Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Biochemistry

Предконцентрация и изоляция микровесикул и экзосом на бумажной основе

doi: 10.3791/61292 Published: April 29, 2020
* These authors contributed equally

Summary

Представлен протокол для изготовления бумажного устройства для эффективного обогащения и изоляции микровесий и экзосом.

Abstract

Микровесицы и экзосомы являются небольшими membranous везикулы выпущен в внеклеточной среде и циркулирует по всему телу. Поскольку они содержат различные родительские клетки, полученные биомолекулы, такие как ДНК, мРНК, миРНК, белки и липиды, их обогащение и изоляция являются важными шагами для их эксплуатации в качестве потенциальных биомаркеров для клинических применений. Однако обычные методы изоляции (например, ультрацентрарифизация) приводят к значительным потерям и повреждению микровесичек и экзосом. Эти методы также требуют нескольких повторяющихся шагов ультрацентрифугации, загрузки и расточительства реагентов. В этой статье описывается подробный метод изготовления оригами-бумажного устройства (Exo-PAD), предназначенного для эффективного обогащения и изоляции микровесий и экзосом простым способом. Уникальный дизайн Exo-PAD, состоящий из аккордеонных многослойных с конвергентных образных областей, интегрирован с техникой поляризации концентрации иона, что позволяет пятикратное обогащение микровесий и экзосом на конкретных слоях. Кроме того, обогащенные микровесицы и экзосомы изолированы, просто разворачивая Exo-PAD.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Микровесицы и экзосомы представляют собой небольшие мембранные пузырьки размером 0,2–1 мкм и 30–200 нм соответственно. Они выделяются в внеклеточной среде несколькими различными типами клеток1,,2,,3,,4,,5. Они содержат информацию о родительских клетках в виде подмножеств ДНК, мРНК, миРНК, белков и липидов, и циркулируют по всему телу через различные жидкости организма, такие как сыворотка, плазма, моча, спинномозговая жидкость, амниотическая жидкость и слюна6,,7,,8,,9. Таким образом, методы эффективной изоляции микровесий и экзосом от биологических жидкостей могут предоставить широкие возможности в области диагностики, прогноза и мониторинга заболеваний в режиме реального времени, а также в разработке новых терапевтических средств.

Однако обычный метод изоляции микрорезокм и экзосом на основе ультрацентрифугации занимает чрезвычайно много времени и приводит к значительным потерям и загрязнению образца. Это потому, что она включает в себя несколько громоздких трубопроводов и погрузочных шагов и отбрасывания различных реагентов с повторными ультрацентрифугации5,6,10,11,12. Кроме того, высокий сдвига стресса, вызванного ультрацентрифугации (100000 х г) может вызвать физический лизис микрорез и экзосомы, что дает плохие темпы восстановления (5-23%)6,13,14. Поэтому необходимо разработать высокоэффективный, ненавязчивый метод изоляции микровесицы и экзосомы для уменьшения урона и потерь, тем самым достигая более высоких скоростей восстановления.

Устройство на основе оригами (Exo-PAD) было разработано для более простой, мягкой и высокоэффективной изоляции микровесий и экзосом6. Конструкция Exo-PAD представляет собой многоотраслую бумагу с последовательно связанными участками образца, которые постепенно уменьшаются в диаметре. Техника поляризации концентрации иона (ICP), которая является наноэлектрическим явлением, которое предконцентрирует заряженные биомолекулы, была интегрирована с этой уникальной конструкцией. Использование Exo-PAD привело к пятикратному обогащению микровесиков и экзосом в определенных слоях и их изоляции, просто развернувшись устройством. В этой статье подробно описывается Exo-PAD, от общего изготовления и эксплуатации устройства до анализа его использования, иллюстрации метода и показа репрезентативных результатов6.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Изготовление устройств

