Summary

Modellering av storleks spektrumet för Makroryggradslösa djur och fiskar i ström ekosystem

Published: July 30, 2019
doi:

Summary

Detta är ett protokoll för att modellera storleken spektrum (skala förhållandet mellan individuell massa och befolkningstäthet) för kombinerade fisk och ryggradslösa data från wadable strömmar och floder. Metoder inkluderar: fälttekniker för att samla in kvantitativa fisk och ryggradslösa djur prover; Lab metoder för att standardisera fältdata; och statistisk dataanalys.

Abstract

Storleken spektrum är en omvänd, allometriska skalning relation mellan genomsnittlig kroppsmassa (M) och densitet (D) av individer inom en ekologisk gemenskap eller livsmedel webben. Viktigt är att storleken spektrum förutsätter att enskilda storlek, snarare än art ‘ beteendemässiga eller livshistoria egenskaper, är den primära bestämnings faktorn för överflöd inom ett ekosystem. Således, till skillnad från traditionella allometriska relationer som fokuserar på Art-nivå data (t. ex. menar artens kroppsstorlek kontra befolkningstäthet), är storleks spektra analyser “ataxic”-enskilda prover identifieras endast genom sin storlek, utan hänsyn till taxonomisk identitet. Storlek Spectra modeller är effektiva representationer av traditionella, komplexa livsmedel Webs och kan användas i beskrivande såväl som prediktiva sammanhang (t. ex. förutsäga svar av stora konsumenter till förändringar i basala resurser). Empiriska studier från olika akvatiska ekosystem har också rapporterat måttliga till höga nivåer av likhet i storlek Spectra sluttningar, vilket tyder på att vanliga processer kan reglera överflöd av små och stora organismer i mycket olika inställningar. Detta är ett protokoll för att modellera community-nivå storlek spektrum i wadable strömmar. Protokollet består av tre huvudsteg. Först samla kvantitativa bentiska fisk och ryggradslösa prover som kan användas för att uppskatta lokala tätheter. För det andra, standardisera fisken och ryggradslösa data genom att omvandla alla individer till ataktisk-enheter (dvs individer identifierade efter storlek, oavsett taxonomisk identitet), och summera individer inom log2 storlek papperskorgar. För det tredje, Använd linjär regression för att modellera relationen mellan ataktisk M och D uppskattningar. Detaljerade instruktioner finns här för att slutföra var och en av dessa steg, inklusive anpassad programvara för att underlätta D uppskattning och storlek Spectra modellering.

Introduction

Kroppsstorlek skalning relationer, såsom den positiva kopplingen mellan kroppsmassa och ämnesomsättning, är välkända på individuell organism nivå och nu studeras på högre nivåer av organisation1,2,3 . Dessa allometriska relationer är oftast Power-Law funktioner i form Y = amb, där Y är variabeln av intresse (t. ex. metabolism, överflöd, eller hem intervall storlek), M är kroppsmassan av en enda eller genomsnittlig individuell, b är en skalningskoefficient, och a är en konstant. För statistisk bekvämlighet är Y -och M -data ofta loggtransformerade före analys och modelleras sedan med linjära ekvationer av formulär loggen (y) = log (a) + b log (M), där b och log ( a) bli linjär modell lutning och skärningspunkt, respektive.

Storleken spektrum är en typ av allometriska relation som förutspår densitet (D, antalet individer per enhet område) eller biomassa (B, den summerade massan av individer per enhet område) som en funktion av M (se avsnitt 4 för ytterligare information om användningen av “normaliserade” D -eller B -skattningar.) Liksom andra skalnings relationer mellan m och D eller mellan m och Bspelar storleks spektrumet en central roll i grundläggande och tillämpad ekologi. På populationsnivå tolkar biologer ofta negativa D Image 1 M -förhållanden som bevis på densitetsberoende överlevnad eller som modeller av ekosystemens bärförmåga (dvs. själv gallring regeln)4, 5. På gemenskapsnivå kan B Image 1 M -relationer användas för att studera effekter på systemnivå av antropogena störningar, till exempel storleks selektivt fiske6,7. Allometrisk skalning av D och B med M är också centralt för de senaste insatserna för att förena befolkning, gemenskap och ekosystemekologi2,8,9.  

Ett bestämt viktigt kännetecken av storleksanpassa spectrumen är faktumet att det är fullständigt ataktisk9,10. Denna punkt är lätt att missa när man jämför scatterplots av D Image 1 m eller B Image 1 m data men skillnaden mellan taxic och ataktisk modeller är en kritisk en. I taxic-modeller används ett enda M -värde för att representera den genomsnittliga kroppsmassan för varje individ av en given art eller taxa11. I ataktisk-modeller partitioneras alla individer inom en datauppsättning mellan en serie kropps storleksintervall eller M -fack, oavsett deras taxonomiska identitet12. Det sistnämnda är ataktisk-metoden fördelaktigt i akvatiska ekosystem där många taxa uppvisar obestämbart tillväxt och upplever en eller flera ontogenetiska förändringar i utfodringsbeteende; i dessa fall, en enda art-nivå M genomsnitt kommer att skymma det faktum att en art kan fylla olika funktionella roller under hela sin livshistoria9,13,14

Här presenterar vi ett komplett protokoll för att kvantifiera storleken spektrum inom wadable strömmar och floder. Protokollet inleds med fält provtagningsmetoder för att samla in nödvändig fisk och bentiska makroinvertebratdata. Fisk kommer att samlas in genom en “Three-pass utarmning” provtagning process. Överflöd kommer då att uppskattas från utarmning data med zippin metod15. I utarmning provtagning, enskilda fiskar inom en sluten studie nå (dvs, individer kan varken ange eller lämna den bifogade Reach) avlägsnas från Reach genom tre på varandra följande prover. Således kommer antalet kvarvarande fiskar successivt utarmat. Från denna utarmning trend, kan det totala överflöd inom studiens räckvidd uppskattas sedan omvandlas till D (i fisk per m2), med hjälp av den kända ytan av studien Reach. Bentiska makroryggradslösa djur kommer att samlas in med standard provtagare med fast areal, som sedan identifieras och mäts i laboratoriet.

Därefter kommer de kombinerade Fish-och av-data att partitioneras mellanstorleks behållare. Traditionellt har oktav-eller log2 -skalan (dvs. dubbleringsintervall) använts för att ställa in storleksgränsen16. När en lista över storlek papperskorgar har upprättats, partitionering av enskilda bentiska makroinvertebrater bland deras respektive storlek papperskorgar är enkelt eftersom ryggradslösa djur är direkt räknas som antalet individer per enhet område. Det är dock mer abstrakt att uppskatta fisk abundans inom storleks soptunnor, eftersom dessa uppskattningar härleds från utarmningen. Det finns därför detaljerade anvisningar för uppskattning av fisk förekomst inom storleks behållare, oavsett taxonomisk identitet, från utarmning av prov data.

Slutligen kommer linjär regression att användas för att modellera storleks spektrumet. Detta protokoll är fullt kompatibelt med den ursprungliga, allmänna metoden för Kerr och Dickie16 och identisk med de metoder som används av McGarvey och Kirk, 201817 i en studie av fisk och ryggradslösa storlek Spectra i West Virginia strömmar. Genom att använda detta protokoll, utredare kan försäkra att deras resultat är direkt jämförbara med andra studier som bygger på Kerr och Dickie16, därmed påskynda en bred och robust förståelse av kroppsstorlek skalning relationer i sötvatten ekosystemen och de mekanismer som driver dem.

Protocol

Alla metoder som beskrivs här har godkänts av den institutionella djuromsorg och användning kommittén (IACUC) av Virginia Commonwealth University. 1. insamling och bearbetning av fiskprover Isolating fiskar inom studien Reach för att skapa en sluten fisk assemblage Identifiera uppströms och nedströms (riktningen är relativ till en SURVEYOR Facing “uppströms” och mot vattenströmmen) ändarna av studien Reach sedan markera ändarna …

Representative Results

Föredöme resultat, inklusive ursprungliga fältdata, presenteras för Slaunch Fork, West Virginia, en liten bäck i södra West Virginia. Ytterligare storlek Spectra modellresultat presenteras också för två andra strömmar i samma region: Camp Creek och Cabin Creek, West Virginia. Dessa är de tre studieplatser som ingår i McGarvey och Kirk17, men data som presenteras här är från nya prover som samlats in i maj 2015. En fullt fungerade, manuell exempel på storleken Spectra modellering pr…

