Her presenterer vi to lett-å-følge trinnvise protokoller for stedpreferanseparadigmer ved hjelp av optogenetikk hos mus. Ved hjelp av disse to forskjellige oppsettene kan preferanse- og unngåelsesatferd vurderes solid i samme apparat med høy romlig og temporal selektivitet, og på en enkel måte.
Forstå hvordan nevronal aktivering fører til spesifikk atferdsproduksjon er grunnleggende for moderne nevrovitenskap. Kombinere optogenetikk hos gnagere med atferdstesting i validerte paradigmer tillater måling av atferdsmessige konsekvenser ved stimulering av distinkte nevroner i sanntid med høy romlig og temporal selektivitet, og dermed etablering av årsakssammenhenger mellom nevronal aktivering og atferd. Her beskriver vi en trinnvis protokoll for et sanntidsstedspreferanse (RT-PP) paradigme, en modifisert versjon av den klassiske kondisjonerte stedspreferansetesten (CPP). RT-PP utføres i et tredelt apparat og kan brukes til å svare på om optogenetisk stimulering av en bestemt nevronal populasjon er givende eller aversiv. Vi beskriver også en alternativ versjon av RT-PP-protokollen, den såkalte cp-protokollen (neutral compartment preference), som kan brukes til å bekrefte aversjon. De to tilnærmingene er basert på utvidelser av klassisk metodikk som stammer fra atferdsfarmakologi og nylig implementering av optogenetikk innenfor nevrovitenskapsfeltet. Bortsett fra å måle stedspreferanse i sanntid, kan disse oppsettene også gi informasjon om betinget atferd. Vi tilbyr trinnvise protokoller som er enkle å følge sammen med eksempler på egne data, og diskuterer viktige aspekter å vurdere når du bruker denne typen eksperimenter.
Implementeringen av optogenetikk, et moderne nevrovitenskapseksperimentelt verktøy der lys brukes til å kontrollere nevronal aktivitet, har de siste årene ført til store fremskritt i å forstå hvordan spesifikke nevronale populasjoner påvirker atferd1,2,3. Den enestående romlige og temporale selektiviteten av optogenetikk gjør det mulig å etablere årsakssammenhenger mellom eksitasjon eller hemming av cellegrupper av interesse og atferdsutgang2,3. Romlig selektivitet i optogenetikk er ofte sikret gjennom Cre-Lox-systemet der aktiviteten til Cre recombinase fører til rekombinasjon av dna-sekvenser tilstede mellom Lox-nettsteder, såkalte floxed alleles (flankert av lox nettsteder)4. Målet med å bruke Cre-Lox-systemet i optogenetikk er å oppnå uttrykk for alleles koding optogenetiske opsiner i bestemte nevroner av interesse samtidig som omkringliggende nevroner blottet for uttrykk. Opsins er lysfølsomme proteiner som ved lysstimulering av spesifikk bølgelengde tillater ionstrømning som påvirker neural spenning eller påvirker cellulære funksjoner ved å modulere nedstrøms effektorveier. Nye varianter av opsiner som varierer i aksjon (eksitatoriske, hemmende, modulerende), mekanisme, aktivering av lysbølgelengde og kinetikkegenskaper5 utvikles kontinuerlig for å møte behovene til spesifikke eksperimentelle tilnærminger. Når det gjelder spenning, dikterer bruk av en depolariserende eller hyperpolariserende opsin nevronenes aktivitet (henholdsvis eksitasjon eller hemming) ved lysstimulering ved en bestemt bølgelengde levert inn i hjernen3.
