FEMI’nin yavruların bağırsak sisteminin gelişimi üzerindeki etkilerini incelemek için canlı organizmaların komplikasyonları olmadan anne iltihabına (FEMI) fetal maruziyeti simüle etmek için bir chorioamnionitis modeli geliştirdik. Bu, chorioamnionitis’i takiben bağırsak hasarı gelişimi için mekanistik nedenlerin incelenmesine izin verir.
Chorioamnionitis, preterm doğumun yaygın bir çökelticisidir ve nekrotizan enterokolit (NEC) de dahil olmak üzere prematürite morbiditelerinin çoğu ile ilişkilidir. Ancak, bu iki koşul arasında mekanistik bir bağlantı henüz keşfedilmemiştir. Lipopolisakkarit (LPS) kaynaklı fetal inflamasyon ve anne iltihabı (FEMI) içeren bir koryoamniyozit modelini benimsedik. Bu FEMI modeli, birçok klinik chorioamnionitis vakasında da bulunan steril bir maternal, plasental ve fetal enflamatuar kaskadı indükler. Canlı bakterileri kullanan ve koliyoamniyotitle sonuçlanan artan bir enfeksiyonun patofizyolojisini daha doğru bir şekilde taklit eden modeller mevcut olsa da, bu yöntemler olgunlaşmamış bağırsak sisteminin ve ilişkili gelişen mikrobiyomun gelişimi üzerinde dolaylı etkilere neden olabilir. Bu protokolü kullanarak, LPS kaynaklı FEMI’nin gebelik kaybı ve erken doğumda doza bağlı bir artışın yanı sıra yavrularda normal bağırsak gelişiminin bozulmasına neden olduğunu gösterdik. Ayrıca, FEMI’nin yavrularda bağırsak yaralanmasını ve serum sitokinleri önemli ölçüde artırdığını, aynı zamanda her ikisi de bağırsak iltihabına karşı doğuştan gelen ilk bağışıklık hattını sağlayan kadeh ve Paneth hücrelerini azaltdığını gösterdik. LPS kaynaklı FEMI’nin benzer bir modeli, chorioamnionitis ile merkezi sinir sisteminin sonraki anormallikleri arasındaki ilişkiyi modellemek için kullanılmış olsa da, bu protokol, chorioamnionitis ve NEC arasında potansiyel bir bağlantı olarak koryoamniyozit ve daha sonra bağırsak gelişimindeki pertürbasyonlar arasında mekanistik bir bağlantı kurmaya çalışan ilk protokoldür.
Koryonik zarlar memeli hamileliğinde ayrılmaz bir rol oynar. Birden fazla işleve hizmet eden korozyon ve amnion içerirler. Fetüsü çevreler ve korurlar, anne ve fetal bölmeler arasında parakrin sinyali kolaylaştırırlar1ve koryonik membranlar içinde parturition1’inbaşlatılmasında rol alabilen yerel geri bildirim döngüleri oluştururlar. Zarların mevcut anlaşılması, amniyonun yapısal bariyer fonksiyonu sağladığını ve koronun öncelikle gelişmekte olan fetüsü anne bağışıklık sisteminden korumak için immünolojik bir tampon sağladığını gösterir2. Bu zarların iltihabı chorioamnionitis olarak bilinir. Tarihsel olarak, klinik koryoamniyozit tanısı anne ateşinin varlığı artı bir veya daha fazla fetal veya maternal klinik bulgu3,4 .4.’densonra konur. Bununla birlikte, bu tanım klinik olarak yararlı olsa da, hassasiyet eksikliği chorioamnionitis araştırmasını zorlaştırdı. 2015 yılında, tanıyı açıklığa kavuşturmak amacıyla, Eunice Kennedy Shriver Ulusal Çocuk Sağlığı ve İnsan Gelişimi Enstitüsü tarafından yapılan bir uzman paneli çalıştayı, koryoamniyonuti rahim içi inflamasyon veya enfeksiyon veya her ikisi (üçlü I)3olarak tanımladı. Bu açıklama önemlidir, çünkü mikrobiyal indüklenen enfeksiyon uterus / amniyotik iltihabın önemli bir nedeni olmakla birlikte, steril rahim / amniyotik inflamasyondan daha az görülür5,6,7. Genel olarak, chorioamnionitis, dönem teslimatlarının% 2\u20124’ünde ve 25 \u201230% preterm teslimatlarında görüldüğü gibi önemli bir halk sağlığı sorunu olmaya devam etmektedir8,9.
Koliyoamniyonut fetüs ve yenidoğan üzerinde önemli etkilere sahip olabilir. Literatürde chorioamnionitis’in prematürite morbiditelerinin çoğunun artan riski ile ilişkili olduğu iyi belgelenmiştir, bronkopulmoner displazi10, serebral beyaz madde yaralanması11, intraventriküler kanama12, prematürite retinopatisi13ve hem şüpheli hem de doğrulanmış erken başlangıçlı yenidoğan sepsis14,15. Olgunlaşmamış bağırsak sisteminin yaralanma ve onarım mekanizmalarıyla ilgilendiğimiz için, chorioamnionitis’in daha sonra nekrotizan enterokolit (NEC) gelişimi ile de ilişkili olduğunu belirtmek önemlidir15,16. NEC, preterm bebeklerin iltihaplanmaya ve sonraki bağırsak nekrozuna disregüle edilmiş konakçı yanıtı ile sonuçlanan yıkıcı bir gastrointestinal hastalığıdır17. Her yıl, NEC Amerika Birleşik Devletleri’nde 4000’den fazla bebeği etkiler ve bu bebeklerin üçte birine kadarı hastalıktan ölür18. NEC patogenez muhtemelen bağırsak olgunlaşmamışlığı, olgunlaşmamış bağışıklık sisteminin düzensizliği, bağırsak iltihabı ve bakteriyel translokasyon19‘un bir kombinasyonunu içerir . Daha da önemlisi, NEC’in başlangıcı genellikle doğumdan haftalar sonra ve koryoamniyozite potansiyel maruziyet meydana gelir, bu da chorioamnionitis ile NEC’in sonraki gelişimi arasındaki mekanistik bağlantıyı belirsiz hale getirir20. Chorioamnionitis’in NEC patofizyolojisine katkıda bulunabileceği potansiyel bir mekanizma, maternal bağışıklık sisteminin yukarı doğrullaştırılması ve daha sonra normal fetal gelişimsel kalıpları bozabilecek güçlü bir fetal inflamatuar yanıt üretmesidir21,22,23.
Korneaların ve koyunların birden fazla memeli modeli kemirgenlerde ve koyunlarda bulunur24,25,26,27,28,29,30,31,32. Bununla birlikte, koliamnionit kaynaklı fetal inflamasyondan (FEMI) sonra ilk yenidoğan döneminin ötesinde bağırsak sisteminin gelişimi ile ilgili çok az veri bulunmaktadır. FEMI ile olgunlaşmamış bağırsak sisteminin yaralanmasının daha sonra gelişmesi arasındaki ilişkiyi araştırmak için lipopolisakkarit (LPS) kaynaklı FEMI modelini uyarladık. Lipopolisakkaritler gram negatif bakteriler üzerindeki hücre dışı yüzeyin önemli bir bileşenidir ve insanlar da dahil olmak üzere birden fazla ökaryotik türün doğuştan gelen bağışıklık sisteminin güçlü bir uyarıcısıdır33. Maternal LPS enjeksiyonu, canlı bakterilerin şaşırtıcı etkileri olmadan steril bir enflamatuar kaskad ile sonuçlanır ve preterm doğum34indüksiyonu için iyi kurulmuş bir modeldir Akut chorioamnionitis ve cenin enflamatuar yanıt sendromu (FIRS) modeli, koryoamniyonit24,35. Ayrıca bir koyun modeli 36 ve bir murine model37 , 38 ,39,40hem serebral beyaz hem de gri madde yaralanmasına neden olduğu gösterilmiştir. Bununla birlikte, bildiğimiz kadarıyla, bu chorioamnionitis ve FEMI modelini gastrointestinal sistemin gelişimi üzerindeki etkilerini araştırmak ve ayrıca chorioamnionitis ile daha sonra NEC41,42gelişimi arasındaki olası bir mekanistik bağlantıyı araştırmak için ilk kullananlarız.
Chorioamnionitis terimin% 2\u20124’ünü ve 25\u201230% preterm teslimatlarının%8,9’unuetkiler. Bununla birlikte, koryoamniyonulün etkisi, fetüs ve yenidoğan 10 , 11 , 12 , 13,14,15,16üzerinde önemli etkileri olduğu gösterildiği için doğumu uzun süre uzatabilir.<sup c…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (DK097335 & T32AI007260) ve Iowa Stead Üniversitesi Aile Pediatri Bölümü aracılığıyla desteklendi.
10% neutral buffered formalin | Sigma | HT501128 | |
Alcian blue stain | Newcomer supply | 1003A | |
C57Bl6/J mice | Jackson Laboratories | 664 | |
Ethanol | Decon labs | 2701 | |
HCl | Sigma | H1758 | |
Hematoxylin stain | Leica | 381562 | |
LPS | Sigma | L2880 | |
NaHCO3 | Sigma | S6014 | |
Nikon Eclipse Ni-U Microscope | Nikon | 2CE-MQVJ-1 | |
Periodic Acid | ACROS | H5106 | CAS# 10450-59-9 |
RNAlater | Thermofisher | Am7021 | |
Schiff's reagent | Sigma | S5133 | |
Secor Imager 2400 | Meso Scale Discovery (MSD) | ||
V-Plex Assay | Meso Scale Discovery (MSD) | ||
Xylene | Sigma | 534056 |