Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Coronaire voorlopercellen en oplosbare biomarkers in cardiovasculaire prognose na coronaire angioplastie

doi: 10.3791/60504 Published: January 28, 2020

Summary

Ontwikkeling van grote bijwerkingen cardiovasculaire voorvallen, die van invloed zijn cardiovasculaire prognose na coronaire angioplastie, worden beïnvloed door de omvang van coronaire schade en vasculaire reparatie. Het gebruik van nieuwe coronaire cellulaire en oplosbare biomarkers, reactief op vasculaire schade en reparatie, zijn nuttig om de ontwikkeling van MacEs en prognose te voorspellen.

Abstract

Grote bijwerkingen (MACEs) hebben een negatieve invloed op de cardiovasculaire prognose van patiënten die coronaire angioplastie ondergaan als gevolg van coronaire ischemische letsel. De omvang van coronaire schade en de mechanismen van vasculaire reparatie zijn factoren die van invloed zijn op de toekomstige ontwikkeling van MACE's. Intrinsieke vasculaire kenmerken zoals de plaque kenmerken en coronaire slagader complexiteit hebben aangetoond prognostische informatie voor MACEs. Het gebruik van intracoronaire circulerende biomarkers is echter als een handige methode voor de vroege identificatie en prognose van MACE's geposteerd, omdat ze beter aansluiten bij dynamische mechanismen waarbij coronaire schade en herstel betrokken zijn. Bepaling van coronaire circulerende biomarkers tijdens angioplastie, zoals het aantal subpopulaties van mononucleaire voorlopercellen (Mp's) en de concentratie van oplosbare moleculen die ontstekingen, celhechting en reparatie reflecteren, beoordeling van toekomstige ontwikkelingen en de prognose van MACE's 6 maanden na coronaire angioplastie. Deze methode wordt benadrukt door zijn translationele aard en betere prestaties dan perifere bloed circulerende biomarkers met betrekking tot de voorspelling van MACE's en het effect ervan op de cardiovasculaire prognose, die kan worden toegepast voor risicogelaagdheid van patiënten met coronaire hartziekte die angioplastie ondergaat.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Coronaire angioplastie en stenting vormen een bergingsprocedure voor patiënten met coronaire hartziekten (CAD). Echter, grote bijwerkingen cardiovasculaire voorvallen (MacEs), met inbegrip van cardiovasculaire dood, hartinfarct, coronaire restenose, en episodes van angina of decompenseren hartfalen, kan maanden na coronaire interventie optreden, waardoor ongeplande bezoeken aan het ziekenhuis. Maces komen wereldwijd vaak voor en hun morbisterfte is hoog1.

Coronaire ischemische schade veroorzaakt vroege vasculaire respons en herstellende mechanismen waarbij mobilisatie van MpCs als gevolg van hun differentiatie vermogen en / of angio-herstellend potentieel, evenals de productie van oplosbare moleculen zoals intercellulaire hechting moleculen (ICAMs), matrix metalloproteinases (MMP's), en reactieve zuurstofsoorten, als gevolg van celverkleving, weefsel remodelleren, en oxidatieve stress. Hoewel intrinsieke vasculaire kenmerken zoals plaquekenmerken en coronaire hartcomplexiteit zijn gebruikt om MACEs te voorspellen, hebben sommige studies gesuggereerd dat biomarkers met betrekking tot de mechanismen van letsel en herstel die zich voordoen in het coronaire endotheel zeer nuttig kunnen zijn voor de vroege identificatie en prognose van cardiovasculaire voorvallen bij patiënten met CAD die aan coronaire angioplastie2,3,4,5worden voorgelegd.

Voortdurende interesse in het begrijpen van de mechanismen die ten grondslag liggen aan CAD letsel en reparatie heeft onderzoekers gemotiveerd om intracoronaire circulerende biomarkers te bestuderen, omdat coronaire bemonstering nauwer vasculaire schade weerspiegelt enherstel 6. Echter, karakterisering van coronaire biomarkers in menselijke studies is schaars7,8,9. Daarom was het doel van deze studie om een methode te beschrijven om de hoeveelheid coronaire circulerende MpCs en oplosbare moleculen te bepalen, als gevolg van zowel vasculairletsel als herstel, en om aan te tonen of deze biomarkers geassocieerd zijn met MACEs en de klinische prognose van CAD-patiënten die coronaire angioplastie ondergingen. Deze methode is gebaseerd op het gebruik van vasculaire, circulerende MpCs en oplosbare moleculen verkregen door bemonsteringslocaties die het dichtst bij de schade aan het vat staan. Het kan ook nuttig zijn voor klinische studies voor onderste ledematen ischemie, beroerte, vasculitis, veneuze trombose, en andere verwondingen waarbij vasculaire letsel en reparatie.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Dit protocol voldoet aan de institutionele richtlijnen van de Human Research Ethics Committee.

