Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Koronar progenitorceller och lösliga biomarkörer i kardiovaskulär prognos efter koronar angioplastik

doi: 10.3791/60504 Published: January 28, 2020

Summary

Utveckling av stora negativa kardiovaskulära händelser, som påverkar kardiovaskulär prognos efter koronar angioplastik, påverkas av omfattningen av koronar skador och vaskulär reparation. Användningen av nya koronar cellulära och lösliga biomarkörer, reaktiva till vaskulär skada och reparation, är användbara för att förutsäga utvecklingen av MACEs och prognos.

Abstract

Stora negativa kardiovaskulära händelser (MACEs) påverkar negativt den kardiovaskulära prognosen hos patienter som genomgår koronar angioplastik på grund av koronar ischemisk skada. Omfattningen av koronarskador och mekanismerna för vaskulär reparation är faktorer som påverkar den framtida utvecklingen av MACEs. Inneboende vaskulära funktioner som plack egenskaper och kranskärl komplexitet har visat prognostisk information för MACEs. Användningen av intrakoronar cirkulerande biomarkörer har dock lagts ned som en lämplig metod för tidig identifiering och prognos för MACEs, eftersom de närmare återspeglar dynamiska mekanismer som involverar koronarskador och reparation. Bestämning av koronar cirkulerande biomarkörer under angioplastik, såsom antalet subpopulationer av mononukleära stamceller (MPCs) samt koncentrationen av lösliga molekyler som reflekterar inflammation, cellvidhäftning och reparation, möjliggör bedömning av den framtida utvecklingen och prognosen för MACEs 6 månader efter koronar angioplastik. Denna metod framhävs av dess translationella karaktär och bättre prestanda än perifert blod cirkulerande biomarkörer när det gäller förutsägelse av MACEs och dess effekt på den kardiovaskulära prognosen, som kan tillämpas för riskstratifiering av patienter med kranskärlssjukdom som genomgår angioplastik.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Kranskärlsangioplastik och stenting representerar ett bärgningsförfarande för patienter med kranskärlssjukdom (CAD). Men stora negativa kardiovaskulära händelser (MACEs), inklusive kardiovaskulär död, hjärtinfarkt, koronar restenosoch episoder av angina eller dekompensera hjärtsvikt, kan uppstå månader efter koronar ingripande, vilket föranledde oplanerade besök på sjukhuset. MacEs är vanliga över hela världen och deras bbidödlighet är hög1.

Koronarischemisk skada inducerar tidig vaskulär respons och reparativa mekanismer som innebär mobilisering av MPCs på grund av deras differentieringförmåga och/eller angio-reparativ potential, samt produktion av lösliga molekyler som intercellulära vidhäftningsmolekyler (IKU:er), matrismetalloproteinaser (MMPs), och reaktiva syrearter, reflekterande cellvidhäftning, vävnadsremodellering och oxidativ stress. Även inneboende vaskulära funktioner som plack egenskaper och kranskärl komplexitet har använts för att förutsäga MACEs, vissa studier har föreslagit att biomarkörer relaterade till de mekanismer för skada och reparation som förekommer i kranskärlen kan vara mycket användbart för tidig identifiering och prognos av kardiovaskulära händelser hos patienter med CAD lämnas in till koronar angioplastik2,3,4,5.

Kontinuerligt intresse för att förstå de mekanismer som ligger till grund för CAD skada och reparation har motiverade utredare att studera intracoronary cirkulerande biomarkörer, eftersom koronar provtagning närmare återspeglar vaskulär skada och reparation6. Karakterisering av koronar biomarkörer i studier i människa har dock varit knappa7,8,9. Syftet med denna studie var därför att beskriva en metod för att bestämma mängden koronar som cirkulerar mpcs och lösliga molekyler, vilket återspeglar både vaskulär skada och reparation, och att visa om dessa biomarkörer är associerade med MACEs och den kliniska prognosen hos CAD-patienter som genomgick koronar angioplastik. Denna metod bygger på användning av vaskulära, cirkulerande MPCs och lösliga molekyler som erhålls genom provtagningplatser närmast kärlskadan. Det kan också vara användbart för kliniska studier för nedre delen ischemi, stroke, vaskulit, venös trombos och andra skador med vaskulär skada och reparation.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Detta protokoll uppfyller de institutionella riktlinjerna från etikkommittén för humanforskning.

