हम माउस फोरब्रेन की ऑर्गानोटिक स्लाइस संस्कृतियों में आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड एफआरईटी-आधारित सेंसर ATeam1.03YEMK की सेल-प्रकार विशिष्ट अभिव्यक्ति के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। इसके अलावा, हम दिखाते हैं कि न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स में सेलुलर एटीपी स्तरों की गतिशील इमेजिंग के लिए इस सेंसर का उपयोग कैसे करें।
केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में न्यूरोनल गतिविधि एडेनोसाइन त्रिपोस्फेट (एटीपी) के टूटने द्वारा प्रदान की गई सेलुलर ऊर्जा पर उच्च मांग पैदा करती है। न्यूरॉन्स के विद्युत संकेत द्वारा अपमानित प्लाज्मा झिल्ली में आयन ग्रेडिएंट को फिर से स्थापित करने के लिए एटीपी के एक बड़े हिस्से की आवश्यकता होती है। इस बात के सबूत हैं कि एस्ट्रोसाइट्स – तेज़ विद्युत संकेतों को उत्पन्न नहीं करते हैं – न्यूरोनल गतिविधि के जवाब में एटीपी के बढ़ते उत्पादन से गुजरना और उन्हें ऊर्जा मेटाबोलाइट्स प्रदान करके सक्रिय न्यूरॉन्स का समर्थन करते हैं। विभिन्न मेटाबोलाइट्स के लिए आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड सेंसर का हालिया विकास अब न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स के बीच इस तरह के मेटाबोलिक इंटरैक्शन के अध्ययन को सक्षम बनाता है। यहां, हम एटीपी-सेंसिटिव फ्लोरेसेंस अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण की सेल-प्रकार विशिष्ट अभिव्यक्ति के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं- (FRET-) सेंसर ATeam1.03YEMK माउस हिप्पोकैम्पस और कॉर्टेक्स की ऑर्गानोटिक ऊतक स्लाइस संस्कृतियों में एडेनो-संबद्ध वायरल वेक्टर (एएवी) का उपयोग करके। इसके अलावा, हम प्रदर्शित करते हैं कि इस सेंसर को अतिरिक्त पोटेशियम में वृद्धि और रासायनिक इस्केमिया (यानी, सेलुलर ऊर्जा चयापचय का अवरोध) के बाद न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स में सेलुलर एटीपी स्तरों में परिवर्तन के गतिशील मापन के लिए कैसे नियोजित किया जा सकता है।
न्यूरॉन्स की उत्तेजक विद्युत गतिविधि काफी हद तक अपने प्लाज्मा झिल्ली में सोडियम (एनए+)और पोटेशियम (के+)जैसे केंशन के प्रवाह पर आधारित है। इस प्रकार सिग्नलिंग के लिए इन दोनों आयनों के इलेक्ट्रोकेमिकल ग्रेडिएंट ्स का रखरखाव आवश्यक है। यह सेलुलर ना+/K+-ATPase (NKA) द्वारा पूरा किया जाता है, एक सर्वव्यापी रूप से व्यक्त इलेक्ट्रोजेनिक ट्रांसमेम्ब्रेन पंप, जो एक्सट्रासेलुलर स्पेस से 2 K + के बदले में सेल से 3 एनए+ को बाहर निकालता है, जिसके लिए प्रति परिवहन चक्र1एटीपी के एक अणु की खपत की आवश्यकता होती है । एनकेए के अलावा, प्लाज्मा झिल्ली सीए2 +-एटपास सहित कई अन्य एटीपी-उपभोग करने वाले आयन ट्रांसपोर्टर हैं, जो इंट्रासेलुलर सीए2 + होमोस्टोसिस और गतिविधि-प्रेरित बाढ़2के बाद इसके निर्यात के लिए महत्वपूर्ण है। प्रेसीनैप्टिक वेसिकल्स में, एक वैक्यूलर-टाइप एच+-एटपास (वी-एटपास) इस डिब्बे3में न्यूरोट्रांसमीटर तेज के लिए आवश्यक प्रोटोन ग्रेडिएंट बनाता है।
जबकि न्यूरॉन्स की गतिविधि इस प्रकार एटीपी4की एक पर्याप्त मात्रा की आवश्यकता है, वे ऊर्जा के भंडारण के लिए एक महत्वपूर्ण क्षमता का प्रदर्शन नहीं करते । इसके बजाय, वे पड़ोसी एस्ट्रोसाइट्स, मस्तिष्क5में प्रमुख ग्लाइकोजन स्टोर के साथ मेटाबोलिक बातचीत पर भरोसा करने लगते हैं। यह सुझाव दिया गया है कि एस्ट्रोसाइटिक ग्लाइकोजन वास्तव में न्यूरोनल ऊर्जा जरूरतों को समर्थन देने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है; और दो सेल प्रकार के बीच इस प्रस्तावित न्यूरो मेटाबोलिक युग्मन में एक महत्वपूर्ण घटना न्यूरोसाइट्स की क्षमता है न्यूरोनल गतिविधि6,7,8के जवाब में अपने एटीपी उत्पादन में वृद्धि . एस्ट्रोसाइट-न्यूरॉन लैक्टेट शटल (एएनसीएल) के रूप में जानी जाने वाली यह परिकल्पना अभी भी बहस के घेरे में है, क्योंकि अन्य काम ने इस बात के सबूत दिए हैं कि न्यूरॉन्स भी उत्तेजना9,10के जवाब में ग्लाइकोलाइसिस की अपनी दर में वृद्धि कर सकते हैं, न्यूरो-ग्लिया इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए आगे के तरीकों और दृष्टिकोणों की आवश्यकता को दर्शाती है।
न्यूरो-ग्लिया मेटाबोलिक इंटरैक्शन को स्पष्ट करने के लिए न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स में सेलुलर ऊर्जा चयापचय और एटीपी स्तर की जांच लंबे समय से मस्तिष्क के ऊतकों में जीवित कोशिकाओं में मेटाबोलाइट सांद्रता में परिवर्तन का पता लगाने के लिए उपयुक्त जांच की कमी से बाधित हुई है। हालांकि, पिछले दशक में एटीपी, लैक्टेट, पायरुवेट और अन्य11,12के लिए सेंसर सहित विभिन्न मेटाबोलाइट्स के लिए नए उपकरणों और नए आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड फ्लोरोसेंट जांच के विकास में वृद्धि हुई है । इन उपकरणों का उपयोग करके, अब सेलुलर एटीपी खपत और एकल कोशिका स्तर पर सेलुलर ऊर्जा के स्तर में परिवर्तन और बरकरार मस्तिष्क ऊतक13में सेल-प्रकार विशिष्ट तरीके से संबंधित प्रश्नों का सीधा समाधान करना संभव है।
वर्तमान कार्य में, हम न्यूरॉन्स और सुसंस्कृत ऑर्गानोटिक मस्तिष्क स्लाइस के एस्ट्रोसाइट्स पर साइटोसोलिक एटीपी गतिशीलता की कल्पना करने के लिए एक प्रक्रिया का वर्णन करते हैं। हम दिखाते हैं कि आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड एटीपी-नैनोसेंसर ATeam1.03YEMK (14)के कोशिका-प्रकार विशिष्ट अभिव्यक्ति के लिए एडेनो-संबद्ध वायरल वेक्टर (एएवी) को कैसे नियोजित किया जाए, न्यूरॉन्स में और माउस मस्तिष्क के स्लाइस के एस्ट्रोसाइट्स को कई हफ्तों तक सेल संस्कृति में बनाए रखा जा सकता है15। सुसंस्कृत ऊतक स्लाइस को कवर करने वाले ग्लियल निशान को कैसे हटाया जाए, इसकी एक प्रक्रिया वर्णित है, जो नीचे ऑर्गानोटिक ऊतक परतों में कोशिकाओं की ऑप्टिकल पहुंच और इमेजिंग में सुधार करती है। अंत में, हम दिखाते हैं कि इस तैयारी में सेलुलर एटीपी स्तरों में परिवर्तनों की FRET-आधारित इमेजिंग करने के लिए ATeam1.03YEMK का उपयोग कैसे किया जा सकता है। यह विधि उन प्रमुख फायदों को होस्ट करती है जिन्हें सर्जिकल मस्तिष्क प्रक्रियाओं की आवश्यकता नहीं होती है, सुसंस्कृत मस्तिष्क स्लाइस में सेंसर और सेल प्रकार विशिष्टता की अभिव्यक्ति का उच्च स्तर प्रदान करता है, अन्य तरीकों की तुलना में कोशिकाओं में आक्रामकता या तनाव को कम करता है, जैसे अन्य वायरल वैक्टर10,16,17के साथ इलेक्ट्रोपोेशन या ट्रांसड्यूक्शन द्वारा ट्रांसफेक्शन। इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल को अन्य एफआरआई आधारित नैनोसेंसर पर लागू किया जा सकता है, उनमें से ATeam1.03 के वेरिएंट जो एटीपी14के लिए कम बाध्यकारी आत्मीयता प्रदान करते हैं।
यहां, हम माउस मस्तिष्क15के ऑर्गानोटिक ऊतक स्लाइस संस्कृतियों में एस्ट्रोसाइट्स या न्यूरॉन्स में एटीपी स्तर में परिवर्तन की माप के लिए ATeam1.03YEMK,एक FRET आधारित, आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड नैनोसेंसर14की कोशिका-प्रकार विशिष्ट अभिव्यक्ति के लिए एक प्रक्रिया प्रदर्शित करते हैं। अनुकरणीय रिकॉर्डिंग में, हम बताते हैं कि एक्स्सेल्युलर पोटेशियम एकाग्रता में वृद्धि के परिणामस्वरूप न्यूरॉन्स में एटीपी सांद्रता में परिवर्तन नहीं होता है, जबकि इस हेरफेर के जवाब में एस्ट्रोसाइटिक एटीपी का स्तर बढ़ जाता है। इसके अलावा, हमारे परिणाम प्रदर्शित करते हैं कि सेलुलर चयापचय के अवरोध पर, ATeam1.03YEMK FRET अनुपात तेजी से दोनों सेल प्रकारों में गिरता है, जो इंट्रासेलर एटीपी में तेजी से कमी का संकेत देता है।
ऑर्गानोटिक स्लाइस संस्कृतियों में ATeam1.03YEMK की अभिव्यक्ति के लिए कम से कम 7-10 दिनों के लिए नियंत्रित परिस्थितियों में संस्कृति में ऊतक के रखरखाव की आवश्यकता है। वैकल्पिक रूप से, ATeam1.03YEMK को तीव्रता से अलग मस्तिष्क ऊतक स्लाइस में और चूहों की ऑप्टिक नसों में13,15में एटीपी के मापन के लिए भी नियोजित किया जा सकता है। तीव्रता से अलग ऊतक में माप, हालांकि, ट्रांसजेनिक जानवरों की पीढ़ी या मस्तिष्क में वायरल वैक्टर के एक स्टीरियोटैक्टिक आवेदन की आवश्यकता है, पशु प्रयोग और सख्त पशु देखभाल प्रोटोकॉल शामिल हैं । इस संबंध में, ऑर्गानोटिक ऊतक स्लाइस संस्कृतियों में ATeam1.03YEMK अभिव्यक्ति एक उपयोगी और मूल्यवान वैकल्पिक22,23का प्रतिनिधित्व करती है। कई वर्षों के लिए, ऑर्गानोटिक ऊतक टुकड़ा संस्कृतियां तंत्रिका गुणों, कनेक्टिविटी और विकास24,25,26का अध्ययन करने के लिए एक स्थापित मॉडल प्रणाली के रूप में काम करती हैं। वे न केवल सामान्य ऊतक वास्तुकला और लेमिनेशन(चित्रा 1)को बनाए रखते हैं, बल्कि सेल संस्कृतियों के तरजीही गुणों जैसे बेहतर पहुंच और प्रयोगात्मक स्थितियों के प्रत्यक्ष नियंत्रण की मेजबानी भी करते हैं। ऑर्गानोटिक टिश्यू स्लाइस संस्कृतियों को भी नियमित रूप से वायरल वैक्टर27का उपयोग करके विदेशी जीन व्यक्त करने के लिए नियोजित किया जाता है । कई प्रकार के वायरल वेक्टर मस्तिष्क केऊतकों 16,28में ट्रांसजीन देने की सूचना मिली है . एडेनोवायरल वेक्टर ग्लियल कोशिकाओं में उच्च अभिव्यक्ति को प्रेरित करते हैं, लेकिन हिप्पोकैम्पल न्यूरॉन्स16नहीं, और ग्लिअल रिएक्टिविटी17उत्पन्न कर सकते हैं। एडेनो से जुड़े वायरल वैक्टर के रूप में यहां इस्तेमाल किया एक अच्छा विकल्प15के रूप में उभरने, और उनकी प्रभावशीलता भी वीवो29में दिखाया गया है ।
जबकि मुख्य रूप से न्यूरोनल गुणों के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है, हाल के अध्ययनों की स्थापना की है कि organotypic ऊतक टुकड़ा संस्कृतियों भी एस्ट्रोसाइट्स के विश्लेषण के लिए नियोजित किया जा सकता है । सुसंस्कृत स्लाइस आमतौर पर प्रतिक्रियाशील एस्ट्रोसाइट्स19,30 (चित्रा 5)की एक परत द्वारा कवर किए जाते हैं, लेकिन एस्ट्रोसाइट्स गहरी परतों19,30 (चित्रा 5)में अधिक देशी, असक्रिय आकृति विज्ञान और साइटोआर्किटेक्चर प्रदर्शित करते हैं। वर्तमान अध्ययन में, हम बाहरी ग्लियल निशान के यांत्रिक हटाने के लिए एक प्रक्रिया का वर्णन करते हैं, जिसके परिणामस्वरूप उचित ऑर्गानासाइटिक ऊतक परतों के भीतर देशी एस्ट्रोसाइट्स की बेहतर प्रयोगात्मक और ऑप्टिकल पहुंच होती है। इसके अलावा, इसके हटाने से ऑर्गानासाइटिक स्लाइस की गहरी परतों में अभिव्यक्ति प्रभावकारिता में सुधार होता है; यदि ग्लियल निशान को हटाया नहीं जाता है, तो एएवी द्वारा ट्रांसड्यूक्शन सतही कोशिका परतों तक सीमित हो सकता है।
ऊतक स्लाइस में प्रयोग करते समय कई बाहरी यांत्रिक कारकों पर विचार करने की आवश्यकता होती है। स्नान परफ्यूजन वेग में भिन्नता पूरी तैयारी के आंदोलनों को प्रेरित कर सकती है और/या ध्यान में परिवर्तन को प्रेरित कर सकती है, जिसके परिणामस्वरूप सेंसर सिग्नल के कृत्रिम क्षणिक परिवर्तन होते हैं । इसके अलावा, एस्ट्रोसाइट्स और न्यूरॉन्स दोनों को यांत्रिक विरूपण का जवाब देने के लिए सूचित किया गया है जैसे कि उच्च परफ्यूजनदरों 32,33द्वारा लगाया गया है। हमारे हाथों में, एक विश्वसनीय पेरिटैल्टिक पंप का उपयोग करके, ऊतक और उद्देश्य (मेनिस्कस) के बीच खारा की छोटी और स्थिर मात्रा को बनाए रखने के साथ यहां उपयोग किए जाने वाले परफ्यूजन वेग (1.5-2.5 mL/min) पर बेसलाइन स्थितियों के तहत एक स्थिर FRET-सिग्नल में परिणाम है; चित्रा 8)।
वर्तमान अध्ययन में, हम यह भी प्रदर्शित करते हैं कि एटीम1.03YEMK के साथ FRET-आधारित इमेजिंग को न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स में एटीपी स्तर की निगरानी के लिए नियोजित किया जा सकता है। सेलुलर एटीपी की माप के लिए पहले पेश किया गया एक वैकल्पिक साधन तथाकथित लुसिफेरिन-ल्यूसिफ़ेराज़ परख34,35,36,37है । हालांकि, यह दृष्टिकोण बायोल्यूमिनेसेंस की इमेजिंग पर आधारित है और केवल उच्च पृष्ठभूमि शोर के स्तर के कारण आंशिक रूप से कम लौकिक और स्थानिक संकल्प प्रदान करता है। हाल के वर्षों में नियमित रूप से नियोजित एक अन्य विधि आयन के प्रति संवेदनशील फ्लोरोफोर मैग्नीशियम ग्रीन38,39,40का उपयोग करके इंट्रासेलर मैग्नीशियम एकाग्रता में परिवर्तन की इमेजिंग थी । यह दृष्टिकोण इस अवलोकन से संबंधित है कि एटीपी की खपत के परिणामस्वरूप इसके सह-कारक मैग्नीशियम की रिहाई होती है । मैग्नीशियम हरे रंग के साथ इमेजिंग जिससे केवल एटीपी के स्तर में परिवर्तन का एक माध्यमिक अनुमान प्रदान करता है। इसके अलावा, मैग्नीशियम ग्रीन भी इंट्रासेलुलर कैल्शियम में परिवर्तन के प्रति संवेदनशील है, जब इस विधि के साथ प्राप्त परिणामों की व्याख्या करते समय एक और कठिनाई शुरू होती है।
सेलुलर मेटाबोलाइट्स की डायरेक्ट इमेजिंग के लिए आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड नैनोसेंसर का हालिया विकास, इसलिए,11,12आगे एक बड़ा कदम का प्रतिनिधित्व किया। कई अलग – अलग सेंसर तैयार किए गए जिनसे इंट्रासेलर एटीपी36,41 ,42,43की माप के लिए नियोजित किया जा सकता है . उन में रेशियोमेट्रिक फ्लोरोसेंट एटीपी इंडिकेटर “क्वीन”41 के साथ-साथ पर्सवलएचआर भी हैं, जो एटीपी: एडीपी अनुपात42को होश में रखते हैं। जबकि बाद की जांच कोशिकाओं की ऊर्जा की स्थिति के अध्ययन के लिए एक मूल्यवान उपकरण है, इसके लिए पीएच42में परिवर्तन ों के एक साथ माप की आवश्यकता होती है।
एटीम एक नैनोसेंसर है जिसमें से कई वेरिएंट मौजूद हैं, जो-दूसरों के बीच-एटीपी14के लिए उनकी बाध्यकारी आत्मीयता में भिन्न हैं । विट्रो में, ATeam1.03YEMK 37 डिग्री सेल्सियस पर 1.2 mM के एक कश्मीरडी प्रदर्शित करता है, जो विभिन्न न्यूरोनल सेल प्रकारों में निर्धारित सेलुलर एटीपी स्तर के करीब है, हाइपोथैलेमस और सेरिबैलम34 से लेकर हिप्पोकैम्पस37,44,45तक। क्यूवेट मापन में, तापमान को 10 डिग्री सेल्सियस तक कम करने के परिणामस्वरूप एटीम 1.03YEMK की एटीपी के लिए बाध्यकारी आत्मीयता में काफी कमी आई, जिससे यह सुझाव दिया गया कि यह कमरे के तापमान14पर सेलुलर इमेजिंग के लिए आदर्श नहीं हो सकता है। हमारे पहले अध्ययन15,हालांकि, प्रदर्शन किया है कि व्यवहार और अलग जोड़तोड़ के लिए न्यूरॉन्स और एस्ट्रोसाइट्स में व्यक्त ATeam1.03YEMK की प्रतिक्रिया के पास शारीरिक और कमरे के तापमान पर समान है, यह दर्शाता है कि सेंसर दोनों स्थितियों के तहत इंट्रासेलुलर एटीपी स्तर के विश्वसनीय निर्धारण की अनुमति देता है । इसके अलावा, हमारे पिछले प्रयोगों ने15कोशिकाओं के अंदर व्यक्त ATeam1.03YEMK की पीएच-संवेदनशीलता को संबोधित किया, जिसमें यह दर्शाया गया है कि यह इंट्रासेलर पीएच में लगभग 0.1-0.2 पीएच इकाइयों द्वारा परिवर्तन के प्रति असंवेदनशील है। यदि कम एमएम रेंज में केडी एक चिंता का विषय है, वैकल्पिक एटीम वेरिएंट14इस्तेमाल किया जा सकता है, उनमें से ATeam के लाल स्थानांतरित वेरिएंट (“जाओ-ATeam”)४३।
ATeam1.03YEMK का उपयोग कर के हमारे प्रयोगों से पता चलता है कि कुछ mM द्वारा एक्स्ट्रासेलुलर पोटेशियम एकाग्रता में वृद्धि केवल (3 से 8 mM तक) के परिणामस्वरूप ऑर्गानोटिपिक स्लाइस संस्कृति में एस्ट्रोसाइट्स में ATeam1.03YEMK अनुपात में क्षणिक वृद्धि हुई है। यह अवलोकन पहलेके अध्ययनों कीपुष्टि करता है15,46 और स्पष्ट रूप से इंगित करता है कि एस्ट्रोसाइट्स सक्रिय न्यूरॉन्स द्वारा पोटेशियम की रिहाई का जवाब देते हैं, जो उनके एटीपी उत्पादन में वृद्धि के साथ सक्रिय न्यूरॉन्स द्वारा पोटेशियम की रिहाई का जवाब देते हैं, ज्यादातर एनए+/K+-ATPase और Na+/HCO3– coट्रांसपोर्टर, क्रमशः47,48की उत्तेजना के परिणामस्वरूप होने की संभावना है। इसके विपरीत, न्यूरॉन्स ने प्रतिक्रिया नहीं दिखाई, जो पिछले काम के साथ-साथ15के अनुरूप है। हालांकि, दोनों सेल प्रकारों ने15से पहले दिखाए गए सेलुलर ग्लाइकोलिसिस और माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन के अवरोध पर तेजी से और दृढ़ता से प्रतिक्रिया व्यक्त की। रासायनिक इस्केमिया की शर्तों के तहत, एटीम FRET अनुपात एक नए स्थिर स्तर पर गिर गया, सेलुलर एटीपी की मामूली कमी का संकेत है । बाद के परिणाम से पता चलता है कि न्यूरॉन्स के साथ-साथ एस्ट्रोसाइट्स दोनों ही सिनैप्टिक एक्टिवेशन या न्यूरोट्रांसमीटर के आवेदन द्वारा अतिरिक्त उत्तेजना के बिना स्थिर-राज्य की स्थितियों के तहत एटीपी की प्रासंगिक खपत का प्रदर्शन करते हैं। एक साथ लिया, हम निष्कर्ष निकालते हैं कि आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड नैनोसेंसर के साथ FRET-आधारित इमेजिंग, उनमें से ATeam1.03YEMK,विभिन्न परिस्थितियों में इंट्रासेल्युलर एटीपी स्तर और सेलुलर एटीपी खपत में परिवर्तन के लिए जिम्मेदार सेलुलर प्रक्रियाओं को स्पष्ट करने के लिए एक मूल्यवान दृष्टिकोण प्रदान करेगा।
The authors have nothing to disclose.
लेखक विशेषज्ञ तकनीकी सहायता के लिए क्लाउडिया रोडरिगो और सिमोन ड्यूरी का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । हम ऑर्गानानोटिक स्लाइस संस्कृतियों की तैयारी में सहायता के लिए डॉ निकलस जे जर्काउ और M.Sc जोएल नेल्सन को धन्यवाद देते हैं । लेखक की प्रयोगशाला में अनुसंधान जर्मन रिसर्च एसोसिएशन (डीएफजी) द्वारा वित्त पोषित किया गया था; २७९५ के लिए: आरओ 2327/13-1 और SPP १७५७: आरओ 2327/8-2 सीआरआर के लिए; और एसपीपी १७५७: युवा ग्लिया स्टार्ट-अप आरएल को धन) ।
2-deoxyglucose | Alfa Aesar | L07338 | Non-metabolizable glucose analog |
36-IMA-410-019 Argon laser | Melles Griot | 488 nm wavelength argon | |
Ascorbic acid | Carl Roth | 3525.1 | Antioxidant, Vitamin C |
band pass filters 483/32 | AHF Analysentechnik AG | Splitter compatible emmision filter | |
band pass filters 542/27 | AHF Analysentechnik AG | Splitter compatible emmision filter | |
Beamsplitter T 455 LP | AHF Analysentechnik AG | Excitation dichroic mirror | |
Beamsplitter T 505 LPXR | AHF Analysentechnik AG | Splitter dichroic | |
Confocal laser scannig microscope C1 | Nikon Microscope Solutions | Modular confocal microscope system C1 | |
Data processing Origin Pro 9.0.0 (64-bit) | OriginLab corporation | Scientific graphing and data analysis software | |
D-glucose monohydrate | Caelo | 2580-1kg | |
DPBS | GIBCO/Life | 14190250 | Dulbecco's phosphate-buffered saline |
Eclipse E 600FN upright microscope | Nikon Microscope Solutions | ||
Eclipse FN1 upright microscope | Nikon Microscope Solutions | ||
Experimental chamber | custom build | Perfusion chamber for live-cell imaging | |
EZ-C1 Silver Version 3.91 | Nikon Microscope Solutions | Imaging software for confocal microscope | |
Hanks' Balanced Salt solution | Sigma-Aldrich | H9394 | With Phenol Red for pH monitoring |
HERAcell 150 | Thermo Scientific | CO2 incubator HERAcell ® 150 with decontamination routine | |
HERAsafe KS/KSP | Thermo Scientific | Safety Cabinet | |
Horse serum | GIBCO/Life | 26050088 | Heat inactivated |
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Image J 1.52i | Wayne Rasban national Institute of Health | Image processing Software available in the public domain | |
Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | Insulin from bovine pancreas |
IP serie peristaltic pump | Ismatec | High-precisionmulti-channel pump | |
Layout software, Illustrator CS6 | Adobe | Vector graphics editor | |
L-glutamine | GIBCO/Life | 25030024 | |
Microm HM 650 V | Thermo Scientific | Vibration microtome. Thermo scientific discontinued the production of the device in the meantime. Any other slicer or tissue chopper siutable for slicing living tissue is fine, too. | |
Microscope stage | custom build | ||
Microsoft Excel 16 | Microsoft | Spreadsheet software for basic data processing | |
Millicell culture insert | Merck Millipore | PICM0RG50 | Hydrophilized PTFE, pore size 0.4 μm |
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NaN3 (Sodium Azide) | Sigma-Aldrich | S-8032 | Mitochondrial inhibitor (complex IV inhibitor). CAUTION: Azide is toxic. Be aware not to accidentally ingest or inhale it, and prevent ist absoption through the skin. |
Nikon Fluor 40x / 0.80 W DIC M ∞/0 WD 2.0 | Nikon Microscope Solutions | Water Immersion Microscope Objective | |
NIS Elements 4.50 advanced Research | Nikon Microscope Solutions | Imaging software. Upgraded version for FRET imaging | |
ORCA-Flash4.0 | Hamamatsu Photonics | Digital CMOS camera | |
Perfusion tubing | Pro Liquid GmbH | Tygon tubing, 1.52 x 322 mm (Wd: 0.85) | |
Photoshop CS 6 Version 13.0 | Adobe | Image processing software | |
Sodium L-lactate | Sigma-Aldrich | 71718-10G | |
ssAAV-2/2-hSyn1-ATeam1.03YEMK-WPRE-hGHp(A) | ETH Zürich | v244 | Single-stranded AAV vector that induces the expression of ATeam1.03YEMK under the control of the human synapsin 1 promoter fragment hSyn1. |
ssAAV-5/2-hGFAP-hHBbI/E-ATeam1.03YEMK-WPRE-bGHp(A) | ETH Zürich | v307 | Single-stranded AAV vector that induces the expression of ATeam1.03YEMK under the control of the human glial fibrillary acidic protein promoter fragment ABC1D. |
WVIEW GEMINI optic system | Hamamatsu Photonics | Emission Image Splitter |