Discussion

Detta ataktisk size Spectra-protokollet kan användas för att kvantifiera och modell storlek struktur inom samhällen av ström fiskar och ryggradslösa djur. Tidigare storlek Spectra studier i ström ekosystem har varierat från grundläggande beskrivande forskning39,40 till jämförelser längs en längsgående flod profil41 och bland olika biogeografiska regioner42. Säsongs jämförelser har utförts<sup class=…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Finansieringen av detta arbete tillhandahölls av National Science Foundation (Grant DEB-1553111) och Eppleys stiftelse för vetenskaplig forskning. Detta manuskript är VCU Rice Rivers Center bidrag #89.

Materials

Chest waders Multiple options n/a Personal protective equipment for use during electrofishing. Do NOT use 'breatheable' waders as electrical current will pass through them.
Rubber lineman's gloves Multiple options n/a Personal protective equipment for use during electrofishing.
Dip nets with fiberglass poles Multiple options n/a Used to capture stunned fishes during electrofishing.
Backpack electrofishing unit Smith-Root; Halltech; Midwest Lake Management; Aqua Shock Solutions www.smith-root.com; www.halltechaquatic.com; https://midwestlake.com; https://aquashocksolutions.com/ Backpack electrofishers are currently manufactured and distributed by four independent companies in North America. Prices and warranty/technical support are the most important factors in choosing a vendor.
Block nets/seines (×2) Duluth Nets https://duluthfishnets.com/ Necessary length will depend on stream width. 3/8 inch mesh is recommended.
Cam-action utility straps with 1 inch nylon webbing (×4) Multiple options n/a Used to secure/anchor block nets. Available at auto supply, hardware, and department stores.
Large tent stakes (×4) Multiple options n/a Used to secure/anchor block nets. Available at camping and department stores.
5 gallon plastic buckets (×5) Multiple options n/a Used to hold and transport fish during electrofishing. Available at hardware and paint supply stores.
10-20 gallon totes (×3) Multiple options n/a Used as livewells, sedation tanks, and recovery bins for captured fishes. Available at hardware and department stores.
Battery powered 'bait bucket' aeration pumps Cabelas IK-019008 Used to aerate fish holding bins during field processing.
Fish anesthesia (Tricaine-S) Syndel www.syndel.com Used to sedate fishes for field processing. Tricaine-S is regulated by the U.S. Food and Drug Administration.
Folding camp table and chairs Cabelas IK-518976; IK-552777 Used to process fish samples.
Pop-up canopy Multiple options n/a Used as necessary for sun and rain protection.
Fish measuring board Wildco 3-118-E40 Used to measure fish lengths.
Battery powered field scale with weighing dish Multiple options n/a Used to weigh fishes. Must weigh be accurate to 0.1 or 0.01 grams.
Clear plastic wind/rain baffle Multiple options n/a Used to shield scale in rainy or windy conditions. Must be large enough to cover the scale and a weighing dish.
White plastic or enamel examination trays Multiple options n/a Trays are essential for examining fishes in the field.
Stainless steel forceps Multiple options n/a Forceps are helpful when examining small fishes and in transfering invertebrates to specimen jars.
Hand magnifiers Multiple options n/a Magnification is often helpful when identifying fish specimens in the field.
Fish identification keys n/a n/a Laminated keys that are custom prepared for specific locations are most effective.
Datasheets printed on waterproof paper Rite in the Rain n/a Waterproof paper is essential when working with aquatic specimens.
Retractable fiberglass field tapes Lufkin n/a Used to measure stream channel dimensions.
Surber sampler or Hess sampler Wildco 3-12-D56; 3-16-C52 Either of these fixed-area benthic samplers will work well in shallow streams with gravel or pebble substrate.
70% ethanol or isopropyl alcohol Multiple options n/a Used as invertebrate preservative.
Widemouth invertebrate specimen jars (20-32 oz.) U.S. Plastic Corp. 67712 Any widemouth plastic jars will work but these particular jars are durable and inexpensive.

