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Behavior

चूहों के लिए एक विस्तारित डर कंडीशनिंग प्रोटोकॉल का उपयोग कर इनक्यूबेशन डर

Published: August 22, 2020 doi: 10.3791/60537
Automatic Translation
1,6, 2, 2, 3, 3, 4, 2, 2, 2,5
1School of Psychology, Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia, 2Animal Behavior Laboratory, Fundación Universitaria Konrad Lorenz, 3Department of Psychology, Universidad de Los Andes, 4School of Veterinary Medicine, Animal Health Department, Universidad Nacional de Colombia, 5Department of Psychology, Troy University, 6Department of Neurobiology, University of Alabama at Birmingham

Summary

हम एक विस्तारित भय-कंडीशनिंग प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं जो चूहों में ओवरट्रेनिंग और डर इनक्यूबेशन पैदा करता है। इस प्रोटोकॉल में 25 टोन-शॉक पेयरिंग (यानी, ओवरट्रेनिंग) के साथ एक एकल प्रशिक्षण सत्र और संदर्भ और क्यू परीक्षणों 48 एच (अल्पकालिक) और प्रशिक्षण के बाद 6 सप्ताह (दीर्घकालिक) के दौरान वातानुकूलित ठंड प्रतिक्रियाओं की तुलना पर जोर दिया गया है।

Abstract

भावनात्मक स्मृति मुख्य रूप से डर कंडीशनिंग प्रतिमान के साथ अध्ययन किया गया है । डर कंडीशनिंग सीखने का एक रूप है जिसके माध्यम से व्यक्ति विरोधी घटनाओं और अन्यथा तटस्थ उत्तेजनाओं के बीच संबंधों को सीखते हैं। भावनात्मक यादों का अध्ययन करने के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली प्रक्रियाओं में चूहों में डर कंडीशनिंग आवश्यक है। इन कार्यों में, अनकंडीशनल उत्तेजना (यूएस) एकल या कई सत्रों में एक बार या कई बार प्रस्तुत किया गया एक फुटशॉक है, और वातानुकूलित प्रतिक्रिया (सीआर) ठंड है। इन प्रक्रियाओं के एक संस्करण में, जिसे क्यूड डर कंडीशनिंग कहा जाता है, प्रशिक्षण चरण के दौरान एक स्वर (वातानुकूलित उत्तेजना, सीएस) को फुटशॉक (यूएस) के साथ जोड़ा जाता है। पहले परीक्षण के दौरान, जानवरों को उसी संदर्भ में उजागर किया जाता है जिसमें प्रशिक्षण हुआ था, और फुटशॉक और टन (यानी, एक संदर्भ परीक्षण) के अभाव में ठंड प्रतिक्रियाओं का परीक्षण किया जाता है। दूसरे परीक्षण के दौरान, संदर्भ को बदलने पर ठंड को मापा जाता है (उदाहरण के लिए, प्रायोगिक कक्ष की गंध और दीवारों में हेरफेर करके) और टोन को फुटशॉक (यानी क्यू टेस्ट) के अभाव में प्रस्तुत किया जाता है। अधिकांश cued डर कंडीशनिंग प्रक्रियाओं कुछ टोन सदमे pairings आवश्यक (उदाहरण के लिए, एक ही सत्र में 1-3 परीक्षण) । डर इनक्यूबेशन (यानी, डर प्रतिक्रियाओं को अपरिवर्तनीय घटनाओं या वातानुकूलित उत्तेजनाओं के आगे जोखिम के बिना समय के साथ वृद्धि) नामक लंबे समय तक चलने वाले प्रभाव से संबंधित लंबे समय तक चलने वाले प्रभाव से संबंधित कम सामान्य संस्करणों में रुचि बढ़ रही है। विस्तारित भय कंडीशनिंग कार्य डर इनक्यूबेशन के व्यवहार और न्यूरोबायोलॉजिकल पहलुओं की समझ के लिए महत्वपूर्ण रहे हैं, जिसमें अन्य मनोवैज्ञानिक घटनाओं (उदाहरण के लिए, पोस्ट-ट्रॉमेटिक स्ट्रेस डिसऑर्डर) के साथ इसका संबंध शामिल है। यहां, हम एक विस्तारित भय-कंडीशनिंग प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं जो चूहों में ओवरट्रेनिंग और डर इनक्यूबेशन पैदा करता है। इस प्रोटोकॉल में 25 टोन-शॉक पेयरिंग (यानी, ओवरट्रेनिंग) के साथ एक एकल प्रशिक्षण सत्र और संदर्भ और क्यू परीक्षणों 48 एच (अल्पकालिक) और प्रशिक्षण के बाद 6 सप्ताह (दीर्घकालिक) के दौरान वातानुकूलित ठंड प्रतिक्रियाओं की तुलना पर जोर दिया गया है।

Introduction

मेमोरी एक मनोवैज्ञानिक प्रक्रिया है जिसमें विभिन्न चरणों को शामिल किया गया है: सूचना अधिग्रहण, समेकन (अधिग्रहीत जानकारी की स्थिरता के लिए अनुमति देता है), और पुनर्प्राप्ति (समेकन प्रक्रिया के लिए साक्ष्य)1। समेकन चरण के दौरान, नए सिनैप्टिक कनेक्शन की स्थापना और पहले से मौजूद कनेक्शनों में संशोधन होता है। इससे पता चलता है कि इन परिवर्तनों के लिए किस समय की आवश्यकता होती,है. ये शारीरिक या आणविक परिवर्तन भिन्न होते हैं कि पुनः प्राप्त घटनाओं को भावनात्मक रूप से चार्ज किया जाता है या नहीं (यानी, भावनात्मक स्मृति)। उदाहरण के लिए, अनुसंधान से पता चला है कि पार्श्व नाभिक और बेसोलाटरी एमिग्डाला परिसर भावनात्मक स्मृति 3,4,,55के लिए विशेष रूप से प्रासंगिक हैं ।

भावनात्मक स्मृति घटनाओं का मुख्य रूप से अध्ययन किया गया है जिसमें डर कंडीशनिंग प्रतिमान5,6 भय कंडीशनिंग सीखने का एक रूप है जिसके माध्यम से व्यक्ति विरोधी घटनाओं और अन्यथा तटस्थ उत्तेजनाओं के बीच संबंधों को सीखते हैं7. डर कंडीशनिंग प्रतिमान एमिग्डाला में आणविक, सेलुलर और संरचनात्मक परिवर्तन का उत्पादन करते हैं। इसके अलावा, डर कंडीशनिंग भावनात्मक स्मृति के समेकन और पुनर्प्राप्ति प्रक्रियाओं के दौरान हिप्पोकैम्पस की कनेक्टिविटी को संशोधित करता है।

डर यादों का अध्ययन करने के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली प्रक्रियाओं में से एक चूहों में शास्त्रीय (पावलोवियन) कंडीशनिंग है। यह प्रक्रिया आम तौर पर फुटशॉक (यूएस) का उपयोग विरोधी उत्तेजना के रूप में करती है, जिसे एक या कई सत्रों में एक या कई बार वितरित किया जाता है। इस प्रक्रिया के संपर्क में आने वाले चूहों की वातानुकूलित प्रतिक्रिया (सीआर) ठंड है (यानी, "सांस लेने में उपयोग की जाने वाली मांसपेशियों को छोड़कर जानवरों की कंकाल मांसपेशी की सामान्यीकृत टॉनिक प्रतिक्रिया के कारण सामान्यीकृत गतिहीनता"7)। इस प्रतिक्रिया का मूल्यांकन दो प्रकार के परीक्षणों पर किया जा सकता है: संदर्भ और क्यू परीक्षण। संदर्भ परीक्षण के लिए, विषय प्रशिक्षण सत्र के दौरान एक दी गई संख्या फुटशॉक से गुजरता है, और फिर एक परिभाषित समय के लिए प्रायोगिक कक्ष से हटा दिया जाता है। परीक्षण के दौरान, विषय को उसी संदर्भ में वापस कर दिया जाता है जिसमें प्रशिक्षण हुआ था और ठंड के विभिन्न उपाय फुटशॉक (जैसे, अवधि, प्रतिशत या फ्रीजिंग एपिसोड की आवृत्ति) के अभाव में एकत्र किए जाते हैं, और प्रशिक्षण चरण के दौरान स्थापित आधारभूत स्तरों की तुलना में। परीक्षण के दूसरे प्रकार के लिए, क्यू परीक्षण, एक उत्तेजना (आमतौर पर एक टोन) प्रशिक्षण चरण (यानी, सशर्त उत्तेजना, सीएस) के दौरान फुटशॉक के साथ जोड़ा जाता है। प्रशिक्षण पूरा होने के बाद, जानवर को एक परिभाषित समय के लिए प्रशिक्षण संदर्भ से हटा दिया जाता है और बाद में एक संशोधित संदर्भ में रखा जाता है (उदाहरण के लिए, एक अलग प्रयोगात्मक कक्ष जिसमें दीवारों और विभिन्न गंध के विभिन्न आकार होते हैं)। क्यू तो समय की एक दी गई संख्या प्रस्तुत की है, और क्यू के लिए ठंड प्रतिक्रियाओं मापा जाता है और आधारभूत प्रशिक्षण के दौरान एकत्र स्तर की तुलना में । इस प्रतिमान का सबसे आम संस्करण एक ही प्रशिक्षण सत्र के दौरान 1 से 3 टोन-शॉक पेयरिंग का उपयोग करता है, इसके बाद संदर्भ और क्यू परीक्षणों ने कई घंटे या कुछ दिनों बाद आयोजित किया।