1. Coronaire angiografie, echografie en bloedafname

  1. Vraag basisklinische en demografische informatie aan voor coronaire interventie. Verzamel de gegevens van het individu: leeftijd, geslacht, huidige rookstatus, body mass index (BMI), hoge bloeddruk, dyslipidemie, diabetes mellitus, medicijnen en de indicatie voor de huidige coronaire angiografie.
  2. Voer coronaire angiografie uit door middel van hartkatheterisatie met behulp van een radiale benadering. Deze procedure moet worden uitgevoerd onder een fluoroscopiegids in de hemodynamicaruimte door deskundige cardiologen.
    OPMERKING: Identificeer waardevolle schepen. Voor deze studie werden waardevolle vaten gedefinieerd als slagaders met secties groter dan 1,5 mm en lumenstenose van meer dan 50%.
  3. Advance de intravasculaire ultrasone katheter naar de regio van belang en beelden opnemen. Gebruik de juiste software om het kleinste armatuurgebied te lokaliseren en te meten.
  4. Gebruik een coronaire katheter om 10 mL bloed te verzamelen van de dichtstbijzijnde locatie naar de plaque.
  5. Na de ontreing van de patiënt, schema periodieke medische evaluaties follow-up studie eindpunten. Als telefonisch contact niet mogelijk is of een arts bezoek wordt uitgesteld voor langer dan 2 maanden, vraag een geautoriseerde persoon (eerder ontworpen) om de studie eindpunten te verifiëren.
    OPMERKING: Overweeg een van de volgende een MACE: 1) cardiovasculaire dood, 2) nieuwe hartinfarct, 3) instabiele angina gevraagd een ongepland medisch bezoek binnen 24 uur, 4) stent restenosis zoals aangetoond door coronaire angiografie, 5) afleveringen van degecompenseerd hartfalen die klinische aandacht vereist.

2. Bepaling van circulerende RPC's(figuur 2)

  1. Verwerk het bloed binnen 1 uur van de collectie. Breng 6 mL van het verzamelde bloed over naar een conische buis van 15 mL en verdun 1:1 (v/v) met 1x fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), pH = 7,4.
  2. Voeg 2 mL dichtheidgradiënt toe aan drie reageerbuizen. Breng voorzichtig drie gelijke volume aliquots verdund bloed in elke reageerbuis met de dichtheid gradiënt medium.
    OPMERKING: Het totale volume van de dichtheid gradiënt medium en verdund bloed mag niet meer dan driekwart van de testbuis maximale capaciteit.
  3. Centrifuge bij 1.800 x g, 4 °C gedurende 30 min. Breng de band op de interface tussen de lagen over in een nieuwe buis. Voeg 2 mL PBS en centrifuge toe bij 1.800 x g,4 °C gedurende 6 min. De pellet zal de MpCs bevatten.
  4. Was de pellet meerdere keren. Aanzuigen uit de vorige oplossing en voorzichtig opnieuw opteschorten van de cel pellet in verse PBS. Voor latere wasbeurten centrifugeeren bij 1.800 x g, 4 °C gedurende 2 minuten. Herhaal het proces 6x.
  5. Resuspend de celpellet in 1 mL PBS. Meng 20 μL van de celvering met 0,4% trypanblauw, verdund 1:1 (v/v). Breng een druppel aan op een hemocytometer en tel de onbevlekte cellen onder een lichtmicroscoop.
  6. Ga over tot de bepaling van de MpC's. Label 5 mL flow cytometrie buizen en aliquot uit 1 x 106 cellen per buis. Bereid de overeenkomstige isotype-matched controle antilichamen. Centrifugeer bij 1.800 x g,4 °C gedurende 6 min en gooi de supernatant weg.
  7. Voeg het primaire antilichaam toe verdund in 100 μL van een antilichaamincubatioplossing bestaande uit 1x PBS (pH = 7.4), 2 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) en 0,05% runderserumalbumine (BSA). Resuspend voor 10 s en incuberen gedurende 20 min bij 4 °C, licht beschermd. Het protocol kan in deze stap worden onderbroken door de lymfocyten in 4% paraformaldehyde in PBS vast te stellen en monsters tot 24 uur bij 4 °C op te slaan.
    OPMERKING: De uiteindelijke concentraties van de primaire antilichamen die in het huidige protocol worden gebruikt, waren CD45 1:50, CD34 1:20, KDR 1:50, CD184 1:20, CD133 1:50.
  8. Centrifugeer bij 1.800 x g,4 °C gedurende 2 min en gooi de supernatant weg. Resuspend in 500 μL of 1x PBS (pH = 7.4), 2 mM EDTA.
  9. Voer flow cytometrie-analyse uit. Gebruik isotype-matched controle antilichamen om de achtergrond vlekken in te stellen. Selecteer vervolgens lymfocyten verspreid op het FSC/SSC-perceel, in een poging om resterende granulocyten, cellulair puin en andere deeltjes uit te sluiten, die zich meestal in de onderste, linker-verspreid in het perceel bevinden. Een dergelijke verdeling wordt beschouwd als 100%.
  10. Gebruik een poort met een hoog aantal cellen met veelvoorkomend immunofenotype CD45+ en CD34+. Gebruik voor dubbele positieve immunophenotypes een poort die eerder CD45+, CD34+identificeerde, met de toevoeging van KDR (VEGFR-2)+, CD133+, of CD184+. Identificeer de MPC-subpopulaties aan de smaken van hun specifieke celoppervlakmarkeringen. Rapporteren als het percentage gated gebeurtenissen.
  11. Identificeer de belangrijkste subpopulaties van MpC's. In deze studie waren de belangrijkste immunophenotypes CD45+CD34+CD133+, CD45+CD34+CD184+, CD45+CD34+CD133+CD184+, CD45+CD34+KDR+, CD45+CD34+KDR+CD133+, en CD45+CD34+KDR+CD184.
    OPMERKING: De gebruikte celoppervlaktemarkers waren CD45 (lymfocyten), CD34 (endotheel- en/of vaatcellen), KDR (VEGFR-2, membraanmarker van endotheelcellen), CD133 (endotheelvoorlopercellen) en CD184 (hematopoietische stamcellen en endotheelcellen).