References

  1. Peters, R. H. . The ecological implications of body size. , (1983).
  2. Brown, J. H., Gillooly, J. F., Allen, A. P., Savage, V. M., West, G. B. Toward a metabolic theory of ecology. Ecology. 85 (7), 1771-1789 (2004).
  3. Marquet, P. A., et al. Scaling and power-laws in ecological systems. Journal of Experimental Biology. 208 (9), 1749-1769 (2005).
  4. Bohlin, T., Dellefors, C., Faremo, U., Johlander, A. The energetic equivalence hypothesis and the relation between population-density and body-size in stream-living salmonids. The American Naturalist. 143 (3), 478-493 (1994).
  5. Dunham, J. B., Vinyard, G. L. Relationships between body mass, population density, and the self-thinning rule in stream-living salmonids. Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 54 (5), 1025-1030 (1997).
  6. Jennings, S., Blanchard, J. L. Fish abundance with no fishing: predictions based on macroecological theory. Journal of Animal Ecology. 73 (4), 632-642 (2004).
  7. Petchey, O. L., Belgrano, A. Body-size distributions and size-spectra: universal indicators of ecological status?. Biology Letters. 6 (4), 434-437 (2010).
  8. Woodward, G., et al. Body size in ecological networks. Trends in Ecology and Evolution. 20 (7), 402-409 (2005).
  9. Trebilco, R., Baum, J. K., Salomon, A. K., Dulvy, N. K. Ecosystem ecology: size-based constraints on the pyramids of life. Trends in Ecology and Evolution. 28 (7), 423-431 (2013).
  10. White, E. P., Ernest, S. K. M., Kerkhoff, A. J., Enquist, B. J. Relationships between body size and abundance in ecology. Trends in Ecology and Evolution. 22 (6), 323-330 (2007).
  11. Schmid, P. E., Tokeshi, M., Schmid-Araya, J. M. Relation between population density and body size in stream communities. Science. 289 (5484), 1557-1560 (2000).
  12. Morin, A., Nadon, D. Size distribution of epilithic lotic invertebrates and implications for community metabolism. Journal of the North American Benthological Society. 10 (3), 300-308 (1991).
  13. Mittelbach, G. G., Persson, L. The ontogeny of piscivory and its ecological consequences. Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 55 (6), 1454-1465 (1998).
  14. Woodward, G., Hildrew, A. G. Body-size determinants of niche overlap and intraguild predation within a complex food web. Journal of Animal Ecology. 71 (6), 1063-1074 (2002).
  15. Zippin, C. The removal method of population estimation. Journal of Wildlife Management. 22 (1), 82-90 (1958).
  16. Kerr, S. R., Dickie, L. M. . The biomass spectrum: a predator-prey theory of aquatic production. , (2001).
  17. McGarvey, D. J., Kirk, A. J. Seasonal comparison of community-level size-spectra in southern coalfield streams of West Virginia (USA). Hydrobiologia. 809 (1), 65-77 (2018).
  18. Reynolds, J. B., Kolz, A. L., Zale, A. V., Parrish, D. L., Sutton, T. M. Electrofishing. Fisheries techniques. 8, 305-361 (2012).
  19. Bowker, J., Trushenski, J. Fish drug questions answered by the FDA. Fisheries. 38 (12), 549-552 (2013).
  20. Topic Popovic, N., et al. Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia. Journal of Applied Ichthyology. 28 (4), 553-564 (2012).
  21. Trautman, M. B. . The fishes of Ohio. , (1981).
  22. Riley, S. C., Fausch, K. D. Underestimation of trout population size by maximum-likelihood removal estimates in small streams. North American Journal of Fisheries Management. 12 (4), 768-776 (1992).
  23. Merritt, R. W., Cummins, K. W., Resh, V. H., Batzer, D. P., Merritt, R. W., Cummins, K. W., Berg, M. B. Sampling aquatic insects: collection devices, statistical considerations, and rearing procedures. An introduction to the aquatic insects of North America. , 15-37 (2008).
  24. Hauer, F. R., Resh, V. H., Hauer, F. R., Lamberti, G. A. Macroinvertebrates. Methods in stream ecology. 1, 297-319 (2017).
  25. Thorp, J. H., Covich, A. P. . Ecology and classification of North American freshwater invertebrates. , (2010).
