosphate buffer solution Wako 163-20145
70% Ethyl alcohol solution Fisher Scientific 04-355-122
Name Company Catalog Number Comments
Equipments
Absorbable hemostat Johnson and Johnson 63713-0019-61
Autoclave
Body weight measure
Cautery Bovie Medical MC-23009
Cell counter
Centrifuzer
Cotton swab
Cryo freezing container NALGENE 5100-0001
Cryotube SARSTEDT 72.379
Curved scissors World Precision Instruments 503247
Curved ultrafine forceps World Precision Instruments 501302
Fabric sheet
Freezer
F/AIR Filter Canister Harvard Apparatus 600979
Heating pad
Isoflurane vaporizer Artisan Scientific 66317-1
Liquid nitrogen
Liquid nitrogen jar Thermo Fisher Scientific 2123
Micro-CT scan Siemens
Needle holder World Precision Instruments 501246
Petri dishes Fisher Scientific FB0875713
Pipette
Spray bottle
Sterile hood Biosafety level 2 cabinet
Sterile No.11 scalpel AD Surgical A300-11-0
Straight forceps World Precision Instruments 14226
Surgical drape
Tail vein restrainer Braintree Scientific TV-150-STD
Water bath
1 mL TB syringe with 27 G needle BD 309623
1.7 mL tube Bioexpress C-3260-1
5-0 PDO Suture AD Surgical S-D518R13
15 mL conical tubes AZER SCIENTIFIC ES-9152N
27 G needle BD 780301
27 G needle Hamilton 7803-01
50 mL conical tubes AZER SCIENTIFIC ES-9502N
50 µL micro syringe BD 80630
50 µL micro syringe Hamilton 7655-01
100 mL container Fisher Scientific 12594997
200μL tip

