Summary
该协议描述了使用高度可口的西式自助餐厅饮食来模拟啮齿动物的暴食和肥胖。在这里，我们提供了食物选择、制备和测量的详细提纲，并解释了有助于产生强健和可重复表型的方法因素。
Abstract
肥胖在发达国家和发展中国家的发病率正在迅速增加，已知会导致或加剧许多疾病。肥胖的健康负担及其合并条件突出表明，需要更好地了解其发病机制，但伦理限制限制了人类的研究。为此，实验室动物肥胖的外部有效模型对于理解超重和肥胖至关重要。虽然许多物种已经被用来模拟伴随人类肥胖的变化范围，但啮齿动物是最常用的。我们的实验室已经开发出一种西式自助餐厅饮食，持续导致大量体重增加和啮齿动物代谢疾病的标志。这种饮食使啮齿动物接触各种高可口的食物，从而诱发吞咽过度，从而模拟了现代西方饮食环境。这种饮食迅速诱导体重增加和身体脂肪积累大鼠允许研究过量饮食和肥胖的影响。虽然自助餐厅饮食可能无法提供与纯化高脂肪或高脂肪、高糖饮食相同的宏量营养素和微量营养素特征控制，但自助餐厅饮食通常诱发比纯化饮食更严重的代谢表型饮食，更符合在超重和肥胖人群中观察到的代谢紊乱。
Introduction
肥胖及其相关合并症对全球健康负担作出巨大贡献，占澳大利亚疾病负担的7%2。肥胖的一个主要危险因素是食用饱和脂肪和精制碳水化合物含量高、纤维和微量营养素含量低的不健康饮食3。确定肥胖治疗干预的目标需要能够系统地评估对多个生化和生理系统的影响的模型。通过使用啮齿动物模型，我们对肥胖病因的理解有了实质性的提高，在环境因素易于控制的条件下，可以随时间进行行为、代谢和分子效应的研究操纵。
自助餐厅饮食 （CAF） 模式的饮食诱发肥胖包括补充啮齿动物的标准小食与各种可口的食物，要么高饱和脂肪，精制碳水化合物，或两者兼而有之。这些食物的例子包括蛋糕、甜饼干和高脂肪的咸味小吃（如加工肉类、奶酪和薯条）。它可靠地促进啮齿动物的吞咽过度和快速体重增加。该模型的主要特征是提供各种高度可口的食物，旨在模拟现代食品环境。获得多样性会增加大鼠在短期4和人类5的食物摄入量，即使食物匹配的可食用性，并只在风味和嗅觉线索4，6变化。然而，一项研究表明，提供能量和宏量营养素匹配的纯化饮食，味道和质地各不相同，对大鼠的长期体重增加没有影响7，这表明营养成分和明显的口腔后效应不同的食物也可能导致暴食。暴露于多种口味和质地克服感官特定的饱质感，这描述了与替代5相比，吃最近吃的食物的欲望减少。在我们的实验室里，我们同样观察到，使用高可口的食物会进一步放大暴食。
这种CAF饮食已经使用了40多年，因为Sclafani8报告说，雌性大鼠暴露于各种"超市食品"（棉花糖，巧克力，花生酱，饼干，香肠和奶酪）表现出加速体重增加相对于控件。这和其他早期研究指出，CAF式饮食似乎比纯高脂肪或高碳水化合物饮食8、9更有效地加速体重增加。20世纪80年代的工作的特点是宏量营养素谱10和膳食模式11的老鼠喂养CAF饮食，并表现出深刻的变化脂肪质量和胰岛素水平9，10和热发生12。我们小组已经使用CAF饮食模型肥胖超过20年13，14，在此期间，我们使用了几种变种的饮食。除了常规的菜水外，老鼠每天至少吃两个甜食和两个咸味的食物。近年来，我们已经开始补充固体CAF食品与10%蔗糖溶液。根据不同的实验设计定制CAF饮食的能力是模型的强项。
CAF 饮食促进立即吞咽症（即，在前 24 小时内）和体重和脂肪质量的稳步增加。然而，最大化多样性的一个后果是宏量营养素和微量营养素的摄入不受控制，有些人认为这是一个不可逾越的缺陷。饮食诱发肥胖症的研究更普遍地使用纯化高脂肪 （HF） 或组合高脂肪、高糖 （HFHS） 饮食，这些饮食对营养成分的精确控制，且比 CAF 模型的劳动密集型程度低，后者需要日常监控和仔细规划和执行时间表。商业上可用的纯化HF饮食的转化相关性是一个持续争论的话题，因为他们的脂肪酸分布和脂肪和蔗糖的比例可能与人类膳食摄入量16不一致。虽然CAF饮食对营养成分的控制程度不如纯化饮食，但它旨在模拟大多数现代社会中食物选择的可食用性和多样性。
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Protocol
此处描述的协议已针对大鼠使用进行了优化。虽然我们已经成功地在小鼠17、18中使用CAF饮食，软性食物研磨可能会进一步产生降低食物摄入量可靠性19的错误。本议定书由新南威尔士大学动物护理和伦理委员会批准，并符合澳大利亚国家卫生和医学研究委员会。
注：在我们的短期研究中，很少观察到不利影响（即<10周，即CAF）;在CAF饮食20的老鼠中，没有改变一般福祉，活动，社交或焦虑行为的证据。在较长的间隔（>16周）后，在CAF喂养的大鼠中观察到非常偶然的心血管事件。
1. 动物适应和住房
- 让大鼠在抵达后5-7天到该设施，并免费获得控制饮食和水。每天从抵达后24小时开始处理大鼠;CAF饮食涉及与笼子的日常互动，因此定期处理很重要。
- 确保向所有保持架提供环境富集。标准笼子包含红色聚甲基丙烯酸酯盒、筑巢材料和木制咀嚼棒，这很重要，因为 CAF 饮食中提供的软食物可能导致大鼠出现不良闭塞，而无法获得更难咀嚼的物品。
- 在开始 CAF 饮食之前，将笼子分配给 CAF 或 chow 组，并通过比较各组之间的体重平均值和范围，并在必要时重新分配，确保这些笼子与起始体重相匹配。由于照明暴露会影响昼夜节律、食物摄入量和活动，因此可确保 CAF 和 chow 笼均匀地分布在菌群室中。
注：当群体居住时，啮齿动物（尤其是男性）形成社会等级。社会压力的影响通过确保老鼠与其他体重相似的老鼠一起被安置在一起（以减少笼子里的欺凌）来部分控制。此外，自助餐厅的饮食应该均匀地分布在笼子周围，以便所有老鼠都能获得饮食。
2. 饮食选择和设置
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调度
- 确保经常供应的菜水，每天至少加两件甜食和两件咸味食品（每周时间表的一个示例，如表1所示;图1所示的3天食物选择）。可选的外法是高脂肪、高糖和10%蔗糖溶液。
- 选择每个类别中宏量营养素比例相似的食物：所有甜食的碳水化合物都比脂肪高，所有咸味食品的脂肪含量都高于碳水化合物。旨在在每一组CAF食物中提供类似比例的脂肪、碳水化合物、糖和蛋白质。
- 在整个实验中定期监测消费，以便在必要时定制菜单以维持吞咽过度。表2提供了几种示例食物的能量密度和宏量营养素信息，并建议200克雄性斯普拉格道利大鼠的起始量。
- 避免连续几天或一周太频繁地喂食任何单一食物，因为这可能会减少食物的摄入量。如果发生这种情况，在重新合并之前，从日程中省略食物几天。
注：大鼠可能表现出新恐惧症，大多数新食物需要反复接触，以确定它们是否会被食用。老鼠通常不喜欢含有酵母（面包、比萨饼等）或有柑橘或咖啡口味的食物。
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湿食品
- 考虑在金枪鱼罐头等容器中提供含水量较高的食物，以避免弄脏床上用品。如果这样做，还应提供空容器来控制保持架。
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饮食采购
- 确保 CAF 食品是主食或获得足够的整个实验，使食品保持一致，无需被替换。
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饮食储存
- 如包装上所示或以-20°C储存食品，并在使用前一天晚上解冻。将干货（饼干）存放在密封的容器中。
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蔗糖溶液（可选）
- 制备蔗糖溶液，通常散装10%（w/v），不使用时储存在4°C。
- 每周更换蔗糖瓶（至少），以防止细菌或真菌生长。每天检查瓶子，如果发现生长迹象，则更换。
注：蔗糖除了水外，还提供水，水始终可用。
3. 咖啡厅饮食准备
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除 霜
- 在使用前，拿出适量的CAF食物解冻+24小时。食物可以使用微波炉解冻，但不应在热时提供。
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每日补充CAF饮食
- 每天更换 CAF 减肥食品可确保品种最大化，并将笼子脏污降至最低。由于大鼠在黑暗周期的最初部分吃他们每天摄入的大部分食物，因此，在黑暗期开始时，安排CAF食物补充，以便此时的食物是新鲜的。在未测量食物摄入量的某一天补充 CAF 饮食。
- 以确保此组具有类似日常体验的方式馈送 chow 组，如下所示。
- 转动水瓶（向上喷口），将笼子放在工作空间上并取下盖子。
- 轻轻打扰床上用品约20s，以模拟从CAF笼子的床上用品收集食物的过程。
- 将一小撮食物料斗的颗粒放入床上用品中，以将接触与笼子床上用品的食物等同起来。
- 返回保持架盖并返回机架，仅在保持架固定时更换水瓶，以尽量减少溢出。
- 为自助餐厅群提供食物
- 将 CAF 饮食物品准备到每个笼子的标记容器中。
- 转动水瓶（向上喷口），将笼子放在工作空间上并取下盖子。
- 尽可能从床上用品中取出旧的自助餐厅饮食。
- 将新鲜的自助餐厅饮食放入笼子。
- 关闭保持架并返回到机架。
- 更换水和蔗糖瓶。
注：为了避免将小食鼠暴露在CAF饮食中，请考虑在CAF笼子前喂食小笼子，反之亦然。手套应该改变处理不同饮食组的老鼠。
- 根据需要，将奶瓶、水和蔗糖瓶充值。在其他程序后执行此操作更有效，因为包装盒在加满食物和水后更重。
注：CAF 盒土壤更快，需要更频繁地更换，以避免因接触湿床上用品和强烈气味而引起的压力。每天检查床上用品，并根据需要更换。
4. 食物摄入量超过24小时
注：食物摄入量测量每周进行几次离散的 24 小时。
- 开始CAF饮食时，每周至少测量两次体重和24小时食物摄入量，以监测饮食的有效性。在黑暗阶段开始附近开始食物摄入量测量。旨在在食物摄入量测量日提供相同的 CAF 食品，因为与风味和能量密度等同将允许精确监测随时间的变化。
注：对于需要每周测量食物摄入量>2的研究来说，这是不可能的，因为过度接触同一食物可能会随着时间的推移减少吞咽过度。 -
CAF 和控制饮食摄入措施
- 准备 CAF 饮食，并放入每个笼子的标记容器中，称重和记录每个组件。图 1显示了一组完整的 CAF 食品。表 3包含一个示例食物摄入量监测表。
- 根据需要重新加注水、蔗糖和菜液。
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对于小（控制）保持架
- 转动水瓶（向上喷口），将笼子放在工作空间上并取下盖子。
- 称量大鼠，然后将它们转移到笼子里，用新鲜的床上用品，以及环境富集。
- 记录水瓶和奶瓶的重量。
- 更换笼盖，将笼子重新装回机架，然后转动水瓶。在笼子里可以添加"FOOD INTAKE"的小标志，通知服务员和研究人员不要触摸瓶子和奶瓶。
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对于 CAF 保持架：
- 执行与步骤 4.3 中相同的步骤。此外，在大鼠转移之前，用新鲜的床上用品将CAF食品的预称重容器撒在笼子里。
- 让大鼠在24小时的时间里，以最小的干扰。记录任何意外的中断（例如，新老鼠到达殖民地房间，或环境噪音变化）。
-
完成食物摄入量测量
- 记录水瓶的重量和菜笼的菜，仔细寻找床上用品的菜块。完成后，从笼子中取出"食物摄入量"标志。
- 为 CAF 笼子准备新鲜的 CAF 饮食。
- 对于每个 CAF 保持架
- 记录水、乔和蔗糖的重量。
- 取下保持架盖，并丰富环境。
- 小心地从床上用品中取出 CAF 碎片，并放入单独的容器中。首先取出最大的部分，然后系统地使用温和的扫掠动作将所有笼子床上用品从一端扫到另一端。
注：收集食物时，对每个笼子都采取同等程度的护理。记录笼子特别凌乱的地方——在某些情况下，老鼠会把蛋糕和/或饼干磨成难以收集的细粉。这可以人为地膨胀食物摄入量的措施。 - 在笼子周围分发新的 CAF 饮食，返回环境富集，关闭笼子盖并将其返回到机架，删除"食物摄入"标志。
- 将每只CAF食物的重量记录到最接近0.1克。从初始食物重量中减去剩余的食物，获得每个笼子的总消费量，然后除以每个盒子里的老鼠数量（假设摄入量相等）。
- 将消耗量（克/鼠）乘以制造商提供的每种食品的能量密度（kJ/g）。
注：为了计算宏量营养素的摄入量，我们使用假设碳水化合物和蛋白质的能量密度为16.7 kJ/g，脂肪的能量密度为37 kJ/g。
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Representative Results
如图2A所示，根据三组雄性斯普拉格道利大鼠的数据，CAF饮食喂养比小食对照组的能量摄入增加了2.5倍，在6周内一致。其他研究已经证实，这种吞咽症的程度持续超过1021和1622周的实验。体重曲线（图2B）表明CAF饮食喂养导致平均体重与3-4周饮食后对照组相比有20%的差异，与体重增加与人类肥胖的发病量相当。在6周内，CAF和对照组体重增加的平均差异为67%（图2C），由EchoMRI测定的脂肪率约为一倍（图2D）。喂食的老鼠通常每天吃5-10%的能量（+5克/只/天）。
宏量营养素摄入量曲线可在食品摄入量测量日使用产品制造商的营养信息进行计算。我们观察到不同性别和年龄的宏量营养素摄入一致，CAF喂养的大鼠消耗了大约8%的能量作为蛋白质，34%为脂肪，58%为碳水化合物。我们的维护周提供22%的蛋白质，13%的脂肪和65%的碳水化合物。相对于人类群体宏量营养素消费的估计（18.3%蛋白质，44.9%碳水化合物和30.9%脂肪在澳大利亚23;15.7%蛋白质，48.7%碳水化合物和33.7%脂肪在美国24），我们的CAF喂养大鼠消耗低比例的能量作为蛋白质，较高的比例作为碳水化合物，和脂肪的可比比例。然而，在考虑绝对摄入量时，CAF喂养的大鼠相对于对照组摄入了所有三种宏量营养素（男性的A+C，女性图3D+F），表明它们没有蛋白质缺乏。相反，宏量营养素成分产生于引起戏剧性的高吞咽症，主要是由过量的碳水化合物和脂肪摄入量推动的，通常不在倾向于超重和逐渐发展肥胖的人类受试者中观察到。
我们最近进行的一项研究表明，雌性大鼠可能特别容易受到CAF饮食的肥胖效应的影响。与控制相比，CAF喂养的女性的能量摄入是对照组3.8倍，持续6周以上（图4A）。在CAF暴露仅2周后，观察到组间20%的体重差异（图4B）。经过6周的饮食暴露后，与健康对照组相比，CAF大鼠的体重增加12倍（图4C），脂肪质量增加一倍（图4D）。斯克拉法尼和戈尔曼早先的研究表明，自助餐厅饮食对女性体重增加的易感性明显高于男性25岁。
提供太少的每个CAF食物可能会人为地限制能量摄入的测量。在喂食24小时后（当食物被刷新时），检查CAF笼中是否残留了一些食物，这最容易得到解决。图 5显示了使用多个食物集摄入食物如何导致宏量营养素摄入量的显著变化，尽管总体能量摄入量相当。在这种情况下，变异性主要是由于脂肪和碳水化合物在蛋白质摄入量持续的背景下的平衡。对所用食物集的分析表明，在提供高度首选的蛋糕时，观察到高碳水化合物的接受量;当这个蛋糕不存在时，观察到更高的脂肪含量。
图1：三天内自助餐饮食示例。CAF饮食应该包括每天不同的食物，以诱导持续的吞咽症。通过将每个笼子的食物放入指定的容器中，可以简化 CAF 食品的准备。这允许轻松、及时地运送到每个笼子。第1天 – 鸡块，牛肉味的狗食，巧克力奶油饼干，果酱卷，高脂肪纯化饮食。第2天 = 肉馅饼，鸡块，苏格兰手指饼干，焦糖泥蛋糕。第3天 = 点心，鸡味狗粮，奶油饼干，蓝莓奶酪蛋糕。请点击此处查看此图的较大版本。
图2：代表产生多个男性群体。在雄性成年大鼠中，CAF饮食在6周内能持续增加能量摄入（A）和体重（B）。同时，当EchoMRI在4周的饮食中评估时，体重增加 （C） 和脂肪质量 （D） 显著增加.数据表示为均值 = SEM;n = 48，用于单个数据;n = 12 的能量摄入量数据（保持架作为分析单位）。请点击此处查看此图的较大版本。
图3：多男性群的宏营养素摄入量。CAF饮食暴露增加成年大鼠总摄入量（A）， 脂肪 （B） 和蛋白质 （C） .这些增加在雌性大鼠中与碳水化合物 （D）、 脂肪 （E） 和蛋白质 （F） 的接受量相当.数据表示为均值 = SEM;n = 12 或 n = 4 个笼子（男性和女性分别）平均在 6 周内。请点击此处查看此图的较大版本。
图4：代表产生女性群体。在雌性成年大鼠的6周内，足菜饮食能持续增加能量摄入 （A） 和体重 （B）.饮食6周后，体重增加 （C） 和脂肪质量 （D） 也有显著差异.数据表示为均值 = SEM;n = 12，用于单个数据;n = 4 的能量摄入量数据。请点击此处查看此图的较大版本。
图5：随时间而摄入的宏量营养素。使用多个食物组来评估食物摄入量，由于一组雄性大鼠的个人偏好不同，随着时间的推移，可能导致宏量营养素摄入量的差异。数据表示为均值 = SEM;n = 4 个笼子。请注意，总体宏量营养素摄入量与通常观察到的模式相匹配;CAF喂养的老鼠消耗60%的能量作为碳水化合物，33%的脂肪和8%的蛋白质，作为能量。请点击此处查看此图的较大版本。
| 星期一 | 星期二 | 星期三 | 星期四 | 星期五 | 星期六 | 星期天 | |
| 每日食品 | 健康菜和饮用水 | ||||||
| 蛋糕 | A | D | B | A | C | B | E |
| 蛋白质 1 | A | C | D | A | C | D | A |
| 蛋白质2 | B | B | A | B | B | A | C |
| 饼干 | B | A | C | B | D | C | A |
| 可选的附加每日食品 | HFHS 周，10% 蔗糖溶液 | ||||||
表1：自助餐厅饮食每周食物计划示例。CAF 饮食通过提供各种日常变化的可口食物来促进吞咽过度，如本例所示每周食物计划所示。字母 A-E 表示该食物组的独特食物（例如，蛋糕 A 可能表示巧克力泥饼和蛋糕 B 香草海绵）。食物摄入日，灰色阴影，应均匀地放置在整个星期，理想情况下保持尽可能一致。虽然CAF饮食总是包括持续获得健康的食物和水，可选的额外日常食品可以包括HF或HFHS菜和10%蔗糖溶液。
| PER 100g（源自制造商） | 能量 PER 1g | 建议起始值（kJ/大鼠） | |||||||||||
| 食品 | 能源（千焦） | 蛋白质（克） | 总脂肪（克） | 饱和脂肪 （g） | 总碳水化合物（克） | 糖（克） | 能量（千焦/克） | 蛋白质 （kJ） | 总脂肪 （kJ） | 饱和脂肪 （kJ） | 总碳水化合物（千焦） | 糖 （kJ） | |
| 蛋白质A | 830.00 | 6.00 | 6.10 | 3.20 | 28.90 | 2.20 | 8.19 | 1.02 | 2.26 | 1.18 | 4.91 | 0.37 | 350.00 |
| 蛋白质 B | 906.00 | 7.30 | 11.10 | 4.60 | 21.10 | 1.80 | 8.94 | 1.24 | 4.11 | 1.70 | 3.59 | 0.31 | 350.00 |
| 蛋糕A | 1470.00 | 4.60 | 13.30 | 3.70 | 52.40 | 33.10 | 14.61 | 0.78 | 4.92 | 1.37 | 8.91 | 5.63 | 200.00 |
| 蛋糕 B | 1660.00 | 4.00 | 18.40 | 4.30 | 53.60 | 36.30 | 16.60 | 0.68 | 6.81 | 1.59 | 9.11 | 6.17 | 200.00 |
| 饼干 A | 1920.00 | 4.30 | 20.60 | 12.70 | 63.20 | 33.20 | 19.10 | 0.73 | 7.62 | 4.70 | 10.74 | 5.64 | 200.00 |
| 饼干 B | 2040.00 | 5.70 | 21.00 | 11.20 | 8.50 | 4.10 | 10.18 | 0.97 | 7.77 | 4.14 | 1.45 | 0.70 | 200.00 |
表2：选定自助餐厅食品的营养信息。此表描述了 CAF 饮食中几个核心项目获得的营养信息。必须确保日常选择提供类似的宏量营养素可用性，并确保大鼠获得足够的蛋白质。对于每天使用的每组食物，计算总体能量密度和宏量营养素含量都很有帮助。最后一栏包含每只食物（作为每只大鼠的能量）的推荐起始体积，为雄性斯普拉格道利大鼠在200克。
| 笼 | 水（克） | 周（g） | 蛋糕 A （g） | 蛋白质 A （g） | 蛋白质 B （g） | 饼干 B （g） | ||||||
| 在 | 出 | 在 | 出 | 在 | 出 | 在 | 出 | 在 | 出 | 在 | 出 | |
| 1 （周） | ||||||||||||
| 2 （咖啡厅） | ||||||||||||
| 3 （周） | ||||||||||||
| 4 （咖啡厅） | ||||||||||||
表3：食物摄入量表示例。每个 CAF 食品的权重（g，每个笼子）应仔细记录在电子表格中。
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Discussion
通过让大鼠接触各种高脂肪和高糖的可口食物，这里描述的CAF饮食协议为许多人食用的所谓"西方饮食"提供了一个可靠而可靠的模型。在接触的前 24 小时内观察到高吞咽症（评估为相对于对照组能量摄入的显著增长），在几周内可以看到具有统计学意义的体重差异。因此，CAF是啮齿动物饮食诱发肥胖的有效模型。
几项研究表明，CAF式饮食比纯化HF或HFHS饮食产生更夸张的肥胖表型。Sampey等人26日表明，相对于喂食HF饮食的大鼠，CAF的暴露导致肝脏和脂肪组织炎症加剧，葡萄糖耐受性较差，胰岛素抵抗能力更强。虽然该研究使用了猪油HFD，但另外两项实验发现，CAF饮食相对于基于黄油27和椰子油28的HFD增加了脂肪含量。同样，Higa等人发现，虽然HF和CAF饮食相对于小鼠控制饮食增加了内脏脂肪，但只有CAF增加了食物摄入量，加速了高血糖、葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗29的发作。另一项小鼠研究表明，除了更明显的代谢效应外，CAF暴露还增加了肝脏和心脏疾病（纤维化、脂肪和凋亡措施）的发病率，相对于纯化HFD30。然而，最近的研究表明，一种特别配制的"西餐"对代谢、脂肪和炎症措施的影响比传统的CAF饮食31更强。还需要进一步确定不同类型的肥胖饮食如何影响代谢结果，因为将自助餐厅饮食与高糖或高糖和高脂肪的纯化饮食进行比较的数据有限。
我们用这个模型进行的大部分工作都是与杂交的斯普拉格-道利大鼠合作。CAF 协议已针对研究现代食品环境的代谢效应进行了优化。我们用这个模型研究了22日喂食的微观结构，"宾宁"33的间歇性获取模型，以及能量摄入被束缚到控制34水平的实验中。最近的研究已经检查了饮食对认知20，35和肠道微生物群36，37的影响。CAF饮食的版本也被用来研究产妇肥胖38和探索喂养反应下丘脑喂养肽在肥胖14。
值得注意的是，虽然有大量证据表明自助餐厅饮食会引起大鼠和小鼠的吞咽和肥胖，但这些研究基本上是在超系斯普拉格道利13、14。 20，39，40，41，42和威星6，26，31，43，44大鼠，在Balb/c17，18和瑞士45，46小鼠以及其他啮齿动物菌株进行的研究相对较少。因此，不知道文献中报道的自助餐厅饮食的影响是否会在其他菌株中观察到，特别是因为已知菌株差异对大鼠的肥胖饮食有反应47，48和小鼠49.此外，起始年龄和体重也是重要的方法因素，可能调节肥胖饮食对代谢结果的影响25。我们之前的大部分工作都已经开始在成年早期对CAF饮食的老鼠，包括在这里报告的代表性数据的研究。
还应考虑若干当地因素。此处建议的食物时间表可能需要修改时设置 CAF 饮食用于不同的应变或供应商。当地食品供应将确定所使用的特定CAF食品，每次引入新食品时，应仔细监测消费量。必须随着时间的推移保留和检查食品包装上提供的营养信息，以确保宏量营养素计算准确。
CAF 模型的成功应用需要仔细规划和日常监控笼子。每天需要额外时间购买、解冻和准备食品，食品摄入量测量日是劳动密集型的。这些因素可能构成后勤限制，在评估使用模型时应考虑这些因素。因此，有兴趣适应CAF模型的研究人员应考虑，在CAF观察到的可靠吞咽症和肥胖表型减少了对营养摄入的控制，增加了准备时间。
CAF 模型的几个限制非常重要。由于这种模式允许啮齿动物选择食物，因此除非使用单个外壳，否则无法确定单个大鼠的宏量营养素摄入量。虽然各组的平均宏量营养素摄入量相对稳定，但我们观察到大鼠对队列内CAF饮食的代谢反应变化，这可能与个体饮食选择的差异有关。此外，CAF饮食项目没有强化，这意味着微量营养素的可得性可能较低。然而，我们的大鼠总是能够获得健康、营养完整的小食（通常占能量摄入量的5-7%），每周3~4天提供营养完整的狗卷作为咸味食物。还必须注意的是，在高脂肪和高糖的人类西式饮食中观察到微量营养素含量低，肥胖的成年人中有很大一部分表现出微量营养素缺乏50。
关于食物摄入量测量，还有几个重要的注意事项。由于不可能找到所有食物碎片，因此必须确保每个笼子都使用相同的程序。由于食物摄入量是按每个笼子测量的，我们以笼子为分析单位分析能量摄入，假设内所有大鼠的消耗相等。然而，由于该模型的明确设计是最大化选择和多样性，单个CAF大鼠的总能量摄入量、宏量营养素和微量营养素分布可能会有所不同。尽管如此，这提供了一个机会，研究个人的差异，在消费和代谢反应，CAF饮食。进一步的研究比较年龄匹配的男性和女性啮齿动物在一生中将是重要的充分描述性别差异对饮食的反应。最后，啮齿动物模型不能——也不会试图——重现影响人类饮食行为的复杂经济、心理和社会因素。然而，鉴于哺乳动物的进食行为背后的同源神经回路，以及对正能量平衡的类似生理反应（即脂肪沉积和改变的代谢功能），我们相信该模型在了解不良饮食和肥胖如何改变身体和大脑功能。
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Disclosures
作者声明没有相互竞争的利益或披露。
Acknowledgments
这项工作得到了NHMRC项目赠款（#568728、#150262、#1126929）对MJM的支持。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2-5 L plastic bottle | For preparing 10% sucrose solution, if applicable | ||
| Chopping board | Plastic is advised | ||
| Freezer | For storing CAF foods | ||
| Gordon's maintenance rodent chow | Gordon's Specialty Stockfeeds (Australia) | Maintenance diet used in our laboratory (14 kJ/g; 65% carb, 13% fat and 22% protein, as energy) | |
| Large plastic storage boxes | All items above can be stored in containers for easy access | ||
| Large spoon | For CAF diet preparation | ||
| Microwave | For CAF diet thawing (when required) | ||
| Non-serrated knife | For CAF diet preparation | ||
| Paper towel | Important for cleaning work surfaces and the knife during CAF prep | ||
| Plastic containers | These are for weighing CAF food items on measurement days | ||
| Plastic funnel | For preparing 10% sucrose solution, if applicable | ||
| Red light | As CAF diet should be refreshed near the onset of the dark phase each day, a red light will assist when working in the dark | ||
| Tuna tins | For presenting 'wetter' CAF food items. Plastic containers may also be suitable | ||
| Weigh container x 3 | Separate containers should be used to weigh rats, chow & bottles, and CAF foods | ||
| Weighing scale | Sensitivity to 0.1 g is recommended | ||
| White sugar | For 10% sucrose solution, if applicable |
References
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