1. Koronar angiografi, ultraljud och blodprov

  1. Begär grundläggande klinisk och demografisk information före koronar intervention. Samla in individens data: ålder, kön, nuvarande rökning status, body mass index (BMI), högt blodtryck, dyslipidemi, diabetes mellitus, mediciner, och indikationen för nuvarande koronar angiografi.
  2. Utför koronar angiografi genom hjärtkateterisering med hjälp av en radiell strategi. Detta förfarande bör utföras under en fluoroskopi guide i hemodynamics rummet av expert kardiologer.
    IDENTIFIERA värdefulla kärl. För den aktuella studien definierades utvärderbara kärl som artärer med sektioner större än 1,5 mm och lumen stenos på mer än 50%.
  3. För den intravaskulära ultraljudkatetern till intresseregionen och spela in bilder. Använd lämplig programvara för att lokalisera och mäta det minsta luminalområdet.
  4. Använd en koronar kateter för att samla 10 ml blod från närmaste plats till placket.
  5. Efter patientansvarsfrihet, schemalägga periodiska medicinska utvärderingar för att följa upp studieslutpunkter. Om telefonkontakt inte är möjlig eller ett läkarbesök försenas längre än 2 månader, be en behörig person (tidigare utformad) att verifiera studiemåtten.
    OBS: Tänk på något av följande en MACE: 1) kardiovaskulär död, 2) nya hjärtinfarkt, 3) instabil angina föranledde en oplanerad medicinsk besök inom 24 h, 4) stentiös restenos som framgår av koronar angiografi, 5) episoder av dekompenserad hjärtsvikt som kräver klinisk uppmärksamhet.

2. Bestämning av cirkulerande mpcs(figur 2)

  1. Bearbeta blodet inom 1 h från samlingen. Överför 6 ml av det insamlade blodet till ett koniskt 15 ml-rör och späd 1:1 (v/v) med 1x fosfatbuffrad kokskokin (PBS), pH = 7,4.
  2. Tillsätt 2 ml densitetgradient medium till tre provrör. Överför försiktigt tre lika stora volym alikvoter av utspädt blod till varje provrör som innehåller densitetgradientens medium.
    OBS: Den totala volymen densitet gradient medium och utspädd blod bör inte överstiga tre fjärdedelar av provröret maximal kapacitet.
  3. Centrifug vid 1 800 x g, 4 °C i 30 min. Överför bandet vid gränssnittet mellan skikten till ett nytt rör. Tillsätt 2 ml PBS och centrifug vid 1 800 x g, 4 °C i 6 min. Pelleten kommer att innehålla MPCs.
  4. Tvätta pelleten flera gånger. Aspirera bort den tidigare lösningen och försiktigt återuppförcellen pellet i färsk PBS. För efterföljande tvättar, centrifug vid 1 800 x g, 4 °C i 2 min. Upprepa processen 6x.
  5. Omblanda cellpelleten i 1 ml PBS. Blanda 20 μL av cellsuspensionen med 0,4% trypanblått, utspädd 1:1 (v/v). Applicera en droppe på en hemocytometer och räkna de ofärgade cellerna under ett lätt mikroskop.
  6. Fortsätt till MPCs beslutsamhet. Etikett 5 ml flöde cytometri rör och aliquot ut 1 x 106 celler per rör. Förbered motsvarande isotypmatchade kontrollantikroppar. Centrifug vid 1 800 x g, 4 °C i 6 min och kassera supernatanten.
  7. Tillsätt den primära antikroppen utspädd i 100 μL av en antikroppsinkubationslösning bestående av 1x PBS (pH = 7,4), 2 mM etylenediaminetetraacetic syra (EDTA) och 0,05% albumin av bovint serum (BSA). Häng om i 10 s och inkubera i 20 min vid 4 °C, ljusskyddad. Protokollet kan pausas i detta steg genom att lymfocyterna fastställs i 4 % paraformaldehyd i PBS och lagra prover upp till 24 timmar vid 4 °C.
    De slutliga koncentrationerna av de primära antikroppar som används i detta protokoll var CD45 1:50, CD34 1:20, KDR 1:50, CD184 1:20, CD133 1:50.
  8. Centrifug vid 1 800 x g, 4 °C i 2 min och kassera supernatanten. Omupphängning i 500 μL 1x PBS (pH = 7,4), 2 mM EDTA.
  9. Utför flödecytometrianalys. Använd isotypmatchade kontrollantikroppar för att ställa in bakgrundsfärgningen. Välj sedan lymfocyter sprids på FSC / SSC tomt, försöker utesluta kvarvarande granulocyter, cellulära skräp och andra partiklar, som vanligtvis ligger i den nedre, vänsterdistribuerade i tomten. Sådan distribution betraktas som 100 %.
  10. Använd en grind som innehåller ett stort antal celler med vanlig immunophenotyp CD45+ och CD34+. För dubbelpositiva immunphenotyper, använd en grind som tidigare identifierat CD45+, CD34+, med tillägg av antingen KDR (VEGFR-2)+, CD133+eller CD184+. Identifiera MPC-subpopulationerna med sina specifika cellytmarkörer. Rapportera i procent av gated händelser.
  11. Identifiera de viktigaste delpopulationerna av MPC. I denna studie var de viktigaste immunophenotyperna CD45+CD34+CD133+, CD45+CD34+CD184+, CD45+CD34+CD133+CD184+, CD45+CD34+KDR+, CD45+CD34+KDR+CD133+och CD45+CD34+KDR+CD184.
    OBS: Cellens ytmarkörer som användes var CD45 (lymfocyter), CD34 (endotelstamceller och/eller kärlceller), KDR (VEGFR-2, membranmarkör för endotelceller), CD133 (endotelstamceller) och CD184 (hematopoietiska stamceller och endotelceller).

3. Bestämning av plasmalösliga biomarkörer

  1. Använd en enzymbunden immunosorbent-analys (ELISA) för att bestämma koncentrationen av SICAM-1 och MMP-9(figur 3, övre raden).
    1. Centrifug blodproverna vid 3 000 x g, rumstemperatur i 5 min och samla plasman.
    2. Märk standarder, provrör och styrrör. Equilibrate de förbelagda brunnarna i analysplattan genom att tvätta 2x med tvättbufferten i ELISA-satsen.
    3. Överför standarder, prover och kontroller till brunnarna. Försegla och inkubera vid 37 °C i 90 min.
      OBS: Låt inte brunnarna torka helt.
    4. Kassera innehållet och tillsätt biotindetekteringsantikroppen. Försegla och inkubera vid 37 °C i 60 min.
    5. Kassera innehållet och tvätta 3x. Försegla plack och inkubera sekventiellt med streptavidinarbetslösning följt av tetrametylbensidinsubstrat vid 37 °C i 30 min, ljusskyddade. Tvätta 3x mellan inkuber. När färgen utvecklas, tillsätt stopplösningen och läs den optiska densitetens absorbans i en elisa-läsare av mikroplatta.
  2. Använd en immunomagnetisk multiplexing-analys för att bestämma koncentrationen av tumörnekrosfaktor alfa (TNFα) och interleukin 1 beta (IL-1β) (figur 3, nedre raden).
    1. Märk standarder, provrör och styrrör.
    2. Vortex de magnetiska pärlorna flaskor för 30 s. Överför pärla suspensionen till lämpligt storlek rör, och sedan till brunnarna i multiplexing analysplattan. Periodisk virvelning undviker utfällning av pärlorna.
    3. Sätt fast den handhållna magnetiska plattbrickan. Vänta 2 min för pärlorna att ackumuleras på botten av varje brunn och snabbt invertera både handhållna magnetiska plattan bricka och platta montering, över en diskbänk eller avfallsbehållare. Kom ihåg att använda den handhållna magnetiska plattan bricka för att upprätthålla pärlor inuti brunnarna.
    4. Tillsätt 150 μL tvättbuffert i varje brunn och vänta 30 s så att pärlorna kan ackumuleras på botten. Kassera innehållet i steg 3.2.3. Tillsätt sedan 25 μL universell analysbuffert (tillhandahålls i satsen) följt av 25 μL beredda standarder, prover och kontroller.
    5. Försegla plattan och inkubera i minst 60 min vid rumstemperatur, ljusskyddad, med konstant skakning vid 500 varv/min. Alternativt, inkubera över natten vid 4 °C, ljusskyddad, med konstant skakning vid 500 varv/min om möjligt.
    6. Tvätta 2x genom att tillsätt 150 μL tvättbuffert och vänta 30 s. Kassera innehållet genom att föra in den handhållna magnetiska plattbrickan. Vänta 2 min och invertera över en diskbänk eller avfallsbehållare.
    7. Inkubera sekventiellt med 25 μL detektionsblandning av detekteringsantikroppar följt av 25 μl streptavidin-PE-lösning vid rumstemperatur i 30 min, förseglade och ljusskyddade, med konstant skakning vid 500 varv/min. Tvätta 2x mellan inkuber, enligt beskrivningen i steg 3.2.6.
    8. Hämta avläsningarna. Tillsätt 120 μL avläsningsbuffert. Försegla plattan och inkubera 5 min vid rumstemperatur, ljusskyddad, med konstant skakning vid 500 varv/min. Kör behandlingen på en multiplexing analysläsare. Justera avläsningsparametrarna enligt varje analyt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Koronar, venös sinus och perifert blod samlades in från 52 patienter som genomgick koronar angiografi (figur 1) och visade en hög prevalens av hypertoni och dyslipidemi. Vid den kliniska uppföljningen var 11 (21,1 %) MacEs inträffade 6 månader efter koronar angiografi: död (n = 1), angina som kräver sjukhusnärvaro (n = 6), hjärtinfarkt (n = 2), och/eller bevis på hjärtsvikt (n = 4).

Koronarkoncentrationen vid baslinjen hos de flesta MPC:er var signifikant lägre hos patienter som utvecklade MACEs(figur 4),med en större minskning av MPC-subpopulationer CD34+CD133+ och CD45+CD34+CD133+CD184+. På samma sätt hade patienter som utvecklade MACEs en ökad baslinje i koronarmängder av sICAM-1 och lägre MMP-9(tabell 1).

Koronar MPCs (subpopulationer CD45+CD34+CD133+ och CD45+CD34+CD133+CD184+) och sICAM-1 (dichotomized av deras medianvärden) visade prognostisk förmåga för MACE-fri överlevnad(figur 5).

Vi karakteriserade vidare dynamiken i lösliga biomarkörer under olika förhållanden, eftersom det finns mycket lite information om kranskärlsblod bestämning. Uttrycket av tumörnekrosfaktor alfa (TNFα) visade variationer beroende på tidpunkten för mätningen (pre- eller postangioplastik) och placeringen av koronarprovtagning baserat på en jämförelse av olika lumenområden vid samma kranskärl med intravaskulär ultraljud (figur 6).

Figure 1
Figur 1: Koronar angiografi och blodinsamling. Bilden visar hjärtkateterisering med hjälp av en radiell strategi, utförs under en fluoroskopi guide i hemodynamics rummet. Kardiologi experter utvärdera koronar fartyg under angiografi och samla koronar blod från närmaste plats till ateroma plack och / eller sinus blod genom en hjärtkateter strax före ballong angioplastik. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2: Beredning av blodprov och MPCs-bestämning genom flödescytometri. (A)Densitetgradient efter blodcentrifugering (blå pil = lymfocytband). (B) Insamling av lymfocytfasen. (C) Tvättar med 1x PBS. (D) Centrifugering. (E)Pelletbildning längst ner på provröret. (F) Neubauercellupphängningsbelastning. (G) Lymfocytcellantal med ljusmikroskopi. (H)Bestämning av cellsubpopulationer genom flödescytometri. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3: Immunoassays att bestämma blodlösliga medlare. Övre raden: Enzym-linked immunosorbent assay (ELISA). Bilden visar hur information från kartan prover (anteckningsbok) överfördes till programvaran för att starta avläsningar efter provberedning, antikroppsinkubation och tvättar. Den visar också gul färgutveckling, antingen i standardbrunnarna (vänster pelare i placket) eller i testproverna (högra kolumner i placket). Nedre raden: Immuno-magnetisk multiplexing analys. Efter provberedning, magnetisk bead-antibody inkubation och tvättar överfördes provinformationen till lämplig immuno-magnetic multiplexing assay systemläsare programvara, och en typisk standardkurva visas på skärmen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 4
Figur 4: Koronar som cirkulerar i mononukleära stamceller (MPCs). Siffran visar subpopulationer för baslinjen %MPCs. (A)Representativa avläsningar från flödescytometri. (B)Kvantifiering av %MPCs-delpopulationer med flödescytometri, ritade enligt presentationen av MACEs (*) = betydande skillnad, med p < 0,05. Denna siffra har ändrats från Suárez-Cuenca et al.10. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 5
Figur 5: Koronar som cirkulerar cellulära (MPCs), lösliga biomarkörer och prognos. Siffran visar baslinjekoronar blodmängder av (A) % MPCs subpopulations bestäms av flödecytometri och (B) plasmakoncentration av sICAM-1 bestäms av ELISA, båda ritade enligt presentationen av MACEs under 6 månaders uppföljning. Den blå linjen anger antalet individer med riskvärden för varje biomarkör, till exempel lägre %MPCs eller högre sICAM-1. sICAM-1 = löslig intercellulär vidhäftningsmolekyl 1. Denna siffra har ändrats från Suárez-Cuenca, et al.10. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 6
Figur 6: Villkor som fastställer variabiliteten hos koronar som cirkulerar i cirkulationskretsar. Figuren visar förändringar i intracoronary koncentrationen av tumör nekros faktor alfa (TNFα), enligt mätningstiden (A: Pre-angioplastik eller B: Post-angioplastik) samt platsen för koronar provtagning (jämförelse mellan två koronar lumen diametrar vid en 3,5 mm cutoff, mätt med intravaskulärultraljud). (*) = p < 0,05 skillnad på biomarkörer som erhållits före angioplastik efter det att angioplastik har uppnåtts och provtagningsskillnad på platser för koronarlumendiametrar ≤3,5 mm jämfört med >3,5 mm. Denna siffra har ändrats från Suárez-Cuenca et al.11. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Table 1
Tabell 1: Baslinjeblodlösliga biomarkörer. (*) anger p < 0,05 skillnad biomarkörer från koronar blod kontra perifer cirkulation. (**) anger p < 0,05, utan MACEs jämfört med MACEs; oberoende T-test. Förkortningar: sICAM-1 = löslig intercellulär vidhäftningsmolekyl 1; IL-1β = interleukin 1 beta; MMP-9 = matrismetalloproteinas 9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Blodinsamling från den drabbade kranskärlen kan vara svår. Ibland är kranskärlen knappt tillgänglig. I detta fall kan provtagning från venous sinus vara ett alternativ. Vi utförde valideringstester jämföra cirkulerande biomarkörer i kranskärl kontra venous sinus, utan betydande skillnader. Prestandan hos cirkulerande biomarkörer validerades dock endast för koronarprovtagning. Därför återstår att utforska biomarkörernas prestanda från den venösa sinus.

Det är bäst att bearbeta proverna för MPCs inom de första 3 h efter blodinsamling. Därför bör god kommunikation upprättas mellan kardiologiteamet och labbforskarna. Under MPCs isolering bör försiktighet iakttas vid insättning av blodprov under densitetgradientberedningen vid tvättning av MPCs pellet. Slutligen, för enkelhetens skull, överför vi alltid celler till ett cytometrirör, lägger till de primära antikropparna, fixar och lagrar cellerna över natten vid 4 °C och utför flödets cytometri läsning dagen efter. När det gäller biomarkörroll cirkulerande MPCs, viktiga ansträngningar har vidtagits för att standardisera de mest kliniskt användbara immunophenotyper mellan stamceller12,men en begränsning av studien kan vara det faktum att specifika subpopulationer av cirkulerande stamceller inte har helt karakteriserats för alla kliniska scenarier inom CAD eller andra vaskulära sjukdomar. Därför bör olika subpopulationer för cirkulerande stamceller undersökas i varje studie.

Under bestämning av lösliga markörer några allmänna rekommendationer för ELISA och multiplexing analyser inkluderar användning av en flerkanalig pipett, deponeralösningar längst ner i varje brunn utan att röra vid sidoväggarna, och undvika torkning av brunnar under analysen. Kontrollera alltid provfördelningen i plattan, särskilt för multiplexing-analysen, för att undvika utfällning av de magnetiska pärlorna genom konstant virvel. Se också till att föra in bottenplattan i den handhållna magnetiska plattan bricka för att upprätthålla magnetiska pärlor inuti brunnarna, annars proverna kommer att gå förlorade under tvättar.

Vi fann att koronar cirkulerande MPCs, främst de från hematopoietiska ursprung, liksom sICAM-1 och MMP-9, var enastående biomarkörer för förutsägelse och prognos av MACEs. Detta är förenligt med uppfattningen att inflammatoriska svar och / eller vaskulär aska deslärare rifing signaler för MPC mobilisering och rekrytering, främja lokal vävnad reparation4. Därför hittade vi variationer i dessa biomarkörer i flera inställningar. Förändringar i samband med angioplastik och/eller placering av koronarprovtagning kan förklaras av effekten av effekten över ateromaplacket under angioplastik, plackets storlek och frisättningen av lösliga medlare som är sequestered i placken i koronarflödet11. Ökad IL-1β har konsekvent varit involverad i utvecklingen av plack och kliniska komplikationer13.

Vår kännedom om detta är den första studien som prospektivt utvärderar koronarsomcirkulerande MPCs roll och lösliga medlare av vaskulär skada och reparation som prognostiska biomarkörer i en population med CAD som lämnats in till koronar angioplastik, inklusive karakterisering av förändringar relaterade till angioplastik, placering av koronar provtagning och jämförelse av koronar kontra perifer provtagning. Vi tror att metoden lätt kan fastställas i alla sjukhus som utför koronar angiografi. En begränsning är dock att vi tillämpade denna metod främst hos patienter med kronisk stabil angina som släppts från en akutmottagning.

Nuvarande traditionella metoder som används för MACEs förutsägelse eller prognos i CAD har måttlig prediktiv förmåga. Det har funnits ett ökande intresse för att hitta nya biomarkörer baserat på patofysiologi mekanismer som ansvarar för reparation och förnyelse inträffar efter CAD och angioplastik. Sådana biomarkörer har visat liknande eller bättre prediktiva prestanda jämfört med traditionella metoder3,4,5,14,15. Därför tror vi att koronar cirkulerande MPCs och lösliga medlare att förutsäga risken för MacEs kommer att undersökas ytterligare i framtida prospektiva studier.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har inget att avslöja.

Acknowledgments

Författarna tackar stödet från institutionella programmet E015; och Fondo Sectorial FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BSA Roche 10735086001 Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.
Calibration Beads Miltenyi Biotec / MACS #130-093-607 MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests
CD133/1 (AC133)-PE Milteny Biotec / MACS #130-080-801 Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770 Miltenyi Biotec / MACS #130-103-798 Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC Miltenyi Biotec / MACS #130-093-601 Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD34-FITC Miltenyi Biotec / MACS #130-081-001 The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34
CD45- VioBlue Miltenyi Biotec / MACS #130-092-880 Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated
Conical Tubes Thermo SCIENTIFIC #339651 15ml conical centrifuge tubes
Cytometry Tubes FALCON Corning Brand #352052 5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.
EDTA BIO-RAD #161-0729 Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe <0.01%, As <1ppm, Insolubles <0.005%
Improved Neubauer Without brand Without catalog number Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA Blood Collection Tubes BD Vacutainer #367863 Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.
Lymphoprep Stemcell Technologies 01-63-12-002-A Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL
Paraformaldehyde SIGMA-ALDRICH #SZBF0920V Fixation of biological samples, (powder, 95%)
Pipette Transfer 1,3mL CRM Globe PF1016, PF1015 The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.
Test Tubes KIMBLE CHASE 45060 13100 Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Cassar, A., Holmes, D. R. Jr, Rihal, C. S., Gersh, B. J. Chronic coronary artery disease: diagnosis and management. Mayo Clinic Proceedings. 84, (12), 1130-1146 (2009).
  2. Regueiro, A., et al. Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).
  3. Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease. Clinical Science (Lond). 120, (7), 263-283 (2011).
  4. Samman Tahhan, A., et al. Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes. Circulation Research. 122, (11), 1565-1575 (2018).
  5. Tomulić, V., Gobić, D., Lulić, D., Židan, D., Zaputović, L. Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent. Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).
  6. Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment? European Heart Journal. 28, (8), 929-940 (2007).
  7. Kremastinos, D. T., et al. Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty. International Journal of Cardiology. 53, (3), 227-232 (1996).
  8. Karube, N., et al. Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass. American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42, (5), M787-M791 (1996).
  9. Truong, Q. A., et al. Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study. Heart Rhythm. 11, (12), 2167-2175 (2014).
  10. Suárez-Cuenca, J. A., et al. Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23, (7), 4844-4849 (2019).
  11. Suárez-Cuenca, J. A., et al. Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease. Angiology Open Access. 7, 01 (2019).
  12. Schmidt-Lucke, C., et al. Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol. PLoS One. 5, (1), e13790 (2010).
  13. Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis. American Journal of Pathology. 138, (4), 951-960 (1991).
  14. Morales-Portano, J. D., et al. Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease. International Journal of Cardiovascular Imaging. 34, (9), 1429-1437 (2018).
  15. Huang, X., et al. Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury. Yonsei Medical Journal. 58, (5), 1012-1017 (2017).
Koronar progenitorceller och lösliga biomarkörer i kardiovaskulär prognos efter koronar angioplastik
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Suárez-Cuenca, J. A., Robledo-Nolasco, R., Alcántara-Meléndez, M. A., Díaz-Hernandez, L. J., Vera-Gómez, E., Hernández-Patricio, A., Sánchez-Díaz, K. S., Gutiérrez-Buendía, J. A., Contreras-Ramos, A., Ruíz-Hernández, A. S., Pérez-Cabeza de Vaca, R., Mondragón-Terán, P. Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty. J. Vis. Exp. (155), e60504, doi:10.3791/60504 (2020).More

Suárez-Cuenca, J. A., Robledo-Nolasco, R., Alcántara-Meléndez, M. A., Díaz-Hernandez, L. J., Vera-Gómez, E., Hernández-Patricio, A., Sánchez-Díaz, K. S., Gutiérrez-Buendía, J. A., Contreras-Ramos, A., Ruíz-Hernández, A. S., Pérez-Cabeza de Vaca, R., Mondragón-Terán, P. Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty. J. Vis. Exp. (155), e60504, doi:10.3791/60504 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter