Stabilité et structure du complexe histocompatibilité majeur de chauve-souris classe I avec β2-Microglobuline

Di Zhang; Kefang Liu; Dan Lu; Pengyan Wang; Qingxu Zhang; Peipei Liu; Yingze Zhao; Yan Chai; Jianxin Lyu; Jianxun Qi; William  J. Liu

doi:10.3791/61462

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Article de méthode

Stabilité et structure du complexe histocompatibilité majeur de chauve-souris classe I avec β₂-Microglobuline

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DOI :

10.3791/61462

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10 mars 2021

Di Zhang^*¹^,² , Kefang Liu^*³^,⁴ , Dan Lu^*²^,⁵ , Pengyan Wang¹^,² , Qingxu Zhang¹^,² , Peipei Liu² , Yingze Zhao² , Yan Chai⁴ , Jianxin Lyu¹ , Jianxun Qi⁴ , William J. Liu¹^,²

¹School of Laboratory Medicine and Life Sciences, Wenzhou Medical University, ²NHC Key Laboratory of Biosafety, National Institute for Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, ³Faculty of Health Sciences, University of Macau, ⁴CAS Key Laboratory of Pathogenic Microbiology and Immunology, Institute of Microbiology, Chinese Academy of Sciences, ⁵Savaid Medical School, University of Chinese Academy of Sciences

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Le protocole décrit les méthodes expérimentales pour obtenir stable majeur complexe d’histocompatibilité (MHC) classe I grâce à des substitutions potentielles de β₂-microglobuline (β₂m) de différentes espèces. La comparaison structurale du MHC I stabilisée par des dommages homologues et β₂m ont été étudiées.

Résumé

Le principal complexe d’histocompatibilité (MHC) joue un rôle central dans la présentation du peptide antigène et les réponses immunitaires des cellules T contre les maladies infectieuses et le développement tumoral. Le MHC hybride I complexé d’une substitution β₂microglobulines (β₂m) de différentes espèces peut être stabilisé in vitro. Il s’agit d’un moyen réalisable d’étudier le MHC I des mammifères, lorsque le β₂m n’est pas disponible. Pendant ce temps, il est indiqué que la substitution β₂m n’affecte pas significativement la présentation du peptide. Cependant, il y a peu de résumé s’agissant de la méthodologie et de la technologie du MHC hybride I complexés avec des β heterologous₂-microglobuline (β₂m). Ci-après, des méthodes d’évaluation de la faisabilité d’une substitution β₂m dans l’étude MHC I sont présentées. Ces méthodes comprennent la préparation de constructions d’expression; la purification des organismes d’inclusion et le refolding du complexe du CSM; détermination de la thermostabilité des protéines; le criblage en cristal et la détermination de la structure. Cette étude fournit une recommandation pour comprendre la fonction et la structure du MHC I, et est également significative pour l’évaluation de réponse de cellule T pendant la maladie infectieuse et l’immunothérapie de tumeur.

Introduction

Le principal complexe d’histocompatibilité (MHC) existe chez tous les vertébrés et est un ensemble de gènes qui détermine l’immunité à médiatté cellulaire contre les pathogènes infectieux. La classe I du MHC présente des peptides endogènes, tels que des composants viraux produits lors de l’infection virale, aux récepteurs des lymphocytes T (TCR) à la surface des lymphocytes CD8⁺ T pour jouer le rôle de médiateur de l’immunité cellulaire et participer à la régulation^{immunitaire 1}. Une étude structurale du MHC I liant aux peptides fournit des informations concernant les motifs de liaison peptidique et les caractéristiques de présentati....