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Medicine

कार्बन टेट्राक्लोराइड (सीसीएल4)एक्सपोजर के माध्यम से चूहों में तीव्र जिगर की चोट को प्रेरित करना एक ओरोगास्ट्रिक ट्यूब के माध्यम से

doi: 10.3791/60695 Published: April 28, 2020
* These authors contributed equally

Summary

यह प्रोटोकॉल एक ओरोगास्ट्रिक ट्यूब के माध्यम से सीसीएल4 एक्सपोजर के माध्यम से तीव्र यकृत चोट (अली) को प्रेरित करने की एक आम और व्यवहार्य विधि का वर्णन करता है। सीसीएल4 एक्सपोजर लिवर में अपने बायोट्रांसफॉर्मेशन के दौरान रिएक्टिव ऑक्सीजन प्रजातियों के गठन के माध्यम से अली को प्रेरित करता है। इस विधि का उपयोग अली के रोगविज्ञान का विश्लेषण करने और विभिन्न हेपेटोप्रोटेक्टिव रणनीतियों की जांच करने के लिए किया जाता है।

Abstract

तीव्र जिगर की चोट (अली) हेपेटिक विफलता के विकास में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जो हेपेटिक एन्सेफेलोपैथी और बिगड़ा प्रोटीन संश्लेषण जैसी जटिलताओं सहित गंभीर यकृत रोग की विशेषता है। उपयुक्त पशु मॉडल अली के तंत्र और रोगविज्ञान का परीक्षण करने और विभिन्न हेपेटोप्रोटेक्टिव रणनीतियों की जांच करने के लिए महत्वपूर्ण हैं। रासायनिक परिवर्तनों को करने की क्षमता के कारण, कार्बन टेट्राक्लोराइड (सीसीएल4)का व्यापक रूप से प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के गठन के माध्यम से अली को प्रेरित करने के लिए जिगर में उपयोग किया जाता है। सीसीएल4 एक्सपोजर को इंट्रापेरिटोनी, साँस लेने, या नासोगास्ट्रिक या ओरोगास्ट्रिक ट्यूब के माध्यम से किया जा सकता है। यहां, हम एक कृंतक मॉडल का वर्णन करते हैं, जिसमें अली को एक ओरोगास्ट्रिक ट्यूब के माध्यम से सीसीएल4 एक्सपोजर द्वारा प्रेरित किया जाता है। यह विधि सस्ती है, आसानी से किया जाता है, और इसमें न्यूनतम जोखिम होता है। मॉडल अत्यधिक प्रजनन योग्य है और व्यापक रूप से संभावित हेपेटोप्रोटेक्टिव रणनीतियों की प्रभावकारिता निर्धारित करने और जिगर की चोट के मार्कर का आकलन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है।

Introduction

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खासकर शराब और नशीली दवाओं के सेवन के कारण लिवर के जहरीले अपमान की आवृत्ति बढ़ रही है । तीव्र जिगर की चोट (अली) उच्च मृत्यु दर के साथ जुड़ा हुआ है और नैदानिक चिंताओं का कारण बना है1,,2। विषाक्त चोट जिगर में मौत संकेत रास्ते की ओर जाता है, जिसके परिणामस्वरूप हेपेटोसाइट एपोप्टोसिस, परिगलन, या पायरोप्टोसिस होता है। अली हेपेटिक विफलता के विकास में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जो हेपेटिक एंसेफेलोपैथी और बिगड़ा प्रोटीन संश्लेषण3,4जैसी जटिलताओं सहित गंभीर यकृत रोग की विशेषता है । हालांकि हाल के शोध ने हेपेटिक विफलता के साथ शारीरिक और रोग परिवर्तनों के बारे में हमारे ज्ञान में वृद्धि की है, लेकिन इसने रोगआणविक विशेषताओं को पूरी तरह से नहीं समझाया है जो कोशिका मृत्यु के तंत्र को प्रभावित करते हैं। इसके अलावा, अली रोगियों में प्रगतिशील गिरावट को रिवर्स करने के लिए वर्तमान में कोई दवा उपलब्ध नहीं है। वर्तमान में, केवल काफी प्रभावी उपचार जिगर प्रत्यारोपण5,6है ।

