Her præsenterer vi to nemme at følge trin-for-trin protokoller for sted præference paradigmer ved hjælp af optogenetik i mus. Ved hjælp af disse to forskellige opsætninger, præference og undgåelse adfærd kan vurderes solidt inden for samme apparat med høj rumlig og tidsmæssige selektivitet, og i en enkel måde.
Forstå, hvordan neuronal aktivering fører til specifikke adfærdsmæssige output er afgørende for moderne neurovidenskab. Kombinere optogenetik i gnavere med adfærdsmæssige test i validerede paradigmer giver mulighed for måling af adfærdsmæssige konsekvenser ved stimulering af forskellige neuroner i realtid med høj rumlig og tidsmæssige selektivitet, og dermed etablering af årsagssammenhænge mellem neuronal aktivering og adfærd. Her beskriver vi en trin-for-trin protokol for en real-time sted præference (RT-PP) paradigme, en modificeret version af den klassiske betinget sted præference (CPP) test. RT-PP udføres i et apparat med tre rum og kan anvendes til at svare, hvis optogenetisk stimulering af en bestemt neuronal population er givende eller aversive. Vi beskriver også en alternativ version af RT-PP-protokollen, den såkaldte neutrale rumpræferenceprotokol (NCP), som kan bruges til at bekræfte aversion. De to tilgange er baseret på udvidelser af klassisk metode, der stammer fra adfærdsmæssige farmakologi og nylige gennemførelse af optogenetik inden for neurovidenskab området. Bortset fra at måle sted præference i realtid, kan disse opsætninger også give oplysninger om konditioneret adfærd. Vi leverer protokoller, der er nemme at følge trin for trin sammen med eksempler på vores egne data, og diskuterer vigtige aspekter, der skal overvejes, når de anvender disse typer eksperimenter.
Gennemførelsen af optogenetik, en moderne neurovidenskab eksperimentelle værktøj, hvor lyset bruges til at kontrollere neuronal aktivitet, har i de seneste år ført til store fremskridt i forståelsen af, hvordan specifikke neuronale populationer indvirkning adfærd1,2,3. Optogenetiks fremragende rumlige og tidsmæssige selektivitet gør det muligt at etablere årsagssammenhænge mellem excitation eller hæmning af cellegrupper af interesse og adfærdsmæssige output2,3. Rumlig selektivitet i optogenetik er almindeligt sikret gennem Cre-Lox system, hvor aktiviteten af Cre recombinase fører til en rekombination af eventuelle DNA-sekvenser til stede mellem Lox steder, såkaldte floxed alleler (flankeret af lox sites)4. Målet med at bruge Cre-Lox-systemet i optogenetik er at opnå udtryk for alleler, der koder optogenetiske opsins i specifikke neuroner af interesse, mens de omkringliggende neuroner er blottet for udtryk. Opsins er lysfølsomme proteiner, der ved lys-stimulation af specifikke bølge-længde tillade ion flow, der påvirker neurale ophidselse eller påvirke cellulære funktioner ved at modulere downstream effector veje. Nye varianter af opsins, der adskiller sig i aktion (excitatoriske, hæmmende, modulerende), mekanisme, aktivering af lys bølgelængde og kinetik egenskaber5 er løbende ved at blive udviklet for at opfylde behovene hos specifikke eksperimentelle tilgange. Med hensyn til ophidselse, ved hjælp af en depolariserende eller hyperpolariserende opsin dikterer aktiviteten af neuroner (excitation eller hæmning, henholdsvis) ved lys-stimulation på en bestemt bølgelængde leveret ind i hjernen3.
Selektiv promotoraktivitet dirigerer udtryk for Cre rekombinase til neuroner af interesse. Ved at gennemføre en floxed allel af opsin af interesse, vil Cre-medieret rekombination sikre, at opsin selektivt udtrykkes i neuroner, co-express Cre rekombinase3,6. Denne brug af dobbelt transgenics til direkte rumlig selektivitet har vist sig meget effektiv i optogenetik. Således, mens lys-stimulation til at aktivere opsins er bredt leveret gennem en intracerebralt implanteret optisk fiber forbundet til en lyskilde (LED eller laser)3,kun neuroner udtrykke både Cre rekombinase og floxed opsin allel vil reagere på denne stimulation. Cre-Lox-systemet i gnavere kan opnås på forskellige måder ved kun at anvende transgene (både Cre rekombinase og den floxed opsin konstruktion er kodet i transgene dyr), kun virale injektioner (DNA konstruktioner til Cre rekombinase og floxed opsin leveres begge via en viral luftfartsselskab), eller en kombination af de to (f.eks. Cre rekombinase er kodet af et transgent dyr, som injiceres med en virus, der bærer den floxed opsin konstruktion)5. Den floxed opsin DNA konstruktion er normalt klonet i ramme med en reporter gen for at muliggøre visualisering af Cre-medieret rekombination i væv sektioner. Mens optogenetik også kan udføres hos rotter, de præsenterede protokoller er blevet genereret for mus. For nemheds skyld vil mus, der bærer både Cre rekombinase og den floxed opsin, blive omtalt som “optogenetikmus”. I de protokoller, der er beskrevet nedenfor, er optogenetik mus blevet genereret af en blandet transgenic (Cre rekombinase under kontrol af to forskellige initiativtagere) og viral (ved hjælp af en adeno-associeret virus, AAV, at levere floxed opsin DNA konstruktion – i vores tilfælde ChR2/H134R) tilgang. Opnåelse og vedligeholdelse af transgene muselinjer er en væsentlig del af metoden. Cre-driver og floxed opsin transgene mus kan produceres til hvert formål, eller købes, hvis kommercielt tilgængelige, som kan en række vira transporterer DNA-sekvenser kodning Cre rekombinase og floxed opsins i forskellige former.
Optogenetik kombineret med adfærdsmæssige test har vist sig at være et værdifuldt redskab til at studere den rolle, forskellige hjerne regioner, eller diskrete neuronale populationer, i bestemte typer af adfærd. I forbindelse med belønning-relateret adfærd, optogenetics har gjort det muligt at kontrollere tidligere resultater inden for adfærdsmæssige farmakologi og eksperimentel psykologi, og også tilladt et nyt niveau af spatio-tidsmæssigt relevant dissektion i, hvordan visse neuroner påvirker adfærd. En metode, der er blevet brugt i flere undersøgelser til at vurdere belønning-relaterede adfærd er en modificeret version af den klassiske metode kendt som Conditioned Place Preference (CPP). Klassisk CPP er blevet brugt til at vurdere de givende eller aversive egenskaber af narkotika af misbrug gennem deres evne til at fremkalde Pavlovian foreninger med signaler af miljøet7,8. I Pavlovian vilkår, stoffet er en uinstrueret stimulus, da det kan fremkalde tilgang eller tilbagetrækning, hvis det er givende eller aversive, henholdsvis. Kontinuerlig parring af lægemidlet med forskellige neutrale stimuli, der selv ikke fremkalde nogen reaktion, kan føre til tilgang eller tilbagetrækning blot ved præsentationen af den tidligere neutrale, men efter parring, såkaldte konditionerede stimuli9. CPP-analyse udføres normalt i et apparat, der indeholder to rum af samme størrelse, men hvor hvert rum defineres ved forskellige egenskaber, såsom gulvtekstur, vægmønstre og belysning (neutrale stimuli). De to rum er forbundet enten af en korridor eller en åbning mellem rummene. Under konditionering, emnet, normalt en lille gnaver, modtager passive injektioner af et lægemiddel, mens begrænset til en af de to vigtigste rum og saltvand, mens begrænset til det andet rum. De givende virkninger af lægemidlet vurderes efterfølgende i en stoffri session, når emnet får lov til frit at udforske hele apparatet. Den tid, der blev brugt i det tidligere stofparrede rum (den konditionerede respons), anses for at afspejle pavloviske læringsmekanismer, der formidles mellem lægemidlets givende virkninger og de signaler i rummet, der er forbundet med dets administration (konditionerede stimuli). Hvis dyret tilbringer mere tid i det stof-parret rum, stoffet har induceret en betinget sted præference, hvilket betyder, at det har givende virkninger på adfærd. På den anden side, hvis stoffet opfattes som aversive, dyret vil undgå narkotika-parret rum og tilbringe mere tid i saltvand-parret rum, der angiver konditioneret sted aversion (CPA)8,9,10,11.
Da optogenetik kan gennemføres for at kontrollere neuronal aktivitet i “real-time”, brugen af en adfærdsmæssig paradigme svarende til, men adskiller sig fra, CPP setup giver mulighed for måling af sted præference ved direkte neuronal aktivering. Optogenetik-drevet analyse af sted præference er derfor ofte omtales som en real-time sted præference (RT-PP) analyse paradigme. I RT-PP paradigme, optogenetisk stimulation af forskellige neuroner via Cre-Lox system erstatter den systemiske levering af et lægemiddel udført i den klassiske CPP, således at RT-PP paradigme i stedet foranstaltninger, hvis optogenetisk induceret neuronal stimulation er opfattes som givende eller aversive. Den nuværende beskrivelse vil fokusere på optogenetik mus, men også optogenetik rotter kan testes ved hjælp af lignende protokoller.
I stedet for konditionering til et rum ad gangen som i den klassiske CPP paradigme, optogenetics mus i RT-PP paradigme får lov til at bevæge sig frit i hele apparatet og adfærd registreres i hele sessionen. Adgang til et af rummene er parret med intrakraniel lys-stimulation. Under passende lys stimulation parametre, neuroner, der udtrykker en excitatoriske opsin vil dermed blive aktiveret. Hvis lysstimuleringen opfattes som givende, forbliver optogenetikmusen i det lysparrede rum, mens hvis lysstimuleringen opfattes som aversive, vil musen forlade rummet for at undslippe stimuleringen. Denne type analyse giver mulighed for at vurdere betinget læring: Motivet kan udløse lys-stimulation og dermed neuronal aktivering ved at komme ind i et rum, og stoppe stimulering ved at forlade rummet, svarende til løftestang-presning under en instrumental opgave. Desuden kan associative læringsmekanismer vurderes under efterfølgende sessioner, hvor den tid, der tilbringes i hvert rum, måles i mangel af stimulering. På denne måde, forskeren kan adskille mellem de umiddelbart givende virkninger ved stimulering af neuroner af interesse og associative hukommelse dannelse relateret til det12.
I den aktuelle undersøgelse beskriver vi to trin-for-trin setup protokoller for optogenetics-drevet sted præference adfærd frit bevægende mus. Den første protokol beskriver RT-PP inden for et apparat med tre segmenter og er blevet skitseret på grundlag af de protokoller , som Root og kollegerne 13 og andre forfattere har fremlagt12,14,15,16,17,18. Forsøget består af to faser, der omfatter flere daglige sessioner (vist i figur 1A). Hver session er designet til forskellige formål, og parametrene for koblingsstimulering med et rum ændres i overensstemmelse hermed. Den første session, “Pretest“, bruges til at vurdere den første præference af emnet til en af rummene. Under forbindelsen til plasterledningen kan motivet frit udforske apparatet uden stimulering i 15 min. Hvis den oprindelige præference for et enkelt rum er mere end 80%, er musen udelukket fra analysen, da den oprindelige sidebias kan skævvride analysen. Efter “Pretest” begynder “fase 1″. Den første del består af to på hinanden følgende, daglige, 30 min sessioner af “RT-PP“. Under “Fase 1” er den optogenetiske mus forbundet til laserkilden gennem plasterledningen og placeret i arenaen for frit at udforske den. Musen modtager intrakraniel laserstimulation ved indgangen til et af de vigtigste rum. Piloteksperimenter kan udføres for at afgøre, hvilket rum der skal tildeles som laserparrede, og hvilke der som ikke-parrede. Hvis stimuleringen viser sig at være givende, kobles laseren til det mindst foretrukne rum under “Pretest” og til det mest foretrukne, hvis stimuleringen er aversive. Således følger den præsenterede RT-PP protokol et forudindtaget design i den forstand, at laser stimulation ikke er tilfældigt tildelt nogen af de to vigtigste rum (upartisk design), men er valgt for at undgå enhver indledende præference for musen. Adgang til det andet hovedrum eller det neutrale rum, der forbinder de to hovedrum, giver ikke anledning til intrakraniel lysstimulering og er derfor ikke lysparret. Disse sessioner giver mulighed for real-time vurdering af de givende eller aversive egenskaber stimulation af specifikke neuronale populationer. På den sidste dag i “Fase 1” finder en 15 min session uden stimulering sted. Denne session tjener til at løse betingede svar (“CR“),som skyldes associativ læring mellem stimulering og miljø, hvor den blev modtaget. Mindst tre dage efter “Fase 1” finder “Tilbageførselsfasen” sted, som følger samme struktur som “Fase 1“, men det tidligere ikke-parrede hovedrum er nu parret med let stimulering. Som det er tilfældet med “Fase 1“, efterfølges de to stimuleringssessioner af en ” CR”-session. “Tilbageførselsfasen” bruges til at bekræfte, at musens adfærd er betinget af optogenetisk stimulation og ikke relateret til tilfældige parametre. Hver session af RT-PP eksperimentet skal programmeres separat i tracking-softwaren. Den aktuelle protokol beskriver sådanne indstillinger i en bestemt software, men enhver anden tracking software i stand til at sende transistor-transistor-logik (TTL) modulering signaler til lyskilden kan bruges.
Den anden protokol beskriver en ny opsætning kaldes Neutral Compartment Preference (NCP) paradigme. Denne ændrede protokol for RT-PP udnytter den lille størrelse og gennemsigtighed i forbindelseskorridoren, som naturligvis undgås af musen på grund af dens smalle og gennemsigtige sammensætning. Ved at parre begge hovedrum med lysstimulering og kun lade korridoren være fri for lysstimulering kan NCP-opsætningen bruges til at teste, om den optogenetiske stimulation vil tvinge musen til at bruge mere tid i korridoren for at undgå at modtage optogenetisk stimulation. Ved at sammenligne den tid, der bruges i de to lysparrede rum, med den tid, der tilbringes i korridoren, kan der foretages en kontrol af optogenetisk induceret aversion. NCP-eksperimentet består af to på hinanden følgende daglige sessioner, hvor optogenetikmus får stimulering (30 min hver) til at måle præference i realtid, og en laserfri session (15 min) til at vurdere betingede reaktioner på samme måde som dem i RT-PP Protokollen.
RT-PP og NCP protokoller nedenfor blev for nylig valideret i vores laboratorium i studiet af, hvordan forskellige typer af neuroner placeret i ventrale tegmental område (VTA) er involveret i forskellige aspekter af belønning-relateret adfærd12. Her, for at eksemplificere gennemførelsen af RT-PP og NCP protokoller, dopamin transportør (DAT)-Cre19 og vesikulære glutamat transporter 2 (VGLUT2)-Cre20 transgene mus blev stereotaktisk injiceret med AAV transporterer en floxed channelrhodopsin2 (ChR2) DNA konstruere i VTA hvorefter en optisk fiber blev implanteret over VTA. Adfærdsmæssige reaktioner opnået ved analyse af disse mus ved hjælp af de medfølgende RT-PP og NCP protokoller viser, hvordan aktivering af dopaminerge og glutamaterge neuroner i VTA fører til forskellige adfærdsmæssige reaktioner(Figur 1).
Trin-for-trin protokoller for RT-PP og NCP paradigmer er forsynet med oplysninger lige fra genoyping af transgene mus, stereotaxiske virale injektioner og fiberoptiske placering, til programmering af tracking software til laser-kontrol og adfærdsmæssige Vurdering. Desuden drøftes forslag til ændringer af protokollen med hensyn til stimuleringsparametre og eksperimentelle aspekter, der kan påvirke det videnskabelige resultat. Mens protokoller er beskrevet i forbindelse med VTA, kan de anvendes på enhver hjerne område eller neuronal befolkning, forudsat de relevante optogenetics værktøjer, såsom relevante Cre-driver og floxed opsins, er tilgængelige.
I den aktuelle undersøgelse præsenterer vi to trin-for trin protokoller om, hvordan man udfører forskellige typer af sted præference analyser ved hjælp af optogenetik i mus. De skitserede protokoller blev brugt til at vurdere den givende eller aversive adfærdsmæssige fænotyper af VTA neuroner(Figur 1 og figur 6)12, men kan udnyttes til at udforske den adfærdsmæssige rolle neuroner i andre hjerne regioner samt.
Flere nylige undersøgelser har beskrevet RT-PP paradigmer i to-rum23,24 og tre-rum apparater13,14,15,16,17,18. De nuværende protokoller beskriver detaljerede opsætninger for RT-PP og NCP protokoller i en tre-rum apparat ligner dem, der traditionelt anvendes i CPP eksperimenter til at vurdere adfærdsmæssige virkninger på administration af narkotika af misbrug. Mens resultaterne kun præsenteres her som den procentdel af tid musen brugt i hvert rum, tracking software gør det muligt for analyse af flere andre adfærdsmæssige parametre, såsom overgange til zoner, hastighed, tid brugt immobile og meget mere. Analyse af forskellige parametre kan være af betydning for fortolkningen af data.
De nuværende RT-PP protokoller er fleksible og kan ændres for at teste, om forskellige typer af stimulation mønstre har givende effekter. Parametrene for laserkontrol kan nemt ændres enten gennem scriptet på microcontroller bord eller inden for tracking software, der viser alsidigheden i opsætningen. Vi foreslår en 20 Hz stimulation frekvens, som er inden for området, og undertiden lavere, af frekvenser anvendes i tidligere undersøgelser ved hjælp af samme opsin variant (ChR2/H134R) til at studere dopaminerge og glutamatergic neuroner og deres terminaler13,14,16,17,18,23,24,25,26,27. Nylige undersøgelser har vist, at højere stimulation frekvenser kan have den modsatte effekt på adfærd end lavere, og at disse virkninger er medieret gennem en depolarisering blok forårsaget af højere frekvenser28. Tilsvarende, forskelle i adfærdsmæssige output er blevet vist, når stimulere glutamatergic og GABAergic neuroner i den laterale præoptiske område15. Disse undersøgelser undersøgte neuroner i forskellige områder end VTA og de største virkninger blev observeret på høje frekvenser af ikke-glutamatergic neuroner15,28. Vores valg på 20 Hz er baseret på tidligere undersøgelser af glutamatergic og dopaminerge VTA neuroner viser, at ved varierende stimulation frekvenser, belønning-relaterede adfærdsmæssige output er ikke væsentligt ændret24,26.
En yderligere parameter, der kan justeres, og som kan påvirke det eksperimentelle resultat, er lyskildens kraft. Højere lasereffekt kan øge størrelsen af det lysstimulerede område, hvilket kan være gavnligt i nogle typer eksperimenter, men med ulempen ved en stigning i temperatur5. Faktisk, en nylig undersøgelse har vist, at laser-induceret stigninger i temperaturen kan ændre hjernens fysiologi og påvirke adfærdsmæssige målinger29. Disse observationer understreger betydningen af at medtage opsinnegative kontroller i forsøgsdesignet. I den nuværende protokol, Vi brugte 10 mW laser magt, der er ens og har tidligere vist sig at være effektiv til at stimulere dopaminerge og glutamatergic neuroner i VTA16,24,26. Ved opsætning af eksperimenter, er det vigtigt at være opmærksom på størrelsen af det område, hvor cellerne af interesse er placeret, og fiber-optik og patch ledning egenskaber (numerisk blænde, kerne diameter). Disse parametre er afgørende for at tage hensyn til, når du udfører beregninger relateret til lasereffekt. For detaljer, kan regnemaskinen udviklet af Karl Deisseroth’s lab (http://web.stanford.edu/group/dlab/cgi-bin/graph/chart.php) bruges.
Histologisk verifikation af Cre-Lox rekombination er et andet kritisk aspekt, når du anvender optogenetics eksperimenter. Validering af rekombinationseffektiviteten bør altid finde sted i en pilotkohorte, før der iværksættes adfærdseksperimenter hos en stor gruppe dyr. Dette er vigtigt af etiske årsager, men også for optimeret eksperimentel output. Hver viral konstruktion kan vise variabel specificitet for forskellige neuronal typer og i forskellige regioner5, en parameter, der kan påvirke eksperimenter i uforudsigelige og endda vildledende måder. For eksempel har vi tidligere valideret Cre-Lox-rekombinationsmønstret for AAV5-vira i VTA af DAT-Cre-mus og konstateret, at ensidige injektioner var tilstrækkelige til at målrette størstedelen af interesseområdet. Da vi derefter studerede rumligt begrænsede underpopulationer inden for VTA, såsom en karakteriseret ved NeuroD6 udtryk, bemærkede vi, at bilaterale virale injektioner var mere effektive til at målrette større antal neuroner giver mere udtalt adfærdsmæssige virkninger på optogenetiske lys-stimulation12. Desuden skal tiden fra operation til indledning af adfærdseksperimenter behandles omhyggeligt. To uger er nok tid til en ChR2 DNA konstruktion, der skal udtrykkes i celle organer, som vi viser her, men længere ventetider (~ 8 uger) kan være nødvendig, hvis investigator tester effekten af stimulation i projektion områder13,14,15,17.
Det er værd at bemærke, at mængden af virus injiceres (i vores tilfælde 300 nL) kan være egnet, når de studerer neuroner i VTA, men volumen og titer skal justeres afhængigt af effektiviteten af transduktion og størrelsen af den undersøgte struktur. For bilaterale strukturer, der er placeret i en afstand fra den mediolaterale akse, kan det desuden være nødvendigt at foretage bilaterale injektioner og også implantere fibertikere bilateralt for at sikre aktivering/hæmning på begge halvkugler.
Endelig er det altid nødvendigt at udføre post-mortem histologisk analyse for at validere og bekræfte effektiviteten af Cre-Lox rekombination og for at kontrollere den korrekte implantation site af den optiske fiber på det tilsigtede sted. Uventet, overbegrænset eller overdreven Cre-Lox-rekombination kan forekomme på grund af ukendt fordeling af neuroner, der udtrykker Cre uden for det tilsigtede områdes grænser, eller på grund af forskelle i virusserotypen, dårlig håndtering af virus, tilstopning af sprøjte til viruslevering eller andre operationsrelaterede problemer. Verifikation af tilfredsstillende Cre-Lox-rekombination og korrekt fiberoptisk implantation skal udføres for at bekræfte eventuelle statistiske resultater af adfærdsvurderingerne for at drage sikre konklusioner.
Med hensyn til de data, der leveres her som eksempler på, hvordan de to adfærdsmæssige paradigmer kan anvendes, den betydelige præference for den lys-parret side opnået ved optogenetisk stimulation af dopaminerge neuroner i VTA ved at analysere DAT-Cre mus i RT-PP paradigme var forventet baseret på tidligere resultater23,24,25,26,27, mens undgåelse af denne side vist af VGLUT2-Cre mus var ikke forventet. VGLUT2 neuroner af VTA og deres fremskrivninger har vist sig at være involveret i både belønning og aversion16,17,24,30,31, og vi har derfor udført NCP analyse for at vurdere den tilsyneladende undgåelse adfærd observeret i den nuværende RT-PP setup mere detaljeret. Ved at bruge den smalle, gennemsigtige korridor som den eneste ikke-lys parret rum for at bekræfte de aversive egenskaber stimulation af VTA glutamatergic neuroner, er det indlysende, at i denne særlige tre-rum setup, optogenetisk aktivering af disse neuroner forårsager en aversive reaktion. Disse forsøg, som her blev vist for at eksemplificere situationer, der kunne drage fordel af at bruge både RT-PP- og NCP-protokollerne, var en del af en nyligt offentliggjort undersøgelse, og det fuldstændige datasæt samt drøftelserne om disse resultater kan findes i denne publikation12.
Ud over NCP, alternative måder at bekræfte aversion omfatter den stærke belysning af et område inden for et åbent felt område, mens parring resten af arenaen til laser aktivering, eller udføre en aktiv undgåelse opgave, hvor musen er nødt til at udføre et bestemt mønster af adfærd til at opsige laser stimulation15.
For at opsummere, de beskrevne protokoller give kritiske oplysninger om, hvordan man med succes udføre RT-PP og NCP analyse på den mest effektive måde med henblik på at optrævle den rolle, neuronal aktivering i belønning og aversion. Afhængigt af den videnskabelige hypotese, en række parametre kan analyseres ved hjælp af disse protokoller, og hver protokol kan også kombineres med andre validerede paradigmer for optimerede adfærdsmæssige analyser gennemføre optogenetik til at løse specifikke hjerne områder og neuroner af interesse.
The authors have nothing to disclose.
Vores finansieringskilder anerkendes taknemmeligt: Uppsala Universitet, Vetenskapsrådet (Sveriges Forskningsråd), Hjärnfonden, Parkinsonfonden, Forskningsfonden for Bertil Hållsten, OE&Edla Johansson, Zoologisk Forskningsog Åhlén. Dyr blev holdt på Uppsala University og eksperimenter blev udført på Uppsala University Behavioral Facility.
AAV-Cre dependent virus | UNC Vector Core | – | a great variety of viruses to suit any project's needs |
Agarose | VWR Life Science | 443666A | |
Buffer for PCR | KAPA BIOSYSTEMS | KB1003 | 10x, contains 1.5mM MgCl2 at 1x |
Bupivacaine (Marcain) | Aspen | N01BB01 | local anesthetic, 5 mg/ml solution, requires prescription |
Carprofen (Norocarp) | N-Vet | 27636 | anti-inflammatory, analgesic; 50 mg/ml solution, requires prescription |
dNTP set | Thermo Fisher Scientific | R0181 | 100mM, have to be dilluted to 10mM and mixed |
DNA ladder | Thermo Fisher Scientific | SM0243 | 100 bp, 50 μg Gene Ruler |
DNA loading dye | Thermo Fisher Scientific | R0611 | 6x, dilute to 1x before using |
Ear puncher | AgnThos | AT7000 | ear puncher to take tissue samples for PCR or to mark animals |
Fiberoptic patchcords | Doric Lenses | MFP_200/240/900-0.22_1m_FC-ZF1.25 | |
Implantable fiberoptics | Doric Lenses | MFC_200/245-0.37_5mm_ZF1.25_FLT | the properties of the fibers might change depending on the experiment |
Infusion pump for virus injections | AgnThos | Legato 130 | contains remote pump to secure the syringe directly on the stereotexi frame |
Isoflurane (Forane) | Baxter | N01AB06 | Volatile anesthetic, requires prescription |
Jewelry screws | AgnThos | MCS1x2 | |
Laser source | Marwell Laser Systems | CNI MBL-III-473-100mW | |
Microcontroller board | Arduino | "Uno" board | can be ordered from several companies |
Microdrill | AgnThos | 1474 | could be ordered with or without stereotaxic holder |
Needle (34G) | World Precision Instruments | NF36BV | |
Nucleic Acid gel stain – GelRed | Biotium | 41003-T | |
PCR tubes | Axygen | PCR-0208-CP-C | |
Power meter | Thorlabs | PM100D | |
Place Preference Apparatus | Panlab | 76-0278 | |
Rotary joint | Doric Lenses | FRJ_1x1_FC-FC | |
Sleeves | Doric Lenses | SLEEVE_ZR_1-25 | mating sleeve to connect the patchcord with the implanted optic fiber |
Stabilization cement | Ivoclar Vivadent | Tetric EvoFlow | |
Syringe (10ul) | World Precision Instruments | NanoFil | |
Taq polymerase | KAPA BIOSYSTEMS | KE1000 | 500U |
TAE buffer | Omega BIO-TEK | SKU:AC10089 | 50x concentration, has to be dilluted before use |
Thermal cycler | BIO-RAD S1000 | 1852148 | necessary to perfrom PCR reactions |
Tissue glue | AgnThos | Vetbond | |
Tracking software | Noldus | Ethovision XT | |
TTL box | Noldus | Noldus USB-IO box | |
UV transilluminator | Azure Biosystems | c200 model |