该协议描述了通过CCl4暴露通过奥胃管诱导急性肝损伤(ALI)的一种常见和可行的方法。CCl4暴露在肝脏生物转化过程中通过活性氧物种的形成诱导 ALI。该方法用于分析ALI的病理生理学,并研究不同的肝保护策略。
急性肝损伤(ALI)在肝功能衰竭的发展中起着至关重要的作用,肝功能障碍的特点是严重的肝功能障碍,包括肝脑病和蛋白质合成受损等并发症。适当的动物模型对于测试ALI的机制和病理生理学以及研究不同的肝保护策略至关重要。由于其进行化学转化的能力,四氯化碳(CCl4)在肝脏中被广泛用于通过活性氧物种的形成诱导ALI。CCl4暴露可以通过腹内、吸入或通过鼻胃或奥胃管进行。在这里,我们描述了一个啮齿动物模型,其中ALI是由CCl4通过奥胃管暴露诱导的。该方法价格低廉,易于执行,风险最小。该模型具有很高的可重复性,可广泛用于确定潜在的肝保护策略的有效性和评估肝损伤的标记。
对肝脏的毒性侮辱的频率正在增加,特别是由于酗酒和吸毒。急性肝损伤(ALI)与高死亡率相关,并引起临床关注11,2。2毒性损伤导致肝脏死亡信号通路,导致肝细胞凋亡、坏死或肺气肿。ALI在肝功能衰竭的发展中起着至关重要的作用,其特征是严重的肝功能障碍,包括肝脑病和蛋白质合成受损等并发症3、4。4虽然最近的研究增加了我们对肝衰竭伴随的生理和病理变化的认识,但它并没有完全解释影响细胞死亡机制的病理分子特征。此外,目前尚无药物来扭转ALI患者的逐渐恶化。目前,唯一有效治疗的是肝移植55、6。6
为了研究ALI的机制和病理生理学,并测试不同的肝保护策略,使用不同的动物模型来诱导ALI。ALI的可取动物模型应该通过可靠、验证、廉价和易于应用的方法模拟疾病的病理过程。实验模型的例子包括肝毒性剂、手术程序,如完全或部分肝切除术,完全或暂时脱血管,以及感染性手术77,8,9。8,9已知的肝毒性物质包括甲酰胺、对乙酰氨基酚、硫酰胺、阿氧西甲烷和CCl4。其中,CCl4虽然尚未得到很好的应用,但其特征尚未得到很好的10、11、12、13。10,11,12,13
CCl4是一种有机无色液体化合物,气味甜美,在低温下几乎无可燃性。暴露于高浓度的CCl4可对中枢神经系统造成损伤,包括肝脏和肾脏的恶化。CCl4通过肝脏的生物转化诱导ALI,形成活性氧物种。这通过P450细胞色素酶2E1发生,形成活性代谢物,通过大分子结合、增强脂质过氧化和细胞内钙平衡扰动14引起细胞损伤。此外,CCl4模型可用于刺激在RNA合成15水平上的星细胞。这种肝毒素由腹腔内、门内、口腔和胃内途径16管理。
在此协议中,我们详细描述了CCl4诱导的ALI在大鼠通过奥胃管。该方法诱导健壮和可重复的ALI,可用于研究ALI的发病机制。通过血清谷氨酸-丙酮酶转氨酶(GPT)、谷胱甘肽转氨酶(GOT)酶和总胆红素(TB)的测量,以及通过血氧林和欧辛(H&E)染色肝组织进行明确的组织学诊断,监测肝病严重程度的确定。通过胃内访问接触 CCl4,可以采用实用、廉价、微创的方法,风险最小。
在此协议中,CCl4用作肝脏毒素,诱导大鼠体内的ALI。ALI的特点是肝胆痛的丧失以及肝脏代谢和合成功能的后续调节。药物、病毒、毒素、自身免疫性疾病、代谢疾病和血管疾病都诱发肝细胞死亡,随后的炎症反应有助于ALI的发病机制。
对肝脏的最初侮辱导致细胞因子的产生,化学基质释放,以及随后炎症细胞渗入肝脏。用于 ALI 评估的三种常见测试的生物标志物是 GP…
The authors have nothing to disclose.
作者感谢内盖夫大学索罗卡医学中心病理学系的伯莎·德尔加多在实验室和组织学分析方面的帮助。
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