  1. Определите регион, который будет напечатан на бумаге с помощью программного обеспеченияпринтера( Таблица материалов ).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Конструкция имеет 12 восковых узорных слоев, в которых диаметры круговой выборки постепенно сужаются от 5 мм до 2 мм(рисунок 1A).
  2. Печать гидрофобного воска на обозначенных областях по обе стороны целлюлозы бумаги(Таблица материалов) с помощью коммерческого воскового принтера(Таблица материалов) (Рисунок 1B).
  3. Поместите бумагу, напечатанную на воске, в лабораторную духовку на 80 с при температуре 120 градусов по Цельсию.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Этот шаг позволяет воску достичь внутренней части бумаги путем достижения теплового потока печатного воска. С этим протоколом инкубации разрешение шаблона составляет 2 мм. Таким образом, будьте осторожны, чтобы не печатать узоры менее 2 мм. В противном случае узоры будут заблокированы воском.
  4. Вырезать воск печатной бумаги с резаком, чтобы сделать отдельные устройства (Рисунок 1C).
  5. Падение 5 л и 2 л пермяки (например, Нафион; Таблица материалов) на выборочных участках в левом и правом слоях, соответственно(рисунок 1D).
  6. Поместите слои, покрытые пермякой мембраной, на горячую тарелку при 70 градусов по Цельсию в течение 30 минут, чтобы испарить пермякзевую мембрану растворителя.
  7. Уплотните внешнюю поверхность слоя с покрытием, обращенного к буферному раствору лентой, чувствительной к давлению, оставляя небольшое отверстие.
  8. Сложите напечатанное отдельное устройство (т.е. Exo-PAD) взад и вперед вдоль белых линий.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Сложив устройство, все области выборки становятся конвергентно связаны(Рисунок 1E). Эта конвергентная конструкция фокусирует линии электрического поля, когда напряжение применяется для МСП, достигая более интенсивной предконцентрации микровесий и экзосом.

2. Обогащение и пространственное фокусировка микровесичек и экзосом поляризацией концентрации иона

  1. Нагрузка 15 мл микровесицы и экзосомного образца (3 х 1011 частиц/мл в 0,1x фосфатном солевом солевом соленом (PBS) с 0,05% Tween 20) в конвергентных областях образца путем пипетки и подождите несколько секунд, чтобы обеспечить полное смачиивание всех образцовобластей (Рисунок 1F).
  2. Поместите две акриловые камеры на обоих концах Exo-PAD и зажим Exo-PAD надежно с небольшими клипами связующего для предотвращения разворачивающихся (Рисунок 1G).
  3. Заполните камеры с 110 МЛ 0,1x PBS и вставьте два Ag/AgCl электродов (Рисунок 1H).
  4. Применить 30 V к электродам в течение 20 минут с помощью системы измерения тока напряжения источника(Таблица материалов).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Прикладное напряжение генерирует явление ПМС и, следовательно, предконцентрирует микровесицы и экзосомы на слоях 8 и 9 Exo-PAD.

3. Изоляция обогащенных микровесиков и экзосом

  1. Отделить сложенный Exo-PAD от акриловых камер и развернуть устройство, чтобы изолировать обогащенные микровесицы и экзосомы от других слоев(рисунок 1I).
  2. Удар из образца областей в слоях 8 и 9, где микровесицы и экзосомы обогащаются, для анализа вниз по течению (Рисунок 1J).

4. Сканирование электронной микроскопии анализ

  1. Исправить обогащенные микровесицы и экзосомы, погрузив пробитые области в 2,5% глутаральдегида в 0,1 млн натрия какодилат буфера на 1 ч и в 1% осмиум тетроксида в 0,1 М натрия cacodylate за 1 ч.
    ВНИМАНИЕ: Тесмий тетроксид является очень ядовитым и опасным химическим веществом. Поскольку тетроксид осмия может проникать в пластик, он должен храниться в стекле. Любая обработка тетроксида осмия должна выполняться в химическом капюшоне дыма с двойными перчатками нитрила.
  2. Обезвоживание фиксированных микровесий и экзосом с восходящими сортами 200 доказательство этанола (т.е., 50%, 70%, 90%, и 100%) в течение 30 мин каждый.
  3. Химически высушите образец, погрузив его в гексаметилдисилазан в десикатор в течение 30 мин.
    ВНИМАНИЕ: Гексаметилдисилазан является легковоспламеняющимся и влагочувствительным химическим веществом. Он должен храниться в сухом и хорошо проветриваемом участке вдали от источников зажигания.
  4. Пальто полностью высушенные микрорезы и экзосомы с золотом / палладием (20 нм) через распыление и захват сканирования электронной микроскопии (SEM) изображений.