अन्य कम बार लागू किए गए डर कंडीशनिंग प्रक्रियाओं में शॉक-क्यू पेयरिंग (यानी, परीक्षण) की एक व्यापक संख्या शामिल है, जिसे अक्सर ओवरट्रेनिंग प्रक्रियाएं 8 कहाजाताहै। इन कार्यों में बढ़ती रुचि उनके लंबे समय तक चलने वाले और बढ़ी हुई स्मृति प्रभावों से संबंधित है जिसे डर इनक्यूबेशन कहा जाता है (यानी, अविरल घटनाओं या वातानुकूलित उत्तेजनाओं के आगे जोखिम के अभाव में समय के साथ वातानुकूलित भय प्रतिक्रियाएं बढ़ जाती हैं)9,10,,11।, इस तरह की अतिप्रशिक्षण प्रक्रियाओं का एक उदाहरण 10 सत्रों में वितरित 100 टोन-शॉक पेयरिंग के प्रशिक्षण चरण पर जोर देता है, इसके बाद संदर्भ और क्यू परीक्षण ों का आयोजन 48 घंटे और 30 दिन बाद11,,12। कई दिनों में फैले व्यापक प्रशिक्षण से बचने के लिए, मैरेन (1 99 8) ने बताया कि 25 पेयरिंग8के साथ एक ही सत्र में ओवरट्रेनिंग की स्थापना और अनुकूलित किया जा सकता है। इनक्यूबेशन प्रभाव प्रशिक्षण के 31 दिनों के बाद परीक्षण चूहों में वातानुकूलित भय के काफी उच्च स्तर में सबूत है, चूहों के बाद ४८ घंटे का परीक्षण किया । विस्तारित भय-कंडीशनिंग कार्य व्यवहार और न्यूरोबायोलॉजिकल पहलुओं की समझ के लिए महत्वपूर्ण रहे हैं, जिसमें इनक्यूबेशन डर अंतर्निहित है, जिसमें अन्य मनोवैज्ञानिक घटनाओं (जैसे, विलंबित शुरुआत के बाद-दर्दनाक तनाव विकार)11,12,,13के साथ इसका संबंध शामिल है।,

यहां, हम एक विस्तारित भय-कंडीशनिंग प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं जो चूहों में ओवरट्रेनिंग और डर इनक्यूबेशन प्रेरित करता है। अन्य प्रतिमानों के लिए अलग है कि प्रशिक्षण के कई दिनों की आवश्यकता है11, वर्तमान प्रोटोकॉल एक ही प्रशिक्षण सत्र8पर केंद्रित है । हमने प्रशिक्षण के 6 सप्ताह बाद किए गए संदर्भ और क्यू परीक्षणों के दौरान उच्च वातानुकूलित ठंड प्रतिक्रियाओं का उत्पादन करने के लिए 25 टोन-शॉक पेयरिंग का उपयोग किया, जैसा कि 48 घंटे बाद किए गए परीक्षणों की तुलना में।

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Protocol

निम्नलिखित प्रोटोकॉल को फंडासिओन यूनीवर्सिटारिया कोनराड लोरेंज (आईएसीयूसी-केएल) की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। इंटरनेशनल लीग ऑफ एनिमल राइट्स, जिनेवा, स्विट्जरलैंड (१९८९) द्वारा जारी पशु अधिकारों की सार्वभौमिक घोषणा और आईसीएलास द्वारा जारी जानवरों के साथ प्रयोग के नैतिक सिद्धांतों का सम्मान किया गया ।

1. विषय की तैयारी

  1. पुरुष वयस्क Wistar चूहों का चयन करें (n = 12) । प्रशिक्षण और परीक्षण प्रोटोकॉल की शुरुआत से पहले, अनुकूलन के तीन दिनों के लिए प्रति पिंजरे चार के समूहों में उन्हें घर। पूरे प्रयोग में पानी तक मुफ्त पहुंच के साथ चूहों को प्रदान करें। 12 घंटे के हल्के-अंधेरे चक्र (07:00 घंटे पर रोशनी) के तहत कमरे के तापमान को 20 डिग्री सेल्सियस से 25 डिग्री सेल्सियस के बीच नियंत्रित करें।
    नोट: चूहा उपभेदों डर कंडीशनिंग के दौरान अंतर प्रदर्शन दिखाया था । उदाहरण के लिए, Schaap एट अल (२०१३) ने बताया कि Wistar और लुईस उपभेदों ने फौन हूडेड और ब्राउन नॉर्वे चूहों12की तुलना में ठंड व्यवहार की लंबी अवधि दिखाई । इस प्रकार, दर्द और थर्मल दहलीज में अंतर तीव्रता और झटके की अवधि को समायोजित करने के लिए मूल्यांकन किया जाना चाहिए ।
  2. हर दिन एक ही घंटे में प्रतिबंधित भोजन का उपयोग देकर अपने मुक्त खिला वजन (350-400 ग्राम के बीच सामान्य वजन) के 85% पर चूहों को बनाए रखें। प्रकाश चक्र के दौरान हर दिन एक ही घंटे में चूहों का वजन करें। विस्तारित भय कंडीशनिंग प्रशिक्षण की शुरुआत से पहले तीन दिनों के लिए विज्ञापन लिब वजन (100% वजन) की गणना करें।
    नोट: वर्तमान प्रयोग में उपयोग किए जाने वाले जानवरों का परीक्षण अतिरिक्त वाद्य परीक्षणों पर किया गया था जो यहां सूचित नहीं किए गए हैं। उन अतिरिक्त परीक्षणों के लिए खाद्य अभाव की आवश्यकता थी । इस प्रक्रियात्मक भिन्नता को वर्तमान प्रक्रिया के दायरे का विस्तार करने की संभावना के रूप में माना जाता है, क्योंकि यह वाद्य-भय संयुक्त परीक्षणों की क्षमता का सुझाव देता है । हालांकि, केवल डर कंडीशनिंग परीक्षणों का उपयोग कर अध्ययन भोजन अभाव की आवश्यकता नहीं होगी ।
  3. बेतरतीब ढंग से निम्नलिखित समूहों में से एक को विषयों को असाइन करें: प्रशिक्षण के 6 सप्ताह बाद भावनात्मक परीक्षण (एन = 6); प्रशिक्षण के बाद भावनात्मक परीक्षण 48 घंटे (एन = 6)।
  4. अंधेरे प्रकाश चक्र के प्रकाश चरण के दौरान, इसी तरह के घंटों में प्रशिक्षण और परीक्षण करें। जानवरों को एक ही प्रायोगिक कक्ष में असाइन करें और प्रशिक्षण और परीक्षण के दौरान जानवरों के एक ही क्रम को बनाए रखें।
    नोट: एक अतिरिक्त नियंत्रण जिसे लागू किया जा सकता है, प्रशिक्षण और परीक्षण चरणों के दौरान जानवरों के आदेश का मुकाबला करना है। व्यवहार पर कार्य-क्रम के संभावित प्रभाव को कम करने के लिए हम इस तकनीक का उपयोग करने की सलाह देते हैं जब गुणक समूहों का मूल्यांकन किया जाता है, या प्रयोगों में विभिन्न कार्य लागू किए जाते हैं।

2. उपकरण की स्थापना और सदमे अंशांकन

  1. 10% इथेनॉल के साथ प्रयोगात्मक कक्ष और स्टेनलेस स्टील ग्रिड मंजिल की सभी आंतरिक सतहों को साफ करें। प्रत्येक जानवर का परीक्षण करने से पहले दोहराएं।
  2. एक यूएसबी केबल का उपयोग कर एक कंप्यूटर के लिए उपकरण कनेक्ट और ठंड का पता लगाने प्रणाली उपकरण शुरू: सीपीयू, नियंत्रण कैबिनेट, अवरक्त प्रकाश, aversive उत्तेजक/
    नोट: हालांकि इस प्रोटोकॉल को व्यावसायिक रूप से उपलब्ध उपकरणों(सामग्री की तालिका) काउपयोग करके निष्पादित किया गया था, लेकिन विभिन्न ब्रांडों के उपकरण और सॉफ्टवेयर का उपयोग किया जा सकता है। उपकरण में एक आंतरिक ऐक्रेलिक स्क्वायर कक्ष (29.53 सेमी x 23.5 सेमी x 20.96 सेमी, जिसे प्रायोगिक कक्ष कहा जाता है) प्लास्टिक के माफी से ढके लकड़ी के बॉक्स में एम्बेडेड होता है। बाहरी दरवाजे ध्वनि, शोर या प्रकाश (तनु बॉक्स दरवाजे) के अलगाव की अनुमति देते हैं। कैमरा बाहरी दरवाजे के आंतरिक भाग में पार्श्व में स्थित है। फर्श धातु ग्रिड (36 स्टेनलेस-स्टील छड़, 3 मिमी व्यास और केंद्र के केंद्र में से हर एक) के साथ आंतरिक ऐक्रेलिक बॉक्स फुटशॉक डिलीवरी की अनुमति देता है। आंतरिक-पार्श्व दीवारों में से एक में, एक वक्ता एक श्रवण क्यू पेश करने के लिए फर्श से 6 सेमी स्थित है।
  3. शॉक तीव्रता कैलिब्रेटर (यानी, सकारात्मक और नकारात्मक कनेक्टर) के लाल और काले क्लिप को ग्रिड फर्श पर किसी भी अलग छड़ से कनेक्ट करें। यूएसबी केबल को कंप्यूटर के संबंधित पोर्ट से कनेक्ट करें। लाल और काले क्लिप को किसी अन्य बार से अलग सलाखों से जोड़ना सुनिश्चित करें।
    नोट: यह खंड सामग्री की तालिका में उल्लिखित उपकरणों के एक विशिष्ट ब्रांड का उपयोग करके सदमे तीव्रता अंशांकन प्रक्रिया का वर्णन करता है। हालांकि, अंशांकन प्रक्रिया उपकरणों के विभिन्न ब्रांडों का उपयोग करके किया जा सकता है। यह सत्यापित करने के लिए कि यह सुसंगत है ग्रिड मंजिल के तीन क्षेत्रों में सदमे की तीव्रता को जांचना करने की सिफारिश की है । इसके अलावा, सदमे की डिलीवरी के दौरान हस्तक्षेप से बचने के लिए हमेशा ग्रिड मंजिल से मल और मूत्र अवशेषों को हटा दें।
  4. शॉक-तीव्रता कैलिब्रेटर सॉफ्टवेयर(सामग्री की तालिका)शुरू करें। रेंज एरो पर क्लिक करके आवेदन में 1.0 एमए की तीव्रता चुनें। इसके बाद रन/स्टॉप स्विच को रन में बदलें ।
    नोट: हम अपनी प्रयोगशाला और साहित्य में कृंतक मॉडलों के साथ अपने अध्ययनों के आधार पर 1.0 एमए का प्रस्ताव करते हैं जो डर कंडीशनिंग33, 34, 35,के अध्ययन के लिए पर्याप्त के रूप में 0.75 एमए से,1.5एमए तक की रिपोर्ट करता है।34
  5. अविवेकी उत्तेजक या फुटशॉक देने के लिए उपयोग किए जाने वाले उपकरणों पर स्विच करें और आवेदन के पैनल पर प्रदर्शित सदमे की तीव्रता को देखें। यदि आवश्यक हो, तो उग्र उत्तेजक पर घुंडी का उपयोग करके तीव्रता को 1.0 एमए तक समायोजित करें।
    नोट: प्रयोग का उचित परीक्षण, जांच और चलाने के लिए Aversive उत्तेजक को "आउट" करने के लिए सेट किया जाना चाहिए।

3. फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम अंशांकन

  1. प्रयोगात्मक कक्ष और ध्वनि-तनु बॉक्स दरवाजे बंद करें। इस बिंदु पर जानवर को पेश न करें, क्योंकि फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम कैलिब्रेशन पूरा होने के बाद इसे चैंबर में रखा जाएगा। चेक करें कि बॉक्स के अंदर प्रकाश की तीव्रता 20 से 30 लक्स के बीच है।
  2. फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम सॉफ्टवेयर शुरू करें और प्रयोग सेटअप डायलॉग विंडो खोलें। प्रत्येक विषय (जैसे विषय पहचान संख्या, तिथि और समूह) का विवरण दर्ज करें और "प्रशिक्षण प्रोटोकॉल VFC.pro" (http://doi.org/10.17605/OSF.IO/4NKFQपर उपलब्ध) शीर्षक से फ़ाइल लोड करें।
    नोट: संदर्भ और क्यू परीक्षण एक अलग कार्यक्रम विन्यास का उपयोग करें; इस प्रकार, प्रत्येक परीक्षण पर सही फ़ाइल का उपयोग करना सुनिश्चित करें। इस बिंदु पर सही फ़ाइल "प्रशिक्षण प्रोटोकॉल VFC.pro" से मेल खाती है। याद रखें कि परीक्षण चरणों के दौरान फाइल संबंधित प्रशिक्षण सत्र के लिए अलग होगी।
  3. संबंधित कैमरा चुनें(ओं) और सेव वीडियो विकल्प (यदि आवश्यक हो) की जांच करें। मोशन थ्रेसहोल्ड को 100 और न्यूनतम फ्रीज अवधि को 30 फ़्रेम तक सेट करें।
    नोट: यह मोशन थ्रेसहोल्ड वैल्यू इस्तेमाल की गई प्रजातियों के आकार (पिक्सेल की संख्या के आधार पर) पर आधारित है। निर्माता द्वारा न्यूनतम फ्रीज अवधि मूल्य की सिफारिश की जाती है। इन मूल्यों का उपयोग कक्ष में जानवर की उचित मान्यता सुनिश्चित करने के लिए किया जाता है।
  4. सत्यापित करें कि चुने हुए कैमरे (एस) से लाइव फ़ीड स्क्रीन पर दिखाई देता है, साथ ही गति सीमा ग्राफ और प्रशिक्षण के दौरान प्रस्तुत किए गए विभिन्न उत्तेजनाओं की समयरेखा (जैसे, ध्वनि और सदमे) के साथ।
    नोट: एक अलग ब्रांड का उपयोग करना, उपकरण सेटअप को जानवर के आंदोलनों को मापने की संभावना की पेशकश करनी चाहिए ताकि गति के "सूचकांक" का पता लगाया जा सके जो जानवर के चलने या ठंड के समय की मात्रा पर तुलना की अनुमति नी चाहिए। एक अन्य संभावना एक सॉफ्टवेयर का उपयोग कर रही है जो केवल वीडियो स्रोत (प्रयोग के दौरान या बाद) के साथ जानवर गति या ठंड में होने के समय का पता लगा सकता है, जैसे कि मुफ्त सॉफ्टवेयर इमेजएफजेड13,मैटलैब14में ओपन-सोर्स टूलबॉक्स, या जाबा15के रूप में पशु व्यवहार का एक मुफ्त वर्गीकरण।
  5. कैलिब्रेट विकल्प पर तीन बार क्लिक करें, जबकि यह जांचते हुए कि मोशन इंडेक्स १०० (दहलीज) से नीचे रहता है । फिर, स्क्रीन पर संबंधित बटन पर क्लिक करके लॉक करने के लिए उपकरण सेट करें।
    नोट: यह खंड सामग्री की तालिका में सूचीबद्ध उपकरणों के एक विशिष्ट ब्रांड का उपयोग करके एक फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम अंशांकन प्रक्रिया का वर्णन करता है। जैसा कि पहले उल्लेख किया गया था, अंशांकन प्रक्रिया को विभिन्न ब्रांडों के उपकरणों का उपयोग करके आयोजित किया जा सकता है (उपकरण और सॉफ्टवेयर में विभिन्न विकल्पों की समीक्षा के लिए एनाग्नोस्टारस एट अल 2010 देखें)16।

4. विस्तारित डर कंडीशनिंग प्रशिक्षण

  1. अपने घर पिंजरों में चूहों परिवहन, एक कपड़े के साथ कवर, पशु देखभाल सुविधा से प्रयोगशाला में व्यवहार प्रशिक्षण कक्ष के लिए । व्यवहार प्रशिक्षण कक्ष में जानवरों के परिवहन के दौरान शोर या तनाव पैदा करने वाली स्थितियों के संपर्क में आने से बचें। यदि कई जानवरों को एक ही समय में ले जाया जाता है, तो केवल जानवरों को परीक्षण करने और प्रायोगिक नियंत्रण बढ़ाने के लिए होल्डिंग रूम में अन्य चूहों को बनाए रखने के लिए लाएं। प्रशिक्षण शुरू करने से पहले धीरे-धीरे जानवरों को 2 मिनट के लिए संभालें।
    नोट: प्रोटोकॉल में, जानवरों को व्यवहार प्रशिक्षण से पहले 2 मिनट के लिए प्रत्येक दिन संभाला गया था । हैंडलिंग के बाद, प्रायोगिक कक्ष में जानवरों को पेश किया गया । हमने चूहों को शोधकर्ता की आदत बनाने के लिए जानवरों में हेरफेर करने की सिफारिश की।
  2. चूहे को प्रायोगिक कक्ष में पेश करें। इसे धीरे-धीरे अपनी पूंछ के आधार से संभालें और इसे कक्ष के बीच में रखें। प्रयोगात्मक कक्ष और ध्वनि-तनु बॉक्स दरवाजे बंद करें।
  3. रिकॉर्ड बटन पर क्लिक करके सत्र शुरू करें। चूहे को 3 मिनट के लिए कक्ष में ले जाने दें। यह 3 मिनट की अवधि उपकरण निर्माता द्वारा अनुशंसित मानक है और कक्ष में एक आधार रेखा और निवास समय के रूप में कार्य करता है।
  4. सत्र के मिनट 3 पर शुरू होने वाले ६० एस इंटर-ट्रायल इंटरवल (आईटीआई) के साथ पच्चीस टोन-शॉक पेयरिंग (ट्रायल) डिलीवर करें । प्रत्येक आईटीआई के अंतिम 10 एस के दौरान टोन (वातानुकूलित प्रोत्साहन - सीएस; 90 डीबी एसपीएल, 2000 हर्ट्ज, 50-एमएस राइज टाइम) प्रस्तुत करें, और प्रत्येक आईटीआई के अंतिम 2 एस के दौरान शॉक (अनकंडीशनल उत्तेजना - यूएस) ।
    नोट: रिकॉर्ड बटन की सक्रियता कैमरों पर सशर्त है ठीक से अंशांकित और बंद किया जा रहा है ।
  5. 28 मिनट का सत्र खत्म होने पर प्रायोगिक कक्ष से चूहे को हटा दें। संबंधित घर पिंजरे के लिए जानवरों को वापस। अपने घर पिंजरों में चूहों परिवहन व्यवहार प्रशिक्षण कक्ष से पशु देखभाल की सुविधा के लिए एक कपड़े के साथ कवर किया ।
  6. सभी विषयों को प्रशिक्षित करने के लिए फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम अंशांकन (चरण 3.1-3.5) और डर कंडीशनिंग (चरण 4.1 और 4.3) दोहराएं।
    नोट: हम दृढ़ता से प्रत्येक जानवर के लिए पता लगाने प्रणाली को फिर से व्यवस्थित करने की सलाह देते हैं ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि जब सॉफ्टवेयर ठंड का पता लगाने के लिए जानकारी को संसाधित करता है तो सॉफ्टवेयर समान मापदंडों को बनाए रखता है।
  7. शेष अवधि: इस अवधि के दौरान, जानवरों को अपने घर के पिंजरों में व्यक्तिगत रूप से आराम करें। इनक्यूबेशन अवधि के 6 सप्ताह के दौरान प्रति सप्ताह दो बार जानवरों के वजन की निगरानी करें। धीरे-धीरे प्रत्येक जानवर को दो मिनट के लिए हेरफेर करें जबकि वे भारित होते हैं।

5. संदर्भ परीक्षण - एकल 10 मिनट सत्र

  1. प्रशिक्षण चरण के बाद, जानवरों को संदर्भपरीक्षण नामक पहले स्मृति परीक्षण के लिए बेनकाब करें। इस 10 मिनट चरण के दौरान, चूहों को उसी संदर्भ में बेनकाब करें जिसमें प्रशिक्षण हुआ था लेकिन संकेत या झटके पेश नहीं करते हैं। पशु देखभाल सुविधा से व्यवहार प्रशिक्षण कक्ष तक अपने कवर किए गए घर पिंजरों (उदाहरण के लिए, एक कपड़े के साथ) में चूहों का परिवहन करें। ध्यान रखें कि जानवरों को समूहों में विभाजित किया गया था, इस प्रकार प्रशिक्षण चरण के बाद एक समूह का परीक्षण 48 घंटे किया जाता है और दूसरे समूह का परीक्षण प्रशिक्षण के 6 सप्ताह बाद किया जाता है (चित्र 1देखें)।

Figure 1
चित्रा 1: प्रयोग की टाइमलाइन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

