मानव रक्त-मस्तिष्क बाधा चुनिंदा मस्तिष्क में हाइड्रोफिलिक अणुओं और रोगजनकों के प्रवेश को रोकती है। दिमागी प्रतिभा और पश्चात प्रलाप सहित कई विकृतियां, रक्त-मस्तिष्क बाधा की बढ़ी हुई सामर्थ्य से जुड़ी हुई हैं। यहां, हम माइक्रोबियल ट्रैवर्सल द्वारा बाधा पारगम्यता का परीक्षण करने के लिए एक एंडोथेलियल सेल संस्कृति मॉडल का वर्णन करते हैं।
मस्तिष्क के चयापचय की रक्षा और विनियमित करने के लिए मानव रक्त-मस्तिष्क बाधा (बीबीबी) को जैव अणुओं के लिए बहुत कम सामर्थ्य की विशेषता है। बीबीबी मुख्य रूप से एंडोथेलियल कोशिकाओं से बनता है जो कोलेजन चतुर्थ और फाइब्रोनेक्टिन से भरपूर तहखाने झिल्ली में एम्बेडेड होते हैं। कई विकृतियां बीबीबी की शिथिलता से होती हैं, जिसके बाद माइक्रोबियल ट्रैवर्सल होते हैं, जिससे दिमागी खुजली जैसी बीमारियां होती हैं। बीबीबी की सामर्थ्य पर विभिन्न दवाओं और एनेस्थेटिक्स सहित कई मापदंडों के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए हमने मानव मस्तिष्क माइक्रोवेस्कुलर एंडोथेलियल कोशिकाओं के साथ बीबीबी की नकल करने वाला एक उपन्यास मानव कोशिका संस्कृति मॉडल स्थापित किया। एंडोथेलियल कोशिकाओं कोकोलेजन चतुर्थ और फाइब्रोनेक्टिन-लेपित फिल्टर इकाइयों पर संगम तक उगाया जाता है और फिर ब्याज के विभिन्न यौगिकों के साथ इलाज किया जा सकता है। एक माइक्रोबियल ट्रैवर्सल प्रदर्शित करने के लिए, एंडोथेलियल कोशिकाओं की एपिकल सतह के साथ ऊपरी कक्ष बैक्टीरिया के साथ टीका लगाया जाता है। एक ऊष्मायन अवधि के बाद, निचले कक्ष के नमूने आगर प्लेटों पर चढ़ाया जाता है और प्राप्त कॉलोनियों की गणना की जाती है, जिससे कॉलोनियों की संख्या बीबीबी की स्थायित्व के साथ सहसंबंधित होती है। बीबीबी में योगदान देने वाली एंडोथेलियल कोशिकाओं के बुनियादी सेलुलर तंत्र को स्पष्ट करने के लिए इस प्रयोगात्मक सेट-अप में एंडोजेनस सेलुलर कारकों का विश्लेषण किया जा सकता है। इसके अलावा, यह प्लेटफ़ॉर्म यौगिकों के लिए स्क्रीन करने की अनुमति देता है जो एंडोथेलियल कोशिकाओं की स्थायित्व को प्रभावित कर सकता है। अंत में, बैक्टीरियल ट्रैवर्सल का अध्ययन किया जा सकता है और दिमागी खुजली जैसी विभिन्न विकृतियों से जोड़ा जा सकता है। मॉडल का विस्तार करना और बीबीबी के माध्यम से बैक्टीरिया के रास्तों का विश्लेषण करना संभव हो सकता है। इस लेख में, हम बीबीबी की सामर्थ्य की जांच करने के लिए वर्णित विधि का एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं।
मानव बीबीबी मस्तिष्क के ऊतकों की एक अनूठी सीमा है, जो मस्तिष्क को रक्त से अलग करती है। यह बड़े और हाइड्रोफिलिक अणुओं के पारित होने को कड़ाई से नियंत्रित करता है, पैरासेलुलर प्रसार को अवरुद्ध करता है, और मस्तिष्क होमोस्टोसिस को बनाए रखता है। यह मस्तिष्क को प्लाज्मा के उतार-चढ़ाव, विषाक्त पदार्थों, रोगाणुओं से भी बचाता है, और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) प्रतिरक्षा के हिस्से के रूप में भड़काऊ कोशिकाओं को गाइड करता है। 1 सदी पहले अपनी खोजकेबाद से, बीबीबी की संरचना और कार्य को समझने के लिए कई अध्ययन किए गए हैं। कोशिकाओं, प्रोटीन, और मस्तिष्क और रक्त की मांग से संकेतों की जटिल बातचीत अभी भी आगे की जांच और मॉडल ।