अली के तंत्र और रोगविज्ञान की जांच करने और विभिन्न हेपेटोप्रोटेक्टिव रणनीतियों का परीक्षण करने के लिए, अली को प्रेरित करने के लिए विभिन्न पशु मॉडलों का उपयोग किया जाता है। अली के एक बेहतर पशु मॉडल को एक विश्वसनीय, मान्य, सस्ती और विधि लागू करने में आसान के माध्यम से रोग की रोग प्रक्रिया की नकल करनी चाहिए। प्रयोगात्मक मॉडलों के उदाहरणों में हेपेटोटॉक्सिक एजेंट, सर्जिकल प्रक्रियाएं जैसे कुल या आंशिक हेपेटेक्टोमी, पूर्ण या क्षणिक देवस्कुलीकरण, और संक्रमित प्रक्रियाएं7,,8,,9शामिल हैं। ज्ञात हेपेटोटॉक्सिक पदार्थों में गैलेक्टोसामाइन, एसीटामिनोफेन, थिओएसेटामाइड, एज़ऑक्सीमेथेन और सीसीएल4शामिल हैं। इनमें से सीसीएल4 का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, हालांकि इसे अभी तक,10, 11 ,1211,13की अच्छी तरह से चित्रित नहीं किया गया है।,

सीसीएल4 एक मीठी गंध के साथ एक कार्बनिक रंगहीन तरल यौगिक है और कम तापमान पर लगभग कोई ज्वलनशीलता नहीं है। सीसीएल4 की उच्च सांद्रता के संपर्क में आने से केंद्रीय तंत्रिका तंत्र को नुकसान हो सकता है, जिसमें यकृत और गुर्दे की गिरावट शामिल है। सीसीएल4 लिवर में अपने बायोट्रांसफॉर्मेशन के जरिए अली को प्रेरित करती है, जो रिएक्टिव ऑक्सीजन प्रजाति बनाती है । यह P450 साइटोक्रोम एंजाइम 2E1 के माध्यम से होता है, जो एक सक्रिय मेटाबोलाइट बनाता है और जिसके परिणामस्वरूप मैक्रोमॉलिक्यूल बाइंडिंग, लिपिड पेरोक्सिडिशन की वृद्धि और इंट्रासेल्युलर कैल्शियम होमोस्टोसिस14की अशांति होती है। इसके अलावा, सीसीएल4 मॉडल का उपयोग आरएनए संश्लेषण15के स्तर पर एस्ट्रोसाइट्स को प्रोत्साहित करने के लिए किया जा सकता है। यह हेपेटोटॉक्सिन इंट्रापेरिटोनियल, इंट्रापोर्टल, ओरल और इंट्रागैस्ट्रिकरूट्स 16द्वारा प्रशासित किया गया है।

इस प्रोटोकॉल में, हम एक orogastric ट्यूब के माध्यम से चूहों मेंसीटी4प्रेरित अली विस्तार से वर्णन करते हैं। यह विधि मजबूत और प्रजनन योग्य अली को प्रेरित करती है जिसका उपयोग अली के रोगजनन की जांच के लिए किया जा सकता है। जिगर की बीमारी की गंभीरता के निर्धारण सीरम ग्लूटामेट-पायरुवेट ट्रांसामिनेज (जीपीटी), ग्लूटामिक ऑक्सालोसेटिक ट्रांसामिनेज (जीएसटी) एंजाइमों और कुल बिलीरुबिन (टीबी) के साथ-साथ हेमेटोक्सिलिन और इओसिन (एच एंड ई) सना हुआ जिगर के ऊतकों द्वारा निश्चित हिस्टोलॉजिकल निदान के माप द्वारा निगरानी की जाती है। इंट्रागास्ट्रिक एक्सेस के माध्यम से सीसीएल4 के संपर्क में आने से न्यूनतम जोखिम के साथ व्यावहारिक, सस्ती, न्यूनतम आक्रामक विधि की अनुमति होती है।

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Protocol

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यह प्रयोग हेलसिंकी और टोक्यो की घोषणाओं की सिफारिशों और यूरोपीय समुदाय के प्रायोगिक पशुओं के उपयोग के लिए दिशा-निर्देशों के अनुसार किए गए थे । इन प्रयोगों को बेन-गुरियन यूनिवर्सिटी ऑफ नेगेव की एनिमल केयर कमेटी ने मंजूरी दी थी ।

नोट: सीसीएल4 मॉडल उत्पन्न किया गया है और एक पिछले अध्ययन17में इस्तेमाल किया गया है । प्रोटोकॉल टाइमलाइन तालिका 1में प्रदर्शित की जाती है ।

1. प्रायोगिक प्रक्रिया के लिए चूहों को तैयार करना

नोट: 300−350 ग्राम वजनी वयस्क पुरुष स्प्राग डाले चूहों का चयन करें।

  1. संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) से प्रयोगों के लिए अनुमोदन प्राप्त करें।
  2. कमरे के तापमान (22 डिग्री सेल्सियस ± 1 डिग्री सेल्सियस) पर चूहों को बनाए रखें, 12 घंटे प्रकाश और 12 घंटे अंधेरे चक्र के साथ। चूहा चाउ और पानी विज्ञापन लिपटम प्रदान करें।
  3. 6:00 बजे से 12:00 बजे के बीच सभी प्रयोग करें
  4. चूहे को शेव करें और त्वचा को शराब से कीटाणुरहित करें।

2. सीरम मिला, GPT, और टीबी बेसलाइन स्तर का निर्धारण

  1. संज्ञाहरण
    1. संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए एक सतत आइसोफ्लुअरन प्रशासन प्रणाली तैयार करें। सुनिश्चित करें कि वाष्पीकरण प्रणाली आइसोफ्लोरीन से भरी हुई है।
    2. 2% आइसोफ्लोरीन के साथ चूहे को एनेस्थेटाइज़ करें। पुष्टि करें कि बाहरी उत्तेजनाओं के जवाब में आंदोलन और पेडल पलटा देख कर चूहा पूरी तरह से एनेस्थेटाइज्ड है।
      नोट: संज्ञाहरण प्रेरण और रखरखाव के लिए 1−5% आइसोफ्लुरन का उपयोग करें।
  2. एक 22 जी कैथेटर के साथ पूंछ नस को कैन्यूलेट कर लें।
  3. बेसलाइन पर 0.5 mL रक्त नमूना लीजिए। सुनिश्चित करें कि रक्त की मात्रा प्राप्त आईएसीयूसी दिशानिर्देशों से अधिक न हो।
  4. सीरम गोट, जीपीटी और टीबी के माप सहित रक्त जैव रासायनिक विश्लेषण करें, जैसा कि पहले18वर्णित था।
    नोट: सोरोका मेडिकल सेंटर की बायोकेमिकल प्रयोगशाला में लिवर एंजाइमों और टीबी के स्तर की परीक्षाएं की गईं । रसायन विज्ञान एनालाइजर(सामग्री की तालिका)पर फ्लोरेसेंस विधि का उपयोग करके रक्त के नमूनों का विश्लेषण किया गया था।

3. चूहों में तीव्र जिगर की चोट का शामिल

सावधानी: वाष्प या त्वचा के माध्यम से अवशोषण सहित सीसीएल4की उच्च सांद्रता के संपर्क में आने से केंद्रीय तंत्रिका तंत्र पर नकारात्मक प्रभाव पड़ सकता है और यकृत और गुर्दे का पतन हो सकता है। लंबे समय तक एक्सपोजर कोमा या मौत का कारण बन सकता है।

  1. 1:1 अनुपात में एक वाहन के रूप में जैतून का तेल के साथ सीसीएल4 मिश्रण द्वारा सीसीएल4 (सामग्री की तालिका)का 50% समाधान तैयार करें।
    नोट: समाधान गैर दवा ग्रेड यौगिकों के लिए आईएसीयूसी दिशानिर्देशों के अनुसार तैयार किया जाना चाहिए।
  2. एक orogastric ट्यूब के माध्यम से सीसीएल4 प्रशासन द्वारा वीवो में हेपेटोटॉक्सिकिटी को प्रेरित करें।
    1. चूहे की मौखिक गुहा के माध्यम से 16 जी ओरोगास्ट्रिक ट्यूब (3 इंच गहरी) डालें।
    2. चूहे के पेट में निम्नलिखित पतला समाधानों में से एक के साथ सिरिंज इंजेक्शन द्वारा सीसीएल4 की विभिन्न खुराकों के लिए चूहे को बेनकाब करें: 1 mL/kg (हल्के अली), 2.5 mL/kg (मध्यम अली), या 5 mL/kg (गंभीर अली) 50% समाधान के। नकली संचालित नियंत्रण समूह के लिए, चूहे को केवल 5 mL/kg जैतून का तेल बेनकाब करें।

4. 24 घंटे के बाद सीरम मिला, GPT, और टीबी के स्तर का निर्धारण

  1. संज्ञाहरण
    1. संज्ञाहरण को प्रेरित करने के लिए एक सतत आइसोफ्लुअरन प्रशासन प्रणाली तैयार करें। सुनिश्चित करें कि वाष्पीकरण प्रणाली आइसोफ्लोरीन से भरी हुई है।
    2. 2% आइसोफ्लोरीन के साथ चूहों को एनेस्थेटाइज़ करें। पुष्टि करें कि बाहरी उत्तेजनाओं के जवाब में आंदोलन और पेडल पलटा देख कर चूहा पूरी तरह से एनेस्थेटाइज्ड है।
  2. सीसीएल4 एक्सपोजर से 24 घंटे में रक्त के नमूने एकत्र करें।
  3. सीरम गोट, जीपीटी और टीबी के माप सहित रक्त जैव रासायनिक विश्लेषण करें।

5. हिस्टोलॉजिकल परीक्षा के लिए जिगर संग्रह

  1. 20% O 2/80% सीओ2के2साथ प्रेरित गैस मिश्रण की जगह द्वारा चूहे इच्छामृत्यु । सुनिश्चित करें कि सीओ2 को आईएसीयूसी दिशानिर्देशों के अनुसार पूर्व निर्धारित दर पर वितरित किया जाता है।
  2. दिल की धड़कन की कमी के लिए जांच करके मौत सुनिश्चित करें और आईएसीयूसी दिशानिर्देशों के अनुसार एक माध्यमिक विधि से पुष्टि करें।
  3. चूहे को एक विच्छेदन बोर्ड पर रखें, जिसमें उसकी पृष्ठीय सतह नीचे और पेट का सामना कर रहा है। चूहे के पेट को शेव करें।
  4. स्केलपेल के साथ, गुदा से ठोड़ी तक वेंट्रम त्वचा की पूरी लंबाई को चीरते हैं। त्वचा को अलग करें। गुदा से जाइफाइड उपास्थि के लिए एक स्केलपेल के साथ पेट की दीवार को छेदना, पेट आंत को उजागर।
  5. कैंची और संदंश का उपयोग करके, जिगर को अपने स्नायुबंधन और अनुलग्नकों से विच्छेदन करके अलग करें। जिगर हिलम से शुरू, सावधानी से अनुलग्नकों से सभी जिगर पालि जारी करके एक हेपेटेक्टोमी प्रदर्शन करते हैं। विच्छेदन और सभी स्नायुबंधन और रक्त वाहिकाओं को काट दिया।
  6. जिगर को पेट्री डिश में स्थानांतरित करें। कम से कम 24 घंटे के लिए 4% बफरफॉर्मेड फॉर्मेल्डिहाइड समाधान(सामग्री की तालिका)में यकृत को ठीक करें।

6. हिस्टोलॉजिकल परीक्षा

  1. नमूना तैयारकरना
    1. निर्धारण के बाद, माइक्रोटोम सेक्शनिंग द्वारा नमूना को 5 माइक्रोमीटर मोटी स्लाइस श्रृंखला में काट लें।
    2. धीरे-धीरे स्लाइस को एक नरम ब्रश के साथ ग्लास स्लाइड पर रखें, प्रति स्लाइड 1 स्लाइस।
    3. एच एंड ई धुंधला प्रदर्शन के रूप में पहलेवर्णित 19
  2. 200x आवर्धन में एक माइक्रोस्कोप के नीचे स्लाइस की जांच 20 मिमी उद्देश्य लेंस(सामग्री की तालिका)का उपयोग करके।
    नोट: जिगर वर्गों उपचार प्रोटोकॉल के लिए अंधा एक विशेष रोगविज्ञानी द्वारा वर्गीकृत किया जाना चाहिए । 0 का स्कोर कोई जिगर असामान्यताओं को इंगित करता है, 1-2 हल्के जिगर की चोट इंगित करता है, 3-4 मध्यम जिगर की चोट इंगित करता है, और 5-6 गंभीर जिगर की चोट20,,21,,22इंगित करता है ।

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Representative Results

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टीबी, मिला, और जीपीटी का स्तर काफी 24 घंटे अली उत्प्रेरण के बाद (उच्च सीसीएल4 खुराक पर अधिक) शाम संचालित नियंत्रण (पी एंड लेफ्टिनेंट; ०.००१)(चित्रा 1)की तुलना में वृद्धि हुई । बेसलाइन पर टीबी, मिला और जीपीटी का स्तर सामान्य था और नकली संचालित नियंत्रणों की तुलना में काफी अलग नहीं थे । 24 घंटे में, सभी तीन इंटरवेंशनल ग्रुप, 1 एमएल/किलो सीसीएल4 (1, 1−2), 2.5 mL/kg सीसीएल4 (3, 3−4), और 5 mL/kg सीसीएल4 (4, 4−5.75), शाम संचालित नियंत्रण समूह (0, 0−0) (पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.05, औसत के रूप में प्रस्तुत डेटा, 25%75% रेंज) की तुलना में काफी अधिक हिस्टोलॉजिकल ग्रेडिंग स्कोर था। एक नकली संचालित नियंत्रण(चित्रा 2A)और विभिन्न सीसीएल4 खुराक(चित्रा 2बी−डी)के संपर्क में समूहों की एच एंड ई छवियां सीसीएल4 एक्सपोजर के बाद हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तन 24 घंटे दिखाती हैं। सीसीएल4 द्वारा हेपेटोसेलुलर वास्तुकला में व्यवधान बड़े रेशेदार सेप्टा विरूपण, फाइबर का विस्तार, कोलेजन संचय, और जिगर वर्गों में छद्म पालि जुदाई(चित्रा 2)के साथ ऊतक चोट के एक उच्च ग्रेड द्वारा प्रदर्शित किया गया था ।

Figure 1
चित्रा 1: सीरम टीबी (ए), समझे (बी), और जीपीटी (सी) रक्त नमूनों में 24 घंटे के जोखिम के बाद विभिन्न सीसीएल4 खुराक के संपर्क में आने के बाद नकली संचालित नियंत्रण की तुलना में । ब्लू बार: नियंत्रण; लाल बार: सीसीएल4 एक्सपोजर के बाद 24 घंटे। सीसीएल4-उजागर चूहों और उजागर चूहों के बीच तुलना का महत्व मान-व्हिटनी परीक्षण का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है। <0.05 का पी-वैल्यू महत्वपूर्ण माना जाता था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: विभिन्न खुराकों में 24 एच सीसीएल4 नशा के बाद एच एंड ई के साथ यकृत ऊतक में हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तन होते हैं। (A)नकली संचालित नियंत्रण, (B) 1 mL/kg सीसीएल4,(C)२.५ mL/kg सीसीएल4,और(D)5 mL/kg सीसीएल4। स्केल बार = 50 माइक्रोन। हिस्टोलॉजिकल परिणामों के वितरण की भविष्यवाणी रैखिक प्रतिगमन द्वारा की गई थी । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

समूहों 0 घंटे 24 घंटे
शाम (15 चूहे) मिला, जीपीटी, टीबी बेसलाइन स्तर मिला, जीपीटी, टीबी का स्तर
हल्के अली (15 चूहे)
मॉडरेट अली (15 चूहे) नकली समूहों के लिए सीसीएल4 एक्सपोजर और नकली समूह के लिए जैतून का तेल हिस्टोलॉजिकल परीक्षा
गंभीर अली (18 चूहे)

तालिका 1: प्रोटोकॉल समयरेखा का प्रदर्शन। विभिन्न समयों पर चूहों के विभिन्न समूहों में एक नकली संचालित नियंत्रण समूह, हल्के अली (1 mL/kg सीसीएल4के संपर्क में), उदारवादी अली (2.5 mL/kg सीसीएल4के संपर्क में), और गंभीर अली (5 mL/kg सीसीएल4के संपर्क में) शामिल हैं। समय 24 घंटे, सीरम मिल गया, GPT और टीबी के स्तर को मापा गया था, और हिस्टोलॉजिकल परीक्षा सभी चार समूहों के लिए किया गया था ।

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Discussion

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इस प्रोटोकॉल में, सीसीएल4 चूहों में अली को प्रेरित करने के लिए एक जिगर विष के रूप में प्रयोग किया जाता है। अली को हेपेटिक पैरानचिमा के नुकसान और यकृत के मेटाबोलिक और सिंथेटिक कार्यों के बाद के डिस्रेगुलेशन की विशेषता है। ड्रग्स, वायरस, विषाक्त पदार्थ, ऑटोइम्यून रोग, मेटाबोलिक रोग, और संवहनी विकार सभी हेपेटोसाइट मौत को प्रेरित करते हैं, और बाद में भड़काऊ प्रतिक्रिया अली के रोगजनन में योगदान देती है।

जिगर के प्रारंभिक अपमान साइटोकिन उत्पादन, केमोकिन रिहाई, और जिगर में भड़काऊ कोशिकाओं की बाद में घुसपैठ की ओर जाता है । अली मूल्यांकन के लिए आमतौर पर परीक्षण किए गए बायोमार्कर में से तीन जीपीटी, समझे और टीबी का स्तर हैं। जीपीटी और मिला गतिविधि के स्तर से मापा एंजाइम हैं, जबकि टीबी का स्तर सीरम एकाग्रता द्वारा जिगर समारोह को मापता है। जब ऊंचा होजाता है, तो सीरम एंजाइम गतिविधि का स्तर हेपेटोसाइट्स या कोलैंगियोसाइट्स23को चोट को निरूपित करता है। रैपिड स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधि को पहली बार 1 9 5524में आर्थर कारमेन के काम में सूचित किया गया था, जिसने सीरम एंजाइम माप के व्यापक नैदानिक अनुप्रयोग के लिए अनुमति दी थी। तब से, हेपेटोसाइट चोट का पता लगाने के लिए मिला और जीपीटी माप भी लागू किया गया है। जीपीटी का उपयोग अधिक बार किया जाता है, और एक साथ जीपीटी परीक्षण आमतौर पर अनावश्यक परिणामों का पता चलता है। रिलीज दरों और घायल कोशिकाओं से निकासी दरों के बीच मिल और जीपीटी की गतिविधि के स्तर में वृद्धि का उपयोग कोशिकाओं को चोट की लगभग दर को मापने के लिए किया जा सकता है। जब घायल जिगर की कोशिकाओं जिगर इस तरह के प्रसंस्करण और पित्त के रूप में बिलीरुबिन को हटाने के रूप में अपनी सामांय गतिविधियों में विफल करने के लिए कारण, यह इंगित करता है कि अली अधिक गंभीर है ।

प्रोटोकॉल में कई कदम हैं जो महत्वपूर्ण हैं और सावधानीपूर्वक विचार करते हैं। अधिकांश प्रोटोकॉल को खोजी एजेंट के संपर्क से पहले और बाद में सीरम बायोमार्कर परीक्षण की आवश्यकता होती है, क्योंकि सीरम एंजाइम एकाग्रता के स्तर में ऊंचाई आम है। हालांकि, एलिवेटेड एएलटी के समय में उतार-चढ़ाव के कारण, किसी भी ऊंचाई का पता लगाने के लिए समय-समय पर कई परीक्षण किए जाने चाहिए। इस प्रोटोकॉल में, हमने बेसलाइन पर समझे, जीपीटी और टीबी के स्तर का परीक्षण करने का फैसला किया और टॉक्सिन के संपर्क में आने के बाद 24 घंटे। हाल के अध्ययनों के अनुसार, इन बायोमार्कर के स्तर इस समय अंतराल17के दौरान अली की गंभीरता के साथ अच्छी तरह से सहसंबद्ध । जैसा कि चित्र ा 1में दिखाया गया है, अली को प्रेरित करने के बाद सभी नमूनों में रक्त मिला, जीपीटी और टीबी का स्तर 24 घंटे में ऊंचा किया गया था। यह इंगित करता है कि मॉडल ने सीसीएल4के संपर्क में आने के बाद से बहुत कम समय के अंतराल में परिणामों की मात्रा निर्धारित की है । किसी को ध्यान में रखना चाहिए कि गंभीर अली में जिगर मिला और GPT संश्लेषण करने की क्षमता खो देता है। इसलिए, इन मामलों में इन एंजाइमों को साहित्य में प्रदर्शित के रूप में उनके भविष्य कहनेवाला मूल्य की कमी हो सकती है।

सीसीएल4 के संपर्क में आने वाले चूहों के हिस्टोलॉजिकल निष्कर्षों में कोशिकाओं के गुब्बारों, सेंट्रलीनेलर नेक्रोसिस और25Councilman निकायों की उपस्थिति की विशेषता है। इस मॉडल में सीसीएल4 प्रशासित की खुराक के आनुपातिक होने के लिए व्यापक क्षति दिखाई गई थी।

orogastric सीसीएल4 एक्सपोजर के माध्यम से अली को प्रेरित करने की इस विधि के कई फायदे हैं। यह सरल, सस्ती, और न्यूनतम जोखिम जोखिम के साथ है। प्रोटोकॉल बहुत कम समय के अंतराल में महत्वपूर्ण परिणाम प्रदान करता है। मॉडल अत्यधिक प्रजनन योग्य है और आमतौर पर संभावित हेपेटोप्रोटेक्टिव रणनीतियों की प्रभावकारिता निर्धारित करने और यकृत की चोट के मार्कर का आकलन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है।

यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि सीसीएल4 मुख्य रूप से यकृत के केंद्रीय क्षेत्र को प्रभावित करता है, जो आमतौर पर मानव यकृत विफलता में देखे गए बड़े पैमाने पर परिगलन से मेल नहीं खाता है। इसके अलावा, सीसीएल4 पूरी तरह से जिगर में मेटाबोलाइज्ड नहीं है, और कुछ नॉनमेटाबोलिज्ड सीसीएल4 फेफड़ों और गुर्दे16सहित अन्य अंगों को नुकसान पहुंचा सकती है । इसके अलावा, साइटोक्रोम P450 विकास और प्रभावकारिता के विभिन्न स्तरों के कारण, प्रजातियों औरउम्र 26के आधार पर संवेदनशीलता में बड़ी भिन्नता है। इन सीमाओं के बावजूद, orogastric सीसीएल4-प्रेरितअली की विधि अभी भी एक मूल्यवान कृंतक मॉडल के रूप में कार्य करता है ।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

लेखकों कृतज्ञता Bertha Delgado, पैथोलॉजी विभाग, Soroka मेडिकल सेंटर, स्वास्थ्य विज्ञान के संकाय, Negev के बेन Gurion विश्वविद्यालय, प्रयोगशाला में उसकी मदद के लिए के रूप में के रूप में अच्छी तरह से हिटोलॉजी विश्लेषण में स्वीकार करते हैं ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
22 G catheter BD Neoflon TM Becton Dickinson Infusion Therapy AB
4% buffered formaldehyde solution Sigma - Aldrich lab materials technologies
BD Microtainer SST TM Tubes Becton Dickinson and Company
Carbone tetrachloride Sigma - Aldrich lab materials technologies CAS 56-23-5
Isofluran, USP 100% Piramamal Critical Care, Inc
Olympus AU2700 Chemistry-Immuno Analyzer Olympus (MN, USA) Analysis of blood samples was done by the fluorescence method
Olympus BX 40 microscope Olympus
RAT Feeding Needles ORCHID SCIENTIFICS
SYRINGE SET 1 and 2 ml MEDI -PLUS Shandong Zibo Shanchuan Medical Instruments Co., Ltd

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Frank, D., Savir, S., Gruenbaum, B. F., Melamed, I., Grinshpun, J., Kuts, R., Knyazer, B., Zlotnik, A., Vinokur, M., Boyko, M. Inducing Acute Liver Injury in Rats via Carbon Tetrachloride (CCl4) Exposure Through an Orogastric Tube. J. Vis. Exp. (158), e60695, doi:10.3791/60695 (2020).More

Frank, D., Savir, S., Gruenbaum, B. F., Melamed, I., Grinshpun, J., Kuts, R., Knyazer, B., Zlotnik, A., Vinokur, M., Boyko, M. Inducing Acute Liver Injury in Rats via Carbon Tetrachloride (CCl4) Exposure Through an Orogastric Tube. J. Vis. Exp. (158), e60695, doi:10.3791/60695 (2020).

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