  1. 10% इथेनॉल के साथ प्रयोगात्मक कक्ष और स्टेनलेस स्टील ग्रिड मंजिल की सभी आंतरिक सतहों को साफ करें। प्रत्येक जानवर का परीक्षण करने से पहले दोहराएं।
  2. फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम अंशांकन (चरण 3.1 से 3.5) दोहराएं। प्रयोग सेटअप संवाद खिड़की खोलें और "संदर्भ परीक्षण protocol.pro" नाम की फ़ाइल लोड करें, जो http://doi.org/10.17605/OSF.IO/4NKFQसे उपलब्ध है।
    नोट: इस फ़ाइल में इस प्रयोगात्मक चरण के लिए सेटअप शामिल है जिसमें कोई झटके या टन नहीं होते हैं।
  3. प्रायोगिक कक्ष में जानवर का परिचय दें। इसे धीरे-धीरे अपनी पूंछ के आधार से संभालें और इसे कक्ष के बीच में रखें। प्रयोगात्मक कक्ष और ध्वनि-तनु बॉक्स दरवाजे बंद करें।
  4. रिकॉर्ड बटन पर क्लिक करके सत्र शुरू करें। इस एकल 10 मिनट के संदर्भ-परीक्षण सत्र के दौरान, कोई उत्तेजनाएं प्रस्तुत नहीं की जाती हैं (शॉक न तो ध्वनि)।
  5. 10 मिनट का सत्र खत्म होने पर प्रायोगिक कक्ष से विषय हटा दें। जानवरों को उनके संबंधित पिंजरों में लौटाएं और व्यवहार प्रशिक्षण कक्ष से जानवरों की देखभाल सुविधा के लिए अपने कवर किए गए घर पिंजरों में चूहों का परिवहन करें। सभी विषयों की परीक्षा के लिए 5.2-5.5 चरण दोहराएं।

6. क्यू टेस्ट - एकल 13 मिनट का सत्र

  1. संदर्भ परीक्षण के एक दिन बाद, जानवरों को क्यू टेस्ट नामक स्मृति के दूसरे परीक्षणसे गुजरना पड़ता है। इस चरण के दौरान, चूहों 13 मिनट के दौरान प्रशिक्षण के एक अलग संदर्भ में होगा। संकेत (टन) प्रस्तुत कर रहे हैं, लेकिन कोई झटके दिया जाता है । अपने घर पिंजरों में चूहों परिवहन पशु देखभाल सुविधा से व्यवहार प्रशिक्षण कक्ष के लिए एक कवर के साथ कवर के साथ कवर किया । डर कंडीशनिंग प्रशिक्षण के बाद एक समूह ७२ एच का परीक्षण करें, और प्रशिक्षण के बाद एक और समूह 6 सप्ताह और एक दिन(चित्रा 1) कापरीक्षण करें ।
    नोट: परिवहन की एक अलग प्रणाली (पशु देखभाल सुविधा से प्रायोगिक कमरे में) को और अधिक संदर्भ और क्यू परीक्षणों में अंतर करने के लिए लागू किया जा सकता है । चूंकि जानवरों को उनके घर पिंजरों में प्रशिक्षण सत्र और संदर्भ परीक्षण सत्र में ले जाया गया था, एक अलग परिवहन पिंजरे, बिस्तर और/या कवर क्यू परीक्षण सत्र के लिए परिवहन के दौरान इस्तेमाल किया जा सकता है ।
  2. 10% इथेनॉल के साथ प्रयोगात्मक कक्ष और स्टेनलेस स्टील ग्रिड मंजिल की सभी आंतरिक सतहों को साफ करें। प्रत्येक जानवर का परीक्षण करने से पहले दोहराएं।
  3. दृश्य संदर्भ को बदलने के लिए, प्लास्टिक के आसपास की दीवार को प्रायोगिक कक्ष में डालें।
  4. घ्राण संदर्भ को बदलने के लिए, कपास-इत्तला वाले झाड़ू पर 1% एसिटिक एसिड लागू करें, और इसे ग्रिड फर्श17, 18, 19 के नीचे,18,19धातु ट्रे में रखें।
  5. फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम अंशांकन (चरण 3.1-3.5) दोहराएं। फाइल "क्यू टेस्ट protocol.pro" फाइल नाम की फाइल लोड करें, जो http://doi.org/10.17605/OSF.IO/4NKFQसे उपलब्ध है।
    नोट: इस फ़ाइल में इस प्रायोगिक चरण के लिए सेटअप शामिल है, जिसमें प्रशिक्षण चरण (सीएस) के दौरान प्रस्तुत किए गए समान टन की डिलीवरी होती है, लेकिन झटके (यूएस) के अभाव में।
  6. प्रायोगिक कक्ष में जानवर का परिचय दें। इसे धीरे-धीरे अपनी पूंछ के आधार से संभालें और इसे कक्ष के बीच में रखें। प्रयोगात्मक कक्ष और ध्वनि-तनु बॉक्स दरवाजे बंद करें।
  7. रिकॉर्ड बटन पर क्लिक करके सत्र शुरू करें। एकल 13 मिनट क्यू परीक्षण सत्र के दौरान, सीएस प्रोत्साहन (टोन) 10 बार प्रस्तुत किया जाता है, सत्र के मिनट 3 पर शुरू ।
    नोट: पहले 3 मिनट इस सत्र के आधार रेखा के अनुरूप है, 10 क्यू परीक्षण परीक्षणों के बाद (यानी, 10 एस प्रत्येक) झटके के अभाव में ५० एस आईटीआई के साथ दिया । टन की डिलीवरी स्वचालित है, पहले से भरी हुई फ़ाइल का उपयोग करके।
  8. 13 मिनट का सत्र खत्म होने पर प्रायोगिक कक्ष से जानवर को हटा दें। संबंधित पिंजरे में जानवरों को वापस करें और उन्हें पशु देखभाल सुविधा के लिए कवर परिवहन करें। सभी विषयों की परीक्षा के लिए 6.5 के माध्यम से चरण 6.2 दोहराएं।

7. डेटा विश्लेषण

  1. फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम सॉफ्टवेयर का उपयोग करके वीडियो स्ट्रीम से प्राप्त होने वाले सामान्य गतिविधि सूचकांक (यानी मोशन इंडेक्स) प्राप्त करें। यह सॉफ्टवेयर स्वचालित रूप से प्रति सत्र ठंड समय का प्रतिशत और ठंड एपिसोड की संख्या प्रदान करने के लिए गति सूचकांक को बदल देता है। सिस्टम की डिफ़ॉल्ट न्यूनतम फ्रीज अवधि सेटिंग (1 s = 30 फ्रेम) के लिए ठंड सीमा निर्धारित करें।
  2. प्राप्त करने के लिए अतिरिक्त कस्टम-निर्मित कार्यक्रम (http://doi.org/10.17605/OSF.IO/4NKFQसे उपलब्ध फ़ाइल) का उपयोग करें:
    1. प्रशिक्षण सत्र के पहले तीन मिनट (यानी, बेसलाइन फ्रीजिंग) के दौरान ठंड का प्रतिशत निर्धारित करने के लिए कार्यक्रम का उपयोग करें, क्योंकि उस 3 मिनट की अवधि से पहले या उसके दौरान कोई झटके या टन प्रस्तुत नहीं किए गए थे) और क्यू परीक्षण सत्र के पहले तीन मिनट के दौरान।
    2. प्रशिक्षण सत्र के आठ 3 मिनट के डिब्बे में से प्रत्येक के लिए ठंड का प्रतिशत निर्धारित करने के लिए कार्यक्रम का उपयोग करें।
    3. क्यू प्रस्तुतियों के दौरान ठंड का प्रतिशत निर्धारित करने के लिए कार्यक्रम का उपयोग करें (यानी, टन के दौरान ठंड) और कोई क्यू अवधि (इंटरट्रायल अंतराल; आईटीआई), प्रशिक्षण और क्यू-टेस्ट सत्र दोनों के लिए।
  3. इन आंकड़ों को प्राप्त करने के लिए, फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम सॉफ्टवेयर खोलें।
    1. फाइल चुनें । रिपोर्ट । बैच घटक सारांश।
    2. एक्सटेंशन के साथ फाइल का चयन करें । सीएमपी http://doi.org/10.17605/OSF.IO/4NKFQ से उपलब्ध है।
    3. आउटपुट फ़ाइल का नाम दें और मोशन थ्रेसहोल्ड को 100 में बदलें। फिर, ओकेपर क्लिक करें।
    4. विश्लेषण की जाने वाली फाइलों का चयन करें (एक्सटेंशन। रॉ) । सत्र समाप्त होने पर इन फाइलों को फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम सॉफ्टवेयर से स्वचालित रूप से उत्पन्न किया जाता है और प्रत्येक सत्र के कच्चे डेटा के अनुरूप होता है। प्रारंभ में, फ़ाइलों को कंप्यूटर के डेस्कटॉप में सहेजा जाता है, लेकिन उन्हें एक कस्टम फ़ोल्डर (जैसे, दस्तावेज़-डर कंडीशनिंग) में संग्रहीत किया जा सकता है ताकि उनकी बाद की पहचान और उद्घाटन की सुविधा मिल सके जब उन्हें विश्लेषण करने की आवश्यकता हो।
    5. आउटपुट फाइल्स (एक्सटेंशन) खोलें । सीएसवी) । वे आगे के विश्लेषण के लिए एक स्प्रेडशीट सॉफ्टवेयर में संपादित किया जा सकता है। इस फाइल में प्रायोगिक सत्र के दौरान ठंड के परिणाम होते हैं।
      नोट: ठंड का कुल प्रतिशत प्राप्त करने के लिए, उस समय को विभाजित करें जो विषय ने कुल सत्र समय में स्थिर खर्च किया था। ठंड एपिसोड की संख्या सत्र के माध्यम से ठंड की घटनाओं की संख्या की गिनती की जा सकती है । दोनों ही मामलों में, न्यूनतम फ्रीज अवधि के आधार पर गति सीमा को परिभाषित करना आवश्यक है। यह लौकिक कसौटी है कि परिभाषित करता है कि क्या एक फ्रीज प्रकरण दर्ज की गई है । रिकॉर्डिंग की स्वचालित प्रणालियां न्यूनतम फ्रीज अवधि के उपाय के रूप में प्रति सेकंड (एफपीएस) फ्रेम की कुछ मात्रा का उपयोग कर सकती हैं। उदाहरण के लिए, 30 एफपीएस की नमूना दर के साथ, 15 फ्रेम की न्यूनतम फ्रीज अवधि 30 एस के लिए पिछले गतिहीनता के उदाहरण को ठंडा करने के रूप में रिकॉर्ड करेगी।
  4. ठंड एपिसोड की कुल संख्या पर कुल ठंड अवधि (सेकंड में) को विभाजित करके प्रत्येक सत्र (प्रशिक्षण और दोनों परीक्षणों, संदर्भ और क्यू) के लिए प्रत्येक फ्रीजिंग एपिसोड की औसत अवधि की गणना करें।