  26. Merritt, R. W., Cummins, K. W., Berg, M. B. . An introduction to the aquatic insects of North America. , (2008).
  27. Stewart, K. W., Stark, B. P. . Nymphs of North American stonefly genera (Plecoptera). , (2002).
  28. Wiggins, G. B. . Larvae of the North American caddisfly genera (Trichoptera). , (1998).
  29. Benke, A. C., Huryn, A. D., Smock, L. A., Wallace, J. B. Length-mass relationships for freshwater macroinvertebrates in North America with particular reference to the Southeastern United States. Journal of the North American Benthological Society. 18 (3), 308-343 (1999).
  30. Smock, L. A. Relationships between body size and biomass of aquatic insects. Freshwater Biology. 10 (4), 375-383 (1980).
  31. Waters, T. F. Secondary production in inland waters. Adv. Ecol. Res. 10, 91-164 (1977).
  32. Carle, F. L., Strub, M. R. New method for estimating population-size from removal data. Biometrics. 34 (4), 621-630 (1978).
  33. Ogle, D. H., Wheeler, P., Dinno, A. FSA: fisheries stock analysis. R package version 0.8.22.9000. , (2018).
  34. Lockwood, R. N., Schneider, J. C., Schneider, J. C. Stream fish population estimates by mark-and-recapture and depletion methods. Manual of fisheries survey methods II: with periodic updates. 7, (2000).
  35. Blanco, J. M., Echevarría, F., García, C. M. Dealing with size-spectra: some conceptual and mathematical problems. Scientia Marina. 58 (1-2), 17-29 (1994).
  36. White, E. P., Enquist, B. J., Green, J. L. On estimating the exponent of power-law frequency distributions. Ecology. 89 (4), 905-912 (2008).
  37. Vidondo, B., Prairie, Y. T., Blanco, J. M., Duarte, C. M. Some aspects of the analysis of size spectra in aquatic ecology. Limnology and Oceanography. 42 (1), 184-192 (1997).
  38. Sprules, W. G., Barth, L. E. Surfing the biomass size spectrum: some remarks on history, theory, and application. Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 73 (4), 477-495 (2016).
  39. Poff, N. L., et al. Size structure of the metazoan community in a Piedmont stream. Oecologia. 95 (2), 202-209 (1993).
  40. Ramsay, P. M., et al. A rapid method for estimating biomass size spectra of benthic metazoan communities. Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 54 (8), 1716-1724 (1997).
  41. Solimini, A. G., Benvenuti, A., D’Olimpio, R., Cicco, M. D., Carchini, G. Size structure of benthic invertebrate assemblages in a Mediterranean river. Journal of the North American Benthological Society. 20 (3), 421-431 (2001).
  42. Huryn, A. D., Benke, A. C., Hildrew, A., Raffaelli, D., Edmonds-Brown, R. Relationship between biomass turnover and body size for stream communities. Body size: the structure and function of aquatic ecosystems. 4, 55-76 (2007).
  43. Gaedke, U. The size distribution of plankton biomass in a large lake and its seasonal variability. Limnology and Oceanography. 37 (6), 1202-1220 (1992).
  44. Stead, T. K., Schmid-Araya, J. M., Schmid, P. E., Hildrew, A. G. The distribution of body size in a stream community: one system, many patterns. Journal of Animal Ecology. 74 (3), 475-487 (2005).
  45. Brose, U., et al. Consumer-resource body-size relationships in natural food webs. Ecology. 87 (10), 2411-2417 (2006).
  46. Mehner, T., et al. Empirical correspondence between trophic transfer efficiency in freshwater food webs and the slope of their size spectra. Ecology. 99 (6), 1463-1472 (2018).
  47. Daan, N., Gislason, H. G., Pope, J. C., Rice, J. Changes in the North Sea fish community: evidence of indirect effects of fishing?. ICES Journal of Marine Science. 62 (2), 177-188 (2005).
  48. Murry, B. A., Farrell, J. M. Resistance of the size structure of the fish community to ecological perturbations in a large river ecosystem. Freshwater Biology. 59 (1), 155-167 (2014).
