Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Koronar progenitor celler og opløselige biomarkører i hjerte-kar-prognose efter koronar Angioplasty

doi: 10.3791/60504 Published: January 28, 2020

Summary

Udvikling af større bivirkninger hjerte-kar-hændelser, som påvirker hjerte-kar-prognose efter koronar angioplastik, er påvirket af omfanget af koronar skader og vaskulær reparation. Brugen af nye koronar cellulære og opløselige biomarkører, reaktiv til vaskulære skader og reparation, er nyttige til at forudsige udviklingen af MacEs og prognose.

Abstract

Større bivirkninger hjerte-kar-hændelser (MacEs) har en negativ indvirkning på den kardiovaskulære prognose hos patienter, der gennemgår koronarangioplastik på grund af koronarisk iskæmisk skade. Omfanget af koronarskader og mekanismerne i vaskulær reparation er faktorer, der påvirker den fremtidige udvikling af MacEs. Iboende vaskulære funktioner som plak egenskaber og koronararterie kompleksitet har vist prognose oplysninger for MacEs. Brugen af intrakoronarcirkulerende biomarkører er imidlertid blevet postuleret som en bekvem metode til tidlig identifikation og prognose for MacEs, da de i højere grad afspejler dynamiske mekanismer, der involverer koronarskader og reparation. Bestemmelse af koronar cirkulerende biomarkører under angioplastik, såsom antallet af subpopulationer af mononukleare stamceller celler (MPCs) samt koncentrationen af opløselige molekyler, der afspejler inflammation, cellevedhæftning og reparation, giver mulighed for vurdering af den fremtidige udvikling og prognose for MacEs seks måneder efter koronarangioplasty. Denne metode fremhæves af dens translationelle karakter og bedre ydeevne end perifere blod cirkulerende biomarkører vedrørende forudsigelse af MacEs og dens virkning på den kardiovaskulære prognose, som kan anvendes til risikostratificering af patienter med koronararteriesygdom, der gennemgår angioplastik.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Koronar angioplastik og stening repræsenterer en bjærgning procedure for patienter med koronararteriesygdom (CAD). Men, store bivirkninger hjerte-kar-hændelser (MacEs), herunder hjerte-kar-død, myokardieinfarkt, koronar restenose, og episoder af angina eller dekompensere hjertesvigt, kan forekomme måneder efter koronar intervention, hvilket fik uforudsete besøg på hospitalet. MacEs er almindelige på verdensplan, og deres morbi-dødelighed er høj1.

Koronar iskæmisk skade inducerer tidlig vaskulær respons og reparative mekanismer, der involverer mobilisering af MpCs på grund af deres differentiering evne og / eller angio-reparative potentiale, samt produktion af opløselige molekyler som intercellulære vedhæftning molekyler (ICAMs), matrix metalloproteinases (MMPs), og reaktiv ilt ilt, arter afspejler celle vedhæftning, væv remodeling, og oxidativ stress. Selv om iboende vaskulære træk som plaque egenskaber og koronararterie kompleksitet er blevet brugt til at forudsige MacEs, nogle undersøgelser har antydet, at biomarkører relateret til mekanismerne for skade og reparation forekommer i koronar endothelium kunne være meget nyttigt for tidlig identifikation og prognose af hjerte-kar-hændelser hos patienter med CAD forelagt koronar angioplastik2,3,4,5.

Fortsat interesse i at forstå de mekanismer, der ligger til grund for CAD-skade og reparation, har motiveret efterforskere til at studere intrakoronarcirkulerende biomarkører, fordi koronarprøvetagning i højere grad afspejler vaskulære skader og reparation6. Men, karakterisering af koronar biomarkører i humane undersøgelser har været knappe7,8,9. Formålet med denne undersøgelse var derfor at beskrive en metode til bestemmelse af mængden af koronarcirkulerende MpCs og opløselige molekyler, der afspejler både vaskulær skade og reparation, og at vise, om disse biomarkører er forbundet med MacEs og den kliniske prognose for CAD-patienter, der gennemgik koronar angioplastik. Denne metode er baseret på anvendelse af vaskulære-relaterede, cirkulerende MpCs og opløselige molekyler opnået ved prøveudtagning steder tættest på fartøjets skader. Det kan også være nyttigt for kliniske undersøgelser for underekstremitetisk, slagtilfælde, vaskulitis, venøs trombose, og andre skader, der involverer vaskulær skade og reparation.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Denne protokol er i overensstemmelse med de institutionelle retningslinjer fra den etiske komité for menneskelig forskning.