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References

  1. Aronow, M. E., Topham, A. K., Singh, A. D. Uveal Melanoma: 5-Year Update on Incidence, Treatment, and Survival (SEER 1973-2013). Ocular Oncology and Pathology. 4, (3), 145-151 (2018).
  2. Krantz, B. A., Dave, N., Komatsubara, K. M., Marr, B. P., Carvajal, R. D. Uveal melanoma: epidemiology, etiology, and treatment of primary disease. Clinical Ophthalmology. 11, 279-289 (2017).
  3. Gragoudas, E. S., et al. Survival of patients with metastases from uveal melanoma. Ophthalmology. 98, (3), 383-389 (1991).
  4. Diener-West, M., et al. Development of metastatic disease after enrollment in the COMS trials for treatment of choroidal melanoma: Collaborative Ocular Melanoma Study Group Report No. 26. Archives of Ophthalmology. 123, (12), 1639-1643 (2005).
  5. Collaborative Ocular Melanoma Study Group. Assessment of metastatic disease status at death in 435 patients with large choroidal melanoma in the Collaborative Ocular Melanoma Study (COMS): COMS report no. 15. Archives of Ophthalmology. 119, (5), 670-676 (2001).
  6. Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4, (9), 998-1013 (2014).
  7. Kim, M. P., et al. Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice. Nature Protocols. 4, (11), 1670-1680 (2009).
  8. Némati, F., et al. Establishment and characterization of a panel of human uveal melanoma xenografts derived from primary and/or metastatic tumors. Clinical Cancer Research. 16, (8), 2352-2362 (2010).
  9. Wilmanns, C., et al. Modulation of Doxorubicin sensitivity and level of p-glycoprotein expression in human colon-carcinoma cells by ectopic and orthotopic environments in nude-mice. International Journal of Oncology. 3, (3), 413-422 (1993).
  10. Kang, Y., et al. Proliferation of human lung cancer in an orthotopic transplantation mouse model. Experimental and Therapeutic. 1, (3), 471-475 (2010).
  11. Fichtner, I., et al. Establishment of patient-derived non-small cell lung cancer xenografts as models for the identification of predictive biomarkers. Clinical Cancer Research. 14, (20), 6456-6468 (2008).
  12. Marangoni, E., et al. A new model of patient tumor-derived breast cancer xenografts for preclinical assays. Clinical Cancer Research. 13, (13), 3989-3998 (2007).
  13. Bergamaschi, A., et al. Molecular profiling and characterization of luminal-like and basal-like in vivo breast cancer xenograft models. Molecular Oncology. 3, (5-6), 469-482 (2009).
  14. Ho, K. S., Poon, P. C., Owen, S. C., Shoichet, M. S. Blood vessel hyperpermeability and pathophysiology in human tumour xenograft models of breast cancer: a comparison of ectopic and orthotopic tumours. BMC Cancer. 12, 579 (2012).
  15. Hoffman, R. M. Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts. Nature Reviews Cancer. 15, (8), 451-452 (2015).
  16. Rubio-Viqueira, B., Hidalgo, M. Direct in vivo xenograft tumor model for predicting chemotherapeutic drug response in cancer patients. Clinical Pharmacology & Therapeutics. 85, (2), 217-221 (2009).
  17. Ozaki, S., et al. Establishment and Characterization of Orthotopic Mouse Models for Human Uveal MelanomaHepatic Colonization. American Journal of Pathology. 186, (1), 43-56 (2016).
  18. Kageyama, K., et al. Establishment of an orthotopic patient-derived xenograft mouse model using uveal melanomahepatic metastasis. Journal of Translational Medicine. 15, (1), 145 (2017).
  19. Fu, X. Y., Besterman, J. M., Monosov, A., Hoffman, R. M. Models of human metastatic colon cancer in nude mice orthotopically constructed by using histologically intact patient specimens. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88, (20), 9345-9349 (1991).
  20. Rashidi, B., et al. An orthotopic mouse model of remetastasis of human colon cancer liver metastasis. Clinical Cancer Research. 6, (6), 2556-2561 (2000).
  21. Fan, Z. C., et al. Real-time monitoring of rare circulating hepatocellular carcinoma cells in an orthotopic model by in vivo flow cytometry assesses resection on metastasis. Cancer Research. 72, (10), 2683-2691 (2012).
  22. Jacob, D., Davis, J., Fang, B. Xenograftictumor modelsinmiceforcancer research, atechnical review. Gene Therapy and Molecular Biology. 8, 213-219 (2004).
  23. Ahmed, S. U., et al. Generation of subcutaneous and intrahepatic human hepatocellular carcinoma xenografts in immunodeficient mice. Journal of Visualized Experiments. 25, (79), e50544 (2013).
  24. Kim, M., et al. Generation of humanized liver mouse model by transplant of patient-derived fresh human hepatocytes. Transplantation Proceedings. 46, (4), 1186-1190 (2014).
  25. Lavender, K. J., Messer, R. J., Race, B., Hasenkrug, K. J. Production of bone marrow, liver, thymus (BLT) humanized mice on the C57BL/6 Rag2(-/-)γc(-/-)CD47(-/-) background. Journal of Immunological Methods. 407, 127-134 (2014).
  26. Boll, H., et al. Micro-CT based experimental liver imaging using a nanoparticulate contrast agent: a longitudinal study in mice. PLoS One. 6, (9), e25692 (2011).
  27. Zhao, X., et al. Global gene expression profiling confirms the molecular fidelity of primary tumor-based orthotopic xenograft mouse models of medulloblastoma. Neuro-Oncology. 14, (5), 574-583 (2012).
  28. Rubio-Viqueira, B., et al. An in vivo platform for translational drug development in pancreatic cancer.Clinical. Cancer Research. 12, (15), 4652-4661 (2006).
  29. Siolas, D., Hannon, G. J. Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models. Cancer Research. 73, (17), 5315-5319 (2013).
  30. Alkema, N. G., et al. Biobanking of patient and patient-derived xenograft ovarian tumour tissue: efficient preservation with low and high fetal calf serum based methods. Scientific Reports. 6, (5), 14495 (2015).
इम्यूनोडिफिएंट चूहों में लिवर ऑर्थोटोपिक ह्यूमन यूवील मेलानोमा ज़ेनोबेड़ा प्लेटफॉर्म की पीढ़ी
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Kageyama, K., Ozaki, S., Sato, T. Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice. J. Vis. Exp. (153), e59941, doi:10.3791/59941 (2019).More

Kageyama, K., Ozaki, S., Sato, T. Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice. J. Vis. Exp. (153), e59941, doi:10.3791/59941 (2019).

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