मानव बीबीबी तीन कोशिका प्रकारों से बना है: मस्तिष्क माइक्रोवैस्कुलर एंडोथेलियल कोशिकाएं (बीएमईसी), पेरिसाइट्स, और एस्ट्रोसाइट्स2,3। बीएमईसी शरीर में एंडोथेलियल कोशिकाओं के बहुमत से अलग है कि उनके पास उच्च संख्या में तंग जंक्शन होते हैं और जंक्शनों4,कम पिनोसाइटोटिक गतिविधि2,5और पैरासेलुलर प्रसार को अवरुद्ध करने के लिए एक निरंतर तहखाने झिल्ली6,7 का पालन करता है। छोटे लिपोफिलिक अणु अपनी एकाग्रता ढाल के बाद बीबीबी को फैला सकते हैं और पारित कर सकते हैं; बड़ा और हाइड्रोफिलिक अणुओं में प्रवेश या केवल ध्रुवीकृत व्यक्त चयनात्मक परिवहन सिस्टम8के माध्यम से मस्तिष्क छोड़ . इस नियमन के परिणामस्वरूप 1,500-2,000 का उच्च ट्रांसेंडोथेलियल इलेक्ट्रिकल रेजिस्टेंस (टीईईआर) होता हैω·सेमी2 जो विपरीत पारगम्यता9,10से संबंधित है। हालांकि BMECs एक तंग बाधा का निर्माण, वे स्थानीय और परिधीय संकेतों11, 12पर प्रतिक्रिया कर सकतेहैं। बीएमईसी और एस्ट्रोसाइट्स13के बीच घनिष्ठ बातचीत है ; एस्ट्रोसाइट एंड फीट जहाजों के चारों ओर एक परत का निर्माण और टाइट जंक्शनों13,14के गठन प्रेरित . वे विभिन्न कारकों के साथ बीबीबी परिपक्वता में शामिल हैं, जिसमें विकासकारक-15,16को बदलना शामिल है। इसके अलावा, पेरिकेट्स एंजियोजेनेसिस17 के नियमन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं और सेलुलर विभेदन18 (चित्रा 1)में एंडोथेलियम के एपोप्टोसिस को रोकते हैं। वे तहखाने झिल्ली में एम्बेडेड हैं और पोत की दीवार19की संरचनात्मक स्थिरता प्रदान करते हैं ।
चित्रा 1: रक्त-मस्तिष्क बाधा की योजनाबद्ध संरचना। मानव बीबीबी की अनूठी संरचना तीन अलग-अलग सेल प्रकारों से बनी है। माइक्रोवेसल ल्यूमेन एंडोथेलियल कोशिकाओं से घिरा हुआ है, जो तंग जंक्शनों में समृद्ध होते हैं, और फेनेस्ट्रेटेड नहीं होते हैं। वे पेरिसाइट्स की तरह तहखाने झिल्ली में एम्बेडेड होते हैं। ये कोशिकाएं पोत की दीवार की संरचनात्मक स्थिरता के लिए महत्वपूर्ण हैं और एस्ट्रोसाइट्स के बगल में बीबीबी के विकास में भूमिका निभाती हैं। उनके अंत पैर पोत के चारों ओर एक करीबी परत का निर्माण और तंग जंक्शनों के निर्माण का समर्थन करते हैं । बीबीबी के सभी घटक शारीरिक कार्यक्षमता के लिए महत्वपूर्ण हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
कई अलग-अलग विकृतियां बीबीबी (जैसे, सेप्टिक एंसेफेलोपैथी) के पतन से संबंधित हैं। प्रभावित रोगियों में सेरेब्रोस्पाइनल द्रव20में प्रोटीन का स्तर बढ़ गया है और प्रभावित कृंतकों में मस्तिष्क परेंचिमा चिह्नित कोलॉयडल आयरन ऑक्साइड और अमीनो एसिड21,22के बढ़ते हुए दिखाता है । ये परिणाम बीबीबी की बढ़ती सामर्थ्य की ओर इशारा करते हैं जो बीएमईसी21 और एंडोथेलियल एक्टिवेशन23में वृद्धि के साथ होता है । एक बदल बीबीबी से संबंधित एक और संबद्ध विकृति दिमागी भूमिका, एक चिकित्सा आपात स्थिति और मस्तिष्क एडीमा के साथ एक जटिल सूजन है जो न्यूरोनल सेल मौत का कारण बन सकती है। परिसंचारी बैक्टीरिया की प्राथमिक प्रवेश स्थल को माइक्रोवेसल्स24माना जाता है ; हालांकि बीबीबी बैक्टीरिया के प्रवेश को रोकता है। बीबीबी की स्थायित्व हमेशा प्रयोगात्मक हेमेटोजेनस दिमागी बूटाइटिस25 में वृद्धि से जुड़ा नहीं होता है और तंत्र बहुकारक हो सकता है। पश्चात प्रलाप (पीओडी)26 के साथ सेप्सिस का संयोग और प्रीऑपरेटिव संक्रमण27,28 के साथ सहयोग बीबीबी मॉडल की आवश्यकता को इंगित करता है जो बैक्टीरिया के सीधे संपर्क को बैक्टीरियल रोगजनकता में बेहतर समझ प्राप्त करने में सक्षम बनाता है।
बीबीबी के माध्यम से माइक्रोबियल ट्रैवर्सल को समझने और मात्रा में कई अंतराल हैं। इसलिए, हमने एक मॉडल विकसित किया है जो बैक्टीरियल ट्रैवर्सल और बीबीबी की पारगम्यता पर प्रभावों के बीच सीधा संबंध के साथ विभिन्न कारकों और स्थितियों के सुविधाजनक परीक्षण की अनुमति देता है। पिछला काम पैरासेलुलर पारगम्यता पर केंद्रित था और इसमें टीईआर माप और ट्रेसर फ्लक्स शामिल थे। इसके अलावा, मैक्रोमॉलिक्यूल परिवहन का विश्लेषण संयुग्मित अणुओं या एंटीबॉडी द्वारा किया गया था, जिससे एस्ट्रोसाइट्स और पेरिसाइट्स के साथ केवल एंडोथेलियल कोशिकाओं या संयोजनों का उपयोग करने वाले विभिन्न मॉडल विकसित किए गए थे। नियमित आधार पर मानव ऊतक प्राप्त करने में कठिनाई के कारण, कई पशु आधारित मॉडलका उपयोग किया जाता है। गोजातीय और पोर्सिन मूल की मस्तिष्क एंडोथेलियल कोशिकाएं एक उच्च टीईआर के साथ तंग मोनोलेयर बनाती हैं जो अच्छी तरह से आकार की एपिकल-बेसल ध्रुवता बनाती हैं और बीबीबी के माध्यम से छोटे अणु परिवहन की जांच के लिए अनुकूल होती हैं। प्रोटीन उनके मानव होमोलॉग29,30से अनुक्रम में भिन्न होते हैं, जिससे चिकित्सीय एंटीबॉडी की जांच मुश्किल हो जाती है। इस कारण से, मूत्र या मानव संस्कृति मॉडल बेहतर हो सकते हैं। नमूना स्रोतों के रूप में माउस या चूहों को अच्छी तरह से विशेषता वाली प्रजातियों से प्राप्त होने का लाभ होता है लेकिन अध्ययन उद्देश्यों के लिए कुछ कोशिकाओं की उपज होती है। इसे अमर माउस ब्रेन एंडोथेलियोमा (अंत) सेल लाइनों bEND.3, bEND.5 या CEND31,32,33के उपयोग से दरकिनार किया जा सकता है।
मानव ऊतक से प्राथमिक सुसंस्कृत कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए और एक नियमित आधार पर संभालकरने के लिए मुश्किल कर रहे हैं । इसलिए, मानव बीबीबी की जांच करने वाले अनुसंधान में उपयोग किए जाने वाले अधिकांश मानव सेलुलर मॉडल एंडोथेलियल सेल लाइनों को अमर कर रहे हैं। एक प्रकाशित सेल लाइन मानव मस्तिष्क माइक्रोवैस्कुलर एंडोथेलियल सेल लाइन hCMEC/D3 है, जो अच्छी तरह से दवा तेज का अध्ययन करने के लिए अनुकूल है और संभालने के लिए आसान है । कोशिकाएं मोनोलेयर बनाती हैं और बीबीबी34के विशिष्ट तंग जंक्शन प्रोटीन को व्यक्त करती हैं, जबकि क्लॉडर्न-5 का अभिव्यक्ति स्तर अक्षुण्ण माइक्रोवेसल्स35 की तुलना में कम बताया गया है और कई विशिष्ट ट्रांसपोर्टरों को ट्रांसक्रिप्ट स्तर36 के साथ – साथ प्रोटेओमिक अध्ययन34में पाया गया है। 30-50 की सीमा में अपेक्षाकृत कम TEERω ·cm2 अभी भी एक चुनौती३७है । मस्तिष्क एंडोथेलियल कोशिकाओं के लिए एक और स्रोत मानव pluripotent स्टेम सेल (hPSCs)38 और मानव गर्भनाल रक्त से व्युत्पन्न स्टेम कोशिकाओं परिसंचारी एंडोथेलियल प्रोजेनिटर और हेमेटोपोइटिक वंश39,40हैं । भेदभाव के दोनों प्रोटोकॉल तंग सेल मोनोलेयर और उच्च TEER मानों में परिणाम (जैसे, सह संस्कृतियों में 1,450ω·cm2) 38. इन स्टेम सेल मॉडल खेती के लिए चरम देखभाल की आवश्यकता है, अभी तक बीबीबी विकास पर आनुवंशिक पृष्ठभूमि४२ के साथ हार्मोन४१ या रोगों को विनियमित करने के प्रभाव का अध्ययन करने का अवसर प्रदान करते हैं ।