1. Koronar angiografi, ultralyd, og blodprøvetagning

  1. Anmod om kliniske og demografiske oplysninger på basisbasis før koronarintervention. Indsamle den enkeltes data: alder, køn, nuværende rygning status, body mass index (BMI), højt blodtryk, dyslipidæmi, diabetes mellitus, medicin, og indikationen for nuværende koronar angiografi.
  2. Udfør koronar angiografi gennem hjertekateterisering ved hjælp af en radial tilgang. Denne procedure bør udføres under en fluoroskopi guide i hæmodynamik værelse af ekspert kardiologer.
    BEMÆRK: Identificer evaluerbare fartøjer. I forbindelse med denne undersøgelse blev evaluerbare fartøjer defineret som arterier med sektioner større end 1,5 mm og lumenstenose på mere end 50%.
  3. Advance intravaskulær ultralyd kateter til regionen af interesse og optage billeder. Brug den relevante software til at finde og måle det mindste luminale område.
  4. Brug en koronar kateter til at indsamle 10 ml blod fra det nærmeste sted til plak.
  5. Efter patientudskrivelse, planlægge periodiske medicinske evalueringer til at følge op undersøgelse endepunkter. Hvis det ikke er muligt at kontakte telefonen, eller et lægebesøg er forsinket i mere end 2 måneder, skal du anmode en autoriseret person (tidligere designet) om at verificere undersøgelsens slutpunkter.
    BEMÆRK: Overvej nogen af følgende en MACE: 1) hjerte-kar-død, 2) ny myokardieinfarkt, 3) ustabil angina hvilket medfører en uforudset medicinsk besøg inden for 24 h, 4) stent restenosis som påvist af koronar angiografi, 5) episoder af dekompenseret hjertesvigt, der kræver klinisk opmærksomhed.