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Representative Results

प्रशिक्षण सत्र के विभिन्न चरणों के दौरान ठंड के समय के प्रतिशत में भिन्नता का विश्लेषण एक आश्रित टी परीक्षण (तालिका 1) का उपयोग करके सभी विषयों (एन =12)के लिए किया गया था। जानवरों को सक्रिय किया गया और प्रशिक्षण सत्र (प्रोटोकॉल के पहले दिन) के पहले तीन मिनट के दौरान प्रयोगात्मक कक्ष का पता लगाया गया, जिस दौरान कोई टन या झटके नहीं दिए गए (यानी, बेसलाइन-बीएल)। जैसा कि चित्रा 2Aमें दिखाया गया है, बाद के 25 टोन-शॉक पेयरिंग(एम = 48.88) के दौरान ठंड के समय का प्रतिशत; एसई = 4.37) बीएल के दौरान की तुलना में काफी अधिक था(एम = 14.65; एसई = 4.05), जिसे भय अधिग्रहण का संकेत माना जाता है।

सांख्यिकी परीक्षण आंकड़ा चरणों
आश्रित टी टेस्ट 2ए टी (11) = -6.21, पी एंड एलटी; .001, d = 2.34
3-मिनट डिब्बे
बार-बार उपाय ANOVA 2B एफ (3.75, 41.32) = 11.19, पी एंड एलटी; .001, ηपी2 = .50।
चरणों समूह चरण एक्स समूह
मिश्रित इनोवा 2C एफ (3, 30) = 14.21, पी एंड एलटी; .001, ηp2 =.58 एफ (3, 30) = 4.63, पी एंड एलटी; .05, ηp2 =.31 एफ (1, 10) = 2.06, पी और जीटी;.05, ηp2 =.17
वन-वे इनोवा 3ए एफ (1, 10) = 6.91, पी एंड एलटी; .05, ηp2 =.40
वन-वे इनोवा 3B एफ (1, 10) = 10.30, पी एंड एलटी; .05, ηp2 =.50
वन-वे इनोवा 3सी एफ (1, 10) = 5.83, पी एंड एलटी; 05, ηp2 =.36
मिश्रित इनोवा 4ए एफ (2, 20) = 29.28, पी एंड एलटी; .001, ηp2 =.74 एफ (2, 20) = 2.33, पी और जीटी;.05, ηp2 =.18 एफ (1, 10) = 2.14, पी और जीटी;.05, ηp2 =.17
मिश्रित इनोवा 4B एफ (1, 10) = 1.53, पी और जीटी;.05, ηp2 =.13 एफ (1, 10) = 3.98, पी एंड एलटी; .05, ηp2 =.28 एफ (1, 10) = .23, पी &.05, ηp2 =.02
मिश्रित इनोवा 4C एफ (1, 10) = 25.43, पी एंड एलटी; .001, ηp2 =.71 एफ (1, 10) = 6.17, पी एंड एलटी; .05, ηp2 =.38 एफ (1, 10) = .22, पी और जीटी;.05, ηp2 =.02

तालिका 1: डेटा विश्लेषण में उपयोग किए जाने वाले आंकड़े। चित्रा 2Aके लिए, प्रशिक्षण सत्र के पहले 3 मिनट के दौरान सभी विषयों (एन = 12) की ठंड का औसत प्रतिशत (बेसलाइन, बीएल के अनुरूप) सत्र के शेष 25 मिनट (25 टोन-शॉक परीक्षण) के दौरान ठंड के प्रतिशत की तुलना में एक महत्वपूर्ण अंतर और एक बड़ा प्रभाव आकार(कोहेन डी = 2.34) दिखा रहा था। चित्रा 2Bके लिए, एक तुलना 3 मिनट के डिब्बे भर में किया गया था एक दोहराया उपाय ANOVA परीक्षण (बीएल और आठ 3 मिनट डिब्बे) में एक महत्वपूर्ण अंतर दिखा । चित्रा 2 सीके लिए, बेसलाइन (बीएल, प्रशिक्षण सत्र के पहले 3 मिनट), प्रशिक्षण अवधि (25 टोन-शॉक पेयरिंग), संदर्भ परीक्षण सत्र, और क्यू परीक्षण सत्र के दौरान चूहों के प्रत्येक समूह की ठंड के औसत प्रतिशत के बीच तुलना समूह (४८ एच या 6 सप्ताह) और भीतर-विषयों के कारक चरणों (बीएल प्रशिक्षण, संदर्भ परीक्षण और परीक्षण संकेत) के साथ एक मिश्रित ANOVA के माध्यम से आयोजित किया गया । चरणों और समूह में अंतर है, लेकिन बातचीत चरणों में नहीं * समूह पाया गया । चित्रा 3ए - 3B गतिविधि (पैनल 3A, मोशन इंडेक्स), ठंड (पैनल 3B, सेकंड में ठंड मतलब) और एपिसोड की अवधि (पैनल 3C, सेकंड में मतलब ठंड एपिसोड) पर डेटा दिखाता है। इन आंकड़ों का विश्लेषण एक तरह से ANOVA का उपयोग करके किया गया था, जिसने सभी मापों में समूहों के बीच मतभेदों को इंगित किया था । अंत में, चित्रा 4ए - 4 सी के लिए प्रत्येक पैनल (ए, बी और सी) के लिए एक मिश्रित ANOVA प्रदर्शन किया गया था, जिसमें समूह (48 एच या 6 सप्ताह) और भीतर-विषयों के कारक चरणों (बीएल, प्रशिक्षण, संदर्भ परीक्षण और क्यू टेस्ट) के बीच-विषय कारक थे।

Figure 2
चित्रा 2: एक विस्तारित cued डर कंडीशनिंग प्रोटोकॉल के प्रशिक्षण चरण। डेटा को ठंड प्रतिक्रिया के मतलब (सलाखों) और एसईएम (त्रुटि सलाखों) के रूप में दिखाया गया है। (ए)प्रशिक्षण सत्र के पहले 3 मिनट के दौरान सभी विषयों (एन = 12) की ठंड का औसत प्रतिशत दिखाता है, जिसके दौरान कोई झटके या टन (बेसलाइन, बीएल) प्रस्तुत नहीं किए गए थे, और सत्र के शेष 25 मिनट (25 टोन-शॉक परीक्षण, इंटरट्रायल अंतराल के साथ, आईटीआई, 60 s); = बीएल से अलग(पी एंड एलटी; .001)। (ख)3 मिनट बेसलाइन अवधि (बीएल, कोई झटके या टन दिया) और प्रशिक्षण सत्र के बाद 3 मिनट डिब्बे के दौरान सभी जानवरों (एन = 12) के औसत ठंड समय से पता चलता है; = शेष सभी डिब्बे से अलग(पी एंड एलटी;.001)। (ग)चूहों के प्रत्येक समूह की ठंड का औसत प्रतिशत दिखाता है (प्रशिक्षण के बाद ४८ घंटे का परीक्षण; प्रशिक्षण के बाद 6 सप्ताह का परीक्षण) बेसलाइन (बीएल, प्रशिक्षण सत्र के पहले 3 मिनट), प्रशिक्षण अवधि (25 टोन-शॉक पेयरिंग), संदर्भ परीक्षण सत्र, और क्यू टेस्ट सत्र; * = 48 घंटे के बाद परीक्षण से अलग(मतलब डिफसंदर्भ = -34.95, एसई = 14.99, पी एंड एलटी; .05, कोहेन डी = 1.34); एक = प्रशिक्षण अवधि से अलग(मतलब डिफट्रेनिंग48h = 42.51; एसई = 7.28; पी एंड लेफ्टिनेंट; .05; कोहेन डी = 3.03); b = प्रशिक्षण अवधि से अलग(मतलब डिफट्रेनिंग6वीके = 25.94; एसई = 7.28; पी एंड लेफ्टिनेंट; .05; कोहेन डी = 1.77), संदर्भ परीक्षण(मतलब डिफContext6Weeks = 50.36; एसई = 10.58; पी एंड लेफ्टिनेंट; .01; कोहेन डी = 3.13), और क्यू परीक्षण(मतलब डिफCue6Weeks = 55.86; एसई = 10.25; पी एंड लेफ्टिनेंट; .01; कोहेन डी = 2.47) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

अधिग्रहण के दौरान ठंड प्रतिक्रिया का एक विश्लेषण आठ 3 मिनट के डिब्बे(चित्रा 2B)में प्रशिक्षण सत्र खंडित करके आयोजित किया गया था । इन आंकड़ों से पता चलता है कि इस प्रतिक्रिया के लिए आवंटित मतलब समय पहले तीन टोन-शॉक परीक्षणों (यानी बिन 1) के दौरान 180 एस के पास या 180 एस पर पहुंचता है। पिछले शोध में इस निष्कर्ष को11से अधिक प्रशिक्षण देने का संकेत माना गया है . बार-बार उपाय ANOVA बड़े प्रभाव आकार(तालिका 1 और तालिका 2)के साथ बेसलाइन और बाद के सभी डिब्बे के बीच लगातार महत्वपूर्ण अंतर का पता चला ।

तुलना मतलब अंतर मानक त्रुटि पी मान कोहेन डी
बिन बेसलाइन बनाम बिन 1 -60.075* 12,243 लेफ्टिनेंट; .05 1.95
बिन बेसलाइन बनाम बिन 2 -69.053* 16,220 लेफ्टिनेंट; .05 1.89
बिन बेसलाइन बनाम बिन 3 -66.197* 13,706 लेफ्टिनेंट; .05 1.91
बिन बेसलाइन बनाम बिन 4 -68.595* 11,969 लेफ्टिनेंट; .05 2.08
बिन बेसलाइन बनाम बिन 5 -65.475* 10,991 लेफ्टिनेंट; .05 2.15
बिन बेसलाइन बनाम बिन 6 -65.795* 13,509 लेफ्टिनेंट; .05 2.06
बिन बेसलाइन बनाम बिन 7 -72.900* 12,231 लेफ्टिनेंट; .05 2.53
बिन बेसलाइन बनाम बिन 8 -78.633* 8,692 <001 3.37

तालिका 2: चित्रा 2 बीमें 3 मिनट के डिब्बे के लिए औसत अंतर, मानक त्रुटि और प्रभाव आकार। यह तालिका बेसलाइन बिन और बाद के डिब्बे(चित्रा 2B)में से प्रत्येक के बीच तुलना दिखाती है। मतलब अंतर, मानक त्रुटि, और पीमूल्य और कोहेन डी इन मतभेदों (प्रभाव आकार) के आकार के एक सूचकांक के रूप में सूचित कर रहे हैं ।

कार्य के दौरान ठंड के प्रतिशत में अंतर का परीक्षण करने के लिए एक मिश्रित ANOVA का आयोजन किया गया था, जिसमें चरणों (बीएल, प्रशिक्षण, संदर्भ परीक्षण और क्यू परीक्षण) के भीतर विषय कारक और समूह (४८ एच और 6 सप्ताह) के रूप में विषय कारक(तालिका 1)के रूप में किया गया था । प्रशिक्षण अवधि के दौरान सभी जानवरों की ठंड का प्रतिशत बेसलाइन अवधि के दौरान की तुलना में काफी अधिक था (चित्रा 2 सीदेखें)। स्मृति परीक्षणों के दौरान ठंड के प्रतिशत और प्रशिक्षण अवधि(पीऔर जीटी; 05) के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं देखा गया ।

बीएल, प्रशिक्षण और क्यू टेस्ट के दौरान ठंड के प्रतिशत में दोनों समूहों (48 एच और 6 सप्ताह) के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं देखा गया(पीऔर जीटी; .115; चित्रा 2Cदेखें)। इसके विपरीत, प्रशिक्षण के 6 सप्ताह बाद परीक्षण किए गए जानवरों ने 48 एच पर परीक्षण किए गए जानवरों की तुलना में संदर्भ परीक्षण के दौरान ठंड का काफी अधिक प्रतिशत दिखाया, एक बड़े प्रभाव आकार के साथ (चित्रा 2Cदेखें)। कुल मिलाकर, चित्रा 2C से पता चलता है कि दीर्घकालिक देरी संदर्भ और क्यू परीक्षणों के दौरान ठंड (यानी, प्रशिक्षण के बाद 6 सप्ताह) कुल मिलाकर प्रशिक्षण सत्र के दौरान की तुलना में काफी अधिक था । प्रशिक्षण के बाद 48 घंटे परीक्षण किए गए जानवरों के समूह में विपरीत गिरावट की प्रवृत्ति देखी गई। हालांकि, 48 घंटे के समूह में ये अंतर सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं थे(पीऔर जीटी; .05)। अंत में, हालांकि ठंड के स्तर ने विभिन्न चरणों में मतभेद दिखाए, लेकिन उन्हें अन्य प्रोटोकॉलों की तुलना में कम माना जा सकता है। एक स्पष्टीकरण प्रयोगशालाओं या अंशांकन प्रक्रिया के दौरान स्थापित गति सूचकांक सीमा के बीच अंतर्निहित पद्धतिगत मतभेद हो सकता है, जिससे प्रयोगशालाओं के बीच डेटा की तुलना मुश्किल हो सकती है ।

संदर्भ परीक्षण के दौरान विषयों के दो समूहों की वातानुकूलित ठंड प्रतिक्रिया को अन्य उपायों, अर्थात् औसत गतिविधि (यानी,मोशन इंडेक्स), कुल ठंड समय और प्रति एपिसोड ठंड समय के विश्लेषण केमाध्यम से आगे का पता लगाया गया था। इन चर(तालिका 1)में अंतर का परीक्षण करने के लिए एक तरह से ANOVA का उपयोग किया गया था। प्रशिक्षण के 6 सप्ताह बाद परीक्षण किए गए विषयों की गतिविधि प्रशिक्षण सत्र(चित्रा 3 ए)के बाद 48 घंटे परीक्षण किए गए जानवरों की तुलना में काफी कम थी। तदनुसार, प्रशिक्षण के तुरंत बाद परीक्षण जानवरों की कुल ठंड समय 6 सप्ताह के बाद परीक्षण जानवरों की तुलना में काफी कम था(चित्रा 3B)। अंत में, प्रत्येक ठंड प्रकरण की औसत अवधि के एक विश्लेषण से संकेत मिलता है कि प्रशिक्षण के बाद 6 सप्ताह का परीक्षण किया गया परीक्षण किया गया है, जो प्रशिक्षण के बाद 48 घंटे परीक्षण किए गए जानवरों की तुलना में लंबे समय तक ठंड एपिसोड प्रदर्शित करताहै (चित्रा 3C)। कुल मिलाकर, इन निष्कर्षों के प्रभाव इनक्यूबेशन एक डर का संकेत मिलता है ।

Figure 3
चित्रा 3: चूहों की ठंड प्रतिक्रिया पर एक विस्तारित cued डर कंडीशनिंग प्रोटोकॉल के प्रभाव।
डेटा को ठंड प्रतिक्रिया के मतलब (सलाखों) और एसईएम (त्रुटि सलाखों) के रूप में दिखाया गया है। (क)संदर्भ परीक्षण के दौरान विषयों के प्रत्येक समूह (प्रशिक्षण के बाद 48 घंटे परीक्षण; प्रशिक्षण के बाद 6 सप्ताह परीक्षण) की गतिविधि (यानी मोशन इंडेक्स) दिखाती है; * = 6 सप्ताहसे अलग . (ख)संदर्भ परीक्षण के दौरान विषयों के प्रत्येक समूह के औसत कुल ठंड समय (सेकंड में) से पता चलता है; * = 6 सप्ताहसे अलग . (ग)संदर्भ परीक्षण के दौरान विषयों के प्रत्येक समूह के लिए प्रत्येक फ्रीजिंग एपिसोड (सेकंड में) की औसत अवधि दिखाता है; * = केवल 6 सप्ताहसे अलग . कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

क्यू टेस्ट सत्र के दौरान प्रदर्शन की एक और परीक्षा बेसलाइन अवधि (बीएल प्रशिक्षण और बीएल क्यू टेस्ट) के दौरान ठंड के (ए) प्रतिशत के विश्लेषण के माध्यम से आयोजित की गई थी और पूरे 10 मिनट क्यू परीक्षण (दस 10 एस टोन प्रस्तुतियों और 50 एस - चित्रा 4Aके दस आईटीआई) के दौरान, (ख) 50 एस इंटरट्रायल अंतराल (आईटीआई; यानी, प्रशिक्षण और क्यू टेस्ट सत्रों(चित्रा 4 बी)दोनों के लिए क्यू (टोन) की 10 प्रस्तुतियों के दौरान विशेष रूप से औसत ठंड समय (20) औसत ठंड समय (सेकंड में) नो-टोन पीरियड्स केवल - चित्रा 4C)। इन आश्रित उपायों में से प्रत्येक का विश्लेषण करने के लिए एक मिश्रित ANOVA का उपयोग किया गया था, चरणों (बीएल प्रशिक्षण, बीएल क्यू टेस्ट, और क्यू टेस्ट) को अंडर-सब्जेक्ट्स फैक्टर और ग्रुप्स (48 एच और 6 सप्ताह) के रूप में मानाजाताथा। जैसा कि चित्रा 4Aपर दिखाया गया है, प्रशिक्षण के 6 सप्ताह बाद परीक्षण किए गए चूहों के समूह ने क्यू टेस्ट सत्र (बीएल क्यू टेस्ट; सत्र के पहले 3 मिनट) और 10 मिनट क्यू टेस्ट के दौरान, बीएल प्रशिक्षण (यानी, किसी भी जोखिम टन और झटके से पहले) की तुलना में ठंड के प्रतिशत में काफी वृद्धि की। बीएल प्रशिक्षण और बीएल क्यू के बीच कोई अनुरूप अंतर 48 घंटे(पी एंड जीटी; .05) के बाद परीक्षण चूहों के समूह के लिए नहीं देखा गया था। चूहों के दोनों समूहों के लिए, 10 मिनट क्यू परीक्षण के दौरान ठंड का प्रतिशत उसी सत्र (बीएल क्यू टेस्ट) की इसी आधारभूत अवधि के दौरान की तुलना में अधिक था, जो एक पुनर्प्राप्ति प्रभाव का सुझाव देता है । विभिन्न अवधियों में ठंड के प्रतिशत पर चूहों के समूहों के बीच कोई अंतर नहीं देखा गया(पीएस और जीटी; .05) ।

चित्रा 4B विशेष रूप से प्रशिक्षण (टोन-शॉक पेयरिंग) और क्यू टेस्ट (केवल टोन प्रस्तुतियों) में 10 एस टोन प्रस्तुतियों के दौरान मतलब ठंड समय (सेकंड में) की तुलना दिखाता है। प्रशिक्षण के 6 सप्ताह बाद केवल चूहों का परीक्षण क्यू के दौरान समय ठंड की मात्रा में काफी वृद्धि हुई।

अंत में, जैसा कि चित्रा 4 सीपर दिखाया गया है, प्रशिक्षण के बाद केवल चूहों के समूह ने प्रशिक्षण के बाद 48 घंटे का परीक्षण किया, जिससे प्रशिक्षण सत्र से क्यू टेस्ट तक आईटीआई के दौरान ठंड के समय में काफी कमी आई। आईटीआई के दौरान ठंड के समय में कोई अंतर नहीं चूहों के दो समूहों(पीएस और जीटी;05) में देखा गया ।

Figure 4
चित्रा 4: क्यू परीक्षण के दौरान ठंड प्रतिक्रिया पर एक विस्तारित cued डर कंडीशनिंग प्रोटोकॉल के प्रभाव।
डेटा को ठंड प्रतिक्रिया के मतलब (सलाखों) और एसईएम (त्रुटि सलाखों) के रूप में दिखाया गया है। (ए)प्रशिक्षण सत्र के पहले 3 मिनट (बीएल, बेसलाइन), क्यू टेस्ट सत्र (बीएल क्यू) के पहले 3 मिनट और क्यू टेस्ट (क्यू टेस्ट) के 10 मिनट के दौरान विषयों के प्रत्येक समूह (प्रशिक्षण के बाद ४८ घंटे का परीक्षण; प्रशिक्षण के बाद 6 सप्ताह परीक्षण) की ठंड का प्रतिशत दिखाता है; एक = 48 घंटे के बाद क्यू परीक्षण से अलग(मतलब डिफब्लीट्रेनिंग-Cue48h = 32.84; एसई = 10.25; पी एंड लेफ्टिनेंट; .05; कोहेन की डी = 1.52); b = बीएल क्यू टेस्ट से अलग(मतलब डिफBLCue-BL6Weeks = 33.98; एसई = 8.36; पी एंड लेफ्टिनेंट; .05; कोहेन डी = 1.59) और क्यू टेस्ट(मतलब डिफक्यू-BL6Weeks = 55.86; एसई = 10.25; पी एंड लेफ्टिनेंट; .05; कोहेन की डी = 2.47); c = 48 घंटे के बाद क्यू टेस्ट से अलग(मतलब डिफBLCue-Cue48h = 18.99; एसई = 5.17; पी एंड लेफ्टिनेंट; .05; कोहेन की डी = .67); घ = 6 सप्ताह के बाद क्यू टेस्ट से अलग(मतलब डिफBLCue-Cue6Weeks = 21.87; एसई = 5.17; पी एंड लेफ्टिनेंट; .05; कोहेन डी = .88) । (ख)प्रशिक्षण और क्यू टेस्ट के दौरान विषयों के प्रत्येक समूह के क्यू (टोन) के दौरान औसत ठंड समय (सेकंड में) से पता चलता है; * = क्यू टेस्ट की परीक्षण अवधि के दौरान 6 सप्ताह से अलग(मतलब डिफप्रशिक्षण-Cue6Weeks = -3.14; एसई = 1.37; पी एंड लेफ्टिनेंट; .05; कोहेन डी = 1.64) । (ग)प्रशिक्षण सत्र (10 टोन-शॉक पेयरिंग) और क्यू टेस्ट (10 टोन-केवल प्रस्तुतियों) के इंटरट्रायल अंतराल (आईटीआई) के दौरान औसत ठंड समय (सेकंड में) चूहों के दो समूहों (48 एच और 6 सप्ताह) से पता चलता है; = प्रशिक्षण के बाद 48 घंटे परीक्षण चूहों के समूह के लिए प्रशिक्षण से अलग(मतलब डिफप्रशिक्षण-Cue48h = 506.16; एसई = 95.08; पी एंड लेफ्टिनेंट; .001; कोहेन डी = 2.48) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

वर्तमान विस्तारित भय कंडीशनिंग प्रोटोकॉल कम (48 घंटे) और दीर्घकालिक अवधि (6 सप्ताह) में भावनात्मक स्मृति का आकलन करने के लिए एक कुशल और वैध दृष्टिकोण है। इस प्रकार, प्रोटोकॉल चूहों में घटनाओं के इनक्यूबेशन ओवरट्रेनिंग और डर का अध्ययन करने की अनुमति देता है। इस प्रोटोकॉल के विभिन्न फायदों में निम्नलिखित हैं। यह दो प्रकार के स्मृति परीक्षण प्रदान करता है, अर्थात् संदर्भ और क्यू, जो संदर्भ और क्यू जोड़तोड़ में दो देरी (48 एच और 6 सप्ताह) के अंतर प्रभाव की पहचान करने की अनुमति देता है। दूसरा, कार्य एक एकल 28 मिनट प्रशिक्षण सत्र है, जो बदले में दीर्घकालिक प्रभाव है कि कई हफ्तों तक विस्तार का उत्पादन जरूरत पर जोर देता है । यह लाभ उल्लेखनीय है, यह देखते हुए कि विस्तारित डर कंडीशनिंग के कुछ संस्करणों को प्रशिक्षण 11 के 10 सत्रों में कम से१००झटके की जरूरत है । तीसरा, प्रोटोकॉल कई माप विकल्प प्रदान करता है, जिनकी गणना स्वचालित रूप से की जाती है। इसके अलावा, बढ़ते औषधीय, शारीरिक और शारीरिक साक्ष्य हैं जो भावनात्मक स्मृति घटना15,,16का आकलन करने के लिए इस प्रतिमान की वैधता का समर्थन करते हैं।

संक्षिप्त प्रशिक्षण सत्रों (यानी, कुछ परीक्षणों) के साथ अन्य डर-कंडीशनिंग प्रतिमानों की तुलना में, विस्तारित प्रोटोकॉल जिनके परिणामस्वरूप ओवरट्रेनिंग प्रभावों पर कम ध्यान दिया गया है। हालांकि, विस्तारित भय-कंडीशनिंग कार्य डर इनक्यूबेशन के अंतर्निहित व्यवहार और न्यूरोबायोलॉजिकल प्रक्रियाओं की समझ के लिए महत्वपूर्ण रहे हैं, जिसमें अन्य मनोवैज्ञानिक घटनाओं (जैसे, विलंबित शुरुआत के बाद-दर्दनाक तनाव विकार)11,12,,13के साथ इसका संबंध शामिल है।, वर्तमान भय कंडीशनिंग प्रोटोकॉल मज़बूती से इनक्यूबेशन डर पैदा करता है । यह प्रशिक्षण के बाद 48 घंटे परीक्षण किए गए जानवरों की तुलना में प्रशिक्षण के 6 सप्ताह बाद मूल्यांकन किए गए जानवरों में उच्च ठंड समय और कम गति अनुक्रमित के साथ प्रदर्शित किया जाता है। इसके अलावा, इस प्रभाव को प्रत्येक प्रकार के परीक्षण में अंतर से देखा जा सकता है; विशेष रूप से, प्रशिक्षण के बाद क्यू प्रस्तुतियों के दौरान प्रशिक्षण और ठंड में वृद्धि के बाद 6 सप्ताह के संदर्भ परीक्षण के दौरान अब ठंड एपिसोड। इस उत्तरार्द्ध प्रभाव से संबंधित (यानी, प्रशिक्षण के 6 सप्ताह बाद क्यू प्रस्तुतियों के दौरान ठंड में वृद्धि), ऐसा लगता है कि प्रयोगात्मक स्थिति (यानी, नए संदर्भ) की नवीनता को खारिज किया जा सकता है, क्योंकि उसी सत्र के दौरान बेसलाइन फ्रीजिंग का स्तर बाद की क्यू प्रस्तुतियों के दौरान की तुलना में काफी कम था।

हालांकि डर सीखने की ओर एक प्रवृत्ति दोनों समूहों में स्पष्ट था (यानी, 3 मिनट बेसलाइन और प्रशिक्षण के बीच मतभेद), जानवरों है कि ४८ एच (संदर्भ) और ७२ एच (क्यू) के बाद परीक्षण किया गया दोनों परीक्षणों के दौरान ठंड के स्तर में महत्वपूर्ण अंतर प्रदर्शन नहीं किया । इसे प्रोटोकॉल की सीमा माना जा सकता है, जो 48 एच समूह (चित्रा 2Cदेखें) में उच्च व्यवहार परिवर्तनशीलता का परिणाम लगता है। परिवर्तनशीलता को कम करने और प्रक्रिया में सुधार करने के लिए एक पद्धतिगत परिवर्तन लागू किया जा सकता है, प्रशिक्षण के बाद संदर्भ और क्यू परीक्षण 24 एच को पूरा करना है, जो कुछ डर कंडीशनिंग प्रक्रियाओं में आम है।

वर्तमान प्रोटोकॉल को नैदानिक अनुसंधान23में लागू किया जा सकता है । मजबूत स्मृति ट्रेस और इनक्यूबेशन प्रभाव जो इसके कार्यान्वयन से परिणाम देते हैं, मनोवैज्ञानिक और मनोरोग विकृतियों के उपचार के लिए नियमित रूप से उपयोग की जाने वाली दवाओं के प्रभावों का परीक्षण करने की अनुमति दे सकते हैं (उदाहरण के लिए, एंक्सियोलिटिक या मूड नियामक उपचार24)भावनात्मक स्मृति घटनाओं (जैसे, डर विलुप्त होने)पर 25,26,,27।, इस प्रकार प्रोटोकॉल विभिन्न समय फ्रेम में स्मृति ट्रेस पर दवाओं के प्रभाव को मापने की अनुमति दे सकता है, जिसमें न्यूरोट्रांसमीटर और स्मृति रखरखाव28, 29,29से संबंधित अणुओं जैसे जैविक सहसंबंध शामिल हैं। प्रोटोकॉल एक अनुवाद परिप्रेक्ष्य के साथ अनुसंधान के लिए भी प्रासंगिकता का हो सकता है, जिसने प्रस्ताव किया है कि भय प्रतिमान व्यवहार चिकित्सा30 के पूर्व नैदानिक मॉडलों का परीक्षण करने के लिए उपयोगी हो सकते हैं और21,,22प्रजातियों में डर पर तुलनात्मक अध्ययन। अंत में, न्यूरोबायोलॉजिकल दृष्टिकोण से, वर्तमान प्रोटोकॉल मस्तिष्क तंत्र, संरचनाओं, नेटवर्क या तंत्रिका कलाकारों के बीच संचार का अध्ययन करने के लिए एक मजबूत मॉडल है, जो दीर्घकालिक अधिग्रहण, भावनात्मक स्मृति के समेकन और भंडारण, या विकास32के दौरान इनक्यूबेशन के प्रभाव में शामिल है।

प्रोटोकॉल के कुछ अन्य पहलुओं पर चर्चा के लायक हैं । पूरे प्रयोग में खाद्य अभाव का प्रयोग किया गया । यह निर्णय इसलिए अपनाया गया था क्योंकि खाद्य पुरस्कारों (जैसे, ऑपरेंट या इंस्ट्रूमेंटल तकनीक)33,34,,35 पर आधारित अन्य व्यवहार परीक्षणों को न्यूनतम परिवर्तनों के साथ एकीकृत किया जा सकता है, जिससे वर्तमान प्रोटोकॉल अधिक बहुमुखी तकनीक बन जाती है।, उदाहरण के लिए, हमने इस प्रोटोकॉल को व्हील-आधारित व्यायाम प्रोटोकॉल और टी-भूलभुलैया स्मृति कार्यों के साथ सफलतापूर्वक एकीकृत किया है। एक अन्य पहलू इस प्रोटोकॉल में लागू समूह आकार (एन = 6) से संबंधित है। हालांकि यह एक अपेक्षाकृत छोटा नमूना था, और बड़े नमूनों की निश्चित रूप से सिफारिश की जाती है, इनक्यूबेशन प्रभाव का आकार इस सीमा के लिए क्षतिपूर्ति करता है (तालिका 1देखें)। यह इस प्रोटोकॉल का एक लाभ माना जा सकता है, विशेष रूप से पशु समितियों की सिफारिशों के बारे में कमी सिद्धांत के आधार पर । प्रोटोकॉल की एक सीमा यह थी कि फुटशॉक और डर के समय-पाठ्यक्रम के लिए न्यूनतम या कोई जोखिम नहीं था इनक्यूबेशन मूल्यांकन नहीं किया गया था। पहले की शर्तों के साथ एक अतिरिक्त नियंत्रण समूह प्रायोगिक डिजाइन की कठोरता में वृद्धि कर सकता है ।

इस प्रोटोकॉल के सर्वोत्तम कार्यान्वयन और परिणामों के लिए अंतिम सिफारिशों में प्रयोगात्मक कक्ष की सही सफाई, विशेष रूप से ग्रिड फ्लोर, प्रत्येक विषय (उदाहरण के लिए, मल और मूत्र अक्सर कक्ष के विभिन्न क्षेत्रों में सदमे की तीव्रता की विश्वसनीयता को कम करने) और ठंड का पता लगाने प्रणाली अंशांकन (गति सीमा की उचित स्थापना और न्यूनतम ठंड अवधि के आधार पर ठंड के उपायों की विश्वसनीयता) प्रशिक्षण से पहले सदमे की तीव्रता का अंशांकन शामिल है।

इस प्रोटोकॉल का परीक्षण चूहों या अन्य कृंतकों (जैसे, चूहों या मंगोलियाई जर्बिल्स) के अन्य उपभेदों के साथ किया जा सकता है, जो अनुप्रयोगों के दायरे को व्यापक बनाता है। उन मामलों में, सदमे की तीव्रता, और गति और अवधि थ्रेसहोल्ड को समायोजित करना महत्वपूर्ण है। चूहों के साथ डर कंडीशनिंग प्रोटोकॉल में उपयोग की जाने वाली सदमे की तीव्रता आमतौर पर 0.4 एमए से 1.5 एमए तक होती है, जिसमें 0.75 एमए अक्सर प्रभावी39तीव्रता16,36, 37,,38, 38 और 1.5 एमए की रिपोर्ट की गई थी।37,, मंगोलियाई जर्बिल एक कृंतक मॉडल है जो डर कंडीशनिंग अनुसंधान के लिए कम बार चुना जाता है; हालांकि, मंगोलियाई जर्बिल्स सफलतापूर्वक स्तनधारियों40में सर्कैडियन लय मॉडल करने के लिए इस्तेमाल किया गया है . तदनुसार, वर्तमान प्रोटोकॉल को सर्कैडियन लय और भावनात्मक स्मृति के बीच संभावित संबंधों का अध्ययन करने के लिए लागू किया जा सकता है, दोनों अवसाद, चिंता या मूड41,,42के परिवर्तन जैसी विकृतियों में प्रासंगिक हैं। जर्बिल्स के मामले में, इसके लिए एक प्रभावी सदमे तीव्रता सीमा और अनुरूप एवरसिव कंडीशनिंग प्रोटोकॉल 1.0 और 4.0 एमए43, 44,,45, 46के46बीच है।44, अंत में, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि47चुनी गई प्रजातियों के आधार पर गति और अवधि की सीमाओं को समायोजित किया जाना चाहिए। ये थ्रेसहोल्ड आंदोलन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर पर स्थापित सीमाएं हैं, जिनके ऊपर पशु व्यवहार आंदोलन के रूप में पंजीकृत है और जिसके नीचे सॉफ्टवेयर ठंड दर्ज करता है। चूहों और जर्बिल्स के साथ अपरिवर्तनीय कंडीशनिंग अध्ययनों में, प्रभावी गति और अवधि थ्रेसहोल्ड क्रमशः 30, 35) 25 और30,एफपीएस (यानी, न्यूनतम 1 एस गतिहीनता) की रिपोर्ट की गईहै।

अपरिवर्तनीय उत्तेजना (फुटशॉक) का पर्याप्त नियंत्रण सुनिश्चित करने के लिए, ग्रिड मंजिल के सभी क्षेत्रों को एक ही तीव्रता प्रदान करनी चाहिए। यह सत्यापित करने के लिए कि यह सुसंगत है ग्रिड मंजिल के तीन क्षेत्रों में सदमे की तीव्रता को जांचना करने की सिफारिश की है । यह जानवरों को कम तीव्रता उत्सर्जित करने वाले बॉक्स में एक जगह पर जाकर झटके के संपर्क को कम करने के लिए सीखने से रोकता है। यदि अंशांकन से पता चलता है कि धातु ग्रिड सभी क्षेत्रों में समान तीव्रता नहीं दे रहा है, तो ग्रिड को फर्श से हटा दें, छड़ को साफ करें, और ग्रिड को चैंबर में बदल दें। ग्रिड मंजिल को ग्रिड मंजिल तक अपरिवर्तनीय उत्तेजना डिवाइस से सबसे अच्छा इलेक्ट्रिक ट्रांसमिशन सुनिश्चित करने के लिए कक्ष में ठीक से डाला जाना चाहिए।

फ्रीजिंग डिटेक्शन सिस्टम कैमरे का फोकस और अपर्चर निर्माता द्वारा कैलिब्रेट किया जाता है। हालांकि, यदि अतिरिक्त अंशांकन की आवश्यकता है, तो फोकस रिंग पर सेटक्रू को ढीला करें, तब तक समायोजित करें जब तक कि एक स्पष्ट छवि प्राप्त न हो जाए और फिर फोकस रिंग पर सेटस्क्रू को कस दें। निर्माता अधिकतम खुली स्थिति में लेंस खोलने को लॉक करने की सिफारिश करता है। इस सेटिंग को प्राप्त करने के लिए, सुनिश्चित करें कि उद्घाटन अंगूठी का सफेद बिंदु लेंस बैरल पर 1.4 नंबर के साथ गठबंधन किया गया है। निर्माता के मैनुअल से परामर्श करने की सिफारिश की जाती है। ध्यान दें कि यदि कैमरे का ध्यान समायोजित किया गया था, तो संबंधित सॉफ्टवेयर का उपयोग करके कैमरे का अंशांकन भी होना चाहिए। कैमरा अंशांकन चमक, लाभ, और शटर के समायोजन की आवश्यकता है। कैमरा अंशांकन प्रक्रिया पर सटीक निर्देशों के लिए निर्माता के मैनुअल से परामर्श करने की सिफारिश की जाती है।

अंत में, प्रोटोकॉल लघु और दीर्घकालिक अवधि में भावनात्मक स्मृति का परीक्षण करने की अनुमति देता है और इनक्यूबेशन दीर्घकालिक भय पैदा करता है। यह डर इनक्यूबेशन प्रभाव एक एकल सत्र ओवरट्रेनिंग के माध्यम से उत्पन्न होता है, जो संदर्भ और क्यू परीक्षणों में 6 सप्ताह बाद प्रभाव दिखाता है। यह एक मजबूत भावनात्मक स्मृति ट्रेस पता चलता है। वर्तमान प्रोटोकॉल चूहों में भावनात्मक स्मृति के घटकों का पता लगाने के लिए एक कुशल और वैध दृष्टिकोण है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस शोध के लिए वित्तीय सहायता Fundación Universitaria कोनराड लोरेंज द्वारा प्रदान की गई थी - अनुदान संख्या 9IN15151। लेखकों कोनराड Lorenz विश्वविद्यालय में संचार विभाग रिकॉर्डिंग और वीडियो संपादन के साथ उनकी मदद के लिए शुक्रिया अदा करना चाहते हैं, विशेष रूप से नतालिया रिवेरा और Andrés Serrano (उत्पादकों) में । इसके अलावा, निकोल Pfaller-Sadovsky और लूसिया मदीना पांडुलिपि पर अपनी टिप्पणी के लिए, और जोहाना Barrero, कॉर्पोरियन Universitaria Iberoamericana में डीन, संस्थागत सहयोग के लिए । लेखकों के हितों का कोई टकराव नहीं है ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetic acid (ethanoic acid) https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/acetic_acid
Aversive Stimulation Current Package MED Associates Inc ENV-420 https://www.med-associates.com/product-category/video-fear-packages-for-rat/
Contextual test protocol.pro http://doi.org/10.17605/OSF.IO/4NKFQ
Cue test protocol.pro http://doi.org/10.17605/OSF.IO/4NKFQ
Curved Wall Insert MED Associates Inc VFC-008-CWI https://www.med-associates.com/product-category/video-fear-packages-for-rat/
Data processing.zip http://doi.org/10.17605/OSF.IO/4NKFQ
NIR/White Light Control Box MED Associates Inc NIR-100
Quick Change Floor/Pan Unit for Mouse MED Associates Inc ENV-005FPU-M https://www.med-associates.com/product-category/video-fear-packages-for-rat/
Small Tabletop Cabinet and Power Supply MED Associates Inc SG-6080D https://www.med-associates.com/product-category/video-fear-packages-for-rat/
Standalone Aversive Stimulator/Scrambler (115 V / 60 Hz) MED Associates Inc ENV-414S https://www.med-associates.com/product-category/video-fear-packages-for-rat/
Standard Fear Conditioning Chamber MED Associates Inc VFC-008 https://www.med-associates.com/product-category/video-fear-packages-for-rat/
Training protocol VFC.pro http://doi.org/10.17605/OSF.IO/4NKFQ
Video Fear Conditioning Package for Rat MED Associates Inc MED-VFC-SCT-R https://www.med-associates.com/product-category/video-fear-packages-for-rat/

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चूहों के लिए एक विस्तारित डर कंडीशनिंग प्रोटोकॉल का उपयोग कर इनक्यूबेशन डर
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Acevedo-Triana, C., Rico, J. L., Ortega, L. A., Cardenas, M. A. N., Cardenas, F. P., Rojas, M. J., Forigua-Vargas, J. C., Cifuentes, J., Hurtado-Parrado, C. Fear Incubation Using an Extended Fear-Conditioning Protocol for Rats. J. Vis. Exp. (162), e60537, doi:10.3791/60537 (2020).

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