Summary
Presentert her er en enkel metode for å måle chitinase aktivitet i biologiske væsker som lunges tømming eller serum.
Abstract
Chitinases er enzymer som Cleave kitin. Selv i fravær av kitin, mammalians har betydelige mengder chitinases tilstede i kroppen, inkludert ved Baseline. Den presise rolle chitinase er ikke kjent, men det ble antatt å spille viktig rolle i fordøyelsen og vert forsvar mot kitin-inneholdende mat og patogener, henholdsvis. Nyere arbeid, inkludert vår, har vist en viktig rolle i chitinase og chitinase proteiner i verts immunitet og allergiske sykdommer. Viktigere, chitinase aktiviteter tjene som viktig biomarkører av sykdom alvorlighetsgrad i en rekke sykdommer, inkludert type 2 inflammatoriske sykdommer som astma og pulmonal fibrose. Tilsvarende pasienter med genetiske lidelser som Gaucher sykdom har betydelig forhøyet chitinase nivåer, som ikke bare samsvarer med sykdoms alvorlighetsgrad, men også tjene som en pålitelig biomarkør for terapeutisk effektivitet. Protokollen skissert her beskriver en enkel, rask og grei måte å måle chitinase aktivitet i BAL eller serumprøver av mus og kan være allment tilpasset menneskelige og andre modell organismer på grunn av den svært bevarte natur enzymer.
Introduction
Kitin er den nest mest tallrike polysakkarid på jorden etter cellulose, som tjener som en viktig strukturell komponent i en rekke organismer, inkludert Exoskeleton av insekter, sopp, gjær og alger; noen virveldyr har også kitin1. Chitinases er en familie av enzymer som er i stand til å bryte ned kitin og er svært bevart gjennom utviklingen i arter som spenner fra bakterier til pattedyr2,3. I tillegg til chitinases, pattedyr har også chitinase-lignende proteiner som ligner chitinases i deres evne til å binde kitin men varierer i at de mangler enzymatisk evne til å holde fast i kitin4.
Selv om kitin og chitinases har lenge vært studert-med undersøkelser dateres tilbake til tidlig på 1900-tallet-hovedfokuset har vært på sin rolle i insekter og andre virvelløse dyr. Faktisk var det ikke før på 1960-tallet da virveldyr ble funnet å ha chitinases i det hele tatt. Ved hjelp av en chitobiase-basert analyse, ble chitinases vist å være funnet i fordøyelseskanalen av en rekke virveldyr inkludert øgler og blackbirds-en observasjon hypotetisk gjennomsnitt å være på grunn av inntak av kitin-inneholdende organismer som insekter5 .
Pattedyr har to enzymatisk aktive former for chitinase: Sure pattedyr chitinase (AMCase; også kjent som CHIT2 og CHIA) og chitotriosidase (CHIT1)4. Begge disse proteinene er i stand til hydroloserende kitin. Imidlertid, CHIT1 er flere enzymatisk aktiv inne human, der hvor nært alle av chitinase aktivitet er avledet fra CHIT1. 4 i mus, både Chit1 og AMCase nesten like bidra til den samlede chitinase aktivitet6. På den annen side, chitinase-lignende proteiner mangler chitinase aktivitet.
Chit1 utskilles hovedsakelig av makrofager og blir ofte betraktet som immunrespons på kitin patogener7. Enzymet har også vist seg å være involvert i modning av monocytter i både M1 og m2 macrophage under typer, selv uten tilstedeværelsen av underlaget kitin8. Videre kan det også være involvert i modning av andre immunceller inkludert T hjelper type 2 (Th2) celler og eosinofile-som ble vist å være tilfelle i kryptokokkmeningitt lungeinfeksjon9. Disse studiene peker på en kompleks rolle chitinases i immunsystemet.
I de senere årene, Chit1 nivåer har blitt funnet å tjene som en viktig biomarkør av progresjon for over 40 forskjellige menneskelige sykdommer, inkludert lysosomal lagring sykdommer, smittsomme sykdommer, luftveissykdommer, endocrinological sykdommer, kardiovaskulær sykdommer, nevrologiske sykdommer, og andre (anmeldt10). I mange av disse sykdommene, nivåene av Chit1 er en sterk indikasjon på sykdom alvorlighetsgrad og terapeutisk effektivitet10.
Som chitinases har fått et rykte som en biomarkør for en rekke medisinske tilstander, inkludert Gaucher sykdom, har verktøy og analyser blitt utviklet for å lette testingen for chitinase tilstedeværelse. Eldre metoder inkluderer Schales ' prosedyre, en protokoll tilpasset fra en blod glukose test, og 3, 5 dinitrosalicylic acid (DNS) metoden. Men disse metodene er ofte tid følsomme og teknisk vanskelig11. Fremgangsmåten for begge disse testene krever reduksjon av uorganiske oksidanter, ferricyanide i tilfelle av Schales ' prosedyre for eksempel, produsere en fargeendring som bare kan måles spektrofotometrisk. I tillegg er begge testene innebære en oppvarming eller kokende trinn som er både tidkrevende og nødvendig for fargen å utvikle12,13.
Beskrevet her er en rask og enkel fluorimetric analysen for å bestemme chitinase nivåer i pattedyr prøver14,15. To av prøvene som brukes her, inkluderer serum og lunges (BAL); chitinase aktivitet har også blitt målt i morsmelk og urinprøver, og teknikken kan utføres i disse type prøver så vel som i alle andre biologiske væske16,17.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyr prosedyrer ble utført under en IACUC-godkjent protokoll ved Yale University School of Medicine.
1. eksempel samling for mus
-
Bedøvelsen
- Bedøve mus som bruker ketamin og xylazine (100 mg/kg ketamin og 10 mg/kg xylazine).
-
Innsamling av blodprøver
- Bekreft dybden av anestesi ved ikke-respons til en tå knipe.
- Kirurgisk åpne brystet hulrom for å avdekke hjertet.
- Sett inn en 26,5 G nål i venstre ventrikkel og samle blod i en sprøyte.
Merk: Vanligvis kan ca 0,5-1 mL blod høstes fra en sunn 20-25 g mus. - Samle blodet i heparinisert rør, for plasma samling, eller ikke-heparinisert rør for serum samling.
-
Innsamling av lunges (BAL)
- For å samle BAL, lage en vertikal kutt på nakken for å avdekke luftrøret.
- Kannelerer luftrøret med et 22 G-kateter og sikre det godt ved hjelp av en snor for å hindre lekkasje ut av nesen på musen.
- Langsomt injisere to alikvoter av sterilt fosfat-bufret saltvann (PBS, 0,75 mL hver) i lungene via luftrøret og hente tilbake.
- Pool alikvoter og holde på isen for videre analyse.
-
Behandling av biologiske prøver.
- Blodprøve: enten fersk (plasma) eller etter at det er mulig å velge 4 timer (serum), sentrifuger ved 600 x g i 10 min. Ta supernatanten og enten fryse for lagring eller bruk for eksperimentet.
- BAL: sentrifuger prøven ved 350 x g i 5 min. Ta supernatanten og enten fryse for lagring eller bruk for eksperimentet.
2. Chitinase analysen
Merk: Vitenskapen bak analysen er relativt enkel. Et ikke-fluorescerende substrat kløyvde av enzymatisk aktive chitinase for å produsere et fluorescerende produkt, som deretter måles som en indirekte markør for chitinase aktivitet. Chitinases i prøvene bryter ned underlaget 4-methylumbelliferyl-D-N, N'-diacetylchitobiose til stede i 1x McIlvain buffer. Et fluorescerende molekyl 4-methylumbelliferyl slippes. Ved å måle den totale fluorescens av hver brønn, får vi en nøyaktig måling av den aktive chitinase i hver prøve. Fordi nedbryting av kitin ved chitinase er en hydrolytisk reaksjon, avsluttes stopp bufferen, en blanding av 0,3 M Glycine og NaOH (12,0 g/L ved pH 10,6) nedbryting av kitin ved å skape et miljø som er for grunnleggende for enzymet å fungere.
-
Klargjør underlag, standarder og løsninger.
- Klargjør McIlvain-bufferen. McIlvain buffer består av 0,1 M citrate og 0,2 M fosfat ved en pH på 5,2. Fortynne i forholdet 1:1 for 1x McIlvain buffer.
- Løs opp både 4-methylumbelliferyl-D-N, N'-diacetylchitobiose og 4-methylumbelliferyl ß-D-N, N ', N "-triacetylchitotriose i 1x McIlvain buffer til en konsentrasjon på 500 μM hver.
Merk: Lagerløsning kan oppbevares ved-20 ° c for videre bruk; Best lagres i alikvoter. - Oppløse standard, 4-methylumbelliferone, til en konsentrasjon på 0,1 mM i stopp buffer (blanding av 0,3 M Glycine og NaOH (12,0 g/L ved pH 10,6)) for å lage standard kurve lagerløsning.
-
Lag og plate arbeids løsningen.
- Kombiner 1x McIlvain buffer og kitin substrat 4-methylumbelliferyl-D-N, N'-diacetylchitobiose for å skape arbeids løsningen. For hvert 10. utvalg, bland 100 μL av substrat med 2,17 mL 1x McIlvain buffer. Se tabell 1 for flere beregninger basert på utvalgsstørrelse.
Merk: Bruk 4-methylumbelliferyl ß-D-N, N ', N "-triacetylchitotriose for menneskelige prøver. Mens begge underlag kan kløyvde av enten menneskelig eller mus enzymer, de har blitt tildelt for enten menneske eller mus prøver basert på effektiviteten av kløft6. - Pipetter 95 μL av arbeids løsning i hver brønn av en 96-brønn plate.
- Kombiner 1x McIlvain buffer og kitin substrat 4-methylumbelliferyl-D-N, N'-diacetylchitobiose for å skape arbeids løsningen. For hvert 10. utvalg, bland 100 μL av substrat med 2,17 mL 1x McIlvain buffer. Se tabell 1 for flere beregninger basert på utvalgsstørrelse.
-
Legg biospecimen prøver til arbeids løsningen.
- Deretter tilsett 5 μL av prøven (blod/BAL/vev lysat/annen biologisk væske) til hver brønn.
- Bland prøven inn i arbeids løsningen for de mest nøyaktige og pålitelige resultatene.
Merk: Prøvene bør kjøres i duplikater/triplicates med spesiell oppmerksomhet til potensielle kanteffekter. Alle prøvene skal være pre-varmet å minimere kanten effekt. Som analysen innebærer en reaksjon mellom chitinases i prøven og underlaget i arbeids løsningen, er det best å jobbe relativt raskt for å minimere forskjellen i tid mellom når den første prøven er belagt og den siste prøven er belagt. Flerkanals pipette anbefales.
-
Ruge ved 37 ° c.
- Dekk til platen og rist kort (5 s).
- Ruge platen ved 37 ° c i 15 min. Dette gjør at enzymatisk reaksjonen skal finne sted.
-
Klargjør standardkurven.
- Mens prøvene er incubating, utarbeide en seriell fortynning av 4-methylumbelliferone, en standard som ofte brukes i fluorimetric bestemmelse av enzym aktivitet.
- Fortynne bestanden av standard løsning i stopp buffer til en konsentrasjon av 5 μM.
- Utfør en rekke fortynninger som angitt i tabell 2. Legg komponentene i det angitte beløpet og bland godt.
Merk: Standardkurven bidrar til å sikre at målte prøver faller i den lineære rekkevidden til standardkurven.
-
Stopp reaksjonen med stopp buffer.
- Tilsett 200 μL av stopp buffer i hver brønn for å stanse reaksjonen.
-
Plate standardene.
- Tilsett 300 μL av hver standard per brønn i duplikater på samme plate.
-
Les platen ved hjelp av en fluorometric leser.
- Les platen ved en eksitasjon på 360 NM, og et utslipp på 455 NM.
3. data analyse
-
Trekk fra de tomme feltene
- Gjennomsnittlig verdiene for duplikat standard fortynninger som ikke har noen 4-methylumbelliferone. Trekk denne verdien fra alle de andre registrerte verdiene.
-
Ta gjennomsnittet av tekniske replikerer og plotte standardene.
- Gjennomsnittlig de to målingene for hver konsentrasjon og graf gjennomsnittlig avlesning av konsentrasjon.
Merk: Det resulterende plottet skal se lineær og har en R2 -verdi nær 1. Hvis den ikke gjør det, kan det være nødvendig å gjøre om standarder og lese platen for å sikre kvaliteten på dataanalyse.
- Gjennomsnittlig de to målingene for hver konsentrasjon og graf gjennomsnittlig avlesning av konsentrasjon.
-
Standardisere verdiene for lese ut.
- Opprett en best egnet linje for dataene i den plottet standarden. Del lese-outs av prøvene ved skråningen av den beste-Fit linje.
-
Sammenligner verdier fra kontrollgruppe og Variabelgruppe.
- Bruk en t-test eller ANOVA for mer enn to grupper for å finne ut om forskjellen mellom grupper er statistisk signifikant. Verdier vil ta enhetene nmol/mL · h.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Resultatene som vises her er fra en studie som måler chitinase aktivitet i serum og BAL prøver av vill type (C57BL/6) og Chit1 transgene mus (på C57BL/6 bakgrunn) som overekspresjon Chit1 genet på en Doxycycline promoter. Våre data viser at både serum og BAL prøver har synlig chitinase aktivitet ved Baseline 698,2 ± 189,9 nmol/mL · h og 485,7 ± 114 nmol/ml · h, henholdsvis. Overuttrykte av Chit1 genet bruker Doxycycline i drikkevann i 4 uker resulterte i heving av chitinase aktivitet som ble observert i både BAL (4 575 ± 673,8 nmol/mL · h, p = 0,003) og serum 1556 ± 251,2 nmol/mL · h, p = 0,0272, sammenlignet med Baseline prøver.
Ved å bruke protokollen som beskrives her, bekrefter analysen at overuttrykte av Chit1-genet hos mus resulterer i økt chitinase aktivitet. En t-test ble brukt til å sammenligne midlene til de to gruppene. Hver gruppe inneholdt 5 mus.
Figur 1: Chitinase aktivitet. Chitinase aktivitet ble målt i (A) serum og (B) lunges tømming av vill type (WT) og chitotriosidase (ChitTg) over-uttrykker transgene mus. Hvert punkt representerer en individuell muse prøve. (C) verdier ble standardisert ved hjelp av linearitet av standardkurven som beskrevet i protokollen. Fluorescens nivåer ble målt ved hjelp av en plate leser på bølgelengde av 360 NM for eksitasjon og 455 NM for utslipp og presenteres som AU. AU = vilkårlig enhet * p < 0,05, * * * p < 0,001. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Antall prøve brønner | Substrat (μL) | McIlvain-buffer (mL) |
| 20 | 100 | 2,17 |
| 50 | 250 | 5,425 |
| 100 | 500 | 10,85 |
Tabell 1: eksempel på beregninger for å opprette arbeids løsningen.
| ΜL | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| CONC. (nM) | 0 | 125 | 250 | 375 | 500 | 625 | 750 | 875 |
| Standard | 0 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 | 120 | 140 |
| 2x McIlvian | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 |
| Destillert H2O | 200 | 180 | 160 | 140 | 120 | 100 | 80 | 60 |
| Stopp buffer | 400 | 400 | 400 | 400 | 400 | 400 | 400 | 400 |
Tabell 2: fortynninger for standard kurve målinger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Chitinase aktivitet har dukket opp som en viktig biomarkør for å forutsi sykdoms alvorlighetsgrad, sykdomsprogresjon, terapeutisk effektivitet og tilstedeværelsen av bestemte patogener18. Selv om mange av de lange postulert teoriene om rollen til chitinases ikke har blitt eksperimentelt bevist19, har nye studier gitt viktig innsikt i rollen som chitinases og chitinase som proteiner i ulike sykdommer2, 9,20.
Protokollen er beskrevet her er en enkel, rask og effektiv måte å måle chitinase aktivitet i biologiske prøver. Lite eller ingen endring er nødvendig for å måle chitinase aktivitet i et bredt utvalg av biologiske prøver og arter på grunn av den svært bevarte natur chitinases. Oppført i denne protokollen er to underlag, hvorav den ene er utpekt for mus prøver og en for menneskelige prøver; Imidlertid kan begge underlag brukes på enten arter, som de har blitt utpekt som sådan basert på tidligere papirer ' demonstrasjon av effektiviteten som enzymene kan holde underlaget.
Sammenlignet med tidligere eksisterende teknikker, for eksempel Schales ' prosedyre og DNS-metoden, analysen skissert her fjerner behovet for tidkrevende trinn som koking eller oppvarming som var nødvendig i eldre metoder. I tillegg er analysen mindre teknisk vanskelig og krever færre kompliserte trinn enn foregående måling teknikker. For best resultat bør både biologiske og tekniske replikerer brukes.
Hvis den chitinase aktiviteten er for høy, er fortynninger av den biologiske prøven tilstrekkelig til å redusere den chitinase aktiviteten for måling, og de sanne verdiene kan beregnes basert på fortynning. Når du utfører dette eksperimentet på nye biologiske prøver, kan det være nyttig å utføre gjenta målinger på samme plate over tid til metning for å sikre en riktig inkubasjonstid for best resultat. I tillegg kan protokollen skaleres opp eller ned så lenge det er samsvar mellom gruppene. Den fremtidige anvendelser av denne protokollen er vidtrekkende som forskning er bare å plukke opp i rollen som chitinase aktivitet i en rekke sykdommer.
En av de første kategorien av sykdommer som chitinase aktivitet ble funnet å være relevant i var lysosomal lagring sykdommer inkludert Gaucher ' s sykdom, Niemann-Pick A/B og C, GM-1 gangliosidosis, og mange andre21. Gaucher sykdom er en lysosomal lagrings sykdom forårsaket av utilstrekkelig aktivitet av glucocerebrosidase og er karakterisert ved oppbygging av glucosylceramide, underlaget av glucocerebrosidase, i lysosome av makrofager15. Det er en genetisk sykdom, med kliniske symptomer som inkluderer milt og lever forstørrelse, lavt antall blodplater, anemi, tretthet, og bein problemer22. Klinisk forskning har vist at et flertall av mennesker som lider av Gaucher sykdom har en median chitinase aktivitet som er over 600 ganger median verdien av normal kontroll frivillige; i tillegg, når folk med Gaucher sykdom ble satt på enzymet kosttilskudd terapi-den nåværende behandling for sykdommen-deres chitinase aktivitet nivåer falt betydelig utlån chitinase aktivitet for å være en utmerket markør for både sykdom progresjon og behandlings overvåkning15. Ingen rolle er ennå ikke funnet for Chit1 i sykdommen imidlertid. Lignende forskning har ført til Chit1 aktivitet avlytting for tallrik annet lysosomal lagringen sykdommen10.
I tillegg har videre forskning indikert en potensiell rolle for Chit1 aktivitet under ulike patogen infeksjon inkludert fungal smitte, malaria, tuberkulose og K. pneumoniae å nevne noen2,3,10 . En 2012 studie fant at chitinase aktivitet var forhøyet hos pasienter med infeksjon i aktiv tuberkulose (TB), selv når den var negativ, noe som tyder på at chitinase aktivitet kan brukes som en effektiv biomarkør i TUBERKULOSE diagnose, spesielt i løpet av lang ventetid som ofte er nødvendig for å nøyaktig diagnostisere sykdommen23. Lignende funn ble sett under Plasmodium falciparum infeksjon, med chitotriosidase serum nivåer betydelig økt i de med akutt infeksjon24. Mens mange av disse sykdommene tar dager å diagnostisere, raske målinger av chitinase aktivitet nivåer i blodet kan gi nyttig innsikt i diagnosen. I tillegg, som malariaparasitter og tuberkulose bakterie blir stadig mer motstandsdyktig mot behandlinger, måle chitinase aktivitet nivåer i serum kan hjelpe med behandling overvåking for sin effektivitet i sanntid.
Mer og mer forskning har begynt å fokusere på rollen som chitinase og chitinase proteiner i immunresponsen, spesielt dens rolle i inflammatoriske trasé. Ettersom denne forskningen fortsetter, vil denne protokollen gi mulighet for rask og nøyaktig måling av denne chitinase aktiviteten til videre forskning. Protokollen er lett justeres for en rekke arter prøver inkludert både mus og menneske, noe som gjør det allment aktuelt.
I tillegg til forskning nytte, bedre metoder for å oppdage og måle chitinase aktivitet i prøvene vil være gunstig i den kliniske riket. Nyere forskning har vist rollen som chitinase som en biomarkør i patologi av mange kroniske sykdommer, inkludert Gaucher sykdom, diabetes mellitus, Sarkoidose, aterosklerose, inflammatorisk tarmsykdom og kreft3, 21,25,26.
På grunn av denne rollen som en biomarkør, rask og nøyaktig måling av chitinase aktivitet som vist her er utrolig relevant for feltet av medisin, slik at helsepersonell å ha mer informasjon for en riktig diagnose og behandlingsplan.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen.
Acknowledgments
Denne forskningen ble støttet av American Lung Association og amerikanske bryst Society Awards til LS. Forfattere oppriktig ønsker å takke Dr. Jack Elias og Dr. Chun Geun Lee for å gi transgene mus stammer.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4-methylumbelliferone | Sigma | M1381 | Standard: commonly used in flourimetric assays for determination of enzyme activity |
| 4MU-GlcNAc2 | Sigma | M9763 | fluorescent chitinase substrate for use in mouse samples |
| 4MU-GlcNAc3 | Sigma | M5639 | fluorescent chitinase substrate for use in human samples |
| Citric Acid-monohydrate | for use in McIlvain Buffer | ||
| Glycine | for use in Stop Buffer at a concentration of 0.3 M | ||
| Na2HPO4xH2O | for use in McIlvain Buffer | ||
| NaOH | for use in Stop Buffer at a concentration of 12 g/L | ||
| Vision Plate: Non-sterile, untreated black 96 well plate | 4titude | 4ti-0224 |
References
- Hamid, R., Khan, M. A., Ahmad, M. Chitinases: An update. Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 5 (1), 21-29 (2013).
- Sharma, L., et al. Regulation and Role of Chitotriosidase during Lung Infection with Klebsiella pneumoniae. Journal of Immunology. 201 (2), 615-626 (2018).
- Kanneganti, M., Kamba, A., Mizoguchi, E. Role of chitotriosidase (chitinase 1) under normal and disease conditions. Journal of Epithelial Biology & Pharmacology. 5, Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3579558/ 1-9 (2012).
- Lee, C. G., et al. Role of Chitin and Chitinase/Chitinase-Like Proteins in Inflammation, Tissue Remodeling, and Injury. Annual Review of Physiology. (73), 479-501 (2011).
- Jeuniaux, C. Chitinase: An Addition to the List of Hydrolases in the Digestive Tract of Vertebrates. Nature. 192 (4798), 135-136 (1961).
- Boot, R. G., et al. Identification of a Novel Acidic Mammalian Chitinase Distinct from Chitotriosidase. Journal of Biological Chemistry. 276 (9), 6770-6778 (2000).
- Arndt, S., Hobbs, A., Sinclaire, I., Lane, A. B. Chitotriosidase Deficiency: A Mutation Update in an African Population. JIMD Reports. 10, 11-16 (2013).
- Di Rosa, M., Malaguarnera, G., De Gregorio, C., Drago, F., Malaguarnera, L. Evaluation of CHI3L-1 and CHIT-1 Expression in Differentiated and Polarized Macrophages. Inflammation. 36 (2), 482-492 (2013).
- Wiesner, D. L., et al. Chitin Recognition via Chitotriosidase Promotes Pathologic Type-2 Helper T Cell Responses to Cryptococcal Infection. PLOS Pathogens. 11 (3), e1004701 (2015).
- Elmonem, M. A., vanden Heuvel, L. P., Levtchenko, E. N. Immunomodulatory Effects of Chitotriosidase Enzyme. Enzyme Research. 2016, 1-9 (2016).
- Ferrari, A. R., Gaber, Y., Fraaije, M. W. A fast, sensitive and easy colorimetric assay for chitinase and cellulase activity detection. Biotechnol Biofuels. 7 (37), 1-8 (2014).
- Schales, O., Schales, S. S. Simple method for the determination of glucose in blood. Proc Am Fed Clin Res. 2, Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20275623 78 (1945).
- Zarei, M., et al. Characterization of Chitinase with Antifungal Activity from a Native Serratia Marcescens B4A. Brazilian Journal of Microbiology. 42 (297), 1017-1029 (2011).
- Zhu, Z., et al. Acidic Mammalian Chitinase in Asthmatic Th2 Inflammation and IL-13 Pathway Activation. Science. 304 (5677), 1678-1682 (2004).
- Hollak, C. E., van Weely, S., van Oers, M. H., Aerts, J. M. Marked elevation of plasma chitotriosidase activity. A novel hallmark of Gaucher disease. Journal of Clinical Investigation. 93 (3), 1288-1292 (1994).
- Musumeci, M., Malaguarnera, L., Simpore, J., Barone, R., Whalen, M., Musumeci, S. Chitotriosidase activity in colostrum from African and Caucasian women. Clinical Chemistry and Laboratory. 43 (2), 198-201 (2005).
- Maddens, B., et al. Chitinase-like Proteins are Candidate Biomarkers for Sepsis-induced Acute Kidney Injury. Mol Cell Proteomics. 11, 1-13 (2012).
- Hector, A., et al. Chitinase activation in patients with fungus-associated cystic fibrosis lung disease. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 138 (4), 1183-1189 (2016).
- Hall, A. J., Morroll, S., Tighe, P., Götz, F., Falcone, F. H. Human chitotriosidase is expressed in the eye and lacrimal gland and has an antimicrobial spectrum different from lysozyme. Microbes and Infection. 10 (1), 69-78 (2008).
- Kim, L. K., et al. AMCase is a crucial regulator of type 2 immune responses to inhaled house dust mites. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (22), e2891-e2899 (2015).
- Olkhovych, N. V. Chitotriosidase activity as additional biomarker in the diagnosis of lysosomal storage diseases. Ukrainian Biochemical Journal. 88 (1), 69-78 (2016).
- Bouayadi, O., et al. Disease: An Underdiagnosed Pathology in the Eastern Moroccan Population. eJIFCC. 30 (1), 82-87 (2019).
- Tasci, C., et al. Efficacy of serum chitotriosidase activity in early treatment of patients with active tuberculosis and a negative sputum smear. Therapeutics and Clinical Risk Management. 8, 369-372 (2012).
- Barone, R., Simporé, J., Malaguarnera, L., Pignatelli, S., Musumeci, S. Plasma chitotriosidase activity in acute Plasmodium falciparum malaria. Clinica Chimica Acta. 331 (1-2), 79-85 (2003).
- Kitamoto, S., et al. Chitinase inhibition promotes atherosclerosis in hyperlipidemic mice. American Journal of Pathology. 183 (1), 313-325 (2013).
- Kzhyshkowska, J., Gratchev, A., Goerdt, S. Human Chitinases and Chitinase-Like Proteins as Indicators for Infl Ammation and Cancer. Biomark Insights. 2, 128-146 (2007).