Selektiv promoteraktivitet leder uttrykket cre recombinase til nevroner av interesse. Ved å implementere en floxed allele av opsin av interesse, Cre-mediert rekombinasjon vil sikre at opsin er selektivt uttrykt i nevroner som co-express Cre recombinase3,6. Denne bruken av dobbelttransgene for å lede romlig selektivitet har vist seg svært effektiv i optogenetikk. Dermed, mens lysstimulering for å aktivere opsinene er bredt levert gjennom en intracerebralt implantert optisk fiber koblet til en lyskilde (LED eller laser)3,vil bare nevroner som uttrykker både Cre rekombinase og floxed opsin allele reagere på denne stimuleringen. Cre-Lox-systemet hos gnagere kan oppnås på forskjellige måter ved å bruke bare transgenikk (både Cre recombinase og floxed opsin konstruksjon er kodet i transgene dyr), bare virale injeksjoner (DNA-konstruksjoner for Cre recombinase og floxed opsin leveres begge via en viral bærer), eller en kombinasjon av de to (for eksempel Cre recombinase er kodet av et transgent dyr som injiseres med et virus som bærer floxed opsin konstruksjon)5. Den floxed opsin DNA konstruksjon er vanligvis klonet i ramme med en reporter genet for å muliggjøre visualisering av Cre-mediert rekombinasjon i vev seksjoner. Mens optogenetikk også kan utføres hos rotter, har de presenterte protokollene blitt generert for mus. For enkelhet, mus som bærer både Cre recombinase og floxed opsin vil bli referert til som “optogenetics mus”. I protokollene beskrevet nedenfor har optogenetikkmus blitt generert av en blandet transgen (Cre rekombinase under kontroll av to forskjellige arrangører) og viral (ved hjelp av et adeno-assosiert virus, AAV, for å levere floxed opsin DNA-konstruksjon – i vårt tilfelle ChR2 / H134R) tilnærming. Å skaffe og vedlikeholde transgene muselinjer er en viktig del av metodikken. Cre-driver og floxed opsin transgene mus kan produseres for hvert formål, eller kjøpes hvis kommersielt tilgjengelig, som kan en rekke virus bærer DNA sekvenser koding Cre recombinase og floxed opsins i forskjellige former.
Optogenetics kombinert med atferdstesting har vist seg å være et verdifullt verktøy for å studere rollen som distinkte hjerneregioner, eller diskrete nevronale populasjoner, i bestemte typer atferd. I sammenheng med belønningsrelatert atferd har optogenetikk gjort det mulig å verifisere tidligere funn innen atferdsfarmakologi og eksperimentell psykologi, og også tillatt et nytt nivå av spatio-tempomessig relevant disseksjon i hvordan visse nevroner påvirker atferd. En metode som har blitt brukt i flere studier for å vurdere belønningsrelatert atferd er en modifisert versjon av den klassiske metoden kjent som Conditioned Place Preference (CPP). Klassisk CPP har blitt brukt til å vurdere de givende eller aversive egenskapene til rusmidler gjennom deres evne til å indusere Pavlovian assosiasjoner med signaler av miljøet7,8. I Pavlovian termer, stoffet er en ubetinget stimulans siden det kan fremkalle tilnærming eller tilbaketrekking hvis det er givende eller aversive, henholdsvis. Kontinuerlig sammenkobling av stoffet med ulike nøytrale stimuli, som selv ikke fremkaller noe svar, kan føre til tilnærming eller tilbaketrekking bare ved presentasjon av den tidligere nøytrale, men etter paring, såkalte betinget stimuli9. CPP-analyse utføres vanligvis i et apparat som inneholder to rom av samme størrelse, men hvor hvert rom er definert av forskjellige egenskaper, for eksempel gulvtekstur, veggmønstre og belysning (nøytrale stimuli). De to rommene er koblet enten av en korridor eller en åpning mellom rommene. Under kondisjonering mottar motivet, vanligvis en liten gnager, passive injeksjoner av et stoff mens det er begrenset til ett av de to hovedrommene og saltvannet mens det er begrenset til det andre rommet. De givende effektene av stoffet vurderes senere i en stofffri økt når motivet får lov til å fritt utforske hele apparatet. Hvor mye tid brukt i det tidligere legemiddelkoblede rommet (den betingede responsen) anses å gjenspeile Pavlovian læringsmekanismer mediert mellom de givende effektene av stoffet og signalene i rommet forbundet med administrasjonen (betinget stimuli). Hvis dyret tilbringer mer tid i det legemiddelparede rommet, har stoffet indusert en betinget stedpreferanse som betyr at det har givende effekter på atferd. På den annen side, hvis stoffet oppfattes som aversiv, vil dyret unngå stoffet-paret rommet og tilbringe mer tid i saltvannsparet, noe som indikerer betinget sted aversjon (CPA)8,9,10,11.
Siden optogenetikk kan implementeres for å kontrollere nevronal aktivitet i “sanntid”, bruk av et atferdsparadigme som ligner på, men forskjellig fra, tillater CPP-oppsettet måling av stedspreferanse ved direkte nevronal aktivering. Optogenetics-drevet analyse av stedpreferanse er derfor ofte referert til som en sanntids stedpreferanse (RT-PP) analyseparadigme. I RT-PP paradigmet erstatter optogenetisk stimulering av forskjellige nevroner via Cre-Lox-systemet systemisk levering av et stoff som utføres i den klassiske CPP, slik at RT-PP-paradigmet i stedet måler hvis optogenetisk indusert nevronal stimulering er oppfattes som givende eller aversiv. Den nåværende beskrivelsen vil fokusere på optogenetikk mus, men også optogenetics rotter kan testes ved hjelp av lignende protokoller.
I stedet for å kondisjonere seg til ett rom om gangen som i det klassiske CPP-paradigmet, kan optogenetikkmusen i RT-PP-paradigmet bevege seg fritt i hele apparatet og atferd registreres gjennom hele økten. Inntreden i et av rommene er forbundet med intrakraniell lysstimulering. Under passende lysstimuleringparametere vil nevroner som uttrykker en eksitatoriv opsin, dermed aktiveres. Hvis lysstimuleringen oppfattes som givende, vil optogenetikkmusen forbli i det lysparede rommet, mens hvis lysstimuleringen oppfattes som aversiv, vil musen gå ut av rommet for å unnslippe stimuleringen. Denne typen analyse gjør det mulig å vurdere betinget læring: Motivet kan utløse lysstimulering og dermed nevronal aktivering ved å gå inn i et rom, og stoppe stimuleringen ved å gå ut av rommet, som ligner på spakpressing under en instrumentell oppgave. Videre kan assosiative læringsmekanismer vurderes under påfølgende økter hvor tid brukt i hvert rom måles i fravær av stimulering. På denne måten kan forskeren dissosiere mellom de umiddelbart givende effektene ved stimulering av nevronene av interesse og den assosiative minnedannelsen knyttet til den12.
I den nåværende studien beskriver vi to trinnvise oppsettprotokoller for optogenetikkdrevet stedpreferanseatferd av fritt bevegelige mus. Den første protokollen beskriver RT-PP i et tre-roms apparat og har blitt skissert basert på protokollene nylig presentert av Root og kolleger13 og andre forfattere12,14,15,16,17,18. Eksperimentet består av to faser bestående av flere daglige økter (vist i figur 1A). Hver økt er designet for forskjellige formål, og parametrene for koblingsstimulering med et rom endres tilsvarende. Den første økten, “Pretest“, brukes til å vurdere innledende preferanse for emnet til en av rommene. Mens det er koblet til lappledningen, kan motivet fritt utforske apparatet i fravær av stimulering i 15 min. Hvis den første innstillingen til ett rom er mer enn 80%, er musen ekskludert fra analysen siden innledende sidebias kan forvrenge analysen. Etter “Pretest“, “Fase 1” begynner. Den første delen består av to påfølgende, daglige, 30 min økter av “RT-PP“. Under “Fase 1“, optogenetics musen er koblet til laserkilden gjennom patch ledningen og plassert i arenaen for å fritt utforske den. Musen mottar intrakraniell laserstimulering ved inntreden i et av hovedrommene. Piloteksperimenter kan utføres for å avgjøre hvilket rom som skal tilordnes som laserparet og som ikke er paret. Hvis stimuleringen er vist å være givende, laseren vil bli koblet til minst foretrukket rom under “Pretest” og til den mest foretrukne hvis stimuleringen er aversiv. Dermed følger den presenterte RT-PP-protokollen en partisk design i den forstand at laserstimulering ikke er tilfeldig tildelt noen av de to hovedrommene (objektiv design), men er valgt for å unngå noen innledende preferanse for musen. Inntreden i det andre hovedrommet eller det nøytrale rommet som forbinder de to hovedrommene, gir ikke opphav til intrakraniell lysstimulering og er dermed ikke lysparet. Disse øktene gir mulighet for sanntidsvurdering av de givende eller aversive egenskapene til stimulering av spesifikke nevronale populasjoner. På den siste dagen av “Fase 1“, en 15 min økt uten stimulering finner sted. Denne økten tjener til å adressere kondisjonerte svar (“CR“) som følge av assosiativ læring mellom stimuleringen og miljøet der den ble mottatt. Minst tre dager etter “Fase 1“, “Reversering Fase” finner sted som følger samme struktur som ” Fase1” men den tidligere ikke-paret hovedrommet er nå forbundet med lysstimulering. Som i tilfelle av “Fase 1“, de to stimulering økter etterfølges av en “CR” økt. Den “Reversering Fase” brukes til å bekrefte at oppførselen til musen er betinget av optogenetisk stimulering og ikke relatert til tilfeldige parametere. Hver økt i RT-PP-eksperimentet må programmeres separat i sporingsprogramvaren. Gjeldende protokoll beskriver slike innstillinger i en bestemt programvare, men annen sporingsprogramvare som kan sende transistor-transistor-logic (TTL) modulasjonssignaler til lyskilden, kan brukes.
Den andre protokollen beskriver et nytt oppsett kalt Neutral Compartment Preference (NCP) paradigme. Denne modifiserte protokollen til RT-PP utnytter den lille størrelsen og gjennomsiktigheten til tilkoblingskorridoren som naturlig unngås av musen på grunn av sin smale og gjennomsiktige sammensetning. Ved å parre begge hovedrommene med lysstimulering og bare forlate korridoren fri for lysstimulering, kan NCP-oppsettet brukes til å teste om optogenetisk stimulering vil tvinge musen til å tilbringe mer tid i korridoren for å unngå å motta optogenetisk stimulering. Ved å sammenligne tiden som brukes i de to lysparede rommene med tiden som brukes i korridoren, kan en verifisering av optogenetisk indusert aversjon gjøres. NCP-eksperimentet består av to påfølgende daglige økter hvor optogenetikkmus får stimulering (30 min hver) for å måle preferanse i sanntid, og en laserfri økt (15 min) for å vurdere betingede svar på samme måte som de i RT-PP Protokollen.
RT-PP- og NCP-protokollene nedenfor ble nylig validert i laboratoriet vårt i studien av hvordan ulike typer nevroner som ligger i ventraltegmentalområdet (VTA) er involvert i ulike aspekter av belønningsrelatert atferd12. Her, for å eksemplifisere gjennomføringen av RT-PP- og NCP-protokollene, ble dopamintransportør (DAT) -Cre19 og vesikulær glutamattransportør 2 (VGLUT2)-Cre20 transgene mus stereotaktisk injisert med AAV som bærer en floxed channelrhodopsin2 (ChR2) DNA-konstruksjon inn i VTA hvorpå en optisk fiber ble implantert over VTA. Atferdsresponser oppnådd ved analyse av disse musene ved hjelp av de medfølgende RT-PP- og NCP-protokollene viser hvordan aktivering av dopaminerge og glutamaterge nevroner i VTA fører til forskjellige atferdsresponser (figur 1).
Trinnvise protokoller for RT-PP- og NCP-paradigmer er utstyrt med informasjon som spenner fra genotyping av transgene mus, stereotaxic virale injeksjoner og fiberoptikk plassering, til programmering av sporingsprogramvare for laserkontroll og atferdsmessig Vurdering. I tillegg diskuteres forslag til endringer av protokollen når det gjelder stimuleringsparametere og eksperimentelle aspekter som kan påvirke det vitenskapelige resultatet. Mens protokoller er beskrevet i sammenheng med VTA, kan de brukes på ethvilket som helst hjerneområde eller nevronal populasjon, forutsatt at de relevante optogenetikkverktøyene, som relevante Cre-driver og floxed opsins, er tilgjengelige.
I den nåværende studien presenterer vi to trinnvise protokoller for hvordan du utfører ulike typer stedpreferanseanalyser ved hjelp av optogenetikk hos mus. Protokollene skissert ble brukt til å vurdere den givende eller aversive atferdsfenotypene til VTA nevroner (Figur 1 og Figur 6)12, men kan også brukes til å utforske nevronenes atferdsrolle i andre hjerneregioner.
Flere nyere studier har beskrevet RT-PP paradigmer i to-kupé23,24 og tre-kupé apparater13,14,15,16,17,18. De nåværende protokollene beskriver detaljerte oppsett for RT-PP- og NCP-protokollene i et tredelt apparat som ligner de som tradisjonelt brukes i CPP-eksperimenter for å vurdere atferdseffekter ved administrering av misbruksstoffer. Mens resultatene bare presenteres her som prosentandelen av tiden musen tilbrakte i hvert rom, tillater sporingsprogramvaren for analyse av flere andre atferdsparametere, for eksempel overganger til soner, hastighet, tid brukt immobile og mer. Analyse av ulike parametere kan være av betydning for tolkningen av data.
De nåværende RT-PP-protokollene er fleksible og kan endres for å teste om ulike typer stimuleringsmønstre har givende effekter. Parametrene for laserkontroll kan enkelt endres enten gjennom skriptet til mikrokontrollerkortet eller i sporingsprogramvaren, noe som viser allsidigheten til oppsettet. Vi foreslår en 20 Hz stimuleringsfrekvens som er innenfor området, og noen ganger lavere, av frekvenser som brukes i tidligere studier ved hjelp av samme opsin-variant (ChR2/H134R) for å studere dopaminerge og glutamatergiske nevroner og deres terminaler13,14,16,17,18,23,24,25,26,27. Nyere studier har vist at høyere stimuleringsfrekvenser kan ha motsatteffekter på atferd enn lavere, og at disse effektene er mediert gjennom en depolariseringsblokk forårsaket av høyere frekvenser28. Tilsvarende har forskjeller i atferdsutgang blitt vist når stimulerende glutamatergic og GABAergic nevroner i det laterale preoptiske området15. Disse studiene undersøkte nevroner av forskjellige områder enn VTA og de største effektene ble observert på høye frekvenser av ikke-glutamatergiske nevroner15,28. Vårt valg på 20 Hz er basert på tidligere studier av glutamatergic og dopaminerge VTA nevroner som viser at ved varierende stimuleringfrekvenser, belønningsrelatert atferdsproduksjon er ikke signifikant endret24,26.
En ekstra parameter som kan justeres og som kan påvirke det eksperimentelle resultatet, er lyskildens kraft. Høyere laserkraft kan øke størrelsen på det lysstimulerte området, noe som kan være gunstig i enkelte typer eksperimenter, men med ulempen med en økning i temperatur5. Faktisk har en nylig studie vist at laserinduserte økninger i temperaturen kan endre hjernefysiologi og påvirke atferdsmålinger29. Disse observasjonene understreker viktigheten av å inkludere opsin-negative kontroller i eksperimentell design. I den nåværende protokollen brukte vi 10 mW laserkraft som er lik og har tidligere vist seg å være effektive i å stimulere dopaminerge og glutamaterge nevroner i VTA16,24,26. Når du setter opp eksperimenter, er det viktig å ta hensyn til størrelsen på området der cellene av interesse er plassert og fiberoptikk og patch ledning egenskaper (numerisk blenderåpning, kjernediameter). Disse parametrene er avgjørende for å ta hensyn til når du utfører beregninger knyttet til laserkraft. For detaljer kan kalkulatoren utviklet av Karl Deisseroths laboratorium (http://web.stanford.edu/group/dlab/cgi-bin/graph/chart.php) brukes.
Histologisk verifisering av Cre-Lox recombination er et annet kritisk aspekt når du bruker optogenetics eksperimenter. Validering av rekombinasjonseffektiviteten bør alltid foregå i en pilotkohort før initieringen av atferdseksperimenter hos en stor gruppe dyr. Dette er viktig av etiske grunner, men også for optimalisert eksperimentell produksjon. Hver viral konstruksjon kan vise variabel spesifisitet for forskjellige nevronale typer og i forskjellige regioner5, en parameter som kan påvirke eksperimentene på uforutsigbare og til og med villedende måter. For eksempel har vi tidligere validert Cre-Lox rekombinasjonsmønsteret til AAV5-virus i VTA av DAT-Cre-mus og funnet at ensidige injeksjoner var tilstrekkelige til å målrette mesteparten av interesseområdet. Da vi deretter studerte romlig begrensede underpopulasjoner i VTA, for eksempel en preget av NeuroD6-uttrykk, observerte vi at bilaterale virale injeksjoner var mer effektive for å målrette større antall nevroner som gir mer uttalt atferdseffekter på optogenetisk lysstimulering12. Videre må tiden fra kirurgi til initiering av atferdseksperimenter tas opp nøye. To uker er nok tid for en ChR2 DNA konstruksjon til å bli uttrykt i cellelegemer som vi viser her, men lengre ventetider (~ 8 uker) kan være nødvendig hvis etterforskeren tester effekten av stimulering i projeksjon ser ut til å bli uttrykt i projeksjonsområder13,14,15,17.
Det er verdt å merke seg at volumet av virus injisert (i vårt tilfelle 300 nL) kan være egnet når du studerer nevroner i VTA, men volum og titer må justeres avhengig av effektiviteten av transduksjon og størrelsen på strukturen studert. I tillegg, for bilaterale strukturer som ligger i en avstand fra mediolateral akse, kan det være nødvendig å utføre bilaterale injeksjoner, og å også implantere fiberoptikk bilateralt for å sikre aktivering / hemming i begge halvkuler.
Til slutt er det alltid nødvendig å utføre post-mortem histologisk analyse for å validere og bekrefte effektiviteten av Cre-Lox-rekombinasjonen og for å verifisere riktig implantasjonssted for optisk fiber på det tiltenkte stedet. Uventet, overbegrenset eller overdreven Cre-Lox-rekombinasjon kan oppstå på grunn av ukjent distribusjon av nevroner som uttrykker Cre utenfor grensene til det tiltenkte området, eller på grunn av forskjeller i virusserotypen, dårlig håndtering av viruset, tilstopping av sprøyte for viruslevering eller andre operasjonsrelaterte problemer. Verifisering av tilfredsstillende Cre-Lox rekombinasjon og korrekt fiberoptikk-implantasjon må utføres for å bekrefte eventuelle statistiske resultater av atferdsvurderinger for å trekke sikre konklusjoner.
Når det gjelder dataene som er gitt her som eksempler på hvordan de to atferdsparadigmene kan brukes, var den betydelige preferansen til den lysparede siden oppnådd ved optogenetisk stimulering av dopaminerge nevroner i VTA ved å analysere DAT-Cre-mus i RT-PP-paradigmet forventet basert på tidligere funn23,24,25,26,27 mens unngåelse av denne siden vist av VGLUT2-Cre-musene ikke var forventet. VGLUT2 nevroner av VTA og deres anslag har vist seg å være involvert i både belønning og aversjon16,17,24,30,31, og vi derfor utført NCP analyse for å vurdere den tilsynelatende unngåelse atferd observert i dagens RT-PP oppsett i mer detalj. Ved å bruke den smale, gjennomsiktige korridoren som det eneste ikke-lette paret rommet for å bekrefte de aversive egenskapene til stimulering av VTA glutamatergic nevroner, er det tydelig at i denne spesielle tre-kupé oppsett, optogenetisk aktivering av disse nevronene forårsaker en aversiv respons. Disse eksperimentene, som ble vist her for å eksemplifisere situasjoner som kan ha nytte av å bruke både RT-PP- og NCP-protokollene, var en del av en nylig publisert studie, og det fullstendige datasettet samt diskusjoner om disse funnene finnes i denne publikasjonen12.
I tillegg til NCP, alternative måter å bekrefte aversjon inkluderer sterk belysning av et område innenfor et åpent feltområde mens du parer resten av arenaen til laseraktivering, eller utføre en aktiv unngåelse oppgave der musen må utføre et bestemt mønster av atferd for å avslutte laserstimulering15.
For å oppsummere, protokollene beskrevet gi kritisk informasjon om hvordan du klarer å utføre RT-PP og NCP analyse på den mest effektive måten for å løse rollen som nevronal aktivering i belønning og aversjon. Avhengig av den vitenskapelige hypotesen kan en rekke parametere analyseres ved hjelp av disse protokollene, og hver protokoll kan også kombineres med andre validerte paradigmer for optimaliserte atferdsanalyser som implementerer optogenetikk for å adressere spesifikk hjerne områder og nevroner av interesse.
The authors have nothing to disclose.
Våre finansieringskilder er takknemlige: Uppsala universitet, Vetenskapsrådet,Hjärnfonden, Parkinsonfonden, Forskningsstiftelsene i Bertil Hållsten, OE&Edla Johansson, Zoologisk Forskning og Åhlén. Dyr ble holdt ved Uppsala universitet og eksperimenter ble utført ved Uppsala Universitet Atferdsanlegg.
AAV-Cre dependent virus | UNC Vector Core | – | a great variety of viruses to suit any project's needs |
Agarose | VWR Life Science | 443666A | |
Buffer for PCR | KAPA BIOSYSTEMS | KB1003 | 10x, contains 1.5mM MgCl2 at 1x |
Bupivacaine (Marcain) | Aspen | N01BB01 | local anesthetic, 5 mg/ml solution, requires prescription |
Carprofen (Norocarp) | N-Vet | 27636 | anti-inflammatory, analgesic; 50 mg/ml solution, requires prescription |
dNTP set | Thermo Fisher Scientific | R0181 | 100mM, have to be dilluted to 10mM and mixed |
DNA ladder | Thermo Fisher Scientific | SM0243 | 100 bp, 50 μg Gene Ruler |
DNA loading dye | Thermo Fisher Scientific | R0611 | 6x, dilute to 1x before using |
Ear puncher | AgnThos | AT7000 | ear puncher to take tissue samples for PCR or to mark animals |
Fiberoptic patchcords | Doric Lenses | MFP_200/240/900-0.22_1m_FC-ZF1.25 | |
Implantable fiberoptics | Doric Lenses | MFC_200/245-0.37_5mm_ZF1.25_FLT | the properties of the fibers might change depending on the experiment |
Infusion pump for virus injections | AgnThos | Legato 130 | contains remote pump to secure the syringe directly on the stereotexi frame |
Isoflurane (Forane) | Baxter | N01AB06 | Volatile anesthetic, requires prescription |
Jewelry screws | AgnThos | MCS1x2 | |
Laser source | Marwell Laser Systems | CNI MBL-III-473-100mW | |
Microcontroller board | Arduino | "Uno" board | can be ordered from several companies |
Microdrill | AgnThos | 1474 | could be ordered with or without stereotaxic holder |
Needle (34G) | World Precision Instruments | NF36BV | |
Nucleic Acid gel stain – GelRed | Biotium | 41003-T | |
PCR tubes | Axygen | PCR-0208-CP-C | |
Power meter | Thorlabs | PM100D | |
Place Preference Apparatus | Panlab | 76-0278 | |
Rotary joint | Doric Lenses | FRJ_1x1_FC-FC | |
Sleeves | Doric Lenses | SLEEVE_ZR_1-25 | mating sleeve to connect the patchcord with the implanted optic fiber |
Stabilization cement | Ivoclar Vivadent | Tetric EvoFlow | |
Syringe (10ul) | World Precision Instruments | NanoFil | |
Taq polymerase | KAPA BIOSYSTEMS | KE1000 | 500U |
TAE buffer | Omega BIO-TEK | SKU:AC10089 | 50x concentration, has to be dilluted before use |
Thermal cycler | BIO-RAD S1000 | 1852148 | necessary to perfrom PCR reactions |
Tissue glue | AgnThos | Vetbond | |
Tracking software | Noldus | Ethovision XT | |
TTL box | Noldus | Noldus USB-IO box | |
UV transilluminator | Azure Biosystems | c200 model |