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Medicine

एक संशोधित गैर सीवन कफ तकनीक का उपयोग कर Murine ग्रीवा महाधमनी प्रत्यारोपण मॉडल

Published: November 2, 2019 doi: 10.3791/59983
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 2, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1,3
1Department of General, Visceral, and Transplant Surgery, Ludwig Maximilian University of Munich, 2Walter-Brendel-Centre of Experimental Medicine, Ludwig Maximilian University of Munich, 3Department of General, Visceral and Cancer Surgery, University Hospital of Cologne, University of Cologne

Summary

यहाँ, हम एक गर्भाशय ग्रीवा murine मॉडल में गैर सीवन कफ तकनीक का उपयोग कर चूहों में विषमस्थानिक महाधमनी प्रत्यारोपण का एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इस मॉडल का उपयोग पुरानी एलोग्रैफ्ट वास्कुलोपैथी (सीएवी) की अंतर्निहित विकृति का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है और इसके गठन को रोकने के लिए नए चिकित्सीय एजेंटों का मूल्यांकन करने में मदद कर सकता है।

Abstract

शक्तिशाली इम्यूनोसप्रेसिव प्रोटोकॉल की शुरूआत के साथ, तीव्र अस्वीकृति एपिसोड की रोकथाम और चिकित्सा में अलग-अलग अग्रिम संभव हैं। हालांकि, पिछले दशकों में प्रतिरोपित ठोस अंगों के दीर्घकालिक परिणामों में केवल मामूली सुधार देखा जा सकता है। इस संदर्भ में, क्रोनिक एलोग्रैफ्ट वास्कुलोपैथी (सीएवी) अभी भी हृदय, गुर्दे और फुफ्फुसीय प्रत्यारोपण में देर से अंग विफलता के प्रमुख कारण का प्रतिनिधित्व करता है।

इस प्रकार अब तक, CAV विकास के अंतर्निहित रोगजनन स्पष्ट नहीं है, समझा क्यों प्रभावी उपचार रणनीतियों वर्तमान में याद कर रहे हैं और प्रासंगिक प्रयोगात्मक मॉडल के लिए एक की जरूरत पर बल देने के क्रम में अंतर्निहित pathophysiology के लिए अग्रणी अध्ययन करने के लिए CAV गठन. निम्नलिखित प्रोटोकॉल एक संशोधित गैर सीवन कफ तकनीक का उपयोग कर एक murine hetertopic गर्भाशय ग्रीवा महाधमनी प्रत्यारोपण मॉडल का वर्णन करता है। इस तकनीक में, वक्ष महाधमनी का एक खंड सही आम ग्रीवा धमनी में interpositioned है. गैर-सीवन कफ तकनीक के उपयोग के साथ, जानने के लिए एक आसान और पुनरुत्पाद्य मॉडल स्थापित किया जा सकता है, सीवन संवहनी सूक्ष्म एनास्टोमोस के संभावित विषमता को कम कर सकता है।

Introduction

पिछले छह दशकों में, ठोस अंग प्रत्यारोपण एक प्रयोगात्मक प्रक्रिया से अंत चरण अंग विफलता1के उपचार के लिए देखभाल के एक मानक के लिए विकसित किया गया है। एंटीमाइक्रोबियल एजेंटों, शल्य चिकित्सा तकनीकों और इम्यूनोसप्रेसिव रेजीमेंटों में प्रगति के कारण, पिछले दशकों में ठोस अंग प्रत्यारोपण की प्रारंभिक सफलता दर में काफी वृद्धि हुई है2.

हालांकि, लंबे समय तक भ्रष्टाचार जीवित रहने की दर में एक ही तरीके से काफी सुधार नहींहुआ है 3. सीएवी का विकास दीर्घकालिक अस्तित्व को सीमित करने वाला प्रमुख कारक है4,5,6. इस विकृति चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं से मिलकर एक गाढ़ा neointimal परत के गठन की विशेषता है, पोत के प्रगतिशील संकुचन और प्रत्यारोपित ठोस अंग के लगातार malperfusion के लिए अग्रणी. हृदय प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं में, CAV घावों प्रत्यारोपण7के बाद 3 साल रोगियों के 75% तक में निदान किया जा सकता है।

सीएवी की पैथोफिजियोलॉजी अभी तक पूरी तरह से समझ में नहीं आ रही है। यह कई इम्यूनोलॉजिकल और गैर-प्रतिरक्षा कारकों से संबंधित प्रतीत होता है, जिससे बाद के एंडोथेलियल सक्रियण और रोग8के साथ एंडोथेलियल क्षति होती है। इस प्रकार अब तक, कोई कारण उपचार विकल्प CAV की रोकथाम के लिए मौजूद है, एक reproduible छोटे पशु मॉडल के लिए की जरूरत पर बल देने के क्रम में गठन और CAV के संभावित चिकित्सा का अध्ययन.

murine महाधमनी प्रत्यारोपण मॉडल के उपयोग के साथ, घावों की तरह CAV प्रत्यारोपण के बाद 4 सप्ताह देखा जा सकता है. उन घावों में मुख्य रूप से संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं से मिलकर बनता है, जिससे मानव विकृति जैसा होता है। ट्रांसजेनिक की एक विस्तृत विविधता की वजह से और चूहों बाहर दस्तक, प्रत्यारोपण जुड़े रोगों में माउस मॉडल का उपयोग नए चिकित्सीय विकल्पों की पहचान करने और उनके विकास को समझने के लिए एक अनूठा अवसर प्रदान करता है। हालांकि प्रतिरोपित वाहिकाओं के छोटे व्यास के कारण, माउस मॉडल का उपयोग आमतौर पर लंबे समय तक सीखने के घटता और एक प्रारंभिक उच्च जटिलता दर9के साथ जुड़ा हुआ है। गैर सीवन कफ तकनीक की शुरूआत के साथ, ऑपरेशन के इस सबसे चुनौतीपूर्ण भाग को सुविधाजनक बनाया जा सकता है और एनास्टोमोसिस का व्यास स्थिर रखा जाता है10,11.

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Protocol

सभी प्रयोगों जर्मन पशु कल्याण अधिनियम के दिशा निर्देशों के अनुसार प्रदर्शन किया गया (TierSchG.) (A$: 55.2-1-54-2532.Vet_02-80-2015).

1. पशु आवास

  1. प्रयोगों के लिए, दाता जानवरों के रूप में C57BL/6 चूहों के साथ 20-25 ग्राम वजन पुरुष C57BL/6 और BALB/c चूहों का उपयोग करें।
  2. स्वास्थ्य निगरानी12के लिए FELASA दिशा निर्देशों के अनुसार, एक बाधा रोगज़नक़ मुक्त सुविधा में जानवरों और घर खरीद.
  3. संवर्धन घोंसले की सामग्री के साथ मानक Makrolon पिंजरों में चूहों रखें. 12 एच के एक दिन /रात चक्र में पानी और छर्रों भोजन के लिए विज्ञापन libitum पहुँच प्रदान करें।
  4. कमरे के तापमान को 22 डिग्री सेल्सियस और सापेक्ष आर्द्रता को 55 डिग्री 5% पर बनाए रखें।

2. प्राप्तकर्ता तैयारी

  1. सबसे पहले, प्राप्तकर्ता जानवर (C57BL/6) को मिडाज़ोलम (5 मिलीग्राम/किलोग्राम; 5 मिलीग्राम/एमएल), मेडेटोमीडिन (0.5 मिलीग्राम/किलोग्राम; 1 मिलीग्राम/एमएल) और फेनेटाइल (0.05 मिलीग्राम/एमएल; 0.05 मिलीग्राम/एमएल) के इंट्रापेरिटोनल इंजेक्शन के साथ एनेस्थेटाइज करें।
    नोट: संज्ञाहरण की सही गहराई 5-10 मिनट में पहुँचा जाना चाहिए.
    1. संज्ञाहरण की गहराई की पुष्टि करने के लिए सजगता की जांच करने के लिए संदंश के साथ पिछले पैर चुटकी।
  2. छोटे जानवरों के लिए एक इलेक्ट्रिक बाल क्लिपर के साथ गर्भाशय ग्रीवा पार्श्व क्षेत्र के सभी बाल क्लिप और प्रक्रिया के दौरान बाहर सुखाने से आंखों को रोकने के लिए कपास swabs के साथ नेत्र मरहम लागू होते हैं।
  3. माइक्रोस्कोप के नीचे एक हीटिंग पैड पर एक सुपाच्य स्थिति में जानवर प्लेस और धीरे त्वचा संवेदनशील प्लास्टर स्ट्रिप्स के साथ ऑपरेटिंग टेबल करने के लिए अपने पैरों टेप।
  4. अपने सिर को पीछे की ओर झुकाएं और शराब के साथ कई बार ऑपरेटिव क्षेत्र को साफ़ करें।
  5. जुगल चीरा से एक त्वचा चीरा छोटे कैंची के साथ सही निचले mandible करने के लिए बनाओ.
  6. पोत पेडिकल के द्विध्रुवी कॉटरी और माइक्रोसेसर के साथ बाद में चीरा के माध्यम से उपमंडीबलर ग्रंथि के सही निचले पालि को निकालें।
  7. ऊपरी और निचले हिस्से के द्विध्रुवी कॉटरी के माध्यम से सही स्टर्नोक्लेडोमास्टॉइड मांसपेशी निकालें और आम ग्रीवा धमनी तक पहुंच प्राप्त करने के लिए माइक्रोसिसेडर के साथ बाद में चीरा।
  8. आसपास के संयोजी ऊतक को ठीक संदंश के साथ खींच कर आम ग्रीवा धमनी को दूर-दूर तक और निकटस्थ रूप से व्यवस्थित करें।
  9. आम ग्रीवा धमनी के बीच प्रत्येक के बीच कम से कम दूरी के साथ दो 7-0 रेशम लिगेचर टाई और लिगेचर के बीच ठीक microscissors के साथ आम ग्रीवा धमनी transect.
  10. सन्निकट, ligated अंत कफ के माध्यम से गुजरती हैं और यह एक छोटी धमनी दबाना के साथ तय.
    नोट: कफ है कि इस प्रक्रिया में इस्तेमाल किया गया 0.610 मिमी के एक बाहरी व्यास और 0.0254 मिमी की एक दीवार मोटाई के साथ polyimide की ट्यूबों से microscissors के साथ काट रहे थे. पूरा कफ एक आधा है, जो कफ प्रक्रिया के लिए प्रयोग किया जाता है के साथ 2 मिमी की लंबाई थी, एक पूर्ण सिलेंडर जा रहा है और अन्य आधा है, जो clamped है, एक आधा सिलेंडर जा रहा है.
  11. ठीक microscissors के साथ लिगेचर निकालें, संभव के रूप में लिगेचर के करीब के रूप में, और एक 30 जी सुई के साथ heparinized नमकीन (50 IU/mL) के साथ लुमेन फ्लश, जबकि देखभाल करने के लिए पोत की दीवारों को नुकसान नहीं.
  12. ठीक संवहनी विस्फारित और पॉलीमिडी ट्यूब पर धीरे से खींच कर कफ पर कैरोटीड स्टंप को एवरट करें।
  13. तुरंत एक ढीला पूर्व बंधे 7-0 रेशम पाश के साथ everted carotid ठीक.
    नोट: ढीला पूर्व टाई 4 7-0 रेशम के बारे में एक व्यास के साथ छोरों 1.5 मिमी सर्जरी से पहले कफिंग प्रक्रिया चिकनी और आसान बनाने के लिए.
  14. ग्रीवा धमनी के दूसरे छोर पर एक ही प्रक्रिया (2.10-2.13) प्रदर्शन.
  15. प्राप्तकर्ता जानवर को एक तरफ सेट करें और ऑपरेटिव क्षेत्र को नमक के साथ मॉइस्चराइज करें जब तक कि महाधमनी खंड को लगाया न जाए।

3. दाता आपरेशन

  1. दाता माउस (BALB/c) प्राप्तकर्ता जानवर के रूप में एक ही फैशन में Anesthetize.
    1. पर्याप्त संज्ञाहरण की पुष्टि करने के लिए सजगता की जांच करने के लिए forceps के साथ पिछले पैर चुटकी.
  2. छोटे जानवरों के लिए एक इलेक्ट्रिक बाल क्लिपर के साथ पेट और थोरैसिक क्षेत्र के सभी बाल क्लिप और प्रक्रिया के दौरान बाहर सुखाने से आंखों को रोकने के लिए कपास swabs के साथ नेत्र मरहम लागू होते हैं।
  3. माइक्रोस्कोप के नीचे एक हीटिंग पैड पर एक सुपाच्य स्थिति में जानवर प्लेस और धीरे त्वचा संवेदनशील प्लास्टर स्ट्रिप्स के साथ ऑपरेटिंग टेबल करने के लिए अपने पैरों टेप।
  4. शराब के साथ ऑपरेटिव क्षेत्र को कई बार स्क्रब करें।
  5. छोटी कैंची के साथ एक मिडलाइन पेट लैपरोटोमी प्रदर्शन करें और अवर वेना कैवा (आईवीसी) को बेनकाब करने के लिए आंतों को थोड़ा ऊपर की ओर धकेलें।
  6. 30 जी सुई का उपयोग करके 1 एमएल हेपरिनीकृत लवण के साथ अवर वेना कैवा (आईवीसी) को इंजेक्ट करें।
  7. दाता जानवर को बाहर निकालने के लिए छोटे कैंची के साथ गुर्दे की धमनियों के नीचे पेट के आरटा और आईवीसी को काटें। रक्त को अवशोषित करने के लिए पेट में एक संपीड़न रखें।
  8. पसलियों के द्विपक्षीय मोड़ पर कैंची से एक thoracotomy प्रदर्शन और एक शल्य दबाना के साथ पूर्वकाल छाती की दीवार cranially झुकाव मध्यस्थता का पर्दाफाश करने के लिए.
  9. आईवीसी और एसोफैगस को सीधे डायफ्राम के ऊपर माइक्रोसिकर्स के साथ काटें।
  10. हृदय और फेफड़ों को ऊपर की ओर झुकाकर कट आईवीसी/एसोफैगस को पकड़े हुए बल के साथ निकालें और फिर उन्हें अपने आधार से माइक्रोसाइसर के साथ निकाल दें ताकि पृष्ठीय मध्यानुम में थोरैसिक वारोटा तक पहुंच प्राप्त हो सके।
  11. किसी भी इंटरकोस्टल धमनियों को नुकसान नहीं करने के लिए सावधान किया जा रहा है, जबकि ठीक forceps के साथ आसपास के संयोजी ऊतक और वसा के अलावा खींच कर अपने आसपास के ऊतकों से वक्ष आधमनी जुटाने.
  12. वक्ष महाधमनी से सभी शाखाओं को द्विध्रुवी काटेरी संदंश के साथ काटना और डायाफ्राम और महाधमनी मेहराब के बीच महाधमनी खंड excise microscissors का उपयोग कर.
  13. एक 30 जी सुई के साथ heparinized नमकीन के साथ excised महाधमनी खंड फ्लश, जबकि देखभाल करने के लिए पोत की दीवारों को नुकसान नहीं, किसी भी शेष रक्त या थक्के को हटाने के लिए, और प्राप्तकर्ता जानवर को भ्रष्टाचार हस्तांतरण.
    नोट: सीधे हस्तांतरण के दौरान प्राप्तकर्ता में मोटे तौर पर सही स्थिति में महाधमनी कलम जगह है. यदि प्राप्तकर्ता जानवर में भ्रष्टाचार के विभिन्न सिरों को भ्रमित करने में समस्याएं हैं, तो दूरस्थ अंत के आसपास एक ढीला लिगेचर मदद कर सकता है।

4. प्रत्यारोपण

  1. ठीक forceps के साथ everted ग्रीवा धमनी के शीर्ष पर निकट कफ पर दाता महाधमनी खंड के निकट अंत खींचो और तुरंत एक ढीला पूर्व बंधे 7-0 रेशम पाश के साथ इसे ठीक.
  2. सूक्ष्मकैंची के साथ महाधमनी कलम के दूरस्थ, मुक्त अंत को ट्रिम करें ताकि कलम की लंबाई दो कफों के बीच की दूरी को फिट कर सके।
  3. एनास्टोमोसिस को पूरा करने के लिए अन्य कफ के साथ ऑर्टा के दूसरे छोर पर चरण 4.1 दोहराएँ।
  4. प्रतिगामी भ्रम की अनुमति देने के लिए डिस्टल क्लैम्प निकालें।
  5. हेमोस्टेसिस प्राप्त करने के बाद, एनास्टोमोसिस को पूरा करने के लिए समीपस्थ क्लैम्प को हटा दें।
  6. अंत में, 6-0 निरंतर सीवन के साथ घाव बंद करें।

5. पोस्टऑपरेटिव देखभाल

  1. ऑपरेशन के बाद पहले 6 एच में माउस को बारीकी से मॉनिटर करें और फिर प्रत्यारोपण के बाद पहले 72 एच के लिए दिन में कई बार किसी भी जटिलताओं का तुरंत पता लगाने के लिए।
  2. पश्चात analgesia के लिए, buprenorphine के साथ प्रत्यारोपित माउस इंजेक्ट (0.05-0.1 mg/kg) प्रत्यारोपण के बाद सीधे subcutaneously और फिर 72 एच के लिए हर 12 एच उपयुक्त प्रदान करने के लिए, लंबी अवधि analgesia.