इस अध्ययन में, हमने बीबीबी की नकल करने और बैक्टीरियल ट्रैवर्सल का अध्ययन करने के लिए एक अमर ट्रांससंक्रमित मानव मस्तिष्क माइक्रोवैस्कुलर एंडोथेलियल सेल लाइन, THBMEC43की स्थापना की। कोशिकाओं को एक फिल्टर पर वरीयता प्राप्त कर रहे है और इस सेल संस्कृति मॉडल में १००% प्रवाह के लिए हो रहे हैं । कोशिका संस्कृति कक्ष के ऊपरी हिस्से में बैक्टीरिया को टीका लगाया जाता है। ई. कोलाई दिमागी पहचान44की उच्च घटनाओं के कारण हम अपने नमूना अध्ययन में एस्चेरिचिया कोलाई (ई कोलाई)का उपयोग करते हैं। यह दर्शाया गया है कि सेल मोनोलेयर की सबसे कम सामर्थ्य45सीडिंग के बाद 13 दिन और दिन 15 के बीच होती है . इसलिए, THBMEC मोनोलेयर का उपचार इस समय के बाद किया जाता है और बैक्टीरिया को बाद में मोनोलेयर की एपिकल सतह पर माध्यम में टीका लगाया जाता है। एक ऊष्मायन समय के बाद, बैक्टीरिया है कि बाधा को पार करने में सक्षम थे आगर प्लेटों पर बैक्टीरिया के साथ चढ़ाना माध्यम के माध्यम से मात्रा निर्धारित कर रहे है और कालोनियों गिनती । कॉलोनियों की बढ़ी हुई संख्या बीबीबी के माध्यम से उच्च जीवाणु ट्रैवर्सल के साथ संबंधित है। टीईआर लगभग 70ω246है। हालांकि, वर्णित विधि में टीईआर को मापना आवश्यक नहीं है। हालांकि यह बीबीबी की पारगम्यता के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित मूल्य है, यह बीबीबी के माध्यम से बैक्टीरिया के traversal पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता लगता है । अनुपचारित कोशिकाएं हमारे मॉडल में जकड़न के नियंत्रण के रूप में काम करती हैं। पिछले काम में यह दर्शाया गया है कि कोशिकाएं भड़काऊ साइटोकिन्स पर प्रतिक्रिया देने और ठेठ तंग जंक्शन प्रोटीन47व्यक्त करने में सक्षम हैं । यह ट्रांसपोर्टर सब्सट्रेट्स और रिसेप्टर्स के एक बड़े सेट की यौगिक स्क्रीनिंग और सत्यापन के लिए अनुमति देता है।
माइक्रोबियल ट्रैवर्सल के रोगजनन में सीमित अंतर्दृष्टि पीओडी या दिमागी पहचान के लिए उपचारों के और विकास को सीमित करती है। इन बीमारियों की मृत्यु दर और रुग्णता बेहतर रोगी उपचार की मांग करती है, अंतर्निहित तंत्रों के अनुसंधान की आवश्यकता होती है, और यौगिक स्क्रीनिंग के लिए एक मजबूत मंच की आवश्यकता होती है। मल्टीफैक्टरियल घटनाओं का अध्ययन मानव बीएमईसी के साथ किया जा सकता है। कई प्रजातियों से बीएमईसी की कई सफल रिपोर्ट की गई अलगाव प्रक्रियाओं में कोशिकाओं की विशेषताओं आणविक हस्ताक्षर52,53का नुकसान हुआ है। इस प्रक्रिया में वर्णित THBMECs बहुत जल्दी मार्ग में ट्रांससंक्रमित थे, जहां वे विशिष्ट मस्तिष्क एंडोथेलियल सेल विशेषताओं का प्रदर्शन किया और उन्हेंसंरक्षित 43. यह महत्वपूर्ण है, क्योंकि प्रभावित रास्तों में सभी कदम अब तक खोजे गए हैं, और यह मॉडल पारंपरिक बीएमईसी की नकल करने लगता है। हमारा प्रस्तुत मॉडल बीबीबी के माध्यम से बीएमईसी और माइक्रोबियल ट्रैवर्सल पर प्रत्यक्ष प्रभाव दिखाता है।
THBMEC कोशिकाओं की हैंडलिंग सीधी है, और आवश्यक तकनीकी उपकरण अधिकांश जीवन विज्ञान प्रयोगशालाओं में मौजूद हैं। हमारा मॉडल THBMECs के एक तंग मोनोलेयर का निर्माण किया है के बाद खोजी प्रक्रियाओं की तत्काल शुरुआत के लिए अनुमति देता है । नए परीक्षणों और पारंपरिक रूप से संभावित संयोजनों जैसे टीईआर माप या ट्रेसर54के साथ लेबलिंग के कारण अनुप्रयोगों का क्षेत्र व्यापक हो सकता है। सह-या ट्रिपल-कल्चर मॉडल बनाने के लिए एस्ट्रोसाइट्स या पेरिसाइट्स को जोड़ना भी संभव है। बैक्टीरिया के साथ ऊपरी कक्ष को इनकुलेट करने से पहले यौगिकों के साथ THBMECs का इलाज करके माइक्रोबियल ट्रैवर्सल पर दवाओं के प्रभाव का परीक्षण हमारे मॉडल में भी किया जा सकता है। वास्तव में, प्रक्रिया के स्वचालन की अनुमति देने वाली 96 अच्छी तरह से प्लेटों के लिए फिल्टर के साथ आवेषण खरीदना संभव है। इससे उल्लिखित रोगों के खिलाफ दवाओं की खोज में तेजी लाने और दवा विकास के दौरान बीबीबी पर दुष्प्रभावों को कम करने के लिए उच्च थ्रूपुट दवा स्क्रीनिंग सिस्टम के कार्यान्वयन में सुविधा हो सकती है ।
प्रस्तुत विधि में एक महत्वपूर्ण कदम ऊपरी कक्ष में बैक्टीरिया जोड़ने के बाद ऊष्मायन समय है। प्रोटोकॉल में समयसीमा के रूप में घंटों का उपयोग करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि ई कोलाई का पीढ़ी का समय केवल 20 मिन55है। अन्यथा, विभिन्न समय बिंदुओं के उपयोग से भ्रामक परिणाम हो सकते हैं । यदि प्लेटों को देखभाल के साथ नहीं संभाला जाता है तो बैक्टीरियल एक्सपोजर के दौरान ऊपरी और निचले कक्ष के बीच संदूषण का संभावित खतरा भी होता है। इस बिंदु पर 12 अच्छी तरह से थाली के लिए किसी भी परिवर्तन निचले कक्ष में माध्यम दूषित सकता है ।
ई. कोलाई बैक्टीरियल दिमागी होने का एक प्रसिद्ध, बहुत आम कारण है। आगे की जांच में विभिन्न बैक्टीरिया का परीक्षण करना चाहिए जो दिमागी पहचान से भी जुड़े होते हैं, जैसे कि निसेरिया मेनिंगिटिस56 या स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया57। ये बीबीबी को पार करने के लिए विभिन्न तंत्रों का उपयोग करने लगते हैं और रोगियों के इलाज के लिए बेहतर ढंग से समझने की आवश्यकता होती है। बुजुर्ग रोगियों में, POD के लिए घटना26 बढ़ जाती है और साथ ही होने वाली comorbidities की संख्या । यह ज्ञात है कि विभिन्न रोगों, विशेष रूप से मधुमेह जैसे प्रणालीगत लोगों के बीच बातचीत होती है। हमारे मॉडल में, उन स्थितियों का अनुकरण करना या बैक्टीरिया को जोड़ने से पहले कोशिकाओं का इलाज करना संभव है।
मॉडल THBMECs और बैक्टीरिया के सीधे संपर्क से सीमित है, और आगे अनुसंधान के लिए शामिल रास्ते और प्रोटीन का पता लगाने के लिए संपर्क के संभावित तंत्र की जांच आवश्यक है । हालांकि, आवेषण को हटाना और आगे के विश्लेषण के लिए कोशिकाओं को फसल करना संभव है। स्टेम सेलमॉडल38,39,40की तुलना में मॉडल का टीयर कम है . हमने एक बैक्टीरियल एकाग्रता का उपयोग करके इसकी पुष्टि की जो 6 घंटे के बाद अनुपचारित कोशिकाओं में बीबीबी को पार नहीं करता था।
सारांश में, यह विधि बीबीबी के माध्यम से बैक्टीरिया के ट्रैवर्स का विश्लेषण करने के लिए एक मजबूत मंच का प्रतिनिधित्व करती है जिसमें उच्च-थ्रूपुट दवा स्क्रीनिंग के लिए इसका विस्तार करने की क्षमता है।
The authors have nothing to disclose.
लेखक इस विधि पर पिछले काम के लिए डॉ मरयम हुसैन को स्वीकार करते हैं, पांडुलिपि को गंभीर रूप से पढ़ने के लिए THBMECs और जूलियन वेबर प्रदान करने के लिए पीडी डॉ केर्स्टिन डैनकर (चारिट-यूनीवर्सिटस्मेडिजिन, बर्लिन) का समूह। इस अध्ययन को आरटीके 2155 (प्रोमोएज) ने समर्थन दिया था।
Agar – Agar | Carl Roth | 6494.3 | BioScience-Grade |
Autoclave | Systec | VX-150 | |
Bacteria E.coli strain GM2163 | Fermentas Life Sciences, Lithuania | ||
Photometer | Eppendorf | 6131 | |
Cells THBMEC | Group of M. F. Stins | ||
Cell culture flasks | Greiner Bio-One | 658175 | |
Centrifuge Universal 320 | Hettrichlab | 1401 | |
Collagen IV | SIGMA Aldrich | C6745 | from human cell culture |
Countess Automated Cell Counter with cell counting chamber slides and Trypan Blue stain 0.4% | Invitrogen | C10311 | |
Culture tubes | Greiner Bio-One | 191180 | |
Cuvettes | BRAND | 759015 | |
Di sodium hydrogen phosphate di hydrate | MERCK | 1065800500 | |
DMEM/F-12 | GIBCO/ Thermo Sc. | 11330032 | HEPES |
Falcon tubes 15 ml | Greiner Bio-One | 188271 | |
Falcon tubes 50 ml | Greiner Bio-One | 227261 | |
Fetal Bovine Serum | GIBCO/ Thermo Sc. | 10270 | value FBS -Brazil |
Fibronectin | SIGMA Aldrich | F0556 | solution human fibroblasts |
Heracell 150 CO2 Incubator | Heraeus | 50116047 | |
Incubator shaker I 26 New Brunswick | Eppendorf | M1324-0000 | |
Inoculation loop | Dr. Ilona Schubert – Laborfachhandel | 641000 | |
LB Broth Base | GIBCO/ Thermo Sc. | 12780029 | |
L-Glutamine | GIBCO/ Thermo Sc. | 25030-081 | |
Microbial incubator B 6200 | Heraeus | 51015192 | |
Microbiological Safety Cabinet AURA 2000 M.A.C. Class II | BIOAIR | 12469 | |
Microscope inverse | Zeiss | TELAVAL 31 | |
Micro tubes 2 ml | Sarstedt | 72,695,400 | |
Micro tubes 1,5 ml | Sarstedt | 72,706,400 | |
Penicillin / Streptomycin | GIBCO/ Thermo Sc. | 15140122 | |
Petri dish | Dr. Ilona Schubert – Laborfachhandel | 464-800 | |
Potassium chloride | Roth | HN02.3 | |
Potassium-di-hydrogen phosphate | Roth | P018.2 | |
Sodium chloride | Roth | 9265.2 | |
ThinCerts + Multiwell Plates | Greiner Bio-One | 665631 | 12 well, pore size 3.0 µm |
Trypsin – EDTA | GIBCO/ Thermo Sc. | 15400054 | |
Vacuumpump Laboport | KNF | N 86 KT.18 |