  49. Broadway, K. J., Pyron, M., Gammon, J. R., Murry, B. A. Shift in a large river fish assemblage: body-size and trophic structure dynamics. PLoS ONE. 10 (4), e0124954 (2015).
  50. Vila-Martínez, N., Caiola, N., Ibáñez, C., Benejam, L., Brucet, S. Normalized abundance spectra of fish community reflect hydro-peaking on a Mediterranean large river. Ecological Indicators. 97, 280-289 (2019).
  51. Brucet, S., et al. Size-based interactions across trophic levels in food webs of shallow Mediterranean lakes. Freshwater Biology. 62 (11), 1819-1830 (2017).
  52. Ersoy, Z., et al. Size-based interactions and trophic transfer efficiency are modified by fish predation and cyanobacteria blooms in Lake Mývatn, Iceland. Freshwater Biology. 62 (11), 1942-1952 (2017).
  53. Arranz, I., Hsieh, C. H., Mehner, T., Brucet, S. Systematic deviations from linear size spectra of lake fish communities are correlated with predator–prey interactions and lake-use intensity. Oikos. 128 (1), 33-44 (2019).
  54. Jennings, S., et al. Long-term trends in the trophic structure of the North Sea fish community: evidence from stable-isotope analysis, size-spectra and community metrics. Marine Biology. 141 (6), 1085-1097 (2002).
  55. Guiet, J., Poggiale, J. C., Maury, O. Modelling the community size-spectrum: recent developments and new directions. Ecological Modelling. 337, 4-14 (2016).
  56. Robinson, J. P. W., et al. Fishing degrades size structure of coral reef fish communities. Global Change Biology. 23 (3), 1009-1022 (2017).
  57. Reuman, D. C., Mulder, C., Raffaelli, D., Cohen, J. E. Three allometric relations of population density to body mass: theoretical integration and empirical tests in 149 food webs. Ecology Letters. 11 (11), 1216-1228 (2008).
  58. Huryn, A. D., Wallace, J. B., Anderson, N. H., Merritt, R. W., Cummins, K. W., Berg, M. B. Habitat, life history, secondary production, and behavioral adaptations of aquatic insects. An introduction to the aquatic insects of. 5, 55-103 (2008).
  59. Werner, E. E., Gilliam, J. F. The ontogenetic niche and species interactions in size-structured populations. Annual Review of Ecology and Systematics. 15 (1), 393-425 (1984).
  60. Edwards, A. M., Robinson, J. P. W., Plank, M. J., Baum, J. K., Blanchard, J. L. Testing and recommending methods for fitting size spectra to data. Methods in Ecology and Evolution. 8 (1), 57-67 (2017).
  61. Roell, M., Orth, D. Production of three crayfish populations in the New River of West Virginia, USA. Hydrobiologia. 228 (3), 185-194 (1992).
  62. Hawkins, C. P., Murphy, M. L., Anderson, N. H., Wilzbach, M. A. Density of fish and salamanders in relation to riparian canopy and physical habitat in streams of the northwestern United States. Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 40 (8), 1173-1185 (1983).
  63. Rabeni, C. F., Collier, K. J., Parkyn, S. M., Hicks, B. J. Evaluating techniques for sampling stream crayfish (Paranephrops planifrons). New Zealand Journal of Marine and Freshwater Research. 31 (5), 693-700 (1997).
  64. DiStefano, R. J., Gale, C. M., Wagner, B. A., Zweifel, R. D. A sampling method to assess lotic crayfish communities. Journal of Crustacean Biology. 23 (3), 678-690 (2003).
  65. Price, J. E., Welch, S. M. Semi-quantitative methods for crayfish sampling: sex, size, and habitat bias. Journal of Crustacean Biology. 29 (2), 208-216 (2009).
  66. Sheldon, R. W., Sutcliffe, W. H., Paranjape, A. M. Structure of pelagic food chain and relationship between plankton and fish production. Journal of the Fisheries Research Board of Canada. 34 (12), 2344-2353 (1977).
  67. Andersen, K., et al. Asymptotic size determines species abundance in the marine size spectrum. The American Naturalist. 168 (1), 54-61 (2006).

Play Video

Cite This Article
McGarvey, D. J., Woods, T. E., Kirk, A. J. Modeling the Size Spectrum for Macroinvertebrates and Fishes in Stream Ecosystems. J. Vis. Exp. (149), e59945, doi:10.3791/59945 (2019).

View Video