Summary
Här presenteras ett protokoll för att bedöma biventrikulär hjärtfunktion hos möss genom att generera tryck-volymslingor (PV) från höger och vänster kammare i samma djur med hjälp av sluten bröstkateterisering. Fokus ligger på den tekniska aspekten av kirurgi och datainsamling.
Abstract
Bedömning av hjärtfunktion är avgörande för att bedriva kardiovaskulär och lungvaskulär preklinisk forskning. Tryck-volymslingor (PV-loopar) som genereras genom att registrera både tryck och volym under hjärtkateterisering är viktiga vid bedömning av både systolisk och diastolisk hjärtfunktion. Vänster och höger hjärtfunktion är nära besläktade, vilket återspeglas i det ömsesidiga beroendet mellan kamrarna. Att registrera biventrikulär funktion hos samma djur är därför viktigt för att få en fullständig bedömning av hjärtfunktionen. I detta protokoll används en sluten bröstkorg för hjärtkateterisering som överensstämmer med hur kateterisering utförs på patienter på möss. Även om det är en utmaning är strategin med stängd bröstkorg ett mer fysiologiskt tillvägagångssätt, eftersom öppning av bröstkorgen resulterar i stora förändringar i för- och efterbelastning som skapar artefakter, framför allt ett fall i systemiskt blodtryck. Högupplöst ekokardiografi används för att bedöma gnagare, men hjärtkateterisering är ovärderlig, särskilt vid bedömning av diastoliskt tryck i båda kamrarna.
Här beskrivs en procedur för att utföra invasiva, slutna bröstkorgar, sekventiella tryck-volym-loopar för vänster och höger kammare (PV) på samma djur. Solcellsslingor förvärvas med hjälp av admittansteknik med en mustryck-volymkateter och tryck-volymsystem-insamling. Proceduren beskrivs, från halsdissektionen, som krävs för att komma åt den högra halsvenen och den högra halspulsådern, till införandet och placeringen av katetern och slutligen datainsamlingen. Därefter diskuteras de kriterier som krävs för att säkerställa förvärv av högkvalitativa solcellsslingor. Slutligen beskrivs kortfattat analysen av PV-slingorna i vänster och höger kammare och de olika hemodynamiska parametrar som finns tillgängliga för att kvantifiera systolisk och diastolisk ventrikulär funktion.
Introduction
Enligt Världshälsoorganisationen (WHO) är hjärtsjukdomar den vanligaste dödsorsaken i världen för både män och kvinnor 1,2,3. Många studier fokuserar på att diagnostisera och förbättra nedsatt hjärtfunktion4. För dessa tillämpningar är högkvalitativ och reproducerbar utvärdering av hjärtfunktionen avgörande. Tillförlitliga och reproducerbara kateterdata krävs för att bedöma både etiologiska och terapeutiska svar. Till exempel är bedömning av hjärtfunktion avgörande för att utvärdera effekten av läkemedel och andra behandlingar i prekliniska modeller av hjärtinfarkt5. Medan många kardiovaskulära studier fokuserar på vänsterkammarfunktion, är högerkammarfunktion också en avgörande faktor för funktionsförmåga och prognos hos patienter med lung-kärlsjukdom 6,7. Hos patienter med avancerad hjärtsvikt är ihållande förhöjt högersidigt och vänstersidigt fyllnadstryck prediktivt för den kombinerade risken för död, kardiovaskulär sjukhusvistelse och hjärttransplantation8. Vid kombinerad aorta- och mitralisklaffsjukdom är preoperativ myokardfunktion (återspeglas i parametrar som hjärtindex och ejektionsfraktion i vänster kammare) den huvudsakliga prediktorn för långtidsöverlevnad9. Högerkammarfunktion är den viktigaste prediktorn för både morbiditet och mortalitet vid pulmonell arteriell hypertension10,11. Således är bedömning av högerkammarfunktionen en nödvändig komponent i en omfattande preklinisk studie med modeller av pulmonell arteriell hypertension12,13,14.
Vänster- och högerkammarfunktionen studeras ofta oberoende av varandra. Men eftersom funktionerna i vänster och höger kammare är intimt sammankopplade är det idealiskt att få en biventrikulär bedömning av systolisk och diastolisk funktion från ett enda test15. Till exempel delar höger kammare sneda fibrer i den interventrikulära skiljeväggen med vänster kammare, vilket utgör en av de mekaniska länkarna mellan vänster och höger kammares kontraktila funktion16,17. Detta fenomen, känt som systolisk ventrikulär interaktion, gör att vänsterkammarkontraktion kan förstärka högerkammarkontraktionen. Ventrikulära interaktioner under diastole är också viktiga. Under diastole påverkar volymen av en kammare volymen av den motsatta kammaren och förändrar därmed diastolisk följsamhet och preload18,19. Vid patologiska tillstånd kan nedsatt funktion i en kammare, eller nedsatt volymbelastning, direkt eller indirekt försämra funktionen i den andra kammaren20. Som en konsekvens av systolisk ventrikulär interaktion kan en global minskning av vänsterkammarfunktionen minska högerkammarens kontraktila funktion15. Hos patienter med hjärtsvikt på grund av systolisk vänsterkammarfunktion och förhöjt diastoliskt tryck är lungartärtrycket förhöjt, vilket indirekt ökar efterbelastningen av höger kammare21,22. Omvänt utövar ökat högerkammartryck och volymöverbelastning vid svår pulmonell hypertension en mekanisk kompression på vänster hjärta. Denna D-formade tillplattning av vänster kammare, orsakad av en vänsterförskjutning i den interventrikulära skiljeväggen, minskar vänsterkammarvolymerna och försämrad systolisk och diastolisk funktion 23,24,25,26,27. Således är bedömningen av både vänster och höger kammare avgörande för att utvärdera global hjärtfunktion i prekliniska modeller av mänskliga sjukdomar.
Hjärtfunktionen kan också bedömas med icke-invasiv ekokardiografi, magnetisk resonanstomografi (MRT) och invasiv kateterisering28,29,30. Ekokardiografi är den vanligaste avbildningsmodaliteten inom kardiovaskulär forskning eftersom den är relativt billig och tillgänglig31. Ekokardiografi har dock flera tekniska begränsningar, bland annat indirekt mätning av fyllnadstryck och begränsad förmåga att kvantifiera diastolisk funktion. Dessutom är kvaliteten på de data som erhålls genom ekokardiografi i hög grad operatörsberoende. Hjärt-MR är ett relativt nytt tillskott till prekliniskt avbildningsarsenal som har stor potential för kvantitativ bedömning av biventrikulär funktion. Kvantifiering med hjärt-MRT är korrekt, eftersom den inte gör geometriska antaganden om ventrikulär form, till skillnad från ekokardiografi32. MR-avbildningsplattformen är dock dyr och är sällan tillgänglig. Dessutom kräver bearbetningen av MRT-data kompetent stöd av en fysiker eller motsvarande forskare, vilket saknas i många prekliniska laboratorier33. På samma sätt ger användningen av mikrodatortomografi (MicroCT) i prekliniska studier kvantitativa högupplösta tredimensionella (3D) anatomiska data som kan erhållas icke-invasivt, vilket möjliggör longitudinella studier34. MikroCT-avbildning kräver dock injektion av kontrastmedel, som ofta är dyra. MicroCT-bildbehandlingsplattformen, liksom MRI, är också dyr och kräver också en skicklig tekniker.
Kateterisering är däremot en invasiv teknik som innebär att en kateter förs in i höger och/eller vänster kammare för att mäta tryck och/eller volym. De verktyg som krävs för att utföra hjärtkateterisering är inte lika dyra som ekokardiografi, CT eller MRT. Betydande teknisk kompetens för kateterisering och smådjursanestesi krävs dock. Kateterisering möjliggör direkta och noggranna bedömningar av hjärtfunktionen28. I detta protokoll används en PV-kateter för att bedöma hjärtfunktionen. Denna teknik, baserad på de distinkta elektriska konduktansegenskaperna hos blod och hjärtmuskel, möjliggör samtidig registrering av tryck och volym i hjärthålan och generering av PV-slingor i realtid 5,35. Kortfattat består katetern av både excitationselektroder och registrerande elektroder. Excitationselektroderna genererar ett elektriskt fält inuti höger eller vänster kammare. Den inre inspelningselektroden mäter spänningsförändring, som är proportionell mot en förändring i motstånd. Att härleda ventrikelvolymen baseras på Ohms lag (spänning = ström x resistans) från vilken konduktans (dvs. inversen av resistans) beräknas. I denna inställning är det uppmätta konduktansvärdet en kombination av blodkonduktans och muskelkonduktans. I det elektriska fältet är blodet rent resistivt medan muskler har både kapacitiva och resistiva egenskaper. Muskelns kapacitiva egenskap orsakar en tidsfördröjning i den uppmätta signalen. Genom att spåra denna fördröjning, känd som "fasvinkeln", rapporteras hjärtvävnadens intrång i fältet när hjärtat drar ihop sig. Detta mått är störst vid systole och lägst vid diastole. Denna egenskap gör det möjligt att separera muskelkomponenten i konduktansen från den i blod och möjliggör en nära approximation av absoluta systoliska och diastoliska volymer. Tryck-volymslingor ger en rad hemodynamiska parametrar som inte är lätta att mäta med andra metoder, till exempel enkel retrograd kateterisering med vätskefyllda katetrar för att mäta hjärttryck. Tryck-volymslingor mäter kammartryck men ger också data om kontraktilitet, elastans, effekt, energi och effektivitet. Dessutom ger solcellsslingor robusta kvantitativa mätningar36. Bedömning av hjärtfunktion med hjälp av PV-slingor som genereras av kateterisering har därför blivit den gyllene standarden inom preklinisk forskning37. Dessutom är prekliniska tekniker relevanta för sjukdomar hos människa där hjärtkateterisering, om än med vätskefyllda katetrar, är vanligt. Hjärtkateterisering hos gnagare kräver dock oklanderlig anestesi och utmärkt teknik för att förhindra överdriven blodförlust, hypoventilation eller förändringar i kroppstemperaturen.
Hos patienter utförs hjärtkateterisering i sluten bröstkorg och vaskulär åtkomst uppnås via halsvenen eller nyckelbensvenen för höger kammare och radial- eller lårbensartären för vänster kammare. På grund av mössens ringa storlek är metoden med stängd bröstkorg ofta utmanande. Studier som utförs på möss använder därför ofta en öppen bröstkorg. Denna teknik innebär att bröstkorgen öppnas, vilket exponerar hjärtat och underlättar införandet av katetern genom punktion av vänster och/eller höger kammares apex38. Även om detta tillvägagångssätt är tekniskt mindre utmanande och ganska reproducerbart, inkluderar dess största begränsningar blödning och andra komplikationer av apikal insättning av katetrar, och en markant minskning av intrakardiellt tryck till följd av att brösthålan öppnas för atmosfärstryck. Öppning av bröstkorgen hos en ventilerad gnagare inducerar en minskning av det systoliska trycket i vänster kammare med 5–10 mm Hg och en minskning av trycket i höger kammare med 2–5 mm Hg39. Därför utvecklades en sluten bröstkorg som är mindre traumatisk för hjärtat och ger mer fysiologiskt relevanta mätningar som lättare kan översättas till klinisk bedömning av hjärtfunktionen.
Protocol
Alla experiment utfördes i enlighet med Queen's Universitys riktlinjer för biosäkerhet och etik (ROMEO/TRAQ#6016826). De förfaranden som följdes utfördes i enlighet med institutionella riktlinjer. Detta är en terminalprocedur. På grund av den invasiva effekten av höger och vänster kateterisering bör djuren avlivas omedelbart efter datainsamlingen. Avlivning ska utföras i enlighet med institutionens riktlinjer för djurstudier.
1. Experimentell förberedelse och uppställning
- Lägg katetern i en 10 ml spruta med koksaltlösning/heparin, i rumstemperatur 30 minuter innan experimentet påbörjas (Figur 1A).
- Efter 30 minuter kalibrerar du katetern (t.ex. baslinjen och insamlingssystemet) enligt tillverkarens rekommendationer. Exponeringssystemet visar höga och låga kalibreringsvärden som används för att kalibrera exponeringssystemet innan ett experiment påbörjas. Mata ut dessa värden och se till att de matchar.
- Använd knappen "Tryckbalanskontroll", "Grov +/- " eller "Fin +/-" för att ställa in baslinjetrycksvärdet på noll.
- Utför en tvåpunktskalibrering för hög och låg signal.
- På kontrollkonsolen trycker du på "Systeminställning" i "Katetermenyn".
- Tryck på "Skicka kalibreringssignal" i "Systeminställningsmenyn" för att skicka den låga signalen. Se till att trycket, volymen, fasen och magnituden är vid 0 mm Hg, 0 μL, 0° respektive 0 μs.
- Tryck på "Enter" för att skicka den höga signalen. Se till att tryck, volym, fas och storlek är vid 100 mm Hg, 150 μL, 20° respektive 5 000 μs.
- Tryck på "Enter" för att återgå till "Systeminställningsmenyn".
- Tryck på "6" för att återgå till "Katetermenyn". Tryck sedan på "Hämta data".
- Böj en 30 G nål till ungefär 90° (Figur 1B,C). Denna böjda nål kommer att användas för att punktera hals- och halspulsåderkärlen.
2. Anestesi och kroppstemperaturkontroll
- Placera musen (28 g, C57BL/6 i detta protokoll) i en anestesikammare som innehåller anestesigas (dvs. syre 100 %, isofluran 3–4 % för induktion).
- När djuret är bedövat och inte reagerar på nyp i tassar eller svansar, placera musen på rygg på värmedynan som är inställd på 37 °C.
- Anslut musen till andningsskyddet genom en näskon som ger en blandning av 100 % syre och 2 % isofluran. För att automatiskt beräkna de rekommenderade ventilationsinställningarna anger du djurets vikt i ventilatorns egenutvecklade programvara med hjälp av pekskärmen. Beräkningarna använder följande formel:
Tidalvolym = 6,2 x djurvikt1,01 (kg),
Andningsfrekvens = 53,5 x djurmassa-0,26 (kg). - Slå på bedövningsslangen från anestesikammaren till näskonen.
- Sätt in temperaturåterkopplingssonden i ändtarmen och dynsonden mellan dynan och baksidan av musen, ställ in önskad kroppstemperatur till 37 °C–37.5 °C. Kontrollera djurets temperatur på monitorn (Figur 2A,B).
- Tejpa fast framtassarna och en distal tass på musen på värmefilten med hjälp av kirurgtejp, så att en baktass är fri för att övervaka anestesidjupet.
3. Åtkomst till kirurgiskt område
- Utför ett 2 cm H-format ventralt cervikalt snitt från manubrium till hyoidbenets nivå.
- Reflektera huden bort från de underliggande musklerna. Vid behov kan dessa muskler skäras bort för bättre visualisering.
- Flytta försiktigt den submandibulära körteln åt sidan.
- Dissekera den cervikala mjukvävnaden och exponera sternocleidomastoideus och sternohyoidmuskeln med tång med hjälp av den trubbiga dissektionsmetoden.
- Dela fascian på mitten och lägg dig över den parade sternohyoiden. Låt den parade sternohyoiden dra sig tillbaka i sidled för att exponera luftstrupen. Var försiktig så att du inte skadar halspulsådrorna och vagusnerverna, som löper längs luftstrupen.
- Passera pincett under luftstrupen för att höja den. För sedan en 4.0 kirurgisk silkessutur under luftstrupen och gör en potentiell knut i mitten av suturen, som senare kommer att dras åt för att säkra endotrakealtuben (Figur 3A).
- Använd en sax och gör ett litet snitt mellan broskringarna i luftstrupen under struphuvudets nivå. Sätt i endotrakealtuben (Figur 3B).
- Anslut trakealkanylen till andningsskyddet och börja ventilera med 100 % syrgas och 2 % isofluran. Dra åt knuten runt luftstrupen för att säkra endotrakealtuben och tejpa fast respiratorslangen på operationsbordet. Se till att luftstrupen inte är blockerad eller kollapsad (Figur 3C).
4. Isolering av höger hals och höger halspulsådern
- Isolering av höger halspulsådern
- Använd trubbig dissektion och förskjut sternohyoidmuskeln lateralt för att exponera och isolera den högra halspulsådern.
- Isolera halspulsådern från vagusnerven genom trubbig dissektion med pincett.
- För tre kirurgiska suturer (4,0) under halspulsådern, exklusive vagusnerven.
- Isolering av höger halsven
- Förskjut den submandibulära och öronspottkörteln i sidled för att visualisera den högra halsvenen. Dissekera och exponera den högra halsvenen med hjälp av en pincett. Dissekera venen försiktigt och ta bort den omgivande fascian.
- Passera pincett under halsvenen.
- För en kirurgisk sutur under halsvenen och knyt den sedan på den kraniala sidan av venen. Applicera skonsam dragning på denna sutur i riktning mot huvudet med hjälp av en hemostatisk klämma.
- För ytterligare två suturer under halsvenen. Dra försiktigt den mest distala suturen i kaudalriktning med hjälp av en hemostatisk klämma. Gör en lös, potentiell knut i den mellersta suturen.
- Applicera flera droppar uppvärmd, fysiologisk koksaltlösning på kärlet på platsen för den förväntade venotomin.
5. Kirurgiska ingrepp för högerkammar- och vänsterkammarkateterisering
- Kateterisering av höger kammare (Figur 4 A–D).
- Använd stereomikroskopet för att identifiera halsvenen.
- Applicera försiktigt överlägsen dragkraft på venen. Utför en venotomi genom att föra in en 30 G böjd nål mellan kranialsuturen och den mellersta suturen. Stick in nålen i 140° vinkel i förhållande till venen för att säkerställa att den går in på ett koaxialt sätt.
- När den är införd, vidga venotomin genom att flytta nålen. För in kateterspetsen i venotomin, under nålen. Knyt sedan försiktigt den mellersta suturen och fäst katetern.
OBS: Var extremt försiktig så att du inte knyter suturen för hårt, eftersom överdriven kraft kan skada katetern. - Släpp den kaudala suturen och för in katetern i höger kammare och detektera den klassiska tryckvågformen för höger kammare på en kontinuerlig monitor.
- Stabilisera trycket i höger kammare. Säkerställ korrekt placering av katetern i höger kammare för att skapa en optimal PV-slinga.
- Stabilisera magnituden, som reflekterar blodet och muskeln, för att generera tryck-magnitudslingor (dvs. Y-axelns tryck, X-axelns storlek). Om det behövs, vrid försiktigt kateterskaftet för att uppnå optimal placering av katetern längs höger kammares axel.
OBS: Det maximala fasvärdet, som återspeglar muskeln, bör vara under 7°.
- Stabilisera magnituden, som reflekterar blodet och muskeln, för att generera tryck-magnitudslingor (dvs. Y-axelns tryck, X-axelns storlek). Om det behövs, vrid försiktigt kateterskaftet för att uppnå optimal placering av katetern längs höger kammares axel.
- När loopsignalen för tryckstorlek är optimal, tryck på "Enter" på konsolen under exponeringen för att utföra en baslinjeskanning. Se till att pulsen som rapporteras på monitorskärmen i slag per minut (bpm) ligger inom ett fysiologiskt intervall (dvs. 400–600 bpm).
- Generera PV-slingorna. Ändra "Magnitude" till "Volume" som en parameter för X-axeln och behåll trycket som Y-axeln. När PV-slingsignalen är optimal, spela in i 30 s.
- Stoppa inspelningen. Dra tillbaka katetern och torka försiktigt av med gasbinda. Lägg katetern i heparin/natriumkloridlösning och knyt ihop den kaudala suturen för att stoppa blödningen från halsvenen.
- Kateterisering av vänster kammare (Figur 5 A–D).
- Höj försiktigt den högra halspulsådern, som tidigare var isolerad (5A) genom att skjuta in den böjda pincetten under artären.
- Knyt den tidigare suturen och täpp därmed till artären. Applicera sedan försiktigt kraniellt riktad dragkraft med hjälp av en hemostatisk klämma.
- Dra den mest distala suturen i kaudal riktning med hjälp av en hemostatisk klämma. Gör en lös potentiell knut på den mellersta suturen.
- Applicera flera droppar uppvärmd, fysiologisk koksaltlösning på kärlet på platsen för den förväntade arteriotomin. Fokusera på kranialsektionen, mellan den kaudala och den mellersta suturen, med hjälp av det stereotaktiska mikroskopet.
- Applicera försiktigt överlägsen dragkraft på artären. Utför en arteriotomi genom att föra in en 30 G böjd nål mellan kranialsuturen och den mellersta suturen. Stick in nålen i 140° i förhållande till artären för att säkerställa att den går in på ett koaxialt sätt.
- För in kateterspetsen i arteriotomin och dra sedan åt den mellersta suturen för att säkra katetern. Släpp samtidigt den distala suturen och för in katetern i aortan för att börja spela in. Se till att tryckkanalen visar ett typiskt aortaspår.
- För katetern bakåt över aortaklaffen in i vänster kammare. Inträdet i vänster kammare kommer att vara tydligt från den plötsliga markanta minskningen av det diastoliska trycket från aortan.
- Stabilisera trycket i vänster kammare. Säkerställ korrekt placering av katetern i vänster kammare för att skapa en optimal PV-slinga.
- Stabilisera magnituden, som reflekterar blodet och muskeln, för att generera tryck-magnitudslingor (dvs. Y-axelns tryck, X-axelns storlek). Om det behövs, vrid försiktigt kateterskaftet för att uppnå optimal placering av katetern längs vänster kammares axel.
OBS: Det maximala fasvärdet, som återspeglar muskeln, bör vara under 7°.
- Stabilisera magnituden, som reflekterar blodet och muskeln, för att generera tryck-magnitudslingor (dvs. Y-axelns tryck, X-axelns storlek). Om det behövs, vrid försiktigt kateterskaftet för att uppnå optimal placering av katetern längs vänster kammares axel.
- Stoppa inspelningen. Dra tillbaka katetern och lägg den i heparin/natriumkloridlösning. Knyt sedan ihop den kaudala suturen.
- Rengör katetern med ett enzymatiskt rengöringsmedel (t.ex. endozim).
OBS: Efter operationen, avliva djuret enligt institutionens riktlinjer för djurstudier.
6. Analys av data
- Utför PV-slinganalysen enligt fastställda rekommendationer.
- Välj den optimala tryck-volym-spårningen (helst en hel, stabil 30 s-inspelning). På programvaran klickar du på "Avancera", klickar på "Loopar" och klickar sedan på "Offlineberäkning".
- Välj volym som volymkanal och tryck som tryckkanal.
- För konsekventa resultat krävs minst 20 slingor.
Representative Results
Katetern placerades i en 10 ml spruta innehållande en lösning av hepariniserad koksaltlösning vid rumstemperatur 30 minuter före kateteriseringen (Figur 1A). En 30 G nål böjdes ~90° (Figur 1B, C) och en trakeotomicanula med en diameter på 1,45 mm förbereddes (Figur 1C).
Upprätthållandet av fysiologisk kroppstemperatur är avgörande. Musen tejpades fast och kopplades till respiratorn genom en noskon. Återkopplingssonden placerades mellan plattan och baksidan av musen. En rektal sond sattes in för att övervaka djurets kroppstemperatur (Figur 2A). Kroppstemperatur (37,1 °C) och dynans temperatur (40,7 °C) övervakades (figur 2B).
Fotografier av de kritiska stegen i intubationsproceduren visas i figur 3A–C. Framgångsrik och obehindrad intubation resulterade i en regelbunden andningsfrekvens med stabilt topptryck (Figur 2B).
Bilder av de kritiska stegen i höger hjärtkateterisering, från isoleringen av halsvenen (Figur 4A–C) till införandet av katetern i halsvenen visas i figur 4D. Figur 5 visar de kritiska stegen i vänster hjärtkateterisering, inklusive isolering av höger halspulsåder (Figur 5 A, B) och kateterinsättning (Figur 5 C, D)
Katetern fördes in i halsvenen och fördes in i höger kammare. Därefter stabiliserades trycket i höger kammare och korrekt positionering verifierades. Alla kateterns elektroder (6 mm långa axellängder) måste vara i höger kammare och inte i kontakt med kammarens väggar. Optimal positionering av katetern som schematiskt representeras i figur 6A genererade optimala PV-slingor (dvs. triangulära, regelbundna). Felaktig positionering som schematiskt visas i figur 6B (dvs. kontakt med kammarväggen) kommer att resultera i felaktiga PV-slingor (dvs. kollapsade och oregelbundna slingor).
Katetern fördes in i halspulsådern, fördes in i aortan och avancerade sedan bakåt över aortaklaffen till vänster kammare. Trycket i vänster kammare stabiliserades och högerpositioneringen verifierades. Alla kateterelektroder (6 mm långa axellängder) ska vara i vänster kammare och inte i kontakt med kammarens väggar. Optimal positionering av katetern som schematiskt visas i figur 6C genererade optimala PV-slingor (dvs. rektangulära, regelbundna). Felaktig positionering som schematiskt representeras i figur 6D (dvs. kontakt med kammarväggen) resulterade i bristfälliga PV-slingor (dvs. kollapsade, icke-rektangulära och oregelbundna slingor).
Representativ hemodynamik genererad av vänster och höger PV-slingor visade en hjärtfrekvens på 410 slag per minut, en hjärtminutvolym på 9 107 μL/min och en slagvolym på 24,5 μL. Specifika parametrar för höger kammare visade ett systoliskt tryck i höger kammare på 21,9 mm Hg, diastoliskt tryck i höger kammare 1,049 mm Hg, ejektionsfraktion på 56,1 %, dp/dt max på 1 469 mm Hg/s, dp/dt max på -1 504 mm Hg/s, slutdiastolisk volym på 38,4 μL, slagarbete på 0,068 mJ, tryck-volymarea på 0,089 mJ, pulmonell arteriell elastans (Ea) på 0,83 mm Hg/μL och Tau-faktor på 12,8 ms. Specifika parametrar för vänster kammare visade ett systoliskt tryck i vänster kammare på 77,1 mm Hg, diastoliskt tryck i vänster kammare på 2,33 mm Hg, ejektionsfraktion på 59,1 %, dp/dt max på 4 695 mm Hg/s, dp/dt max på -3 553 mm Hg/s, diastolisk slutvolym på 36,9 μL, slagarbete på 0,14 mJ, tryck-volymarea på 0,22 mJ, arteriell elastans (Ea) på 5,37 mm Hg/μL och Tau-faktor på 15,1 ms (tabell 1).
| Hemodynamiska parametrar | |
| HR (BPM) | 410,6 ± 23,3 |
| CO (μL/min) | 9107 ± 1016 |
| SV (μL) | 24,5 ± 2,3 |
| RV-funktion | |
| RVSP (mmHg) | 21,9 ± 2,15 |
| RVEDP (mmHg) | 1,042 ± 0,12 |
| EF (%) | 56,1 ± 4,4 |
| dP/dt max (mmHg/s) | 1469 ± 170 |
| dP/dt max (- mmHg/s) | 1504 ± 215 |
| EDV (μL) | 38,4 ± 3,7 |
| SW (mJoule) | 0,068 ± 0,008 |
| PVA (mJoule) | 0,084 ± 0,009 |
| Ea (mmHg/μL) | 0,83 ± 0,09 |
| Tau-faktor (ms) | 12,8 ± 0,8 |
| Funktionen LV | |
| LVSP (mmHg) | 77,1 ± 2,4 |
| LVEDP (mmHg) | 2,33 ± 0,17 |
| EF (%) | 59,1 ± 3,6 |
| dP/dt max (mmHg/s) | 4695 ± 355 |
| dP/dt max (- mmHg/s) | 3553 ± 373 |
| EDV (μL) | 36,9 ± 4,8 |
| SW (mJoule) | 0,14 ± 0,013 |
| PVA (mJoule) | 0,22 ± 0,03 |
| Ea (mmHg/μL) | 5,37 ± 0,9 |
| Tau-faktor (ms) | 15,07 ± 1,7 |
| CO, hjärtminutvolym; Ea, arteriell elastans; EDV, diastolisk slutvolym; HR, hjärtfrekvens; LVEDP, diastolisk slutvolym för vänster kammare; LVSP, systoliskt tryck i vänster kammare; PVA, tryckvolymområde; RVEDP, diastoliskt tryck i höger kammare; RVSP, systoliskt tryck i höger kammare; SV, slagvolym; SW, stroke arbete; Tau-faktorn, Tau Mirsky. N= 6 möss. Värdena uttrycks ± SEM | |
Tabell 1: Tabell över hemodynamiska parametrar. Hemodynamisk parameter för vänster och höger kammare uppmätt hos sex möss.
Figur 1: Experimentell förberedelse och uppställning. (A) Kateter i en 10 ml spruta med koksaltlösning/heparin, (B), (C) 30 G nål böjd till ca 90°, (D) trakeotomicanula, 1,45 mm diameter. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: Anestesi, kroppstemperaturkontroll . (A) Mus med tre tassar tejpade, anslutna till andningsskydd genom en noskon, med återkoppling och rektala sonder insatta. Observera att värmedynan ligger under operationsfilten. (B) Temperaturövervakningskontroll som visar kroppstemperatur (rektal) och dyna (återkoppling) och ventilationsparametrarna: andningsfrekvens (inställd RR), genomsnittlig tidalvolym (Meas TV), topptryck (PeakPress) och minutventilation (MinVol). Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: Intubationsprocedur. (A) Skinnet drogs bort och skars upp. Underkäkskörteln flyttades försiktigt åt sidan. Sternocleidomastoideusmuskeln och sternohyoidmuskeln drogs isär och sedan fördes pincett in under luftstrupen med hjälp av en mjuk, trubbig dissektion. (B) Kirurgiskt silke (4.0) fördes in under luftstrupen och ett litet snitt gjordes framtill mellan två broskringar i luftstrupen. Trakeostomin sattes in och knöts. (C) Trakealkanylen var ansluten till ventilatorn och suturen knöts runt slangen. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 4: Kateterisering av höger kammare. (A), (B), (C) Den högra halsvenen isolerades, sedan fördes en kirurgisk sutur in under venen och knöts på den kraniala sidan av venen. Skonsam dragkraft applicerades på denna sutur i riktning mot huvudet med hjälp av en hemostatisk klämma. Ytterligare två suturer fördes distalt, under halsvenen. Den mest distala suturen drogs försiktigt i kaudal riktning med hjälp av en hemostatisk klämma. En lös, potentiell knut gjordes i den mellersta suturen. (D) Katetern fördes in i halsvenen, den mellersta suturen knöts till katetern. Bilderna i (C) och (D) förstoras genom ett stereomikroskop. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 5: Vänsterkammarkateterisering. (A), (B) Den högra halspulsådern isolerades, sedan fördes en kirurgisk sutur in under halsvenen och knöts på den kraniala sidan av venen. Skonsam dragkraft applicerades på denna sutur i riktning mot huvudet med hjälp av en hemostatisk klämma. Ytterligare två suturer fördes in under halspulsådern. Den mest distala suturen drogs försiktigt i kaudal riktning med hjälp av en hemostatisk klämma. En lös, potentiell knut i den mellersta suturen gjordes. (C) Kateterns spets fördes in i halspulsådern och sedan knöts den mellersta suturen till katetern för att säkra den. (D) Katetern fördes försiktigt bakåt ner i halspulsådern mot aortan. Bilderna i (B), (C), (D) förstoras genom ett stereomikroskop. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 6: Schematisk representation av kateterpositionering och resulterande PV-slingor. (A) Optimal kateterpositionering i höger kammare. Kateterns spets är i mitten av kammaren, isolerad från kammarens väggar. Representativa PV-slingor som är resultatet av en optimal kateterplacering i höger kammare (dvs. stabil, triangulär). (B) Felaktig kateterplacering i höger kammare. Kateterns spets är i kontakt med kammarväggarna. Representativ PV loopar brus till följd av en suboptimal kateterplacering i höger kammare (dvs. kollapsad, oregelbunden). (C) Optimal kateterpositionering i vänster kammare. Kateterns spets är i mitten av kammaren, isolerad från kammarens väggar. Representativa PV-slingor till följd av optimal kateterpositionering i vänster kammare (dvs. stabil, rektangulär). (D) Felaktig kateterplacering i vänster kammare. Kateterns spets är i kontakt med kammarväggarna. Representativa PV-slingor till följd av en suboptimal kateterplacering i vänster kammare (dvs. kollapsad, oregelbunden). Ett 50 Hz FIR-brusfilter applicerades för att generera PV-slingorna. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Discussion
Bedömning av hjärtfunktion är ett kritiskt steg för preklinisk kardiovaskulär och lungvaskulär forskning. I detta arbete föreslog vi ett protokoll för en sluten bröstkorgsbiventrikulär bedömning av hjärtfunktionen hos möss. Genom detta tillvägagångssätt kan man generera PV-slingor för höger kammare och vänster kammare i samma mus. Detta tillvägagångssätt ger en robust och fullständig bedömning av hjärtfunktionen, vilket möjliggör mätning av systolisk och diastolisk funktion, såväl som slagvolym och hjärtminutvolym. Till skillnad från den öppna bröstkorgen som traditionellt används för kateterisering av gnagare, resulterar denna slutna bröstteknik i stabilare fysiologi och mer fysiologiskt relevanta data. Även om det är tekniskt mer utmanande och beroende av operatörens skicklighet för att framgångsrikt placera katetern i höger och vänster kammare, begränsar den slutna bröstkorgen det trauma och den blödning som är förknippad med öppen bröstkirurgi och minskar de drastiska tryckförändringar som är förknippade med att utsätta lungorna för atmosfärstryck. Metoden med sluten bröstkorg efterliknar också bättre den hjärtkateteriseringsprocedur som utförs på patienter, vilket ökar relevansen av att använda denna teknik i preklinisk forskning.
Det kirurgiska ingreppet är det kritiska steget i protokollet. Även när du använder ett kirurgiskt mikroskop för kateterinsättning i halsvenen eller halspulsådern, vilket rekommenderas, kräver denna procedur övning och teknisk skicklighet. Noggrann dissektion av kärlen fria från omgivande fascia med hjälp av skonsam, trubbig dissektion kommer att öka framgången med kanylering samtidigt som risken för blödning minimeras. För att minimera blodförlusten är det viktigt att kanylera halspulsådern i sekventiella steg: 1) för in kateterspetsen i halspulsådern; 2) Knyt försiktigt suturen runt den del av artären som innehåller katetern. 3) Släpp den säkra suturen, så att katetern kan röra sig samtidigt som du bibehåller en försiktig dragning uppåt för att minimera blödningen. och 4) för katetern till aortan. Placeringen av katetern i ventrikeln, som bestäms av vågformsövervakning i realtid, är den mest utmanande delen av detta protokoll. Alla kateterelektroder ska vara i ventrikelhålan och ingen ska vidröra väggen. All felaktig placering av katetern kommer att resultera i oregelbundna PV-slingor och kommer att påverka eller förhindra datainsamling negativt. Att känna igen den karakteristiska tryck-volym-vågformen som är resultatet av att ha alla elektroder i kammaren gör att man kan vara säker på en lämplig kateterposition. Det är viktigt att få en stabil ventrikulär tryckvågform och stabila tryckstorleksslingor innan du växlar till PV-läge och volymförvärv. Korrekt kunskap om hjärtats fysiologi och anatomi är avgörande för att lyckas med denna procedur. Onlineavläsning av PV-spåren, från förmaket, trikuspidalklaffområdet och höger kammare, kommer att visa kateterns framfart och hjälpa till att uppnå korrekt positionering. Det är viktigt att känna till den normala hjärtfrekvensen (400–600 slag per minut) och förväntade vågformer och tryck (t.ex. systoliskt tryck i höger kammare, 18–25 mm Hg, diastoliskt tryck <5 mm Hg; systoliskt tryck i vänster kammare 60–120 mm Hg40, diastoliskt tryck <8 mmHg) hos möss för att göra det möjligt för operatören att utvärdera sanningshalten i observerade data.
Kvaliteten och reproducerbarheten av data beror på procedurens hastighet och blodförlust eller blödning. Proceduren från anestesi till slutförande av datainsamling tar i genomsnitt ~30–40 min/mus. Kateterisering av höger hjärta från införandet av katetern till datainsamling tar 5–10 minuter, kateterisering av vänster hjärta från införandet av katetern till datainsamlingen tar ytterligare 10–15 minuter. Data av publikationskvalitet erhålls i ~75 % av fallen. Sekvensen av steg i hjärtkateteriseringen ska hållas konstant mellan djuren. Vid denna procedur intuberas mössen först, följt av högerkammarkateterisering och slutligen vänsterkammarkateterisering. Beslutet att gå vidare i denna ordning baseras på den större svårigheten och blödningsrisken vid kateterisering av vänster hjärta jämfört med höger hjärta. En ospecifik 50 Hz brusinspelningsartefakt kan observeras. Detta brus kan minskas med hjälp av ett FIR-filter med en hög avstängning vid 50 Hz och en låg avstängning på 0 på programvaran. För volymkanalen skapar du ett nytt kanal/filter/FIR-filter. Ett notchfilter på 50 Hz kan också användas under datainsamlingen för att eliminera nätbrus och ta bort eventuella radiofrekvensstörningar.
Ju snabbare kateteriseringen utförs, desto bättre blir kvaliteten på datan. Baserat på tidigare erfarenhet rekommenderas det att skaffa data inom 15 minuter. Ökad kateteriseringstid ökar den fysiologiska stressen på djuret och ökar risken för arytmi på grund av närvaron av katetern i kaviteten. Dessa krafter kan minska slagvolymen och försämra reproducerbarheten och tolkningsbarheten av vågformerna. Dessutom är kateterns spets vass och kan skada eller punktera kammaren. Detta är särskilt viktigt för höger kammare, som är ~ 1/3av tjockleken på vänster kammare.
Invasiv trakeostomi och mekanisk ventilation med positivt tryck resulterar i stabil och kontrollerad andning av mössen och minskar variabiliteten i PV-slingorna. Positivt slutexpiratoriskt tryck (PEEP) är dock en markant kontrast till normal ventilation, som är ett undertrycksfenomen. Tillsammans sänker övertrycksventilation och PEEP hjärtminutvolymen och sänker höger hjärttryck. Således, även om det krävs för att få stabila data, kommer mekanisk ventilation såväl som kardiodepressiva effekter av anestesin att påverka PV-slingorna och bör betraktas som en begränsning. Tillfälligt stopp av mekanisk ventilation under den korta inspelningen av PV-slingor används för att eliminera denna potentiella källa till artefakter. Observera att ventilationseffektiviteten kan bekräftas genom kapnografiövervakning av koldioxid.
De tekniska färdigheter som krävs för metoden med sluten bröstkorg kan vara en begränsning för denna teknik. På samma sätt är det svårt att få en korrekt och stabil placering av katetern i kammaren. Oddsen för att lyckas ökar med operatörens erfarenhet och med mössens storlek och vikt. Kateterisering av möss under 20 g är extremt utmanande. Den unika kammargeometrin i höger kammare kan påverka volymmätningen och bör övervägas. Det bedövningsmedel som används, hjärtfrekvens, temperatur och djurstam kan påverka de hemodynamiska parametrarna och bör rapporteras och övervakas noggrant.
Sammanfattningsvis utförs både höger- och vänsterkammarkateterisering i samma mus. Beroende på forskarens specifika mål kan vänster- eller högerkammarkateterisering utföras oberoende av varandra, med hjälp av den relevanta delen av det biventrikulära ingreppet. Det tillvägagångssätt som presenteras är dock optimalt för fullständig bedömning av hjärtfunktionen.
Disclosures
Ingen
Acknowledgments
Författarna vill tacka för hjälpen och samarbetet från personalen på Queen's Universitys djuranläggning. Författarna vill tacka för hjälpen från Austin Read, TMED MSc-kandidat.
Denna studie stöddes delvis av U.S. National Institutes of Health (NIH) anslag NIH 1R01HL113003-01A1 (S.L.A.), NIH 2R01HL071115-06A1 (S.L.A), Canada Foundation for Innovation och Queen's Cardiopulmonary Unit (QCPU) 229252 och 33012 (SLA), Tier 1 Canada Research Chair in Mitochondrial Dynamics and Translational Medicine 950-229252 (S.L.A.), Canadian Institutes of Health Research (CIHR) Foundation Grant CIHR FDN 143261, William J. Henderson Foundation (S.L.A.), Canadian Vascular Network Scholar Award (F.P.) och Paroian Family-stipendiet från Pulmonary Hypertension Association of Canada (F.P.)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ADVantage Pressure-Volume System (ADV500) | Transonic | FY097B | |
| Endozime AW triple plus | Ruhof | 34521 | |
| Fiber optic dual Gooseneck | Volpi Intralux | # 6000-1 | |
| Forceps | F.S.T | 11052-10 | |
| Forceps | F.S.T | 11251-20 | |
| Gauze sponges | Dermacea | 441400 | |
| Hemostatic clamp | F.S.T | 13003-10 | |
| Hemostatic clamp | F.S.T | 13018-14 | |
| Heparin sodium | Sandoz | 023-3086 | 100 U/L |
| High-fidelity admittance catheter | Scisence; Transonic | FTH-1212B-3518 | |
| Isofluorane | Baxter | CA2L9108 | |
| labScribe v4 software | iworx | LS-30PVL | |
| Needle (30 gauge) | BD | 305106 | |
| sodium chloride injection | Baxter | JB1309M | 0.9%(wt/vol) |
| Stereo microscope | Cole-Parmer | OF-48920-10 | |
| Surgical suture | SERAFLEX | ID158000 | black braided silk, 4.0 |
| Surgical tape | 3M, Transpore | SN770 | |
| Tabletop Single Animal Anesthesia Systems | Harvard apparatus | 72-6468 | |
| Tracheotomy canula 1.45 mm diameter | Harvard apparatus | 72-1410 | |
| Ventilator, far infrared warming pad for mice and rats PhysioSuite | Kent scientific corporation | # PS-02 |
References
- Nowbar, A. N., Howard, J. P., Finegold, J. A., Asaria, P., Francis, D. P. 2014 Global geographic analysis of mortality from ischaemic heart disease by country, age and income: Statistics from World Health Organisation and United Nations. International Journal of Cardiology. 174 (2), 293-298 (2014).
- Nowbar, A. N., Gitto, M., Howard, J. P., Francis, D. P., Al-Lamee, R. Mortality From Ischemic Heart Disease. Circulation. Cardiovascular quality and outcomes. 12 (6), 005375 (2019).
- Finegold, J. A., Asaria, P., Francis, D. P. Mortality from ischaemic heart disease by country, region, and age: Statistics from World Health Organisation and United Nations. International Journal of Cardiology. 168 (2), 934-945 (2013).
- McClellan, M., Brown, N., Califf, R. M., Warner, J. J. Call to Action: Urgent Challenges in Cardiovascular Disease: A Presidential Advisory From the American Heart Association. Circulation. 139 (9), 44-54 (2019).
- Clark, J. E., Marber, M. S. Advancements in pressure-volume catheter technology - stress remodelling after infarction. Experimental Physiology. 98 (3), 614-621 (2013).
- Price, L. C., Wort, S. J., Finney, S. J., Marino, P. S., Brett, S. J. Pulmonary vascular and right ventricular dysfunction in adult critical care: current and emerging options for management: a systematic literature review. Critical Care. 14 (5), London, England. 169 (2010).
- Ryan, J. J., et al. Right Ventricular Adaptation and Failure in Pulmonary Arterial Hypertension. The Canadian Journal of Cardiology. 31 (4), 391-406 (2015).
- Cooper, L. B., et al. Hemodynamic Predictors of Heart Failure Morbidity and Mortality: Fluid or Flow. Journal of cardiac failure. 22 (3), 182-189 (2016).
- Turina, J., Stark, T., Seifert, B., Turina, M. Predictors of the long-term outcome after combined aortic and mitral valve surgery. Circulation. 100 (19), Suppl 48-53 (1999).
- Vonk Noordegraaf, A., Galiè, N. The role of the right ventricle in pulmonary arterial hypertension. European Respiratory Review : An Official Journal of the European Respiratory Society. 20 (122), 243-253 (2011).
- Vonk-Noordegraaf, A., et al. Right heart adaptation to pulmonary arterial hypertension: physiology and pathobiology. Journal of the American College of Cardiology. 62 (25), Suppl 22-33 (2013).
- Potus, F., et al. Downregulation of miR-126 Contributes to the Failing Right Ventricle in Pulmonary Arterial Hypertension. Circulation. 132 (10), 932-943 (2015).
- Potus, F., Hindmarch, C., Dunham-Snary, K., Stafford, J., Archer, S. Transcriptomic Signature of Right Ventricular Failure in Experimental Pulmonary Arterial Hypertension: Deep Sequencing Demonstrates Mitochondrial, Fibrotic, Inflammatory and Angiogenic Abnormalities. International Journal of Molecular Sciences. 19 (9), 2730 (2018).
- Xiong, P. Y., et al. Biventricular Increases in Mitochondrial Fission Mediator (MiD51) and Proglycolytic Pyruvate Kinase (PKM2) Isoform in Experimental Group 2 Pulmonary Hypertension-Novel Mitochondrial Abnormalities. Frontiers in Cardiovascular Medicine. 5, 195 (2019).
- Schwarz, K., Singh, S., Dawson, D., Frenneaux, M. P. Right Ventricular Function in Left Ventricular Disease: Pathophysiology and Implications. Heart, Lung and Circulation. 22 (7), 507-511 (2013).
- Buckberg, G., Hoffman, J. I. E. Right ventricular architecture responsible for mechanical performance: Unifying role of ventricular septum. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 148 (6), 3166-3171 (2014).
- Buckberg, G. D. The ventricular septum: the lion of right ventricular function, and its impact on right ventricular restoration. European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 29, Supplement_1 272-278 (2006).
- Farrar, D. J., Chow, E., Brown, C. D. Isolated Systolic and Diastolic Ventricular Interactions in Pacing-Induced Dilated Cardiomyopathy and Effects of Volume Loading and Pericardium. Circulation. 92 (5), 1284-1290 (1995).
- Dickstein, M. L., Todaka, K., Burkhoff, D. Left-to-right systolic and diastolic ventricular interactions are dependent on right ventricular volume. The American Journal of Physiology. 272 (6), Pt 2 2869-2874 (1997).
- Slater, J. P., et al. Systolic ventricular interaction in normal and diseased explanted human hearts. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 113 (6), 1091-1099 (1997).
- Rosenkranz, S., et al. Pulmonary hypertension due to left heart disease: Updated Recommendations of the Cologne Consensus Conference 2011. International Journal of Cardiology. 154, 34-44 (2011).
- Ranchoux, B., et al. Metabolic Syndrome Exacerbates Pulmonary Hypertension due to Left Heart Disease. Circulation Research. 125 (4), 449-466 (2019).
- Habib, G., Torbicki, A. The role of echocardiography in the diagnosis and management of patients with pulmonary hypertension. European Respiratory Review : An official Journal of the European Respiratory Society. 19 (118), 288-299 (2010).
- Brierre, G., et al. New echocardiographic prognostic factors for mortality in pulmonary arterial hypertension. European Journal of Echocardiography. 11 (6), 516-522 (2010).
- Badano, L. P., et al. Right ventricle in pulmonary arterial hypertension: haemodynamics, structural changes, imaging, and proposal of a study protocol aimed to assess remodelling and treatment effects. European Journal of Echocardiography: the Journal of the Working Group on Echocardiography of the European Society of Cardiology. 11 (1), 27-37 (2010).
- Ibrahim, E. -S. H., Bajwa, A. A. Severe Pulmonary Arterial Hypertension: Comprehensive Evaluation by Magnetic Resonance Imaging. Case Reports in Radiology. 2015, 946920 (2015).
- Pinsky, M. R. The right ventricle: interaction with the pulmonary circulation. Critical Care. 20 (1), London, England. 266 (2016).
- Kosova, E., Ricciardi, M.
- Lindqvist, P., Calcutteea, A., Henein, M. Echocardiography in the assessment of right heart function. European Journal of Echocardiography. 9 (2), 225-234 (2007).
- Fogel, M. A. Assessment of Cardiac Function by Magnetic Resonance Imaging. Pediatric Cardiology. 21 (1), 59-69 (2000).
- Janardhanan, R., Kramer, C. M.
- Attili, A. K., Schuster, A., Nagel, E., Reiber, J. H. C., vander Geest, R. J. Quantification in cardiac MRI: advances in image acquisition and processing. The International Journal of Cardiovascular Imaging. 26 (1), 27-40 (2010).
- Urboniene, D., Haber, I., Fang, Y. -H., Thenappan, T., Archer, S. L. Validation of high-resolution echocardiography and magnetic resonance imaging vs. high-fidelity catheterization in experimental pulmonary hypertension. American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (3), 401-412 (2010).
- Ashton, J. R., et al. Anatomical and functional imaging of myocardial infarction in mice using micro-CT and eXIA 160 contrast agent. Contrast Media & Molecular Imaging. 9 (2), 161 (2014).
- Larson, E. R., Feldman, M. D., Valvano, J. W., Pearce, J. A. Analysis of the Spatial Sensitivity of Conductance/Admittance Catheter Ventricular Volume Estimation. IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 60 (8), 2316-2324 (2013).
- Sasayama, S., et al. Assessment of cardiac function by left heart catheterization: an analysis of left ventricular pressure-volume (length) loops. Journal of Cardiography. Supplement. (1), 25-34 (1984).
- Lindsey, M. L., Kassiri, Z., Virag, J. A. I., de Castro Brás, L. E., Scherrer-Crosbie, M. Guidelines for measuring cardiac physiology in mice. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 314 (4), 733-752 (2018).
- Townsend, D. Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse. Journal of Visualized Experiments JoVE. (111), e53810 (2016).
- Provencher, S., et al. Standards and Methodological Rigor in Pulmonary Arterial Hypertension Preclinical and Translational Research. Circulation Research. 122 (7), 1021-1032 (2018).
- Lips, D. J., et al. Left Ventricular Pressure-Volume Measurements in Mice: Comparison of Closed-Chest Versus Open-Chest Approach. Basic Res Cardiol. 99 (5), 351-359 (2004).