6. महाधमनी कलम स्पष्टीकरण

  1. प्रतिरोपित पशु को मिडाज़ोलम (5 मिलीग्राम/किलोग्राम; 5 मिलीग्राम/एमएल), मेडेटोमीडिन (0.5 मिलीग्राम/किलोग्राम; 1 मिलीग्राम/एमएल) और फेनेटाइल (0.05 मिलीग्राम/एमएल) के एक इंट्रापेरिटोनल इंजेक्शन के साथ एनेस्थेटीकरण करें; प्रत्यारोपण के 4 सप्ताह बाद।
    1. पर्याप्त संज्ञाहरण की पुष्टि करने के लिए सजगता की जांच करने के लिए forceps के साथ पिछले पैर चुटकी.
  2. छोटे जानवरों के लिए एक इलेक्ट्रिक बाल क्लिपर के साथ पेट, वक्ष और गर्भाशय ग्रीवा क्षेत्र के सभी बाल क्लिप.
  3. माइक्रोस्कोप के नीचे एक हीटिंग पैड पर एक सुपाच्य स्थिति में जानवर प्लेस और धीरे त्वचा संवेदनशील प्लास्टर स्ट्रिप्स के साथ ऑपरेटिंग टेबल करने के लिए अपने पैरों टेप।
  4. शराब के साथ ऑपरेटिव क्षेत्र को कई बार स्क्रब करें।
  5. छोटी कैंची के साथ एक मिडलाइन पेट लैपरोटोमी प्रदर्शन करें और अवर वेना कैवा (आईवीसी) को बेनकाब करने के लिए आंतों को थोड़ा ऊपर की ओर धकेलें।
  6. 30 जी सुई का उपयोग करके 1 एमएल हेपरिनीकृत लवण के साथ अवर वेना कैवा (आईवीसी) को इंजेक्ट करें।
  7. दाता जानवर को बाहर निकालने के लिए छोटे कैंची के साथ गुर्दे की धमनियों के नीचे पेट के आरटा और आईवीसी को काटें। रक्त को अवशोषित करने के लिए पेट में एक संपीड़न रखें।
  8. प्रत्यारोपण प्रक्रिया के दौरान किए गए त्वचा चीरा करने के लिए इसी छोटे कैंची के साथ सही निचले mandible करने के लिए जुगल चीरा से एक त्वचा चीरा बनाओ।
  9. विस्थापित और समीपस्थ कफ के साथ एक साथ प्रत्यारोपित महाधमनी कलम की पहचान करें और कुंद संदंश के साथ किसी भी आसपास के ऊतकों को हटा दें।
  10. माइक्रोसिजनका प्रयोग, आम ग्रीवा धमनी distal के माध्यम से कटौती और कफ के साथ महाधमनी कलम करने के लिए निकट के लिए दो कफ समाप्त होता है के साथ महाधमनी कलम explant.
  11. महाधमनी खंड को आधे में काटें और नमूनों को आगे के विश्लेषणों (फ्रोज़न सेक्शन, पैराफिन एम्बेडेड सेक्शन, स्नैप जमे हुए सामग्री)13,14के लिए संरक्षित करें।

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Representative Results

पूरी तरह से MHC-mismatch प्रत्यारोपण मॉडल में, एक गाढ़ा neointimal परत प्रत्यारोपण के बाद 4 सप्ताह देखा जा सकता है (चित्र 2). इस परत SM22 के लिए इम्यूनोहिस्टोलॉजिकल धुंधला के रूप में संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं के मुख्य रूप से होते हैं ( परिपक्व संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं के लिए एक चयनात्मक मार्कर) से पता चला. जैसा कि पहले कहा गया है, इन संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं पुरानी allograft vasculopathy में देखा घावों के लिए pathognomonic हैं. आगे के विश्लेषण के लिए, महाधमनी खंडों को विभाजित किया जाना चाहिए और लोचिका वैन गिसन-स्टेनिंग द्वारा दाग दिया जाना चाहिए। यहाँ, neointimal परत आसानी से आंतरिक लोचदार झिल्ली के लोचदार फाइबर के लिए भेदभाव किया जा सकता है, Tunica मीडियासे Tunica intima विभाजित.

इस मॉडल में एक संभावित चिकित्सीय प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए, neointima-मीडिया अनुपात, साथ ही luminal पार अनुभागीय क्षेत्र संकुचन, उन अनुभागीय नमूनों में मापा जा सकताहै 13,15. गैर-सीवन महाधमनी प्रत्यारोपण के हमारे वर्णित संशोधित मॉडल में, की एक तकनीकी सफलता दर और 91% से अधिक 300 महाधमनी प्रत्यारोपण प्रदर्शन में प्राप्त किया जा सकता है. इस उच्च सफलता दर 0.610 मिमी और 0.0254 मिमी की एक दीवार मोटाई के एक बाहरी व्यास के साथ polyimide टयूबिंग से बने एक कफ का उपयोग करके पूरा किया जा सकता है.

Figure 1
चित्र 1: Intraoperative चित्र. (क)लिगेटेड ग्रीवा धमनी काटना. (बी) लिगेचर को हटाने और हेपरिनीकृत लवण के साथ अंत फ्लश करने के बाद क्लैम्ड कैरोटीड अंत। (सी) कफिंग प्रक्रिया। (डी) पूर्ण प्राप्तकर्ता तैयारी (दोनों carotids अंत कफ). (ई) रिफ्यूजन के बाद पहले और ( एफ ) से पहले और (एफ) प्रतिरोपित महाधमनी खंड। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2: प्रतिरोपित महाधमनी खंडों का हिस्टोलॉजिकल नमूना प्रत्यारोपण के 4 सप्ताह बाद। (ए)SM22 (हरी फ्लोरोसेंट) और डीएपीआई (नीले फ्लोरोसेंट) के साथ प्रतिनिधि इम्यूनोहिस्टोलॉजिकल धुंधला संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं से मिलकर मोटी neointimal परत दिखा. लोचदार फाइबर लाल फ्लोरोसेंट (20x आवर्धन) में दिखाए जाते हैं। (बी)लोचिका-वैन-गिसन धुंधला (10x आवर्धन)। (ग)सिनजीनिक प्रतिरोपित महाधमनी खंड 4 सप्ताह के बाद प्रत्यारोपण (10x आवर्धन)। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

जीर्ण एलोग्रैफ्ट वाहिकाविकृति हृदय के ठोस अंग प्रत्यारोपण के बाद देर से कलम हानि का प्रमुख कारण है और संभावना गुर्दे और फेफड़ों allografts8. इस प्रकार अब तक, सीएवी के गठन को रोकने के लिए कोई कारण चिकित्सीय आहार विकसित नहीं किया जा सका।

सीएवी की पैथोफिजियोलॉजी बहुकारक है औरइसमेंप्रतिरक्षा और गैर-प्रतिरक्षा पहलुओं को शामिल किया गया है । प्रत्यारोपण में कृंतक मॉडल का उपयोग ठोस अंग प्रत्यारोपण में allograft अस्वीकृति प्रक्रियाओं के अंतर्निहित pathophysiology को समझने में आवश्यक किया गया है और उपन्यास चिकित्सीय दृष्टिकोण है कि अस्वीकृति को रोकने की पहचान करने में मददकी 17 . सीएवी एक नव-स्तरीय परत के गठन की विशेषता है जिसमें संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं से मिलकर वाहिका की लगातार संकुचन होती है और अंग समारोह7के बाद में गिरावट के साथ प्रतिरोपित अंग का भ्रम होता है .

वर्णित murine महाधमनी प्रत्यारोपण मॉडल में, गाढ़ा नवजात गठन पूरी तरह से MHC में देखा जा सकता है (एच -2डी से एच -2बी) बेमेल वक्ष महाधमनी grafts 4 प्रत्यारोपण के बाद सप्ताह. उन घावों में मुख्य रूप से संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाएं होती हैं (चित्र 2) । शि एट अल ने 199418में ट्रांसप्लांट आर्टिरियोस्क्लेरोसिस के पहले माउस मॉडल का वर्णन किया . उन्होंने ग्रीवा धमनी खंड को साइड सुट्यूरिंग के अंत तक कलम बद्ध किया। 1996 में, Koulack एट अल अंत करने के लिए अंत एनास्टोमोसिस19द्वारा अवरक्त महाधमनी महाधमनी के लिए एक महाधमनी खंड grafting द्वारा पहले पेट माउस महाधमनी प्रत्यारोपण मॉडल की स्थापना की. डाइट्रिच एट अल. ने सबसे पहले 2000 11 में कटोनिक धमनी में वक्ष महाधमनी खंड के प्रत्यारोपण के लिए एक गैर सीवन कफ तकनीक के उपयोग का वर्णनकिया।

महाधमनी क्षेत्रों प्रत्यारोपण करने के लिए microvascular एनास्टोमोसिस का उपयोग कर माउस मॉडल की तुलना में, कफ तकनीक कई लाभ प्रदान करता है. सबसे पहले, प्रक्रिया सरल और जानने के लिए आसान है. दूसरा, grafted महाधमनी खंड के इस्कीमिक समय स्थिर है, क्योंकि प्राप्तकर्ता जानवर दाता के महाधमनी खंड की खरीद से पहले एनास्टोमोसिस के लिए पहले तैयार किया जाता है, ठंड और गर्म ischemia समय को कम करने. तीसरा, एनास्टोमोसिस का व्यास पॉलीमिड कफ के कठोर चरित्र के कारण स्थिर रखा जाता है। इस प्रकार, एनास्टोमोटिक क्षेत्र की कठोरता की उपेक्षा की जा सकती है।

इसके अलावा, शल्य प्रक्रिया प्राप्तकर्ता जानवर के लिए कम दर्दनाक है के रूप में पेट चीरा के साथ तकनीक की तुलना में. इसके अतिरिक्त, कफ तकनीक के कार्यान्वयन से प्राप्तकर्ता पशु 11 ,20,21में एक ही तकनीक का उपयोग करते समय विभिन्न प्रकार के ठोस अंग प्रत्यारोपण की संभावना प्रदान करता है।

हालांकि हम आश्वस्त हैं कि इस microsurgical तकनीक अन्य महाधमनी प्रत्यारोपण मॉडल साहित्य में वर्णित की तुलना में जानने के लिए आसान है वहाँ प्रक्रिया के दौरान कुछ संभावित नुकसान कर रहे हैं. प्राप्तकर्ता आपरेशन के दौरान, इसे काटने से पहले sternocleidomastoid मांसपेशियों को ठीक से cauterize करने के लिए सुनिश्चित हो। मांसपेशियों को अच्छी तरह से संवहनी है और गंभीर रक्तस्राव हो सकता है अगर साथ जहाजों को अच्छी तरह से स्कंदित नहीं किया जाता है। इन खून बह रहा है को नियंत्रित करने के लिए मुश्किल कर रहे हैं के रूप में मांसपेशियों को एक बार पूरी तरह से विच्छेदन वापस ले जाएगा. इसके अलावा, जबकि आम ग्रीवा धमनी जुटाने सीधे धमनी ही हड़पने के लिए नहीं सुनिश्चित हो.

कफ प्रक्रिया ही अब तक और विफलता के लिए सबसे अतिसंवेदनशील द्वारा आपरेशन का सबसे चुनौतीपूर्ण हिस्सा है। इसलिए, ग्रीवा धमनी की सही लंबाई के साथ काम करना महत्वपूर्ण है। शुरुआत में, सर्जन ग्रीवा धमनी की बहुत कम लंबाई तैयार करते हैं, जो प्रक्रिया को पूरा करने के लिए बहुत कठिन बना देता है। इसके अलावा, शुरुआत में, सर्जन ऑपरेटिंग क्षेत्र के बीच में आम ग्रीवा धमनी के आसपास विभाजन लिगेचर सेट करते हैं। यह कठिनाइयों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, जबकि अधिक कपाल स्थित कफ प्रदर्शन के रूप में इस carotid अंत खंड काफी कठोर और जुटाने के लिए मुश्किल है. इस बीच, आम ग्रीवा धमनी का एक महत्वपूर्ण हिस्सा क्लेविकल के नीचे के क्षेत्र से मामूली तनाव से जुटाया जा सकता है। इसलिए, हम आम ग्रीवा धमनी के कपाल भाग के लिए और अधिक लंबाई छोड़ने के लिए थोड़ा अधिक proximaly carotid धमनी ligating सुझाव देते हैं। एक बार आम ग्रीवा धमनी विच्छेदन है और समाप्त होता है कफ के माध्यम से पारित कर रहे हैं और संवहनी clamps के साथ तय कर रहे हैं, ग्रीवा धमनी के फैलाव प्रदर्शन किया जाना चाहिए। ऑपरेशन के इस हिस्से में, पोत को अधिक नहीं करना बहुत महत्वपूर्ण है क्योंकि इससे पोत की दीवार को नुकसान हो सकता है, जिससे कफिंग प्रक्रिया के दौरान विफलता हो सकती है। पूरे ऑपरेटिव क्षेत्र घूर्णन इतना है कि कर्षण कफ पर धमनी दबाना के संरेखण के साथ लाइन में है प्रक्रिया की सुविधा.

महाधमनी खंड की खरीद करते समय, किसी भी इंटरकोस्टल धमनियों या थोरैसिक महाधमनी की अन्य शाखाओं को चीरना सुनिश्चित न करें। दूसरी ओर, ध्यान रखना भी थोरैसिक aorta के करीब cauterize करने के लिए आदेश प्रत्यारोपण के बाद कलम के घनास्त्रता के जोखिम में वृद्धि के साथ भ्रष्टाचार की क्षति को रोकने के लिए.

महाधमनी खंड प्रत्यारोपण करते समय, सुनिश्चित करें कि दोनों सिरों ठीक से गठबंधन कर रहे हैं ताकि भ्रष्टाचार के मरोड़ को रोकने के लिए. इसके अलावा, महाधमनी खंड reperfusion के दौरान kinking को रोकने के लिए सही लंबाई के लिए छोटा किया जाना चाहिए. जब कलम reperfusing, हमेशा अधिक कपाल दबाना पहले खोलने के लिए hemostasis निरीक्षण करने के लिए सुनिश्चित हो. नहीं पूरी तरह से स्कंदित इंटरकोस्टल धमनियों के छोटे रक्तस्राव एक छोटे से कपास झाड़ू के साथ कोमल दबाव लागू करने से नियंत्रित किया जा सकता है।

पूरे प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ता तैयारी के लिए अधिकतम 30 मिनट के साथ एक घंटे से भी कम समय लेना चाहिए और दाता आपरेशन और प्रत्यारोपण के लिए प्रत्येक 15 मिनट की अधिकतम.

इस विधि का सबसे अधिक चर्चा नुकसान यह है कि कफ प्रयोग की लंबाई के दौरान एनास्टोमोसिस में बना रहेगा। यह एक निश्चित विदेशी शरीर की प्रतिक्रिया और घनास्त्रता के एक संभावित उच्च जोखिम के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. तथापि, कफ तकनीक के साथ प्रतिरोपित नमूनों के हिस्टोपैथोलॉजिकल विश्लेषण से भ्रष्टाचार और ट्यूबिंग22के केवल हल्के विदेशी शरीर की प्रतिक्रिया का पता चला. प्रक्रिया की एक अन्य चर्चा की सीमा सामान्य ग्रीवा धमनी में वक्ष महाधमनी के विषमस्थानिक स्थान है। थोरैसिक महाधमनी और आम ग्रीवा धमनी के बीच भिन्न पोत व्यास के कारण, एक एक orthotropic महाधमनी interpositioning की तुलना में प्रतिरोपित महाधमनी खंड में एक अधिक अशांत प्रवाह की उम्मीद कर सकते हैं. यह व्यवस्थित आधारित intimal परिवर्तन करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. तथापि, संजीनी प्रतिरोपित क्षेत्रकेवल थोड़ा न्ययुतिमा गठन एक व्यवस्थित आधारित पूर्वाग्रह से पता चलता है (चित्र 2देखें)।

इस पत्र का उद्देश्य अपनी प्रयोगशालाओं में अन्य शोधकर्ताओं द्वारा इस मॉडल के कार्यान्वयन को सुविधाजनक बनाना है। उपर्युक्त संशोधनों के साथ, महाधमनी प्रत्यारोपण के इस माउस मॉडल बुनियादी microsurgical कौशल के साथ पूरा किया जा सकता है, जबकि एक उच्च सफलता दर को प्राप्त करने.

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Disclosures

लेखक घोषणा करते हैं कि उनका कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हित नहीं है।

Acknowledgments

कोई नहीं.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Balb-c Mice (H2-d) Charles River Strain# 028 Donor animal
Bipolar cautery system ERBE ICC 50 / 20195-023 Bipolar cautery
C57BL/6J (H-2b) Charles River Strain# 027 Recipient animal
Halsey Needle Holders FST 12501-12 Needle Holder
Halsted-Mosquito Forceps AESCULAP BH111R Curved Clamp
Medical Polyimide Tubing Nordson MEDICAL 141-0031 Cuff-Material
Micro Serrefines FST 18055-04 Micro Vessel Clip
Micro-Adson Forceps (serrated) FST 11018-12 Standard Forceps
Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps FST 18057-14 Clipapplicator
S&T Forceps - SuperGrip Tips (Angled 45°) S&T 00649-11 Fine Forceps
S&T Vessel Dilating Forceps - Angled 10° (Tip diameter 0.2 mm) S&T 00125-11 Vesseldilatator
Schott VisiLED Set Schott MC 1500 / S80-55 Light
Stereoscopic microscope ZEISS SteREO Discovery.V8 Microscope
Student Fine Scissors / Surgical Scissors - Sharp-Blunt FST 91460-11 / 14001-12 Standard Sissors
Vannas-Tübingen Spring Scissors (curved, 8.5 cm) FST 15004-08 Microsissors (curved)
Vannas-Tübingen Spring Scissors (straight, 8.5 cm) FST 15003-08 Microsissors (straight)

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चिकित्सा अंक 153 महाधमनी प्रत्यारोपण पुरानी एलोग्रैफ्ट वास्कुलोपैथी गैर-सीवन कफ तकनीक संवहनी चिकनी मांसपेशी सेल माइक्रोसर्जरी।
एक संशोधित गैर सीवन कफ तकनीक का उपयोग कर Murine ग्रीवा महाधमनी प्रत्यारोपण मॉडल
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Ryll, M., Bucher, J., Drefs, M.,… More

Ryll, M., Bucher, J., Drefs, M., Bösch, F., Kumaraswami, K., Schiergens, T., Niess, H., Schoenberg, M., Jacob, S., Rentsch, M., Guba, M., Werner, J., Andrassy, J., Thomas, M. N. Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique. J. Vis. Exp. (153), e59983, doi:10.3791/59983 (2019).

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