5. Анализ отслеживания наночастиц

  1. Удар из образца областей в слоях 6, 8 и 10 с помощью биопсии удар после 20 мин работы устройства.
  2. Погрузите каждую пробитую область в буферное решение (0,1x PBS с 0,01% Tween 20).
  3. Вихрь в течение 10 мин и центрифуга на 30 с при 6000 об/мин, чтобы восстановить обогащенные микровесицы и экзосомы.
  4. Удалите пробитые области из раствора и измерьте концентрацию микровесов и экзосом с помощью инструмента анализа наночастиц (NTA)(Таблица материалов).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Время работы должно быть оптимизировано для достижения максимального выхода на восстановление обогащенных микровесий и экзосом. Недостаточное время не позволяет достаточной миграции микровесицы и экзосомы, что уменьшает обогащение, в то время как чрезмерное время ухудшает пространственную фокусировку и, следовательно, рассеивает микровесицы и экзосомы. Таким образом, благодаря этапу оптимизации времени можно определить максимальный фактор предконцентрации микровесов и экзосом и конечное место, где микровесицы и экзосомы наиболее обогащены. Чтобы найти окончательное расположение микровесицы и экзосомы, замедленной миграции флуоресцентно помечены микровесицы и экзосомы наблюдался с микроскопом(Рисунок 2A) и флуоресценции интенсивности во всех областях выборки были количественно с помощью программного обеспечения ImageJ (Рисунок 2B). Перед процессом обогащения(рисунок 2A, 0 мин), микровесицы и экзосомы были рассеяны во всех областях образца с постепенным снижением интенсивности из-за небольшого фильтрующего действия бумажной матрицы(рисунок 2B, 0 мин). После 10 мин обработки(рисунок 2A, 10 мин), микровесицы и экзосомы мигрировали электрокинетически и мгновенной предконцентрации штепсельная вилка появилась на слое 7. Дальнейшая обработка достигла большей предконцентрации микровесий и экзосом. Когда время процесса достигло 20 мин, микровесицы и экзосомы были сильно сфокусированы на слоях 8 и 9(рисунок 2A,20 мин) и обогащены в пять раз, на основе интенсивности флуоресценции(рисунок 2B, 20 мин).

После завершения предконцентрации процесс, обогащенные микровесицы и экзосомы были изолированы путем развертывания устройства и образец области в слое 8 был проб для дальнейшего анализа. Изображения SEM были получены для исследования целостности обогащенных микровесий и экзосом. Как показано на изображениях SEM(Рисунок 3A),после процесса обогащения наблюдалось значительно больше немагильных микрогезий и экзосом. С помощью полученных изображений SEM было проанализировано распределение размеров обогащенных микровесий и экзосом(рисунок 3B), гдеэкзосомы и микровесицы отличались на основе порогового диаметра 200 нм. Другими словами, размер экзосом варьировался от 95 до 195 нм со средним диаметром 134 нм, а микровесицы от 214-377 нм со средним диаметром 315 нм.

Впоследствии фактическая концентрация обогащенных микровесий и экзосом на участках выборки в слоях 6, 8 и 10 была проанализирована NTA. До обогащения концентрация составляла 2,24 х 1011 частиц/мЛ в слое 8(рисунок 3C, слой 8). После обогащения концентрация составила 1,25 х 1012 частиц/мЛ в слое 8(рисунок 3C, слой 8), что указывает на то, что микровеси и экзосомы были предварительно соотценированы коэффициентом 5,58 евро. Заметной предконцентрации не наблюдалось на других слоях(рисунок 3C,слои 6 и 10). В совокупности эти результаты показывают, что предлагаемое бумажное устройство может обогащать микровесицы и экзосомы примерно в пять раз.

Эффективность изоляции устройства была оценена следующим образом: объем выборки, который может быть размещен слоем 8 и 9, составляет 2,2 л из общего объема выборки в 10 слоях из-за сужения конструкции Exo-PAD. Если предположить идеальный случай, в котором все микровесы и экзосомы предварительно соотценированы на слое 8 и 9 и ни один не теряется, то идеальный фактор предварительной зависимости должен составлять 6,8 (15 мл/2,2 л. и 6,8). Тем не менее, экспериментальный фактор предварительной концентрации, полученный NTA(Рисунок 3c) составил 5,58 евро, что означает, что часть 1,22 микровесицы и экзосомы были потеряны лизисом или неспецифической привязкой к бумажной матрице.
Equation 1
где 2,24 х 1012 частиц/мЛ является начальной концентрацией микровесичек и экзосом. Из этого расчета ожидаемая скорость убыточности Exo-PAD составляет около 18%; следовательно, эффективность изоляции составляет около 82%. Это значительное улучшение по сравнению с низкими урожаями ультрацентрифугации (5%-23%).

Figure 1
Рисунок 1: Общие процедуры Exo-PAD, от сборки до эксплуатации. () Программноеобеспечение дизайн для руководства печати гидрофобных воска на целлюлозной бумаги. (B) Бумага, напечатанная на воске, после инкубации в духовке на 80 с при температуре 120 градусов по Цельсию. (C) Отдельные устройства вырезаны с помощью резака. (D) Пермзелективный мембранный раствор сбрасывается на участки образца в левом и правом слоях и растворитель испаряется на плите при 70 градусов по Цельсию в течение 30 мин. (E) Печатный Exo-PAD складывается взад и вперед вдоль белых линий; таким образом, все области выборки связаны с конвергентно. (F) В области образца загружается микровесик и экзосомный образец. (G) Две акриловые камеры помещаются на концах устройства и закреплены небольшими зажимами связующего. H) Акриловые камеры заполнены буферным раствором и два электрода Ag/AgCl вставляются, чтобы применить напряжение 30 V. (I) Устройство разворачивается, чтобы изолировать предконцентрированные микрорезы и экзосомы. (J)Образцы областей в слоях 8 и 9 пробиваются для анализа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 2
Рисунок 2: Наблюдение флуоресцентно помеченных микровесий и экзосом во время работы устройства и соответствующей флуоресценции. (A) Наблюдение за промежутком времени микровесицы и экзосомы. Масштабная штанга 5 мм. С 20 мин обработки, микровесицы и экзосомы были сильно сосредоточены на слоях 8 и 9, где (B) они были обогащены примерно в пять раз. Бары ошибок представляют собой стандартное отклонение (n No 3). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 3
Рисунок 3: Анализ обогащенных микровесов и экзосом. ()SEM изображения, показывающие целостность обогащенных микровесичек и экзосом. После предконцентрации, гораздо больше микровеси и экзосомы были замечены6. Шкала бар No 1 мкм. (B) Распределение размера обогащенных микровесиков и экзосом. Размеры экзосомы составляли 95–195 нм (средний диаметр 134 нм), а размеры микровесицы — 214–377 нм (средний диаметр 315 нм). (C) Фактическая концентрация обогащенных микровесий и экзосом, оцененных с помощью NTA. После обогащения концентрация микровесичек и экзосом увеличилась в пять раз, что согласуется с результатами флуоресценции6. Бары ошибок представляют собой стандартное отклонение (n No 3). Панели A и C воспроизводятся с разрешения Ким и др.6. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой фигуры.

Дополнительный рисунок 1: Microvesicles и exosomes preconcentrated и сфокусировано на слое 8 были отделены от альбумина сыворотки быка (BSA), который остался в слоях 1-3. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Хотя Exo-PAD был успешно использован для обогащения и изоляции микрорезокм и экзосом, следует тщательно рассмотреть несколько критических точек: 1) время инкубации печи во время подготовки устройства, 2) время обработки, 3) применение напряжения с различными номерами слоя и диаметрами выборки, и 4) применимость к клиническим образцам.

Время инкубации и температура, приведенные в протоколе, оптимизированы для изготовления надежного устройства. Более длительное время инкубации или более высокая температура могут привести к искажению конвергентной конструкции из-за чрезмерного повторного потока печатного воска. Это предотвратит образование сфокусированных линий электрического поля и тем самым усилит устойчивость к миграции в процессе электрокинетического обогащения.

Время обработки также является фактором, который следует учитывать для максимального обогащения и изоляции. Время обработки здт;20 мин приводит к меньшему предконцентрации, поскольку нет достаточного времени, чтобы позволить микровескулы и экзосомной миграции. С другой стороны, время обработки в 20 мин ухудшает эффективность фокусировки и позволяет рассеивание обогащенных микровесичек и экзосом. Согласно этому тесту, 20 мин является лучшим временем обработки для достижения максимального обогащения и изоляции микровесий и экзосом.

Прикладное напряжение является еще одним важным фактором для рассмотрения. В этом протоколе, учитывая количество слоев и диаметры выборки, 30 V используется для достижения стабильной предконцентрации и изоляции. При сгенерировании феномена ПМС в устройстве режим работы можно разделить на три отдельных региона в зависимости от прикладного напряжения: (1) ohmic, (2) ограничение, и (3) перелименение регионов6,15,16. Для стабильной предконцентрации и изоляции устройство должно работать в зоне ограничения, где генерируется зона истощения ионов и микровесицы и экзосомы стабильно предконцентрируются. В этой экспериментальной обстановке диапазон рабочего напряжения (5–40 В) соответствует предельной области для Exo-PAD. Если прикладное напряжение составляет злт;5 В, устройство работает в ohmic области, где электрический ток увеличивается линейно, что свидетельствует о том, что не ион истощается область генерируется для предварительной концентрации. Однако, если напряжение составляет 40 V, область истощения ионов разрушается сильным электроконверектом напряжения, который дестабилизирует предконцентрацию. Учитывая эти факторы, было установлено, что 30 V является оптимальным напряжением для устройства с 12 слоями и размером выборки диаметром 2х5 мм. Номера слоя или диаметры выборки могут быть увеличены для увеличения объема образца, но эти факторы, как и рабочее напряжение, должны быть оптимизированы для достижения стабильного обогащения микровесиков и экзосом.

Предлагаемый Exo-PAD может быть использован для изоляции микровесиков и экзосом из различных клинических образцов, включая слюну, мочу, сыворотку и плазму. Для образцов с меньшим количеством белка, таких как слюна или моча, микровесицы и экзосомы могут быть легко изолированы без серьезных изменений, потому что небольшое количество белка в этих образцах будет отфильтровы к неспецифической привязке к бумаге. При работе устройства в пределах предельная область необходимо учитывать только прикладное напряжение, так как ионическая прочность образцов может быть разной. Для богатых белком образцов, таких как сыворотка или плазма, необходимо тщательно рассмотреть предконцентрацию микровесий и экзосом, а также их отделение от обильных белков. Наш недавний эксперимент показывает, что разделение микровесичек и экзосом от белков значительно улучшается при использовании карбонатного буфера, потому что карбонатный буфер приводит к более высокой разнице электрического заряда между микровесиками и экзосомами и белком из-за изоэлектрической точки, что приводит к лучшей эффективности разделения. Для этого эксперимента, вещество с обильными протеинами сосуществуя с microvesicles и exosomes было передразняно путем смешивать очищенные microvesicles и exosomes маркированные с FITC (Ex/Em: 490/520 nm) с BSA маркированной с по-разному фторфором (Ex/Em: 590/617 nm) в буфере углерода мМ (Материалы). Как показано на дополнительном рисунке 1,большинство микровесик и экзосом были предварительно отконцентрированы на слое 8, как на рисунке 2A, и они были отделены от BSA, который остался в слоях 1-3. Этот результат показывает, что обогащение от сыворотки или плазмы образца требует дополнительного шага, добавляющего карбонатный буфер в образец, и ясно показывает, что Exo-PAD может очистить микровесицы и экзосомы от обильных белков.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторам нечего раскрывать.

Acknowledgments

Это исследование было поддержано Национальным исследовательским фондом Кореи Grant NRF-2018R1D1A1A09084044. J. H. Lee был поддержан исследовательским грантом Университета Кванвуна в 2019 году. Херин Ким был поддержан «Программой развития компетенций для специалистов отрасли» Министерства торговли, промышленности и энергетики Кореи (MOTIE), управляемой Корейским институтом развития технологий (KIAT) (No. P0002397, HRD программа для промышленной конвергенции носимых смарт-устройств).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ag/AgCl electrodes A-M Systems, Inc. 531500 0.15" diameter
Albumin from Bovine Serum (BSA), Alexa Fluor 594 conjugate Thermo Fisher Scientific A13101 BSA conjugated with Alexa Fluor 594 (Ex/Em: 590/617 nm)
Carbonate-Bicarbonate Buffer Sigma-Aldrich C3041-50CAP Carbonate buffer
CorelDraw software (Coral Co., Canada) Corel Corporation Printer software to define wax printing region
ColorQube 8870 Xerox Corporation Wax printer
Chromatography paper grade 1 Whatman 3001-861 Cellulose paper, dimension: 20 * 20 cm
Fluorescent-labeled exosome standards HansaBioMed Life Sciences, Ltd. HBM-F-PEP-100 Exosome labeled with FITC (Ex/Em: 490/520 nm)
Keithley 2410 current/voltage source-meter Keithley Instruments, Inc. Current–voltage source measurement system
Nafion perfluorinated resin solution Sigma-Aldrich 31175-20-9 Permselective membrane, 20 wt.% in the mixture of lower aliphatic alcohols and water; contains 34% water
NanoSight LM10 NanoSight Technology Nanoparticle tracking analysis (NTA) machine
Phosphate-buffered saline (PBS, pH7.4) Thermo Fisher Scientific 10010001

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Edgar, J. R. Q & A: What are exosomes, exactly. BMC Biology. 14, (1), 1-7 (2016).
  2. Contreras-Naranjo, J. C., Wu, H. J., Ugaz, V. M. Microfluidics for exosome isolation and analysis: Enabling liquid biopsy for personalized medicine. Lab on a Chip. 17, (21), 3558-3577 (2017).
  3. Simons, M., Raposo, G. Exosomes - vesicular carriers for intercellular communication. Current Opinion in Cell Biology. 21, (4), 575-581 (2009).
  4. Ståhl, A. L., Johansson, K., Mossberg, M., Kahn, R., Karpman, D. Exosomes and microvesicles in normal physiology, pathophysiology, and renal diseases. Pediatric Nephrology. 34, (1), 11-30 (2019).
  5. Chen, C., Lin, B. R., Hsu, M. Y., Cheng, C. M. Paper-based devices for isolation and characterization of extracellular vesicles. Journal of Visualized Experiments. (98), e52722 (2015).
  6. Kim, H., et al. Origami-paper-based device for microvesicle/exosome preconcentration and isolation. Lab on a Chip. 19, (23), 3917-3921 (2019).
  7. Raposo, G., Stoorvogel, W. Extracellular vesicles: Exosomes, microvesicles, and friends. Journal of Cell Biology. 200, (4), 373-383 (2013).
  8. Lee, Y., El Andaloussi, S., Wood, M. J. A. Exosomes and microvesicles: Extracellular vesicles for genetic information transfer and gene therapy. Human Molecular Genetics. 21, 125-134 (2012).
  9. Liu, C., et al. Field-Free Isolation of Exosomes from Extracellular Vesicles by Microfluidic Viscoelastic Flows. ACS Nano. 11, (7), 6968-6976 (2017).
  10. Marczak, S., et al. Simultaneous isolation and preconcentration of exosomes by ion concentration polarization. Electrophoresis. 39, (15), 2029-2038 (2018).
  11. Livshts, M. A., et al. Isolation of exosomes by differential centrifugation: Theoretical analysis of a commonly used protocol. Scientific Reports. 5, 1-14 (2015).
  12. Chiriacò, M. S., et al. Lab-on-chip for exosomes and microvesicles detection and characterization. Sensors. 18, (10), 3175 (2018).
  13. Lobb, R. J., et al. Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma. Journal of Extracellular Vesicles. 4, (1), 1-11 (2015).
  14. Taylor, D. D., Shah, S. Methods of isolating extracellular vesicles impact down-stream analyses of their cargoes. Methods. 87, 3-10 (2015).
  15. Han, S., et al. Electrokinetic size-based spatial separation of micro/nanospheres using paper-based 3d origami preconcentrator. Analytical Chemistry. 91, (16), 10744-10749 (2019).
  16. Yeh, S. H., Chou, K. H., Yang, R. J. Sample pre-concentration with high enrichment factors at a fixed location in paper-based microfluidic devices. Lab on a Chip. 16, (5), 925-931 (2016).
Предконцентрация и изоляция микровесикул и экзосом на бумажной основе
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lee, D., Wee, K. W., Kim, H., Han, S. I., Kwak, S., Yoon, D. S., Lee, J. H. Paper-Based Preconcentration and Isolation of Microvesicles and Exosomes. J. Vis. Exp. (158), e61292, doi:10.3791/61292 (2020).More

Lee, D., Wee, K. W., Kim, H., Han, S. I., Kwak, S., Yoon, D. S., Lee, J. H. Paper-Based Preconcentration and Isolation of Microvesicles and Exosomes. J. Vis. Exp. (158), e61292, doi:10.3791/61292 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter