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Immunology and Infection

चूहों में हेटेरोटोपिक हार्ट और कार्डियक मांसपेशी सेल प्रत्यारोपण के लिए एक इम्यूनोलॉजिकल मॉडल

Published: May 8, 2020 doi: 10.3791/60956
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1
1Regenerative Medicine and Experimental Surgery, Department of General, Visceral and Transplant Surgery, Hannover Medical School

Summary

हम चूहों में विषमता पेट हृदय प्रत्यारोपण के एक मॉडल का वर्णन करते हैं, जिसका अर्थ वर्तमान रणनीतियों में संशोधन होता है, जो एक सरलीकृत शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण का कारण बनते हैं। इसके अतिरिक्त, हम महत्वपूर्ण हृदय मांसपेशियों की कोशिकाओं के कान में इंजेक्शन द्वारा एक उपन्यास अस्वीकृति मॉडल का वर्णन करते हैं, जिससे चूहों में इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण को और अधिक प्रत्यारोपण की अनुमति होती है।

Abstract

चूहों में हेटेरोटोपिक हृदय प्रत्यारोपण 50 से अधिक वर्षों से विविध प्रतिरक्षा अध्ययनों के लिए आमतौर पर उपयोग किया जाने वाला मॉडल रहा है। 1964 में पहले विवरण के बाद से कई संशोधनों की सूचना दी गई है। चूहों में विषमचिकित्सा हृदय प्रत्यारोपण करने के 30 वर्षों के बाद, हमने एक सरलीकृत शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण विकसित किया है, जिसे आगे सर्जिकल प्रशिक्षण या पृष्ठभूमि के बिना आसानी से सिखाया और प्रदर्शन किया जा सकता है।

आरोही महाधमनी और फेफड़े की धमनी और बेहतर और अवर गुलाल और फेफड़े की नसों के लिगेशन के विच्छेदन के बाद, दाता दिल काटा जाता है और बाद में हेपरिन के साथ पूरक बर्फ-ठंडे खारा समाधान के साथ छिद्रित होता है। प्राप्तकर्ता पेट के जहाजों को क्लैंप िंग और चीरा लगाने के बाद, दाता आरोही महाधमनी और फेफड़े की धमनी को निरंतर चल रहे टांके का उपयोग करके क्रमशः प्राप्तकर्ता पेट महाधमनी और अवर वेना कावा के लिए एनास्टोमोस किया जाता है।

विभिन्न दाता-प्राप्तकर्ता संयोजनों के आधार पर, यह मॉडल एलोग्राफ्ट की तीव्र या पुरानी अस्वीकृति के विश्लेषण की अनुमति देता है। इस मॉडल के इम्यूनोलॉजिकल महत्व को महत्वपूर्ण हृदय की मांसपेशियों की कोशिकाओं के कान में इंजेक्शन के एक उपन्यास दृष्टिकोण और गर्भाशय ग्रीवा लिम्फेटिक ऊतक को निकालने के बाद के विश्लेषण से और बढ़ाया जाता है।

Introduction

हेटेरोटोपिक हार्ट प्रत्यारोपण प्रत्यारोपण सहिष्णुता, तीव्र और पुरानी एलोबेड़ा अस्वीकृति, इस्केमिया-रिपेरेफ्यूजन चोट, मशीन परेक या कार्डियक रिमॉडलिंग के बारे में विभिन्न जांचों के लिए अक्सर उपयोग किया जाने वाला प्रयोगात्मक मॉडल है। अन्य फायदों के अलावा, भ्रष्टाचार समारोह को टटोलने से गैर-आक्रामक रूप से निगरानी की जा सकती है और भ्रष्टाचार की विफलता से गुर्दे या यकृत जैसे अन्य अंगों के विपरीत प्राप्तकर्ता की महत्वपूर्ण हानि नहीं होती है।

१९६४ में, एबॉट एट अल शुरू में चूहों में विषमता पेट हृदय प्रत्यारोपण का वर्णन1। बाद में, 1966 में, अनास्तोमूसा के लिए एंड-टू-साइड तकनीक को टोमिता एट अल2द्वारा वर्णित किया गया था। वर्तमान में इस्तेमाल किए गए मॉडल की नींव ओनो और लिंडसे ने 19693में बताई थी। पिछले दशकों के दौरान, संयुक्त विषमता हृदय-फेफड़ों के प्रत्यारोपण,4,5,56सहित विभिन्न प्रकार के अनलोड, आंशिक रूप से लोड या लोडेड बाएं वेंट्रिकुलर हार्ट ग्राफ्ट बनाने के लिए कई संशोधन प्रकाशित किए गए हैं। इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण के लिए एक गैर मात्रा भरी हुई हृदय भ्रष्टाचार प्रत्यारोपण सबसे अधिक किया जाता है। इस मामले में, रक्त प्रवाह प्रतिगामी रूप से दाता आरोही महाधमनी और बाद में कोरोनरी धमनियों में प्रवेश करता है। वेनस ड्रेनेज कोरोनरी सिनस के साथ सही एट्रियम और वेंट्रिकल(चित्रा 1ए-बी)में होता है। इसलिए, बाएं वेंट्रिकल को रक्त प्रवाह से बाहर रखा गया है, इसके अलावा थेसियन नसों से रक्त की मामूली मात्रा के अलावा। यह बाएं वेंट्रिकुलर असिस्ट डिवाइस थेरेपी7के दौरान रोगविज्ञानी तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी मॉडल भी बनाता है।

चूहों, खरगोशों, सूअरों सहित विभिन्न प्रजातियों में हेटेरोटोपिक हृदय प्रत्यारोपण किया गया है और यहां तक कि मनुष्यों में एक विश्वविद्यालय या द्विप्रतिकार सहायता उपकरणकेरूप में उपयोग किया गया है8,99,10,,11। चूहा अभी भी प्रत्यारोपण मॉडल के लिए एक लोकप्रिय प्रयोगात्मक जानवर का प्रतिनिधित्व करता है, खासकर के बाद से विभिन्न चूहा तनाव संयोजनों के लिए भ्रष्टाचार अस्तित्व समय अतीत में अच्छी तरह से परिभाषित किया गया है और इम्यूनोलॉजिकल रिएजेंटों की एक बड़ी संख्या12,,13सुलभ हैं । चूहों के विपरीत, चूहे बड़ी सर्जरी कर रहे हैं और इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण के लिए लिम्फेटिक ऊतक तक पहुंच अधिक व्यवहार्य12। इसके अलावा, हाल के वर्षों में चूहों में वाणिज्यिक क्लोनिंग प्रौद्योगिकियों की शुरूआत सबसे अधिक संभावना प्रायोगिक चूहा मॉडल14में आवर्ती रुचि के लिए नेतृत्व करेंगे ।

सामान्य तौर पर, गर्भाशय ग्रीवा या पेट एनास्टोमोसिस प्रदर्शन करके प्राप्तकर्ता जहाजों से हेटेरोटोपिक हार्ट ग्राफ्ट संलग्न किया जा सकता है। हालांकि, कुछ अध्ययनों से पता चलता है कि एक ऊर्ध्वाधर एनास्तोमोसिस मैनुअल टटोलना या ट्रांसफेमोरल इकोकार्डियोग्राफी के लिए बेहतर पहुंच के कारण बेहतर निगरानी की सुविधा प्रदान करता है और इस प्रकार भ्रष्टाचार की विफलता15,,16का अधिक सटीक पता लगाने की अनुमति देता है।

यह दिखाया गया है कि एनास्टोमोसिस तकनीक17दोनों के बीच ऑपरेशन समय, जटिलता दर, परिणाम और भ्रष्टाचार के अस्तित्व के समय के बारे में कोई अंतर नहीं है। जाहिर है, पर्याप्त संख्या में ड्रेनिंग लिम्फ नोड्स की उपलब्धता को सर्वाइकल एनास्टोमोसिस के लाभ के रूप में उल्लेख किया जाना चाहिए; हालांकि, लंबे समय तक प्रशिक्षण अवधि की आवश्यकता होती है। इसके विपरीत, पेट एनास्तोमोसिस इम्यूनोलॉजिकल जांच के लिए कम जटिल और समान रूप से मूल्यवान है, खासकर जब एलोजेनिक हृदय मांसपेशियों की कोशिकाओं और बाद में सर्वाइकल लिम्फेडेनेक्टॉमी के इन-इयर इंजेक्शन की एक उपन्यास विधि से परिणामों के साथ संयुक्त होता है। दोनों मॉडलों का एक संयोजन हस्तक्षेप के बाद इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण का एक व्यापक स्पेक्ट्रम प्रदान करता है।

निम्नलिखित प्रोटोकॉल इस्केमिया समय को कम करने के लिए सर्जन के जोड़े में संचालन को संदर्भित करता है। हालांकि, सभी प्रयोग एक ही व्यक्ति द्वारा किए जा सकते हैं। दिल के वृक्षारोपण और प्रत्यारोपण के लिए उपकरणों और सामग्रियों की स्थापना चित्रा 2ए-बीमें प्रदर्शित की जाती है।

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Protocol

सभी पशु अनुभवों को अनुमोदन IDs 12/0768 और 17/2472 के साथ उपभोक्ता संरक्षण और लोअर सैक्सनी (LAVES, Oldenburg, जर्मनी) के खाद्य सुरक्षा के लिए क्षेत्रीय अधिकारियों के स्थानीय नैतिकता पशु समीक्षा बोर्ड के दिशा निर्देशों के अनुसार किया गया है ।

1. हार्ट एक्सप्लांटेशन और परफ्यूजन

नोट: भ्रष्टाचार दाताओं के रूप में, 7-22 सप्ताह की उम्र में महिला या पुरुष चूहों का इस्तेमाल किया गया था ।

  1. आइसोफ्लोरीन साँस लेने (5% पर प्रेरण और 1 एल/मिन के ओ2 प्रवाह के साथ रखरखाव 5% पर प्रेरण) द्वारा दाता चूहे को एनेस्थेटाइज़ करें। पेरिऑपरेटिव एनालजेसिया के लिए प्रति किलो शरीर के वजन के प्रति किलोकी दर से 5 मिलीग्राम कार्प्रोफेन इंजेक्ट करें और टो चुटकी वापसी पलटा की अनुपस्थिति की जांच करें।
  2. आंख ों को चिकनाई लगाएं और यांत्रिक क्लिपर का उपयोग करके पेट और छाती के फर को हटा दें।
  3. डोनर को एक सुपाइन स्थिति में रखें, लोचदार बैंड के साथ ऑपरेशन टेबल के आधार पर अंगों को ठीक करें और त्वचा को 70% इथेनॉल या किसी अन्य पर्याप्त विकल्प के साथ स्टरलाइज करें।
  4. दैर्सुन्ध दिशा में और स्थानीय संवेदनाकारियों के आवेदन के बाद त्वचा को छानलें (उदाहरण के लिए, लिडोकेन 0.2%) कैंची का उपयोग करके एक औसत लेप्रोटॉमी करें।
  5. रिट्रैक्टर डालें, दाता के बाईं ओर आंत को जुटाएं, और निष्फल कपास झाड़ू के साथ अवर वेना कावा का पर्दाफाश करें।
  6. एंटीकोगुलेशन के लिए, अवर वेना कावा पंचर करके बर्फ-ठंडआइकोनिक खारा समाधान के 1 किलोल में भंग हेपरिन के 500 आईयू इंजेक्ट करें। सुई के पीछे हटने के बाद एक कपास झाड़ू के साथ प्रकाश संपीड़न द्वारा पंचर साइट पर रक्तस्राव बंद करो(चित्रा 3ए)।
  7. डायाफ्राम को चीरा लगाएं और दाता के दोनों ओर पार्श्व थोराकोटॉमी करें।
  8. ऑपरेशन टेबल पर छाती की जुटाई गई वेंट्रल वॉल को पिन करें।
  9. दो माइक्रो-सुई धारकों का उपयोग करके कुंद तैयारी द्वारा पेरिकार्डियम और वागल तंत्रिका को हटा दें।
  10. दाता को उत्तेजित करने और दिल को उतारने के लिए पेट के बर्तनों का ट्रंसेक्शन करें।
  11. ट्रांसवर्स पेरिकार्डियल सीनस में एक जांच की कुंद शाखा डालें और एक गीला संपीड़न(चित्रा 3बी)के साथ दिल के प्रकाश कौडल कर्षण के तहत संभव के रूप में आरोही महाधमनी और फेफड़े की धमनी को अलग करें।
  12. बेहतर और अवर वेना कावा और फेफड़े की नसों के चारों ओर एक 5-0 लिगामेंट रखें और इसे संभव के रूप में पृष्ठीय के रूप में कस ें(चित्रा 3सी)।
  13. लिट्रेचर के लिए ऊतक पृष्ठीय तोड़ और दिल निकालने(चित्रा 3डी)।
  14. आरोही महाधमनी और बर्फ के 30 मिलीग्राम के साथ फेफड़े की धमनी के माध्यम से एक नसों में कैथेटर से एक 18 जी cannula के साथ निकाल दिल perfuse-ठंडा, isotone खारा समाधान हेपरिन के १००० I.U. के साथ पूरक और एक 15 mL बर्फ पर खारा समाधान से भरा ट्यूब में दिल जगह(चित्रा 3ई-एफ)।

2. दिल प्रत्यारोपण

नोट: प्राप्तकर्ताओं के रूप में, 10-14 सप्ताह पुरानी महिला या पुरुष चूहों का उपयोग किया गया था। दानदाताओं और प्राप्तकर्ताओं लगभग वजन मिलान किया गया ।

  1. आइसोफ्लोरीन साँस लेने (5% पर प्रेरण और 1 एल/मिन के ओ2 प्रवाह के साथ 1.5-2% पर रखरखाव) का उपयोग करके प्राप्तकर्ता चूहे का संज्ञाहरण करें। पेरिऑपरेटिव एनालजेसिया के लिए प्रति किलो शरीर के वजन के प्रति किलोकी दर से 5 मिलीग्राम कार्प्रोफेन इंजेक्ट करें और टो चुटकी वापसी पलटा की अनुपस्थिति की जांच करें।
  2. आंख ों को चिकनाई लगाएं, पेट के फर को हटा दें, अंगों को ठीक करें और त्वचा को दाता तैयार करने के अनुरूप निष्फल करें। इष्टतम पश्चात परिणाम के लिए, इंट्राऑपरेटिव हाइपोथर्मिया को रोकने के लिए एक हीटिंग मैट पर ऑपरेशन करें।
  3. त्वचा के देशाें चीरा के बाद, पेट के प्रावरणी पर लिडोकेन (0.2%)जैसे स्थानीय संवेदनाकारी लागू करें। औसत लेप्रोटॉमी द्वारा पेट गुहा खोलें और रिट्रैक्टर डालें।
  4. प्राप्तकर्ता के ऊपरी बाईं ओर आंत को जुटाएं और इसे गर्म, गीले संपीड़न में रखें।
  5. क्रमशः डुओडेनम और समीपस्थ जेजुनम को जुटाने के बाद, सर्जिकल माइक्रोस्कोप (या आवर्धक चश्मे) का उपयोग करके 5-7x आवर्धन के साथ, कपास झाड़ू के साथ कुंद तैयारी करके पेट महाधमनी और अवर वेना कावा का पर्दाफाश करें। पेट के बर्तनों को अलग न करें।
  6. काठ की नसों को घायल किए बिना दो माइक्रो सुई धारकों का उपयोग करके पेट के जहाजों को ऊंचा करें और कूले संवहनी क्लैंप(चित्रा 4ए)की स्थिति रखें।
  7. एक 30-45 ° धनुषाकार 27 जी cannula(चित्रा 4बी)के साथ पेट वाहिकाओं पंचर ।
  8. एक देशीयंवदा चीरा है कि दाता जहाजों के lumen के आकार से मेल खाता हैबनानेC-Dके लिए Potts कैंची का उपयोग पंचर साइट विस्तार और खारा समाधान के साथ प्राप्तकर्ता जहाजों perfuse ताकि थक्के को हटाने और पश्चात थ्रोम्बोसिस को रोकने के लिए ।
  9. सिटस में भ्रष्टाचार प्लेस और दो सरल बाधित टांके (8-0) द्वारा प्राप्तकर्ता पेट महाधमनी के लिए दाता आरोही महाधमनी उतारना देशीय चीरा(चित्रा 4ई)के कपाल और कौडल कोने में मोनोफिलामेंट गैर-रिसोर्बेबल सीवन) ।
  10. Anastomose एक चल 8-0 द्वारा प्राप्तकर्ता के पेट महाधमनी के साथ दाता के आरोही महाधमनी दो चरणों में मोनोफिलामेंट सीवन: सबसे पहले, प्राप्तकर्ता जहाजों के दाईं ओर भ्रष्टाचार रखें और एनास्टोमोसिस(चित्रा 4ई)की पहली छमाही करें। इसके बाद, ग्राफ्ट को प्राप्तकर्ता जहाजों के बाईं ओर रखें और एनास्टोमोसिस(चित्रा 4एफ)की दूसरी छमाही करें।
  11. दाता फेफड़े की धमनी को अवर वेना कावा अनुरूप रूप से अधिताल एनास्टोमोसिस (8-0) के अनुरूप ठीक करें मोनोफिलामेंट गैर-रिसोर्बल सीवन)। पोत के इंट्राल्यूमिनल साइड(चित्रा 4जी-एच)से वेनस एनास्टोमोसिस के पहले हाफ को टांका लगाएं।
  12. परिधीय एम्बोलिज्म को रोकने के लिए समुद्री मील कसने से पहले सीधे खारे के साथ एनास्टोमूसा फ्लश।
  13. दोनों एनास्टोमूसा के चारों ओर एक हीमोस्टैटिक धुंध रखें और सावधानी से कूले संवहनी क्लैंप जारी करें ताकि भ्रष्टाचार का रिपरफ्यूजन शुरू हो सके। निष्फल कपास झाड़ू के साथ प्रकाश संपीड़न द्वारा एनास्टोमूसा के साथ खून बह रहा संभाल।
    नोट: भ्रष्टाचार के आसपास ६० एस के बाद पिटाई शुरू कर देना चाहिए ।
  14. आंत को फैशन की तरह एक मीनर में बदलें। सुनिश्चित करें कि आंतों के परिगलन या यांत्रिक बाधा को रोकने के लिए मेसेन्टेरिक मूलांक का कोई मालरोटेशन नहीं है।
  15. लगातार 3-0 पॉलीफिलामेंट रनिंग टांके का उपयोग करके पेट की मांसपेशियों/प्रावरणी और त्वचा को अलग से बंद करें।

3. पश्चात देखभाल

  1. पश्चात एनालजेसिया के लिए, प्राप्तकर्ताओं को पहले पश्चात दिन (पीओडी) पर प्रति किलो शरीर के वजन के 5 मिलीग्राम कार्प्रोफेन के अतिरिक्त चमड़े के नीचे इंजेक्शन के साथ आपूर्ति करें। इसके अतिरिक्त, तीसरे पीओडी तक 500 मिलीग्राम पीने के पानी में मेटामिज़ोल के 1 ग्राम जोड़ें।
  2. तीसरे पीओडी पर दैनिक पेट टटोलने से दिल कलम समारोह की निगरानी शुरू करें।
    नोट: तीसरे POD से पहले भ्रष्टाचार की विफलता के मामले में, एक शल्य चिकित्सा विफलता के बजाय एक शल्य चिकित्सा पर विचार किया जाना चाहिए । हालांकि, यह निश्चित रूप से चुने गए तनाव संयोजन और संबंधित प्रतिरक्षण मॉडल (उदाहरण के लिए, पूर्व प्रतिरक्षण के बाद हाइपरएक्यूट अस्वीकृति) पर निर्भर करता है।
  3. भ्रष्टाचार अस्वीकृति के बाद, एनास्टोमूसा के निकासी रेट्रोपेरिटोनियल लिम्फ नोड्स कपाल, तिल्ली, रक्त, थाइमस और प्रवाह साइटोमेट्री या इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के माध्यम से आगे इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण के लिए भ्रष्टाचार जैसे ऊतकों को निकालें।

4. दिल का एंजाइमैटिक पाचन और कान में हृदय कोशिकाओं का चमड़े का इंजेक्शन

  1. विषमविषय हृदय प्रत्यारोपण के अनुरूप दिल के विस्तार और परफ्यूजन प्रदर्शन करें (चरण 1 देखें)।
  2. 3 मिमी x 3 मिमी ब्लॉक में दिल को एक बाँझ स्केलपेल या बाँझ कैंची का उपयोग करके टुकड़ा करें और इसे संस्कृति माध्यम में 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिमी के लिए इनक्यूबेट करें जिसमें 0.5 मिलीग्राम/एमएल कोलेजेनेज़ हो।
    नोट: भ्रूण बछड़े सीरम (एफसीएस) के बिना पेनिसिलिन, स्ट्रेप्टोमाइसिन और ग्लूटामाइन युक्त संस्कृति माध्यम का उपयोग करना महत्वपूर्ण है, विशेष रूप से एफसीएस कोलेजेनेस पाचन को रोकता है।
  3. एक बड़े पोर छलनी के लिए पचा ऊतक जोड़ें, जबकि संस्कृति माध्यम और कीमा को अच्छी तरह से हटाने के लिए महत्वपूर्ण हृदय मांसपेशियों की कोशिकाओं, ज्यादातर मृत एकल दिल की कोशिकाओं और शेष रक्त कोशिकाओं के निलंबन मिलता है । सेल निलंबन को बाँझ आइसोटोनिक खारा समाधान के साथ दो बार धोएं।
    नोट: सेंट्रलिफायरेशन सेटिंग्स: 10 मिन, 200 x g, 20 डिग्री सेल्सियस
  4. 40 माइक्रोन सेल छलनी का उपयोग करके निलंबन को फ़िल्टर करें और आइसोटोनिक नमकीन समाधान के 5-10 मीटर के साथ सेल छलनी को फ्लश करके महत्वपूर्ण सेल कॉन्गरियों को इकट्ठा करें।
  5. केंद्रीकरण के बाद, 5x105 कोशिकाओं/mL की एकाग्रता पर भंग खारा समाधान में हृदय की मांसपेशियों की कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें और सेल समाधान को 1 मिलीसी सिरिंज में खींचें।
  6. विषमविषय हृदय प्रत्यारोपण के लिए प्राप्तकर्ता नार्कोसिस (चरण 2 देखें) के लिए वर्णित प्रोटोकॉल के अनुरूप संज्ञाहरण करें।
  7. प्राप्तकर्ता को पार्श्व स्थिति में रखें और डबल तरफा टेप(चित्रा 5ए)का उपयोग करके कान को उंगली से ठीक करें।
  8. प्राप्तकर्ता के कान में दृश्य केशिका जहाजों के करीब 27 ग्राम कैनुला एससी के माध्यम से कार्डियक मांसपेशी कोशिका समाधान (1 x 104 कोशिकाओं वाले) के 20 μL इंजेक्ट करें (चित्र5बी)।
  9. एक परिभाषित अवलोकन अवधि (चुने हुए तनाव संयोजन और अस्वीकृति की ताकत के आधार पर) के बाद, निकासी गर्भाशय ग्रीवा लिम्फ नोड्स निकालें और प्रवाह साइटोमेट्री या सह-संस्कृतियों(चित्रा 5सी)जैसे आगे विश्लेषण करें।
    नोट: इसके अलावा, सेल घुसपैठ का निर्धारण करने के लिए पिन्ना का हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण किया जा सकता है।

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Representative Results

पूर्व में मॉडल के आधार पर विभिन्न इम्यूनोलॉजिकल मुद्दों का समाधान किया गया है, जिसे कार्य समूह में 500 से अधिक प्रत्यारोपण द्वारा मान्य किया गया था , जिसमें 95%13,18,,19,20,,21, 22,2323,24से अधिक जीवित रहने की दर थी ।, कुल ऑपरेटिंग समय (भ्रष्टाचार वृक्षारोपण और प्रत्यारोपण सहित) आमतौर पर 60 मिनट से अधिक नहीं था, जबकि संयुक्त ठंडा और गर्म इस्केमिया समय लगभग 30 मिनट था। लागू तनाव संयोजन मुख्य रूप से लुईस (ल्यू) पृष्ठभूमि पर आधारित थे । सिनजेनिक प्रत्यारोपण भ्रष्टाचार की विफलता के संकेत के बिना १०० दिनों तक बच गया, लेकिन भ्रष्टाचार वृक्षारोपण पर महत्वपूर्ण वजन और आकार में कमी । सबसे हाल ही में, हम दो अलग दाता प्राप्तकर्ता एक तेजी से और एक लंबे समय तक अस्वीकृति मॉडल अनुकरण संयोजनों में विषमगति दिल प्रत्यारोपण प्रदर्शन: Lew.1a → Lew wt तेजी से अस्वीकृति के लिए अग्रणी (७.४ दिनों के मतलब अस्तित्व का समय) और Lew.1u-7B → Lew.1a एक और अधिक लंबे समय तक अस्वीकृति के लिए अग्रणी (४२.५ दिनों के मतलब अस्तित्व का समय)(चित्रा 6)। मैक्रोस्कोपी, अस्वीकृत ग्राफ्ट ्सप्ता ने एक नाराज मलिनकिरण और सूजन के साथ थ्रोम्बोसिस दिखाया, जबकि गैर-अस्वीकृत ग्राफ्ट अलग शोल दिखाते हैं, जो एक अनलोड बाएं वेंट्रिकल के परिणामस्वरूप सबसे अधिक संभावना है। इसके अलावा, हमने एक क्षारीय फॉस्फेटेज़-एंटीअलकासिन फॉस्फेटेज़ (एपीएपी) धुंधला विधि का उपयोग करके सेल घुसपैठ का पता लगाने के लिए प्रत्यारोपित दिलों के क्रायोस्टेट वर्गों को आकर्षित किया। 50x आवर्धन वाले एकल फ्रेम को एक समग्र छवि में विलय कर दिया गया था, जिससे पूर्ण भ्रष्टाचार और घुसपैठ कोशिकाओं के वितरण का अवलोकन किया गया था। हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण से एलोजेनिक ग्राफ्ट में (जैसे, सीडी4+,टीसीआर+,या एनकेआर-पी1ए/बी+) प्रतिरक्षा कोशिकाओं की बढ़ी हुई घुसपैठ दिखाई गई, जबकि सिंजेनिक ग्राफ्ट काफी हद तक सेल घुसपैठ से मुक्त थे(चित्रा 7ए-सी)।

उपर्युक्त तनाव संयोजनों में हृदय की मांसपेशियों की कोशिकाओं के कान इंजेक्शन के बाद लिम्फ नोड कोशिकाओं को छानने के गर्भाशय ग्रीवा लिंफेनेक्टॉमी और फिर से उत्तेजना परखों ने एलोजेनिक कार्डियक ऊतक के प्रति अलग तनाव-विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का खुलासा किया और साइटोकिन प्रोफाइलिंग(चित्रा 8ए-सी)जैसे आगे इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण ों की अनुमति दी।

Figure 1
चित्रा 1: अंत से साइड एनास्टोमूसा की योजनाबद्ध प्रस्तुति और जिसके परिणामस्वरूप दिल के माध्यम से रक्त प्रवाह। प्राप्तकर्ता पेट महाधमनी के लिए दाता आरोही महाधमनी अंत करने के लिए और एनालॉग प्राप्तकर्ता अवर वेना कावा(ए)के लिए फेफड़े की धमनी के अनुरूप, रक्त प्रवाह आरोही महाधमनी के माध्यम से कोरोनरी धमनियों में प्रवेश करती है । वेनस ड्रेनेज सीनस कोरोनरियस के माध्यम से दाएं एट्रियम और वेंट्रिकल में और पल्मोनरी धमनी के माध्यम से प्राप्तकर्ता अवर वेना कावा(बी)में होता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: आवश्यक शल्य चिकित्सा उपकरणों और सामग्री। (क)Explantation: 1: लोचदार अंग बैंड, 2: reट्रैक्टर, 3: 5-0 लिगाचर, 4: जांच बताया कैंची, 5-6: माइक्रो सुई धारकों, 7: कैंची, 8: सर्जिकल संदंश, 9: माइक्रो संदंश, 10: आंख स्नेहक, 11: संपीड़न, 12: कपास झाड़ू, 13: perfusion आधार, 14: बर्फ पर खारा समाधान । (ख)प्रत्यारोपण: 1: लोचदार अंग बैंड, 2: रिट्रैक्टर, 5-6: माइक्रो सुई धारकों, 7: कैंची, 8: संदंश, 9: माइक्रो संदंश, 10: आंख स्नेहक, 11: संपीड़न, 12: कपास झाड़ू, 15: माइक्रो कैंची, 16: माइक्रो संदंश, 17: Potts कैंची, 18: सुई धारक, 19: धनुषाकार डिब्बाुला, 20: कूले संवहनी क्लैंप, 21: 8-0: मोनोफिलामेंट टांके, 22: हीमोस्टैटिक धुंध, 23: 3-0 पॉलीफिविलाप टांके, 24: पेट्री डिश, 25: कार्प्रोफेन (5 मिलीग्राम/mL), 26: स्थानीय संवेदनाकार (लिडोकेन ०.२%), 27: खारा समाधान । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: दिल के वृक्षारोपण। हेपरिनाइजेशन(ए)के बाद, थोराकोटॉमी किया जाता है और आरोही महाधमनी और फेफड़े की धमनी को यथासंभव डिस्टल(बी)के रूप में कटे हुए हैं। एक एकल लिगेचर पल्मोनरी और दोनों कैवल नसों को ऑक्सील्ड(सी)के साथ और दिल को वक्ष गुहा(डी)से हटा दिया जाता है। (ई)30 mL खारा हेपरिन युक्त समाधान के साथ perfusion के बाद पहले और(एफ)दिल से पता चलता है । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4: दिल प्रत्यारोपण। पेट के जहाजों की प्रदर्शनी और कूले संवहनी क्लैंप(ए)के प्लेसमेंट के बाद जहाजों को वाणियित(बी)और पॉट्स कैंची(सी-डी)का उपयोग करके एक देश्युद्यशता का उपयोग किया जाता है। दाता आरोही महाधमनी प्राप्तकर्ता पेट महाधमनी(ई)के चीरा के कपाल और कौडल कोने में एक-एक गाँठ के साथ उतारना चाहते हैं और एनास्टोमोसिस लगातार टांके(ई-एफ)चलाकर किया जाता है। ध्यान दें कि भ्रष्टाचार को एनास्टोमोसिस(ई)की पहली छमाही के लिए जहाजों के दाईं ओर और एनास्टोमोसिस(एफ)और उसके बाद के वेनस एनास्टोमोसिस के दूसरे चरण के लिए जहाजों के बाईं ओर रखा जाता है। वेनस एनास्टोमोसिस का पहला हाफ इंट्राल्यूमिनल सीवन(जी)द्वारा किया जाता है। वेनस एनास्टोमोसिस के उत्तरार्ध को खत्म करने के बाद, भ्रष्टाचार रिपरफ्यूजन(एच)के लिए तैयार है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्रा 5: एलोजेनिक कार्डियक मांसपेशियों की कोशिकाओं के कान में इंजेक्शन। दो तरफा टेप(ए)एलोजेनिक महत्वपूर्ण हृदय मांसपेशी कोशिकाओं का उपयोग करएक उंगली पर प्राप्तकर्ता के कान फिक्सिंग के बाद दृश्य केशिका जहाजों(बी)के करीब चमड़े के नीचे इंजेक्शन हैं । एक अवलोकन अवधि के बाद ग्रीवा लिम्फ नोड्स(*)निकाला जाता है (सी)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 6
चित्रा 6: विभिन्न सिंजेनिक और एलोजेनिक दाता प्राप्तकर्ता संयोजनों में दिल का अस्तित्व। Kaplan-Meier विश्लेषण सिंजेनिक के अस्तित्व से पता चलता है (n = 10 तेजी से अस्वीकृति मॉडल; n = 5 लंबे समय तक अस्वीकृति मॉडल) और एलोजेनिक ग्राफ्ट (n= 11 तेजी से अस्वीकृति मॉडल; n = 14 लंबे समय तक अस्वीकृति मॉडल) । लंबे समय तक अस्वीकृति मॉडल में 14 प्राप्तकर्ताओं में से छह भ्रष्टाचार की विफलता के बिना अवलोकन अवधि (६० दिन) के अंत तक पहुंच गया, इस समूह में एक लंबे समय तक भ्रष्टाचार अस्तित्व के लिए अग्रणी । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 7
चित्रा 7: सिंजेनिक और एलोजेनिक हार्ट ग्राफ्ट का हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण। (ए-बी)एक सिंजेनिक भ्रष्टाचार(ए)में एपीएपी धुंधला विधि का उपयोग कर सीडी 4+ कोशिकाओं की घुसपैठ और अस्वीकृति पर एक एलोजेनिक भ्रष्टाचार(बी)दिखा । (ग)विभिन्न प्रतिरक्षा कोशिका सबसेट के लिए सिंजेनिक ग्राफ्ट (संदर्भ समूह के रूप में सेवारत) की तुलना में एलोजेनिक ग्राफ्ट में सेल घुसपैठ की वृद्धि प्रस्तुत करता है। सेल घुसपैठ की मात्रा निर्धारित करने के लिए लागू वर्गीकरण हिर्शबर्गर एट अल अल से संशोधित किया गया था।25:0 = सिंजेनिक ग्राफ्ट के बराबर घुसपैठ; 0.5 = अलग ऊतक वर्गों में दाग कोशिकाओं की मामूली वृद्धि; 1 = पूरे ऊतक अनुभाग पर विलक्षण दाग कोशिकाओं की वृद्धि; 1.5 = पूरे ऊतक अनुभाग में समान रूप से वितरित दाग सेल समूहों की वृद्धि; 2 = मजबूत; 2.5 = बहुत मजबूत; 3 = पूरे ऊतक अनुभाग में दाग सेल समूहों की सबसे मजबूत वृद्धि। ग्राफ्ट के हिस्टोलॉजिकल वर्गों का विश्लेषण 50x आवर्धन का उपयोग करके किया गया था। विश्लेषण में प्रति समूह पांच ग्राफ्ट (क्रमशः सिंजेनिक और एलोजेनिक, शामिल किए गए थे। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 8
चित्रा 8: एलोजेनिक हृदय मांसपेशियों की कोशिकाओं के कान में इंजेक्शन के बाद लिम्फ नोड कोशिकाओं को निकालने का विश्लेषण। विशिष्ट पुनः उत्तेजना (संबंधित दाता तनाव के 2 x 105 splenocytes के साथ) 2 x 105 लिम्फोसाइट्स या तो गर्भाशय ग्रीवा या मेसेंट्रिक लिम्फ नोड्स (एलएन) तेजी से खारिज Lew wt और लंबे समय तक अस्वीकार से काटा Lew.1a प्राप्तकर्ताओं ने Lew.1a प्राप्तकर्ताओं(ए)में लिम्फ नोड कोशिकाओं को निकालने के प्रसार को काफी कम दिखाया, जबकि सामान्य रूप से प्रोलाइफर क्षमता सीडी 3/सीडी28 एंटीबॉडी(बी)के साथ अविशिष्ट उत्तेजना के बाद अभी भी नमूदार थी । हैरानी की बात है, साइटोकाइन प्रोफाइलिंग ने लंबे समय तक अस्वीकार करने वाले प्राप्तकर्ताओं(सी)के लिम्फ नोड्स में भड़काऊ साइटोकिन्स की वृद्धि का खुलासा किया। परिणाम प्रति समूह कम से कम 4 जानवरों के मतलब ± एसईएम के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं। महत्व पी-मूल्यों के लिए * के साथ संकेत दिया गया है = 0.05 और **** पी-मूल्यों के लिए 0.0001। (इस आंकड़े को बीट्ज एट अल24से संशोधित किया गया है) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

चूहों में हेटेरोटोपिक कार्डियक प्रत्यारोपण की पहले वर्णित विधि मुख्य रूप से 19693में ओनो और लिंडसे के विवरण पर आधारित है। तब से, विभिन्न प्रजातियों में कई संशोधन शुरू किए गए हैं जिससे इस मॉडल की व्यापक विविधता हो गई है। इनमें से कई संशोधनों का संयोजन और प्रयोगशाला में विषमविज्ञान हृदय प्रत्यारोपण करने के 30 से अधिक वर्षों के परिणामस्वरूप हमारे अपने अनुभव को शुरू करते हुए, हमने एक व्यवहार्य शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण बनाया, जिसमें लंबे प्रशिक्षण अवधि या शल्य चिकित्सा पृष्ठभूमि की आवश्यकता नहीं होती है। निम्नलिखित में, हम इस मॉडल की सामान्य सीमाओं पर चर्चा करेंगे और प्रोटोकॉल के महत्वपूर्ण चरणों को रेखांकित करेंगे। इसके अलावा, हम हृदय की मांसपेशियों की कोशिकाओं के कान में इंजेक्शन की एक उपन्यास विधि के साथ विषमता हृदय प्रत्यारोपण के संयोजन के लाभों पर जोर देंगे ।

संज्ञाहरण और सामान्य जटिलताएं
यद्यपि यह बताया गया है कि आइसोफ्लोरीन संज्ञाहरण विषमता हृदय प्रत्यारोपण के बाद प्रारंभिक अस्तित्व के बारे में इंजेक्शन संज्ञाहरण से बेहतर है, इंट्राऑपरेटिव श्वसन अवसाद अभी भी सबसे आम जटिलताओं में से एक का प्रतिनिधित्व करता है और इस प्रकार एक सावधान नार्कोसिस प्रबंधन26की आवश्यकता होती है। धारावाहिक भ्रष्टाचार वृक्षारोपण और प्रत्यारोपण के बजाय, क्रमशः, हम दाता जानवर के छाती के तुरंत बाद प्राप्तकर्ता और पेट के जहाजों की तैयारी शुरू करने की सलाह देते हैं, खासकर इसलिए कि एक घंटे से कम के ऑपरेशन समय भ्रष्टाचार और प्राप्तकर्ता अस्तित्व26,,27के बारे में बेहतर परिणाम से जुड़े होते हैं। लंबे समय तक ऑपरेटिंग समय और लापता हीटिंग मैट के कारण हाइपोथर्मिया जैसी जटिलताओं का उल्लेख किया गया है, और आंत के अशारीरिक प्लेसमेंट द्वारा आंतों के परिगलन या बाधा, बाधा अंगों का एक पैरासिस एक और जटिलता का प्रतिनिधित्व करता है, जिसे परिधीय एम्बोलिज्म28,,29से बचने के लिए एनेस्टोमूसा के एट्रॉमेटिक वैस्कुलर क्लैंपिंग और पूरी तरह से फ्लशिंग द्वारा रोका जा सकता है।

फेफड़े और कैवल नसों और रक्तस्राव जटिलताओं का लिगेचर
गर्म इस्केमिया समय को कम करने के लिए, हम दोनों घुड़सवार और सभी चार फेफड़े की नसों के लिए एक एकल लिगेचर का उपयोग करते हैं। लिगेचर के बहुत समीपस्थ/वेंट्रल प्लेसमेंट के परिणामस्वरूप संभावित जटिलता के रूप में, सीनस कोरोनरियस के ऑक्क्लूजन द्वारा वेनस बैकफ्लो के व्यवधान का उल्लेख किया जाना चाहिए । कूले क्लैंप को हटाने और भ्रष्टाचार की धड़कन दिखाई देने के बाद गंभीर रक्तस्राव के मामले में, लिगेचर को तुरंत अपर्याप्तता के लिए जांचना होगा। हमने इस प्रकार की जटिलता का अवलोकन किया, खासकर यदि छाती गुहा से भ्रष्टाचार को हटाते समय फेफड़े की नसों का विच्छेदन लिगेचर के बहुत करीब किया गया था। अन्यथा, गंभीर रक्तस्राव मुख्य रूप से संवहनी एनास्टोमूसा की अपर्याप्तता के कारण होता है। इसके अतिरिक्त, आरोही महाधमनी के साथ चलने वाली एक कोरोनरी धमनी जिसे अक्सर वृक्षारोपण के दौरान कटे हुए होते हैं, को रिपरफ्यूजन27पर घातक रक्तस्राव का कारण बताया जाता है।

इस्केमिया समय और परफ्यूजन
प्रत्यारोपण मॉडल की परवाह किए बिना, यह हमेशा इस्केमिया समय को कम करने के लिए अपरिहार्य है, खासकर के रूप में दिल इस्केमिया क्षति के बारे में एक कमजोर अंग के रूप में माना जाता है । दो सर्जनों के साथ सर्जरी करके, हम एक न्यूनतम गर्म और ठंडे इस्कीमिक समय को प्राप्त करने में सक्षम हैं और इसलिए इस्केमिया-रिपरफ्यूजन क्षति को कम करने के लिए कार्डियोप्लेजिक समाधानों के उपयोग को रोक ते हैं30। आम तौर पर, भ्रष्टाचार का परफ्यूजन एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है और भ्रष्टाचार को ठंडा करने और रक्त कोशिकाओं को हटाने के लिए आवश्यक है, जिसके परिणामस्वरूप थ्रोम्बोसिस या एम्बोलिज्म हो सकता है। जबकि कम परफ्यूजन दबाव अपर्याप्त परफ्यूजन का कारण बनते हैं और इस प्रकार रक्त कोशिकाओं को अधूरा हटाने के लिए, उच्च परफ्यूजन दबाव एंडोथेलियल क्षति का कारण बन सकता है31,32। हम फेफड़े की धमनी के साथ-साथ आरोही महाधमनी के बारे में सलाह देते हैं जब तक कि कोरोनरी धमनियों को स्पष्ट रूप से फ्लश नहीं किया जाता है।

प्राप्तकर्ता जहाजों का चीरा
प्रोटोकॉल में एक महत्वपूर्ण कदम जहाजों के पीछे की दीवार को नुकसान पहुंचाए बिना प्राप्तकर्ता जहाजों के चीरा का गठन करता है: श्मिड एट अल ने कपाल और कौडल दिशा में देशीयद्रि वृद्धि के बाद एक छोटे ट्रांसवर्स चीरा प्रदर्शन करने वाले कोंटोटॉमी या वैनोमी के लाभ का वर्णन किया, जो आगे ऑरटाल एनास्टोमोसिस33की कम स्टेनोसिस दर की ओर जाता है। हमारे मॉडल में, प्राप्तकर्ता जहाजों को एक छोटे से कैनुला का उपयोग करके पंचर कर दिया जाता है। बाद में, पंचर साइट एक देशांति चीरा बनाने के लिए Potts कैंची का उपयोग करके बढ़ा या है । एक बेहतर व्यवहार्यता के लिए, हम कैनुला की नोक को 30-45 डिग्री के कोण पर मोड़ने की सलाह देते हैं जिससे जहाजों के पीछे की दीवार को नुकसान पहुंचने का खतरा कम हो जाता है। हमने अपने किसी भी प्राप्तकर्ता में चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक संवहनी स्टेनोस का पालन नहीं किया। पेट महाधमनी पंचर और एक कैनुला के साथ अवर वेना कावा पंचर द्वारा प्राप्तकर्ता जहाजों खोलने के इसी तरह के लाभ शान एट अल३४द्वारा वर्णित किया गया है ।

विषमगति हृदय प्रत्यारोपण के मॉडल माहिर
पिछले दशक के दौरान, मॉडल विभाग में शोधकर्ताओं द्वारा कम या कोई शल्य चिकित्सा पृष्ठभूमि के साथ प्रदर्शन किया गया है । जैसा कि ऊपर कहा गया है, हम सर्जन के जोड़े में काम करते हैं, जबकि अधिक अनुभवी शोधकर्ता प्रत्यारोपण की सफलता की गारंटी के आरोप में है और धीरे से अनुभवहीन शोधकर्ता के कौशल सेट में सुधार के एक ही । मृत जानवरों में लगभग दस भ्रष्टाचार वृक्षारोपण और प्रत्यारोपण की एक छोटी प्रशिक्षण अवधि के बाद, अनुभवहीन शोधकर्ता दिल के वृक्षारोपण करने और लगभग दस जीवित जानवरों में भ्रष्टाचार प्रत्यारोपण की सहायता करने के आरोप में है। इसके बाद, अनुभवहीन शोधकर्ता सक्रिय रूप से संवहनी एनास्टोमूसा का प्रदर्शन करता है, ताकि लगभग दस और प्रत्यारोपण के बाद, पूर्व अनुभवहीन शोधकर्ता आमतौर पर मॉडल के सभी महत्वपूर्ण चरणों को करने में सक्षम होता है।

इस प्रशिक्षण अवधारणा को लागू करते हुए, चूहों में विषमता हृदय प्रत्यारोपण का उपयोग करके हमारे विभाग के पिछले प्रकाशनों ने सर्जनों की कई अलग-अलग टीमों के बावजूद रुग्णता, मृत्यु या भ्रष्टाचार समारोह के बारे में कोई मतभेद नहीं दिखाया13,,18,,19,,20,,21,,22,,23,,24।

ध्यान दें, संवहनी एनास्टोमूसा प्रदर्शन इस प्रोटोकॉल और सामान्य रूप से ठोस अंग प्रत्यारोपण मॉडल में सबसे महत्वपूर्ण कदम का प्रतिनिधित्व करता है। इसलिए, हम मृत जानवरों का उपयोग करके लंबे समय तक प्रशिक्षण अवधि की सलाह देते हैं जब तक कि एनास्टोमोस सटीक और तेज प्रदर्शन न कर दें, खासकर यदि कोई अनुभवी शोधकर्ता जीवित जानवरों में मार्गदर्शन के लिए उपलब्ध नहीं है।

मॉडल के सामान्य फायदे और नुकसान
जबकि सहज सहिष्णुता प्रेरण को अक्सर यकृत प्रत्यारोपण में एक घटना के रूप में वर्णित किया जाता है और गुर्दे प्रत्यारोपण में भी मनाया जाता है, दिल को एक इम्यूनोजेनिक अंग माना जाता है और इस प्रकार प्रत्यारोपण मॉडल35,,36में विश्वसनीय अस्वीकृति को सक्षम बनाता है। इन निष्कर्षों के विपरीत, हम भी दीर्घकालिक अस्तित्व और पूर्ण प्रमुख हिस्टोअनुकूली जटिल असमानता के बावजूद कुछ दाता प्राप्तकर्ता संयोजनों में विषमोटोपिक दिल प्रत्यारोपण के बाद अस्वीकृति के अभाव नोटिस सकता है ।

विषमगति हृदय प्रत्यारोपण की अक्सर उल्लेख की गई आलोचना मैनुअल टटोलना द्वारा भ्रष्टाचार की निगरानी की व्यक्तिपरकता है। इसलिए, मॉडल को टटोलने के लिए पहुंच को सुविधाजनक बनाने और ट्रांसफेमोरल इकोकार्डियोग्राफी15,,16जैसी आगे निगरानी तकनीकों को पेश करने के लिए ऊर्ध्वाधर एनास्टोमोसिस तकनीकों तक बढ़ाया गया है। दूसरी ओर, मोटेराम एट अल ने प्रदर्शन किया कि टटोलने के माध्यम से भ्रष्टाचार की निगरानी इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफिक माप37के साथ अच्छी तरह से संबंधित है। इस प्रकार, विषमता हृदय प्रत्यारोपण में मैनुअल टटोलना एक तीव्र अस्वीकृति मॉडल में भ्रष्टाचार समारोह की निगरानी के लिए पर्याप्त लगता है ।

विषमता प्लेसमेंट और बाएं वेंट्रिकुलर अनलोडिंग के परिणामस्वरूप, दिल शारीरिक या शारीरिक स्थितियों के तहत यह मानते हुए काम नहीं करता है कि यह प्रतिरक्षा विश्लेषण को प्रभावित नहीं करता है। इस धारणा के विपरीत, यह दिखाया गया था कि कार्डियक रिमॉडलिंग के परिणामस्वरूप बाएं वेंट्रिकुलर अनलोडिंग के दौरान बाएं वेंट्रिकुलर अनलोडिंग डिवाइस थेरेपी से साइटोकिन रिलीज38,,39में कमी आती है। दूसरी ओर, तांग-क्वान एट अल ने अनलोड की गई सेटिंग को इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण के लिए अधिक उपयुक्त दृष्टिकोण बताया, क्योंकि ग्राफ्ट के दीर्घकालिक इस्कीमिक क्षति के परिणामस्वरूप बाएं वेंट्रिकुलर लोडेड मॉडल में आंशिक रूप से डिऑक्सीजनयुक्त रक्त के साथ पेरिकक्षतिप का परिणाम४०मनाया गया था ।

हालांकि ग्राफ्ट के पेट प्लेसमेंट व्यावहारिकता के मामले में शल्य चिकित्सा लाभ प्रदान करता है, यह भ्रष्टाचार अस्वीकृति पर रेट्रोपेरिटोनियल लिम्फ नोड्स निकासी की पर्याप्त संख्या में फसल करने के लिए मुश्किल है आगे विश्लेषण ख़राब । इस कारण से, हमने एलोजेनिक कार्डियक मांसपेशियों की कोशिकाओं के इन-इयर इंजेक्शन की एक उपन्यास विधि पेश की। परजीवी अनुसंधान से उत्पन्न, इस अवधारणा को प्रत्यारोपण में प्रतिरक्षण विश्लेषण के लिए लागू नहीं किया गया है, बावजूद इसके व्यवहार्यता41,42। इस मॉडल का लाभ लिम्फ नोड्स की पहचान करने और कटाई की संभावना है, जो जटिल इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण करने की संभावना प्रदान करता है। ध्यान दें, दोनों मॉडलों को चूहों में कोशिका और अंग प्रत्यारोपण में अस्वीकृति और सहिष्णुता के तंत्र में आगे की अंतर्दृष्टि प्रदान करने वाले प्राप्तकर्ता में जोड़ा जा सकता है।

चूहा दिल और हृदय मांसपेशी कोशिका प्रत्यारोपण के हमारे मॉडल एक व्यावहारिक और अच्छी तरह से अध्ययन दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व करते है और आगे सर्जिकल प्रशिक्षण या पृष्ठभूमि के बिना प्रदर्शन किया जा सकता है । इस तथ्य का सामना करना पड़ रहा है कि चूहों के लिए नई क्लोनिंग प्रौद्योगिकियों को पेश किया गया है और हाल ही में विकसित किया गया है, ये मॉडल प्रत्यारोपण प्रतिरक्षा शोधकर्ताओं के लिए विशाल अवसर प्रदान करते हैं।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

हम ब्रिटा ट्रैटविग, कोरिना लोबर्ट और इंग्रिड मेडर को उनकी प्रतिबद्धता के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Anesthesia device (including isoflurane vaporizer) Summit Anesthesia Solutions No Catalog Number available
Cannula (27 G) BD Microlance 302200
Carprofen Pfizer Rimadyl 50 mg/mL
Cellstar Tubes (15 mL) GreinerBioOne 188271
Cell strainer (40 µm) BD Falcon 2271680
Collagenase Type CLSII Biochrome C2-22
Compresses 5x5 cm Fuhrmann 31501
Compresses 7.5x7.5 cm Fuhrmann 31505
Cotton swabs Heinz Herenz Medizinalbedarf 1032128
Dexpathenol (5 %) Bayer "Bepanthen"
DPBS BioWhittaker Lonza 17-512F
Forceps B. Braun Aesculap BD557R
Forceps B. Braun Aesculap BD313R
Forceps B. Braun Aesculap BD35
Heating mat Gaymar Industries "T/Pump"
Hemostatic gauze Ethicon Tabotamp
Heparin-Natrium 25 000 I.E. Ratiopharm No Catalog Number available
Isofluran CP CP-Pharma No Catalog Number available
Large-pored sieve (stainless steel) Forschungswerkstätten Hannover Medical School No Catalog Number available
Lidocaine Astra Zeneca 2 % Xylocain
Metamizol-Natrium Ratiopharma Novaminsulfon 500 mg/mL
Micro forceps B. Braun Aesculap BD3361
Micro needle holder Codman, Johnson & Johnson Medical Codmann 80-2003
Micro needle holder B. Braun Aesculap BD336R
Micro needle holder B. Braun Aesculap FD241R
Micro scissors B. Braun Aesculap FD101R
Micro scissors B. Braun Aesculap FM471R
Needle holder B. Braun Aesculap BM221R
Penicillin/Streptomycin/Glutamine (100x) PAA P11-010
Peripheral venous catheter (18 G) B. Braun 4268334B
Peripheral venous catheter (22 G) B. Braun 4268091B
Probe pointed scissors B. Braun Aesculap BC030R
Retractors Forschungswerkstätten Hannover Medical School No Catalog Number available
RPMI culture medium Lonza BE12-702F
Saline solution (NaCl 0.9 %) Baxter No Catalog Number available
Scissors B. Braun Aesculap BC414
Surgical microscope Carl-Zeiss OPMI-MDM
Sutures (anastomoses) Catgut Mariderm 8-0 monofil
Sutures (ligature) Resorba Silk 5-0 polyfil
Sutures (skin, fascia) Ethicon Mersilene 3-0
Syringe (1 mL) B. Braun 9166017V
Syringe (10 mL) B. Braun 4606108V
Syringe (20 mL) B. Braun 4606205V
Vascular clamp B. Braun Aesculap FB708R

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इम्यूनोलॉजी एंड इंफेक्शन इश्यू 159 हार्ट ट्रांसप्लांटेशन चूहा अंग प्रत्यारोपण सेल प्रत्यारोपण ट्रांसप्लांट मॉडल अस्वीकृति मॉडल प्रायोगिक माइक्रोसर्जरी
चूहों में हेटेरोटोपिक हार्ट और कार्डियक मांसपेशी सेल प्रत्यारोपण के लिए एक इम्यूनोलॉजिकल मॉडल
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Weigle, C. A., Lieke, T., Vondran,… More

Weigle, C. A., Lieke, T., Vondran, F. W. R., Timrott, K., Klempnauer, J., Beetz, O. An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (159), e60956, doi:10.3791/60956 (2020).

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