3. Bepaling van in het plasma oplosbare biomarkers

  1. Gebruik een enzymgebonden immunosorbent test (ELISA) om de concentratie van SICAM-1 en MMP-9(figuur 3, bovenste rij) te bepalen.
    1. Centrifugeer de bloedmonsters op 3.000 x g,kamertemperatuur gedurende 5 min en verzamel het plasma.
    2. Label de normen, monsterbuizen en regelbuizen. Equilibrate de voorgecoate putten in de testplaat door het wassen van 2x met de wasbuffer in de ELISA kit.
    3. Breng de normen, monsters en controles over naar de putten. Verzegel en incubeer bij 37 °C gedurende 90 min.
      LET OP: Laat de putten niet volledig drogen.
    4. Gooi de inhoud weg en voeg het biotinedetectie-antilichaam toe. Verzegel en incubeer bij 37 °C gedurende 60 min.
    5. Gooi de inhoud weg en was 3x. Sluit de plaque af en bebroed achtereenvolgens met streptavidine werkoplossing gevolgd door tetramethylbenzidinesubstraat bij 37 °C gedurende 30 min, licht beschermd. Was 3x tussen incubatie. Wanneer de kleur zich ontwikkelt, voeg de stopoplossing toe en lees de optische dichtheidsabsorptie in een microplate ELISA-lezer.
  2. Gebruik een immuno-magnetische multiplexing test om de concentratie van tumor necrose factor alpha (TNFα) en interleukine 1 bèta (IL-1β) (Figuur 3, onderste rij) te bepalen.
    1. Label de normen, monsterbuizen en regelbuizen.
    2. Vortex de magnetische kralen flesjes voor 30 s. Breng de kraal suspensie naar de juiste grootte buizen, en vervolgens naar de putten in de multiplexing testplaat. Periodieke vortexing voorkomt neerslag van de kralen.
    3. Plaats de handbediende magneetplaatwasser stevig in. Wacht 2 min tot de kralen zich ophopen op de bodem van elke put en snel omkeren zowel de hand-held magnetische plaat wasmachine en plaat assemblage, over een gootsteen of afvalcontainer. Vergeet niet om de hand-held magnetische plaat wasmachine te gebruiken om de kralen in de putten te behouden.
    4. Voeg 150 μL wasbuffer toe in elke put en wacht 30 s om de kralen op de bodem te laten ophopen. Gooi de inhoud weg zoals in stap 3.2.3. Voeg vervolgens 25 μL universele testbuffer toe (in de kit), gevolgd door 25 μL aan voorbereide normen, monsters en bedieningselementen.
    5. Sluit de plaat af en incubeer gedurende ten minste 60 min bij kamertemperatuur, licht beschermd, met constant schudden bij 500 tpm. U ook 's nachts uitbroeden bij 4 °C, licht beschermd, met constant schudden bij 500 tpm indien mogelijk.
    6. Was 2x door 150 μL wasbuffer toe te voegen en wacht 30 s. Gooi de inhoud weg door de handbediende magnetische plaatwasser in te voegen. Wacht 2 min en omkeren over een gootsteen of afvalcontainer.
    7. Incubeer achtereenvolgens met 25 μL detectieantilichaammengsel, gevolgd door 25 μL streptavidin-PE-oplossing bij kamertemperatuur gedurende 30 min, verzegeld en lichtbeschermd, met constant schudden bij 500 tpm. Was 2x tussen incubatie, zoals beschreven in stap 3.2.6.
    8. Verkrijg de metingen. Voeg 120 μL afleesbuffer toe. Sluit de plaat af en incubeer 5 min bij kamertemperatuur, licht beschermd, met constant schudden bij 500 tpm. Voer de lezing uit op een multiplexing-testlezer. Pas de leesparameters aan op basis van elke analyt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Coronaire, veneuze sinus, en perifere bloed werden verzameld van 52 patiënten die coronaire angiografie onderging (Figuur 1) en toonde een hoge prevalentie van hypertensie en dyslipidemie. Bij de klinische follow-up werd 11 (21,1%) Maces traden op 6 maanden na coronaire angiografie: overlijden (n = 1), angina die ziekenhuisbezoek vereist (n = 6), hartinfarct (n = 2) en/of bewijs van hartfalen (n = 4).

De basiscoronaire concentratie van de meeste MpCs was aanzienlijk lager bij patiënten die MACEs ontwikkelden(figuur 4),met een grotere afname van MPC-subpopulaties CD34+CD133+ en CD45+CD34+CD133+CD184+. Evenzo hadden patiënten die MacEs ontwikkelden een verhoogde basislijn in coronaire hoeveelheden sICAM-1 en lagere MMP-9 (Tabel 1).

Coronaire MpCs (subpopulaties CD45+CD34+CD133+ en CD45+CD34+CD133+CD184+) en sICAM-1 (gedichotomiseerd door hun mediane waarden) toonden prognostische vermogen voor MACE-vrije overleving(figuur 5).

We hebben de dynamiek van oplosbare biomarkers onder verschillende omstandigheden verder gekarakteriseerd, omdat er zeer weinig informatie is over coronaire bloedbepaling. De expressie van tumornecrose factor alpha (TNFα) vertoonde variaties op basis van het meettijd (pre- of post-angioplastie) en de locatie van coronaire bemonstering op basis van een vergelijking van verschillende lumengebieden op dezelfde kransslagader met behulp van intravasculaire echografie(figuur 6).

Figure 1
Figuur 1: Coronaire angiografie en bloedafname. Het beeld toont hartkatheterisatie met behulp van een radiale benadering, uitgevoerd onder een fluoroscopie gids in de hemodynamica kamer. Cardiologie deskundigen evalueren de kransslagaders tijdens angiografie en verzamelen coronaire bloed van de dichtstbijzijnde locatie naar de atheroma plaque en / of sinus bloed door middel van een hartkatheter net voor ballon angioplastie. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

Figure 2
Figuur 2: Voorbereiding van bloedmonsters en mpc's bepaling door stroomcytometrie. (A) Dichtheidgradiënt na bloedcentrifugatie (blauwe pijl = lymfocytenband). (B) Verzameling van de lymfocytenfase. (C) Wasbeurten met 1x PBS. (D) Centrifugatie. (E) Pelletvorming aan de onderkant van de reageerbuis. (F) Neubauer celveringsbelasting. (G) Lymfocyten cel telling met behulp van lichte microscopie. (H) Bepaling van celsubpopulaties door stroomcytometrie. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

Figure 3
Figuur 3: Immunoassays om in het bloed oplosbare bemiddelaars te bepalen. Bovenste rij: Enzym-gebonden immunosorbent test (ELISA). De afbeelding laat zien hoe informatie uit de kaartmonsters (notebook) naar de software is overgebracht om de metingen te starten na het voorbereiden van monsters, antilichaamincubatie en wasbeurten. Het toont ook gele kleurontwikkeling, hetzij in de standaard putten (linkerkolommen in de plaque) of in de testmonsters (juiste kolommen in de plaque). Onderste rij: Immuno-magnetische multiplexing test. Na monstervoorbereiding, magnetische parel-antilichaamincubatie en wasbeurten werd de monsterinformatie overgebracht naar de juiste immuno-magnetische multiplexing-testsysteemlezersoftware en wordt een typische standaardcurve in het scherm weergegeven. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

Figure 4
Figuur 4: Coronaire circulerende mononucleaire voorlopercellen (RPC's). De figuur toont subpopulaties van baseline %MpCs. (A) Representatieve metingen van stroomcytometrie. (B) Kwantificering van %RPC's subpopulaties met stroomcytometrie, uitgezet volgens de presentatie van MACE's (*) = significant verschil, met p < 0,05. Dit cijfer is gewijzigd van Suárez-Cuenca et al.10. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

Figure 5
Figuur 5: Coronaire circulerende cellulaire (RPC's), oplosbare biomarkers en prognose. De figuur toont de uitgangswaarden coronaire bloedhoeveelheden (A) %NDC's subpopulaties bepaald door flow cytometrie en (B) plasmaconcentratie van sICAM-1 bepaald door ELISA, beide uitgezet volgens de presentatie van MACE's tijdens de 6 maanden follow-up. De blauwe lijn geeft het aantal personen met risicowaarden voor elke biomarker aan, zoals lagere %MpCs of hogere sICAM-1. sICAM-1 = oplosbaar intercellulair adhesiemolecuul 1. Dit cijfer is gewijzigd van Suárez-Cuenca, et al.10. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

Figure 6
Figuur 6: Voorwaarden die de variabiliteit van coronaire oplosbare biomarkers bepalen. De figuur toont veranderingen in de intracoronaire concentratie van tumor necrose factor alpha (TNFα), volgens het meettijd (A: Pre-angioplastie of B: Post-angioplastie) evenals de locatie van coronaire bemonstering (vergelijking tussen twee coronaire lumendiameters bij een 3,5 mm cutoff, gemeten door intravasculaire echografie). (*) = p < 0,05 verschil van verkregen biomarkers vóór versus na angioplastie en verschil van bemonstering op plaatsen met coronaire lumendiameters ≤3,5 mm vs. >3,5 mm. Dit cijfer is gewijzigd van Suárez-Cuenca et al.11. Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.

Table 1
Tabel 1: Basisbloedoplosbare biomarkers. (*) geeft p < 0,05 verschil biomarkers van coronaire bloed versus perifere circulatie aan. (**) geeft p < 0,05 aan, zonder MACE's vs. met MACEs; eenzijdige onafhankelijke T-test. Afkortingen: sICAM-1 = oplosbaar intercellulair hechtingsmolecuul 1; IL-1β = interleukine 1 bèta; MMP-9 = matrix metalloproteinase 9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Bloedafname van de aangetaste kransslagader kan moeilijk zijn. Soms is de kransslagader nauwelijks toegankelijk. In dit geval kan bemonstering van de veneuze sinus een alternatief zijn. We hebben validatietests uitgevoerd waarbij circulerende biomarkers in kransslagader vergeleken met veneuze sinus, zonder significante verschillen. Echter, de prestaties van circulerende biomarkers werd alleen gevalideerd voor coronaire bemonstering. Daarom moet de prestaties van biomarkers verkregen uit de veneuze sinus nog worden onderzocht.

Het is het beste om de monsters voor MpCs te verwerken binnen de eerste 3 uur na het verzamelen van bloed. Daarom moet er een goede communicatie tot stand worden gebracht tussen het cardiologieteam en de laboratoriumonderzoekers. Tijdens de isolatie van de MpC's moet er voorzichtig worden omgezorgd bij het deponeren van bloedmonsters tijdens het voorbereidingsverloop van de dichtheid bij het wassen van de RPC's. Ten slotte brengen we voor het gemak cellen altijd over in een cytometriebuis, voegen we de primaire antilichamen toe, fixeren en slaan we de cellen 's nachts op 4 °C en voeren we de stroomcytometrie met de dag erna uit. Met betrekking tot de biomarkerrol van circulerende RPC's zijn belangrijke inspanningen geleverd om de meest klinisch nuttige immunophenotypes tussen voorlopercellen12te standaardiseren, maar een beperking van de studie kan het feit zijn dat specifieke subpopulaties van circulerende voorlopercellen niet volledig zijn gekarakteriseerd voor alle klinische scenario's binnen CAD of andere vasculaire ziekten. Daarom moeten in elke studie verschillende circulerende progenitorcelsubpopulaties worden onderzocht.

Tijdens de bepaling van oplosbare markers enkele algemene aanbevelingen voor ELISA en multiplexing tests omvatten het gebruik van een meerkanaals pipet, het deponeren van oplossingen aan de onderkant van elke put zonder het aanraken van de zijwanden, en het vermijden van het uitdrogen van de putten tijdens de test. Controleer altijd de monsterverdeling in de plaat, met name voor de multiplexingtest, om neerslag van de magnetische kralen te voorkomen door constante vortexing. Zorg er ook voor dat u de bodemplaat in de handgehouden magnetische plaatwasser plaatst om de magnetische kralen in de putten te behouden, anders gaan de monsters verloren tijdens de wasbeurten.

We vonden dat coronaire circulerende MpCs, voornamelijk die van hematopoietische oorsprong, evenals sICAM-1 en MMP-9, waren uitstekende biomarkers voor voorspelling en prognose van MACE's. Dit komt overeen met het idee dat ontstekingsrespons- en/of vasculaire schadebemiddelaars signalen stimuleren voor MPC mobilisatie en rekrutering, waardoor lokale weefselherstel wordt bevorderd4. Daarom vonden we variaties in deze biomarkers in verschillende instellingen. Veranderingen in relatie tot angioplastie en/of locatie van coronaire bemonstering kunnen worden verklaard door het effect van de impact op de atheromaplaque tijdens angioplastie, de grootte van de plaque en het vrijkomen van oplosbare bemiddelaars die in de plaque in de coronaire stroom zijn afgezonderd11. Verhoogde IL-1β is consequent betrokken geweest bij de ontwikkeling van de plaque en klinische complicaties13.

Voor zover wij weten, dit is de eerste studie prospectief evaluatie van de rol van coronaire circulerende MpCs en oplosbare bemiddelaars van vasculaire letsel en reparatie als prognostische biomarkers in een populatie met CAD voorgelegd aan coronaire angioplastie, met inbegrip van karakterisering van veranderingen in verband met angioplastie, locatie van coronaire bemonstering, en vergelijking van coronaire versus perifere bemonstering. Wij denken dat de methode gemakkelijk kan worden vastgesteld in elk ziekenhuis dat coronaire angiografie uitvoert. Een beperking is echter dat we deze methode vooral hebben toegepast bij patiënten met chronische stabiele angina die vrijkomen op de spoedeisende hulp.

De huidige traditionele methoden die worden gebruikt voor MACEs voorspelling of prognose in CAD hebben een matige voorspellende vermogen. Er is een toenemende hoeveelheid belangstelling voor het vinden van nieuwe biomarkers op basis van de pathofysiologie mechanismen die verantwoordelijk zijn voor reparatie en regeneratie die zich voordoen na CAD en angioplastie. Dergelijke biomarkers hebben vergelijkbare of betere voorspellende prestaties laten zien in vergelijking met traditionele methoden3,4,5,14,15. Wij zijn dus van mening dat de rol van coronaire circulerende RPC's en oplosbare bemiddelaars bij het voorspellen van het risico voor MACE's verder zal worden onderzocht in toekomstige prospectieve studies.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs hebben niets te onthullen.