2. Bestemmelse af cirkulerende MFC(figur 2)

  1. Behandle blodet inden for 1 time fra indsamling. Overfør 6 ml af det indsamlede blod til et 15 ml konisk rør og fortyndes 1:1 (v/v) med 1x fosfatbuffered saltvand (PBS), pH = 7,4.
  2. Tilføj 2 ml detsitetsgradientmedium til tre reagensglas. Overfør forsigtigt tre lige store mængder aliquots af fortyndet blod til hvert reagensglas, der indeholder detsitetsgradientmedium.
    BEMÆRK: Den samlede mængde masseafdensitetsgradientmedium og fortyndet blod må ikke overstige tre fjerdedele af reagensglassets maksimalkapacitet.
  3. Centrifugeres ved 1.800 x g, 4 °C i 30 min. Overfør båndet ved grænsefladen mellem lagene i et nyt rør. Der tilsættes 2 ml PBS og centrifuger ved 1.800 x g, 4 °C i 6 min. Pellet vil indeholde MpCs.
  4. Vask pellet flere gange. Aspirere den tidligere opløsning og forsigtigt resuspendere cellepellet i frisk PBS. For efterfølgende vasker centrifugeres ved 1.800 x g, 4 °C i 2 min. Processen gentages 6x.
  5. Opslæm cellepellet i 1 ml PBS. 20 μL af celleaffjedringen blandes med 0,4% trypanblå, fortyndet 1:1 (v/v). Påfør en dråbe på et hæmocytometer og tælle de ufarvede celler under et let mikroskop.
  6. Fortsæt til bestemmelse af MpCs. Etiket 5 ml flow cytometri rør og aliquot ud 1 x 106 celler pr rør. Forbered de tilsvarende isotype-matchede kontrolantistoffer. Centrifugeres ved 1.800 x g, 4 °C i 6 min og kassér supernatanten.
  7. Tilsæt det primære antistof, der er fortyndet i 100 μL af en antistofinkubationsopløsning bestående af 1x PBS (pH = 7,4), 2 mM ethylenediamintetraeddikesyre (EDTA) og 0,05% kvægserumalbumin (BSA). Ophæng i 10 s og inkuber esitrere i 20 min ved 4 °C, lysbeskyttet. Protokollen kan sættes på pause på dette trin ved fastsættelse af lymfocytter i 4% paraformaldehyd i PBS og opbevaring af prøver op til 24 timer ved 4 °C.
    BEMÆRK: De endelige koncentrationer af de primære antistoffer, der anvendes i denne protokol, var CD45 1:50, CD34 1:20, KDR 1:50, CD184 1:20, CD133 1:50.
  8. Centrifugeres ved 1.800 x g, 4 °C i 2 min. og kassér supernatanten. Ophæng igen i 500 μL 1x PBS (pH = 7,4), 2 mM EDTA.
  9. Udfør flowcytometrianalyse. Brug isotype-matchede kontrolantistoffer til at konfigurere baggrundsfarvningen. Derefter skal du vælge lymfocytter spredt på FSC / SSC plot, forsøger at udelukke resterende granulocytter, cellucellulære vragrester, og andre partikler, som normalt er placeret i den nederste, venstre-fordelt i plottet. En sådan fordeling betragtes som 100 %.
  10. Brug en port, der indeholder et stort antal celler med almindelig immunophenotype CD45+ og CD34+. For dobbelt positive immunophenotyper, bruge en port tidligere identificere CD45+, CD34+, med tilføjelse af enten KDR (VEGFR-2)+, CD133+, eller CD184+. Identificer MPC-delpopulationerne efter deres specifikke celleoverflademarkører. Rapport som procentdelen af gated begivenheder.
  11. Identificer de vigtigste delpopulationer af MpCs. I denne undersøgelse var de vigtigste immunophenotyperCD45+CD34+CD133+,CD45+CD34+CD184+CD45 + CD34+CD133+CD184+CD45+CD34+CD184.
    BEMÆRK: De anvendte celleoverflademarkører var CD45 (lymfocytter), CD34 (endotel- og/eller vaskulære celler), KDR (VEGFR-2, membranmarkør for endotelceller), CD133 (endotelstamceller) og CD184 (hæmatopoietiske stamceller og endotelceller).

3. Bestemmelse af plasmaopløselige biomarkører

  1. Brug en enzymrelateret immunorbentassay (ELISA) til at bestemme koncentrationen af SICAM-1 og MMP-9(Figur 3, øverste række).
    1. Centrifuger blodprøverne ved 3.000 x g,stuetemperatur i 5 min. og opsaml plasmaet.
    2. Mærk standarderne, prøverørene og kontrolrørene. De forbelagte brønde i analysepladen kan udøjdiges ved at vaske 2x med den vaskebuffer, der er angivet i ELISA-sættet.
    3. Overfør standarder, prøver og kontroller til brøndene. Tætning og inkuber ved 37 °C i 90 min.
      BEMÆRK: Lad ikke brøndene tørre helt.
    4. Kassér indholdet, og tilsæt biotindetektionsantistoffet. Tætning og inkuber ved 37 °C i 60 min.
    5. Kassér indholdet og vask 3x. Plak og inkubator fortløbende med streptavidinarbejdsopløsning efterfulgt af tetramethylbenzidinsubstrat ved 37 °C i 30 min. Vask 3x mellem inkubationer. Når farven udvikler sig, tilføje stop opløsning, og læse den optiske tæthed absorbans i en mikroplade ELISA-læser.
  2. Brug en immun-magnetisk multiplexing assay til at bestemme koncentrationen af tumor nekrose faktor alpha (TNFα) og interleukin 1 beta (IL-1β)(Figur 3,nederste række).
    1. Mærk standarderne, prøverørene og kontrolrørene.
    2. Vortex de magnetiske perler hætteglas i 30 s. Overfør perle suspensiontil passende størrelse rør, og derefter til brøndene i multiplexing assay plade. Periodisk vortexing undgår udfældning af perlerne.
    3. Sæt den håndholdte magnetiske pladeskive sikkert ind. Vent 2 min for perlerne til at akkumulere på bunden af hver brønd og hurtigt vende både håndholdt magnetisk plade skive og plade samling, over en vask eller affaldsbeholder. Husk at bruge den håndholdte magnetiske pladeskive til at vedligeholde perlerne inde i brøndene.
    4. Tilsæt 150 μL vaskebuffer i hver brønd og vent 30 s for at lade perlerne ophobes på bunden. Kassér indholdet som i trin 3.2.3. Der tilsættes derefter 25 μL universalanalysebuffer (angivet i sættet) efterfulgt af 25 μL tilberedte standarder, prøver og kontroller.
    5. Forsegle pladen og inkubere i mindst 60 minutter ved stuetemperatur, lysbeskyttet, med konstant omrystning ved 500 omdrejninger. Alternativt, inkubere natten over ved 4 °C, lysbeskyttet, med konstant rystelser ved 500 rpm hvis det er muligt.
    6. Vask 2x ved at tilsætte 150 μL vaskebuffer og vente 30 s. Kassér indholdet ved at indsætte den håndholdte magnetiske pladeskive. Vent 2 min og inverter over en vask eller affaldsbeholder.
    7. Inkubator sekventialt med 25 μL påvisningsantistofblanding efterfulgt af 25 μL streptavidin-PE-opløsning ved stuetemperatur i 30 min, forseglede og lysbeskyttede med konstant omrystning ved 500 omdrejninger i minuttet. Vask 2x mellem inkubationer, som beskrevet i trin 3.2.6.
    8. Få aflæsningerne. Der tilsættes 120 μL af læsebufferen. Forsegle pladen og inkubere 5 min ved stuetemperatur, lysbeskyttet, med konstant omrystning ved 500 omdrejninger. Kør læsning på en multiplexing assay læser. Juster læseparametrene i henhold til hver analysand.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Koronar, venøs sinus og perifert blod blev indsamlet fra 52 patienter, der gennemgik koronarangiografi (figur 1) og viste en høj forekomst af hypertension og dyslipidæmi. Ved den kliniske opfølgning var 11 (21,1 %) MacEs fandt sted 6 måneder efter koronar angiografi: død (n = 1), angina kræver hospitalsdeltagelse (n = 6), myokardieinfarkt (n = 2), og / eller tegn på hjertesvigt (n = 4).

Baseline koronarkoncentrationen af de fleste MpCs var betydeligt lavere hos patienter, der udviklede MacEs(Figur 4),med et større fald i MPC-underpopulationer CD34+CD133+ og CD45+CD34+CD133+CD184+. Ligeledes, patienter, der udviklede MacEs havde en øget baseline i koronar mængder af sICAM-1 og lavere MMP-9(Tabel 1).

Koronar-MPC'er (underpopulationer CD45+CD34+CD133+ cd45+CD34+CD133+CD184+) og sICAM-1 (dichotomiseret af deres medianværdier) viste prognostisk evne til MACE-fri overlevelse (Figur 5).

Vi karakteriserede yderligere dynamikken i opløselige biomarkører under forskellige forhold, fordi der er meget få oplysninger om koronar blodbestemmelse. Udtrykket af tumornekrosefaktor alpha (TNFα) viste variationer i henhold til måletidspunktet (præ- eller post-angioplastik) og placeringen af koronarprøvetagning baseret på en sammenligning af forskellige lumenområder ved samme koronararterie ved hjælp af intravaskulær ultralyd (Figur 6).

Figure 1
Figur 1: Koronar angiografi og blodtapning. Billedet viser hjertekateterisering ved hjælp af en radial tilgang, udført under en fluoroskopi guide i hæmodynamik rummet. Kardiologi eksperter evaluere koronar fartøjer under angiografi og indsamle koronar blod fra det nærmeste sted til ateroma plaque og / eller sinus blod gennem et hjertekateter lige før ballon engioplastik. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 2
Figur 2: Forberedelse af blodprøver og bestemmelse af MPC'er ved flowcytometri. (A) Density gradient efter blod centrifugering (blå pil = lymfocyt bånd). B) Indsamling af lymfocytfasen. (C) Vasker med 1x PBS. (D) Centrifugering. (E) Pelletdannelse i bunden af reagensglasset. (F) Neubauer celle suspension belastning. (G) Lymfocytcelletal ved hjælp af lysmikroskopi. H) Bestemmelse af celleunderpopulationer ved flowcytometri. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 3
Figur 3: Immunassays at bestemme blodopløselige mediatorer. Øvre række: Enzym-forbundet immunsorbent assay (ELISA). Billedet viser, hvordan oplysninger fra korteksemplerne (notesbogen) blev overført til softwaren for at starte aflæsningerne efter prøveforberedelse, antistofinkubation og vask. Det viser også gul farveudvikling, enten i standardbrøndene (venstre kolonner i plak) eller i testprøverne (højre kolonner i pladen). Nederste række: Immun-magnetisk multiplexing assay. Efter prøveforberedelse, magnetisk perle-antistofinkubation og vasker, blev prøveoplysningerne overført til den relevante immunmagnetiske multiplexinganalysesystemlæsersoftware, og der vises en typisk standardkurve på skærmen. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 4
Figur 4: Koronar cirkulerende mononukleare stamceller celler (MpCs). Figuren viser oprindelige underpopulationer af %MpCs. A) Repræsentative aflæsninger fra flowcytometri. (B) Kvantificering af %MpCs-delpopulationer med flowcytometri, afbildet i henhold til præsentationen af MacEs (*) = betydelig forskel med p < 0,05. Dette tal er blevet ændret fra Suárez-Cuenca et al.10. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 5
Figur 5: Koronar cirkulerende cellulære (MpCs), opløselige biomarkører og prognose. Figuren viser baseline koronar blodmængder af (A) %MpCs subpopulationer bestemt ved flow cytometri og (B)plasma koncentration af sICAM-1 bestemt af ELISA, begge afbildet i henhold til præsentationen af MacEs i løbet af 6 måneders opfølgning. Den blå linje angiver antallet af personer med risikoværdier for hver biomarkør, f.eks. sICAM-1 = opløseligt intercellulært adhæsionmolekyle 1. Dette tal er blevet ændret fra Suárez-Cuenca, et al.10. Klik her for at se en større version af denne figur.

Figure 6
Figur 6: Betingelser, der bestemmer koronarcirkulerende opløselige biomarkørers variabilitet. Figuren viser ændringer i intrakoronarkoncentrationen af tumornekrosefaktor alpha (TNFα), i henhold til måletidspunktet (A:Pre-angioplastik eller B: Post-angioplastik) samt placeringen af koronarprøvetagning (sammenligning mellem to koronarlumendiametre ved en 3,5 mm afskæring målt ved intravaskulær ultralyd). (*) = p < 0,05 forskel på biomarkører opnået før- vs. post-angioplastik, og forskel i prøveudtagning på steder af koronar lumen diametre ≤3,5 mm vs >3,5 mm. Dette tal er blevet ændret fra Suárez-Cuenca et al.11. Klik her for at se en større version af denne figur.

Table 1
Tabel 1: Baseline blodopløselige biomarkører. (*) angiver p < 0,05 forskel biomarkører fra koronar blod vs perifert kredsløb. (**) angiver p < 0,05, uden MacEs vs. med MacEs; ensidet uafhængig T-test. Forkortelser: sICAM-1 = opløseligt intercellulært adhæsionmolekyle 1; IL-1β = interleukin 1 beta; MMP-9 = matrix metalloproteinase 9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Blodtapning fra de berørte koronararterie kan være svært. Nogle gange er koronararterien knap nok tilgængelig. I så fald kan prøveudtagning fra venøs sinus være et alternativ. Vi udførte valideringstest, der sammenlignede cirkulerende biomarkører i koronararterie vs venøs sinus, uden væsentlige forskelle. Udførelsen af cirkulerende biomarkører blev dog kun valideret for koronarprøvetagning. Derfor er udførelsen af biomarkører opnået fra venøs sinus er endnu ikke undersøgt.

Det er bedst at behandle prøverne til MpCs inden for de første 3 timer efter blodtapning. Derfor bør der etableres god kommunikation mellem kardiologiteamet og laboratorieforskerne. Under MFC'ers isolation skal der udvises forsigtighed ved deponering af blodprøver under densitetsgradientforberedelse, når mpc'erne vaskes. Endelig, for nemheds skyld, vi altid overføre celler til en cytometri rør, tilføje de primære antistoffer, fastsætte og gemme cellerne natten over ved 4 °C, og udføre strømmen cytometri læsning dagen efter. Med hensyn til biomarkør rolle cirkulerende MpCs, er der gjort en betydelig indsats for at standardisere de mest klinisk nyttige immunophenotyper mellem sogenitor celler12,men en begrænsning af undersøgelsen kan være det faktum, at specifikke subpopulationer af cirkulerende sårceller ikke er fuldt karakteriseret for alle kliniske scenarier inden for CAD eller andre vaskulære sygdomme. Derfor bør forskellige cirkulerende stamceller undersøges i hvert studie.

Under bestemmelsen af opløselige markører omfatter nogle generelle anbefalinger til ELISA og multiplexingaster brugen af en flerkanals pipette, deponeringsløsninger i bunden af hver brønd uden at røre sidevæggene og undgå udtørring af brønde under analysen. Kontroller altid prøvefordelingen i pladen, især for multiplexing-analysen, for at undgå udfældning af de magnetiske perler ved konstant vortexing. Sørg også for at indsætte bundpladen i den håndholdte magnetiske pladeskive for at opretholde de magnetiske perler inde i brøndene, ellers vil prøverne gå tabt under vaskerne.

Vi fandt, at koronar cirkulerende MPCs, primært dem fra hæmatopoietisk oprindelse, samt sICAM-1 og MMP-9, var fremragende biomarkører for forudsigelse og prognose af MacEs. Dette er i overensstemmelse med forestillingen om, at inflammatorisk respons og / eller vaskulære skader mæglere stimulere homing signaler til MPC mobilisering og rekruttering, fremme lokale væv reparation4. Derfor fandt vi variationer i disse biomarkører i flere indstillinger. Ændringer i forhold til angioplastik og/eller placering af koronarprøvetagning kan forklares ved virkningen af virkningen over ateromapladen under angioplastik, pladens størrelse og frigivelse af opløselige mediatorer, der er isoleret i plak, i koronarstrømmen11. Øget IL-1β har været konsekvent involveret i udviklingen af plak og kliniske komplikationer13.

Så vidt vi ved, er dette den første undersøgelse, der fremadrettet evaluerer koronarcirkulerende MpCs og opløselige mediatorer af vaskulær skade og reparation som prognostiske biomarkører i en population med CAD indsendt til koronar angioplasty, herunder karakterisering af ændringer i forbindelse med angioplastik, kransprøvetagningsplacering og sammenligning af koronar vs. perifer prøveudtagning. Vi mener, at metoden let kan etableres på ethvert hospital, der udfører koronar angiografi. Men en begrænsning er, at vi anvendtdenne metode primært hos patienter med kronisk stabil angina frigivet fra en skadestue afdeling.

Nuværende traditionelle metoder, der anvendes til MacEs forudsigelse eller prognose i CAD har moderat prædiktiv evne. Der har været en stigende interesse for at finde nye biomarkører baseret på de patofysiologimekanismer, der er ansvarlige for reparation og regenerering, der finder sted efter CAD og angioplastik. Sådanne biomarkører har vist en lignende eller bedre prædiktiv ydeevne sammenlignet med traditionelle metoder3,4,5,14,15. Vi mener således, at koronarcirkulerende MFC'erog opløselige mægleres rolle i at forudsige risikoen for MacEs vil blive undersøgt yderligere i fremtidige fremtidige undersøgelser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har intet at afsløre.

Acknowledgments

Forfatterne takker støtten fra Institutional Program E015; og Fondo Sektoriel FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BSA Roche 10735086001 Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.
Calibration Beads Miltenyi Biotec / MACS #130-093-607 MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests
CD133/1 (AC133)-PE Milteny Biotec / MACS #130-080-801 Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770 Miltenyi Biotec / MACS #130-103-798 Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC Miltenyi Biotec / MACS #130-093-601 Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD34-FITC Miltenyi Biotec / MACS #130-081-001 The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34
CD45- VioBlue Miltenyi Biotec / MACS #130-092-880 Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated
Conical Tubes Thermo SCIENTIFIC #339651 15ml conical centrifuge tubes
Cytometry Tubes FALCON Corning Brand #352052 5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.
EDTA BIO-RAD #161-0729 Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe <0.01%, As <1ppm, Insolubles <0.005%
Improved Neubauer Without brand Without catalog number Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA Blood Collection Tubes BD Vacutainer #367863 Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.
Lymphoprep Stemcell Technologies 01-63-12-002-A Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL
Paraformaldehyde SIGMA-ALDRICH #SZBF0920V Fixation of biological samples, (powder, 95%)
Pipette Transfer 1,3mL CRM Globe PF1016, PF1015 The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.
Test Tubes KIMBLE CHASE 45060 13100 Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Cassar, A., Holmes, D. R. Jr, Rihal, C. S., Gersh, B. J. Chronic coronary artery disease: diagnosis and management. Mayo Clinic Proceedings. 84, (12), 1130-1146 (2009).
  2. Regueiro, A., et al. Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).
  3. Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease. Clinical Science (Lond). 120, (7), 263-283 (2011).
  4. Samman Tahhan, A., et al. Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes. Circulation Research. 122, (11), 1565-1575 (2018).
  5. Tomulić, V., Gobić, D., Lulić, D., Židan, D., Zaputović, L. Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent. Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).
  6. Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment? European Heart Journal. 28, (8), 929-940 (2007).
  7. Kremastinos, D. T., et al. Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty. International Journal of Cardiology. 53, (3), 227-232 (1996).
  8. Karube, N., et al. Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass. American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42, (5), M787-M791 (1996).
  9. Truong, Q. A., et al. Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study. Heart Rhythm. 11, (12), 2167-2175 (2014).
  10. Suárez-Cuenca, J. A., et al. Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23, (7), 4844-4849 (2019).
  11. Suárez-Cuenca, J. A., et al. Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease. Angiology Open Access. 7, 01 (2019).
  12. Schmidt-Lucke, C., et al. Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol. PLoS One. 5, (1), e13790 (2010).
  13. Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis. American Journal of Pathology. 138, (4), 951-960 (1991).
  14. Morales-Portano, J. D., et al. Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease. International Journal of Cardiovascular Imaging. 34, (9), 1429-1437 (2018).
  15. Huang, X., et al. Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury. Yonsei Medical Journal. 58, (5), 1012-1017 (2017).
Koronar progenitor celler og opløselige biomarkører i hjerte-kar-prognose efter koronar Angioplasty
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Suárez-Cuenca, J. A., Robledo-Nolasco, R., Alcántara-Meléndez, M. A., Díaz-Hernandez, L. J., Vera-Gómez, E., Hernández-Patricio, A., Sánchez-Díaz, K. S., Gutiérrez-Buendía, J. A., Contreras-Ramos, A., Ruíz-Hernández, A. S., Pérez-Cabeza de Vaca, R., Mondragón-Terán, P. Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty. J. Vis. Exp. (155), e60504, doi:10.3791/60504 (2020).More

Suárez-Cuenca, J. A., Robledo-Nolasco, R., Alcántara-Meléndez, M. A., Díaz-Hernandez, L. J., Vera-Gómez, E., Hernández-Patricio, A., Sánchez-Díaz, K. S., Gutiérrez-Buendía, J. A., Contreras-Ramos, A., Ruíz-Hernández, A. S., Pérez-Cabeza de Vaca, R., Mondragón-Terán, P. Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty. J. Vis. Exp. (155), e60504, doi:10.3791/60504 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter