Улучшенная fecundity и анализ плодородности для Aedes aegypti используя 24 плит культуры ткани наилучшим образом (плиты EAgaL)

Summary

Описанный метод экономии времени и пространства для подсчета яйцеклеток и определения скорости вылупления отдельных комаров с использованием 24 пластин культуры тканей, которые могут существенно увеличить масштаб и скорость анализа плодовитости и фертильности.

Abstract

Комары представляют собой значительную проблему общественного здравоохранения в качестве переносчиков различных патогенов. Для тех исследований, которые требуют оценки параметров пригодности комаров, в частности производства яиц и скорости вылупления на индивидуальном уровне, традиционные методы несут существенную нагрузку на исследователей из-за высокой интенсивности труда и требований к лабораторным помещениям. Описанный простой метод, используя 24 хорошо ткани культуры пластины с агарозой в каждой хорошо и цифровой визуализации каждой хорошо, чтобы определить яйца номера и люк ставки на индивидуальном уровне с существенно сокращенным временем и пространством требования.

Introduction

Борьба с комарами для защиты человека от переносных патогенов является важной целью общественного здравоохранения, главным образом из-за отсутствия эффективных вакцин для большинства патогенных микроорганизмов, переносимых комарами. Многие исследования направлены на снижение пригодности комаров в сочетании с полевой применимой стратегией^{сокращения популяции 1,2,3.} Это включает в себя обширные исследования для создания трансгенных комаров и / или CRISPR / Cas9 нокаут линий. Такие подходы к модификации популяции требуют детальной оценки индивидуальных параметров

Protocol

1. Подготовка плиты

1. Сверлить отверстия в 24 крышках пластины культуры ткани скважины (4'6 отверстий на скважину) с помощью бытовой дрели с битом 1,6 мм (1/16 дюйма)(рисунок 2).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Эти отверстия предотвращают конденсации воды от агары накапливаться на крышке, где комары могут откладывать яйца. Стандартный размер женского штамма Ae. aegypti ("Ливерпуль") составляет 3,11 мм размах крыльев. Уменьшение размера отверстий рекомендуется при использовании небольших комаров, чтобы избежать выхода из тарелки.
2. За день до эксперимента по овипозиции тщательно промойте и промойте пластины и замочите их в отбелива....

Results

Комары были введены с dsRNA ориентации кандидата транспортер железа (FeT) или контроль гена (EGFP), крови кормили, и измеряется на плодовитость и плодовитость выход с помощью метода пластины EAgaL, после процедуры, описанной выше.

Комары, в которых выражение FeT замолчали после инъекции dsRNA, продемонстрировали значительное снижение как количества яиц, так и скоростивылупления (рисунок 11AиC). Все контрольные и лечебные комары были помещены в пла.......

Discussion

Пластина EAgaL резко сокращает труд, время и пространство для проведения индивидуальных анализов плодовитости и фертильности в Aedes aegypti по сравнению с методом FT. Предварительное сравнение метода FT и пластины EAgaL привело к сокращению времени для всех этапов (техника визуализации была применена к методу FT)(таблица 1). В качестве эталона в таблице 2 представлена оценка стартапа и анализа (одна 24 хорошо пластины EAgaL против 24 FTs).

Е.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
		1,6 мм &Phi	альтернативным подогревом гвоздей можно использовать
1000 мкм; L наконечники для пипеток (длинные)	Olympus plastics	24-165RL
24-луночный планшет для культивирования тканей	Thermo Scientific	930186	прозрачный, плоскодонный с кольцевой крышкой пластины
Agarose	VWR	0710-500G
Компактный цифровой фотоаппарат	Olympus	TG-5/TG-6
Компьютер (Windows, Mac или Linux)
Деионизированная вода
Фиджи (imageJ) программное обеспечение			скачать с: https://fiji.sc/
Щипцы	Dumont		острые щипцы могут сломать тело комара
Стеклянные чашки Петри	VWR
Бытовой отбеливатель
Бытовая электрическая дрель
для стереомикроскоп (гусиная шея)
Пипетка P-1000
Резинки SD-карта
			для записи изображений с цифровых камер (DSHC, SDXC должно быть лучше)
Корм для рыб TetraMin	Tetra		молотый с кофемолкой, блендером или ступкой и пестиком
Передаточные пипетки	VWR	16011-188