Acknowledgments

De auteurs danken de steun van institutioneel programma E015; en Fondo Sectorial FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BSA Roche 10735086001 Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.
Calibration Beads Miltenyi Biotec / MACS #130-093-607 MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests
CD133/1 (AC133)-PE Milteny Biotec / MACS #130-080-801 Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770 Miltenyi Biotec / MACS #130-103-798 Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC Miltenyi Biotec / MACS #130-093-601 Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD34-FITC Miltenyi Biotec / MACS #130-081-001 The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34
CD45- VioBlue Miltenyi Biotec / MACS #130-092-880 Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated
Conical Tubes Thermo SCIENTIFIC #339651 15ml conical centrifuge tubes
Cytometry Tubes FALCON Corning Brand #352052 5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.
EDTA BIO-RAD #161-0729 Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe <0.01%, As <1ppm, Insolubles <0.005%
Improved Neubauer Without brand Without catalog number Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA Blood Collection Tubes BD Vacutainer #367863 Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.
Lymphoprep Stemcell Technologies 01-63-12-002-A Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL
Paraformaldehyde SIGMA-ALDRICH #SZBF0920V Fixation of biological samples, (powder, 95%)
Pipette Transfer 1,3mL CRM Globe PF1016, PF1015 The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.
Test Tubes KIMBLE CHASE 45060 13100 Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Cassar, A., Holmes, D. R. Jr, Rihal, C. S., Gersh, B. J. Chronic coronary artery disease: diagnosis and management. Mayo Clinic Proceedings. 84, (12), 1130-1146 (2009).
  2. Regueiro, A., et al. Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).
  3. Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease. Clinical Science (Lond). 120, (7), 263-283 (2011).
  4. Samman Tahhan, A., et al. Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes. Circulation Research. 122, (11), 1565-1575 (2018).
  5. Tomulić, V., Gobić, D., Lulić, D., Židan, D., Zaputović, L. Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent. Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).
  6. Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment? European Heart Journal. 28, (8), 929-940 (2007).
  7. Kremastinos, D. T., et al. Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty. International Journal of Cardiology. 53, (3), 227-232 (1996).
  8. Karube, N., et al. Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass. American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42, (5), M787-M791 (1996).
  9. Truong, Q. A., et al. Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study. Heart Rhythm. 11, (12), 2167-2175 (2014).
  10. Suárez-Cuenca, J. A., et al. Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23, (7), 4844-4849 (2019).
  11. Suárez-Cuenca, J. A., et al. Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease. Angiology Open Access. 7, 01 (2019).
  12. Schmidt-Lucke, C., et al. Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol. PLoS One. 5, (1), e13790 (2010).
  13. Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis. American Journal of Pathology. 138, (4), 951-960 (1991).
  14. Morales-Portano, J. D., et al. Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease. International Journal of Cardiovascular Imaging. 34, (9), 1429-1437 (2018).
  15. Huang, X., et al. Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury. Yonsei Medical Journal. 58, (5), 1012-1017 (2017).
Coronaire voorlopercellen en oplosbare biomarkers in cardiovasculaire prognose na coronaire angioplastie
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Suárez-Cuenca, J. A., Robledo-Nolasco, R., Alcántara-Meléndez, M. A., Díaz-Hernandez, L. J., Vera-Gómez, E., Hernández-Patricio, A., Sánchez-Díaz, K. S., Gutiérrez-Buendía, J. A., Contreras-Ramos, A., Ruíz-Hernández, A. S., Pérez-Cabeza de Vaca, R., Mondragón-Terán, P. Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty. J. Vis. Exp. (155), e60504, doi:10.3791/60504 (2020).More

Suárez-Cuenca, J. A., Robledo-Nolasco, R., Alcántara-Meléndez, M. A., Díaz-Hernandez, L. J., Vera-Gómez, E., Hernández-Patricio, A., Sánchez-Díaz, K. S., Gutiérrez-Buendía, J. A., Contreras-Ramos, A., Ruíz-Hernández, A. S., Pérez-Cabeza de Vaca, R., Mondragón-Terán, P. Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty. J. Vis. Exp. (155), e60504, doi:10.3791/60504 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter