Мы представляем моторное центробежное микрофлюидное устройство, которое может культивировать клеточные сфероиды. С помощью этого устройства, сфероиды одного или нескольких типов клеток могут быть легко сконкультурированы в условиях высокой гравитации.
Трехмерная культура сфероидных клеток может получить более полезные результаты в клеточных экспериментах, поскольку она может лучше имитировать клеточную микросреду живого тела, чем двухмерную клеточную культуру. В этом исследовании мы изготовили электромоторную платформу Lab-on-a-CD (compact disc), называемую центробежной микрофлюидной системой культуры сфероидов (CMS), чтобы создать трехмерные (3D) клеточные сфероиды, реализующие высокую центробежную силу. Это устройство может варьировать скорость вращения для создания условий гравитации от 1 х г до 521 х г. Система CMS имеет 6 см в диаметре, имеет сто 400 мкм микроуэллов, и производится путем литья с полидиметилсилоксаном в поликарбонатной плесени, сделанной компьютерным аппаратом управления числом. Барьерная стена на входе канала системы CMS использует центробежную силу для равномерного равномерного распределения клеток внутри чипа. В конце канала есть область слайда, которая позволяет клеткам входить в микроколодцы. В качестве демонстрации, сфероиды были созданы монокультуры и кокультуры человеческих жиров полученных стволовых клеток и легких фибробластов человека в условиях высокой гравитации с помощью системы. Система CMS использовала простую схему работы для производства сфероидов кокультуры различных структур концентрических, Янус, и сэндвич. Система CMS будет полезна в клеточной биологии и исследованиях тканей, которые требуют сфероидов и органоидной культуры одного или нескольких типов клеток.
Легче моделировать биологические микросреды in vivo с трехмерной (3D) культурой сфероидных клеток, чем с двухмерной (2D) клеточной культурой (например, обычной культурой клеток петри) для получения более физиологически реалистичного экспериментального результаты1. В настоящее время доступны методы формирования сфероидов включают висячие капли техники2, жидкая накладка техника3, carboxymethyl целлюлозы техники4, магнитной силы на основе микрофлюидной техники5, и использование биореакторы6. Хотя каждый метод имеет свои преимущества, необходимо дальнейшее улучшение воспроизводимости, производительности и генерации сфероидов кокультуры. Например, в то время как микрофлюидная техника5 на основе магнитной силы является относительно недорогой, влияние сильных магнитных полей на живые клетки необходимо тщательно рассмотреть. Преимущества сфероидной культуры, особенно в изучении мезенхимальной дифференциации стволовых клеток и распространения, были зарегистрированы в нескольких исследованиях7,8,9.
Центробежная микрофлюидная система, также известная как lab-on-a-CD (компактный диск), полезна для легкого контроля жидкости внутри и использования вращения субстрата и, таким образом, была использована в биомедицинских приложениях, таких как иммуноанализы 10, колорометрические анализы для обнаружения биохимических маркеров11,усиление нуклеиновой кислоты (ПЦР), автоматизированные системы анализа крови12и все-в-одном центробежные микрофлюидные устройства13. Движущей силой, контролирующей жидкость, является центростремительная сила, создаваемый вращением. Кроме того, несколько функций смешивания, вальвинга и разделения образцов можно сделать просто в этой единственной платформе компакт-диска. Однако, по сравнению с вышеупомянутыми методами биохимического анализа, было меньше испытаний, применяющих CD-платформы к культурным клеткам, особенно сфероидам14.
В этом исследовании мы показываем производительность центробежной микрофлюидной сфероидной системы (CMS) путем монокультуры или кокультуры стволовых клеток человека, полученных из жиров (hASC) и фибробластов легких человека (MRC-5). В этой статье подробно описывается методология исследования нашей группы15. Таким образом, платформа сфероидной культуры-на-CD может быть легко воспроизведена. Представлена система генерации CMS, включающая чип культуры CMS, держатель чипа, двигатель постоянного тока, моторную установку и вращающуюся платформу. Моторная крепление напечатано 3D с акрилонитрилом бутадиена стирола (ABS). Держатель чипа и вращающаяся платформа cNC (компьютерный цифровой контроль) отражаются с ПК (поликарбонат). Скорость вращения двигателя контролируется от 200 до 4500 об/мин путем кодирования PID (пропорционально-интегрально-производной) алгоритма на основе импульсно-ширинной модуляции. Его габариты 100 мм х 100 мм х 150 мм и вес 860 г, что делает его легким в обращении. Используя систему CMS, сфероиды могут быть созданы в различных условиях гравитации от 1 х г до 521 х г,поэтому изучение содействия дифференциации клеток в условиях высокой гравитации может быть продлено с 2D-клеток16,17 до 3D Сфероида. Кокультура различных типов клеток также является ключевой технологией для эффективного имитирования среды in vivo18. Система CMS может легко генерировать монокультурные сфероиды, а также сфероиды кокультуры различных типов структур (например, концентрические, янус ы, и сэндвич). Система CMS может быть использована не только в простых сфероидных исследованиях, но и в 3D органоидных исследованиях, для рассмотрения структур органов человека.
CMS является закрытой системой, в которой все инъекционные клетки попадают в микроскважину без отходов, что делает его более эффективным и экономичным, чем обычные методы генерации сфероидов на основе микроскважин. В системе CMS, средства массовой информации заменяется каждые 12-24 ч через …
The authors have nothing to disclose.
Это исследование было поддержано Программой фундаментальных научных исследований (2016R1D1A1B03934418) и Программой развития био- и медицинских технологий (2018M3A9H1023141) NRF и финансируется корейским правительством, MSIT.
3D printer | Cubicon | 3DP-210F | |
Adipose-derived mesenchymal stem cells (hASC) | ATCC | PCS-500-011 | |
Antibiotic-Antimycotic | Gibco | 15240-062 | Contained 1% of completed medium and buffer |
CellTracker Green CMFDA | Thermo Fisher Scientific | C2925 | 10 mM |
CellTracker Red CMTPX | Thermo Fisher Scientific | C34552 | 10 mM |
Computer numerical control (CNC) rotary engraver | Roland DGA | EGX-350 | |
DC motor | Nurielectricity Inc. | MB-4385E | |
Dimethylsulfoxide (DMSO) | Sigma Aldrich | D2650 | |
Dulbecco's modified eaggle's medium (DMEM) | ATCC | 30-2002 | |
Dulbecco's phosphate buffered saline (D-PBS) | ATCC | 30-2200 | |
Fetal bovine serum | ATCC | 30-2020 | Contained 10% of completed medium |
human lung fibroblasts (MRC-5) | ATCC | CCL-171 | |
Inventor 2019 | Autodesk | 3D computer-aided design program | |
Petri dish Φ 150 mm | JetBiofill | CAD010150 | Surface Treated |
Plasma cleaner | Harrick Plasma | PDC-32G | |
Pluronic F-127 | Sigma Aldrich | 11/6/9003 | Dilute with phosphate buffered saline to 4% (w/v) solution |
Polycarbonate (PC) | Acrylmall | AC15PC | 200 x 200 x 15 mm |
Polydimethylsiloxane (PDMS) | Dowcorning | Sylgard 184 | |
Trypsin | Gibco | 12604021 |