Summary
Dyremodeller for alvorlig akut pancreatitis muliggør undersøgelse af patofysiologiske ændringer i den indledende fase, hvilket letter observation af udviklingen af inflammatoriske begivenheder. Her giver vi en protokol for induktion af svær akut galde pancreatitis ved retrograd infusion af natrium taurocholat i bugspytkirtlen kanalen af bedøvet C57BL/6 mus.
Abstract
Galde akut betændelsesinduktion ved natrium taurocholatinfusion er blevet meget udbredt af det videnskabelige samfund på grund af repræsentationen af den menneskelige kliniske tilstand og reproduktion af inflammatoriske hændelser svarende til udbrud af klinisk galde pancreatitis. Sværhedsgraden af bugspytkirtelskader kan vurderes ved at måle koncentrationen, hastigheden og mængden af den infunderede galdesyre. Denne undersøgelse giver en opdateret tjekliste over de materialer og metoder, der anvendes i protokollen reproduktion og viser de vigtigste resultater fra denne akutte pancreatitis (AP) model. De fleste af de tidligere publikationer har begrænset sig til at reproducere denne model hos rotter. Vi har anvendt denne metode i mus, hvilket giver yderligere fordele (dvs. tilgængeligheden af et arsenal af reagenser og antistoffer til disse dyr sammen med muligheden for at arbejde med genetisk modificerede stammer af mus), der kan være relevante for undersøgelsen. For akut induktion af pancreatitis hos mus præsenterer vi en systematisk protokol med en defineret dosis på 2,5 % natrium taurocholat ved infusionshastighed 10 μL/min i 3 min i C57BL/6 mus, der når sit maksimale sværhedsgradsniveau inden for 12 timer efter induktion og fremhæver resultater med resultater, der validerer metoden. Med praksis og teknik er den samlede anslåede tid, fra induktion af anæstesi til afslutningen af infusionen, 25 min pr. Dyr.
Introduction
Hos mennesker er tilstedeværelsen af galdesten den mest almindelige årsag til bugspytkirtel på grund af obstruktionen af den terminale del af choledochal, afbryder strømmen af bugspytkirtelsekretioner og forårsager en intens inflammatorisk proces i bugspytkirtlen med en stigning i koncentrationen af fordøjelsesenzymer i serum og inflammatoriske mæglere1,2.
To forskellige teorier er blevet foreslået at forklare udviklingen af akut pancreatitis (AP). Den "fælles kanal" teori tyder på, at stenene til stede i galdeblæren hindre distal fælles galdegang system, så galde sekretion til at flyde tilbageskridt i bugspytkirtlen kanalen. Den anden teori ("kanal obstruktion" teori) tyder på, at obstruktion af bugspytkirtlen kanalen ved overskydende galdesten forårsager en blokering i strømmen af bugspytkirtel sekretion til duodenum, forårsager ductal hypertension3. Selv om de mekanismer, der fører til akut galde pancreatitis ikke er fuldt forstået, resultatet er en intens inflammatorisk proces. Fordøjelsesenzymudbrud og bugspytkirtel selvfordøjelse føre til histopatologiske ændringer, en stigning i inflammatoriske cytokiner (IL-1β, IL-6, TNF-α) i ascitisk væske og serum, og en stigning i akut fase proteiner4,5,6.
Alvorlig akut pancreatitis er en tilstand, der fortjener klinisk opmærksomhed på grund af inddragelse af flere organer og en høj dødelighed risiko. Dyremodeller til reproduktion af akut pancreatitis (AP) er vigtige, da disse forklarer sygdommens patofysiologiske mekanismer og hjælper med at overvåge udviklingen af inflammatoriske begivenheder, startende fra de indledende stadier af sygdommen. Dette er normalt ikke muligt i klinikkerne2,7. Derudover er adgang til bugspytkirtelvæv let i prækliniske undersøgelser, der favoriserer udredningen af ændringer forbundet med kliniske tilstande8 sammen med muligheden for at arbejde med isogene arter, eliminere uønskede variabler og spejle klinisk lighed med de resultater, der observeres i den menneskelige tilstand9.
Galde- og ikke-galdemodeller til induktion af akut pancreatitis hos rotter og mus arter er ofte blevet undersøgt i den videnskabelige litteratur. Ikke-galde metoder til induktion omfatter administration af supramaximal stimulerende doser af cholecystokinin secretagogue eller dens analoge cerulein10; administration af næsten dødelige doser af L-arginin; eller administration af en cholin-mangelfuld kost suppleret med ethionin11. Selv om disse metoder er nemme at reproducere og resultere i bugspytkirtelbetændelse, de ikke replikere de mekanismer, der i teorien udløser AP (dvs., refluks af galde sekretion i bugspytkirtlen kanalen). Den teknik, der adresserer galdemodellen er baseret på retrograd infusion af galdesyrer i bugspytkirtlen kanalen og kræver veluddannede forskere til at udføre denne protokol. Flere undersøgelser er blevet offentliggjort ved hjælp af denne metode hos rotter (tilsyneladende af tekniske årsager, da disse forsøg involverer kirurgiske procedurer)12,13. Men, tilgangen i mus kan tilbyde mere interessante resultater i studiet af inflammation3,14,15. I denne undersøgelse vil vi vise en tjekliste over de trin, der skal følges til reproduktion af alvorlig akut pancreatitis ved infusion af natrium taurocholat i C57BL/6 bedøvede mus.
For værker, der involverer behovet for forsøg med antistoffer og analyse af gen- og proteinekspressionen, er brugen af mus at foretrække på grund af det større arsenal af materialer til disse dyr og muligheden for at arbejde med isogen- og knockoutarter, blandt andre, der kan bruges relevante for undersøgelser16. Mus C57BL/6 er en indavlet stamme af mus, der oprindeligt blev udviklet til undersøgelse af antitumoraktivitet og immunologi. Denne stamme foretrækkes i stigende grad af forskere for at være isogen, hvilket giver mulighed for en større reproducerbarhed af resultater, hvilket kan indebære anvendelse af et mindre antal dyr i et forsøg og mindre variation i resultaterne mellem den samme gruppe17,18.
Perides et al. (2010)14 offentliggjorde en protokol for AP induktion hos mus ved natrium taurocholat infusion. Her opdaterer vi denne model ved hjælp af en højere natrium taurocholatkoncentration (2,5%) i C57BL/6 mus med et defineret volumen og infusionshastighed (figur 1). Det maksimale sværhedsgradsniveau nås inden for 12 timer efter induktion hos mus. Højden af koncentrationen af IL-6 både i serum og i bughulen er korreleret med progressionen af AP. Med praksis er den samlede anslåede tid fra induktion af anæstesi til afslutningen af infusionen 25 min pr. Dyr. Det er vigtigt, at en uddannet forsker udfører dette eksperiment. For at sikre, at opløsningen sprøjtes korrekt ind i den fælles galdegang, skal du udføre flere pilottræningssessioner ved hjælp af methylenblåt i stedet for natrium taurocholat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne protokol blev godkendt af den etiske komité for brug af dyr fra USP Medicine School, Num. Project: 1343/2019-CEUA: FMUSP. Til denne protokol blev der anvendt C57BL/6 mus på 6 uger, der vejede 20 ± 2 g (n = 9/gruppe).
1. Laparotomi
- Bedøve dyr med xylazin (10 mg/kg) og ketaminopløsning (80 mg/kg), subkutant (0,1 mL/10g kropsvægt) ved hjælp af en 1 mL sprøjte og 13x0,45 mm nål 26G 1/2. Kontroller for tilstrækkelig anæstesi dybde ved at klemme tåen. Styr kropstemperaturen ved hjælp af opvarmede puder. Sørg for, at alle kirurgiske materialer er sterile.
- Rengør maveregionen med 5% povidone-jodopløsning og brug en trimmer til at fjerne hår mellem brystet og underlivet (ca. 2 cm2). Rengør det kirurgiske område med 70% alkohol.
- Immobilisere dyret på operationsbrættet ved hjælp af kirurgisk tape. Brug en saks til at skære 5 mm af huden vandret, på den øverste del af maven og 1 cm under xiphoid-processen. Gentag snittet på bughinden. Dette vil resultere i en laparotomi med minimal eksponering af hulrummet.
2. Lokalisering og eksponering af bugspytkirtlen
- Ved hjælp af en retractor skal du trække leveren mod musens hoved, ~ 1 cm fra tarmen.
- Find det område af bugspytkirtlen, der vil blive injiceret med natrium taurocholat (bugspytkirtel hoved). Find duodenum med henvisning til leveren- under leveren, på højre side (til venstre som musen ses). Duodenum er den første del af tyndtarmen og er forbundet med den sidste del af maven.
- Ved hjælp af sammentrækninger løfte leveren mod dyrehovedet, og træk forsigtigt tyndtarmen del. Fix de to laterale ender af tyndtarmen med en 6-0 polypropylen sutur til bedre at se den distale del af den fælles galdegang.
3. Alvorlig akut induktion af pancreatitis
- Midlertidigt okkludere proksimale fælles galdegang med en microvessel klip for at forhindre retrograd infusion fra utætte ind i leveren. Den fælles galdegang kan ses på leversiden af duodenum og dens kryds med duodenum vises hvid. Eksponer organet ud af bughulen.
- Punkterer den perampulære region (hvidlig del af tyndtarmens væg) for at få adgang til den fælles galdegang med en 0,4 mm nål forbundet til et 0,54 mm polyethylenrør.
- Lav en midlertidig okklusion af den distale fælles galdegang med 8-0 for at forhindre, at natrium taurocholatopløsningen siver ud i duodenum.
- Start infusionspumpen, og programmer en infusion på 2,5 % natrium taurocholatopløsning (fortyndet i 0,9 % saltvand) med en konstant hastighed på 10 μL/10 g kropsvægt i 3 min.
- Efter infusionen skal du fjerne mikrovesselclipsen, den midlertidige 8-0 sutur, og injektion nål fra galde bugspytkirtelkanalen til at rekonstruere den fysiologiske strøm af galden.
- I slutningen syer maven med 6-0 nonabsorbent monofilament polypropylen sutur. Tiden mellem laparotomi og ende sutur bør være højst 30 min (se figur 1).
- Efter operationen skal dyrene huses i polyethylenkasser foret med træspåner og vand og mad ad libitum.
- Behandl kontrolmus på samme måde som forsøgsmusene, men sørg for, at infundatet kun består af saltvand. Udfør den kirurgiske procedure og infusionen af saltvandsopløsning (10 mL/min, i 3 min) i en kontrolgruppe (SHAM) for at eliminere den inflammatoriske bias forårsaget af kirurgi og cannulation.
- Brug tramadol 12,5 mg/kg subkutant hver 8. time, startende efter post-kirurgisk opsving.
4. Analysemetoder
- Ved 12 timer efter AP induktion bedøver dyrene med xylazin (10 mg/kg) og ketamin (80 mg/kg) for at opsamle ca. 250 μL blod via orbital plexus.
- Hold forsigtigt huden på bagsiden, fremme en lille fremspring af øjeæblet, og placere den med øjet vender opad.
- Indgyd en dråbe øjensalt, der indeholder lokalbedøvelse i dyrets øje.
- Placer enden af kapillærrøret i det mediale hjørne af øjet og sæt det forsigtigt under øjeæblet, med en vinkel på ~ 30 ° - 45 °. Roter kapillærrøret, indtil blodgennemstrømningen begynder. Husk, at det ikke er nødvendigt at bruge kraft til proceduren.
- Når samlingen er overstået, sikre homøostase ved at holde øjenlågene lukket af lys kompression med gaze. Kassér kapillærrøret i beholderen med skarpe genstande19.
- Centrifuge serum (700 x g, 15 min) og bestanden supernatant for amylase og IL-6 dosering (trin 4,7 og 4,8).
- Aflive mus ved CO2 kvælning.
- Brug en 27 G nål til at injicere 4 mL iskold 1x PBS i bughulen. Tened abdominal hud og sikre, at nålen skubbes langsomt i bughinden for ikke punktere nogen organer. Efter injektionen skal du forsigtigt massere bughinden i 10'erne for at fjerne celler, der klæber til bughinden.
- Brug en saks og pincet til at lave et lille snit (0,5 cm) på den indre hud og muskulaturen for at eksponere bughulen. Indsæt en pære pipette i bughinden og indsamle væsken. Pas på ikke at aspirere fedtvæv eller andre organer.
- Saml så meget væske som muligt og deponere den indsamlede celle suspension i rør holdes på is. Kassér pærepipetten i skarpe beholder20. Centrifuge peritonealvæsken (250 x g, 5 min) og lagerfører supernatanten til IL-6 dosering (trin 4.9).
- Saml bugspytkirtlen regionen støder op til duodenum (<5mm).
- Behandle bugspytkirtlen ved fastsættelse i 10% formalin og indarbejde det i paraffin.
- Plette dias med hæmatoxylin og eosin for histopatologiske analyser under lys mikroskopi. Brug Schmidts protokol21 (bugspytkirtelødem, acinarcelle, skade/nekrose, betændelse i bugspytkirtlen) til at vurdere omfanget af AP.
- Mål amylase (U /dL) ved hjælp af kommercielt tilgængelige kits i henhold til producentens anbefalinger.
- Mål IL-6 af Luminex assays ved hjælp af kommercielle kits i henhold til producentens anbefalinger.
- Serum og peritonealvæske supernatant, der er opnået i trin 4.1 og 4.4, opbevares i en fryser ved -80 °C, hvis det er nødvendigt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Pancreatitis sværhedsgrad blev scoret mellem 0-3 i henhold til Schmidt's skala21 , hvor nul svarer til fraværet, 1 svarer til en mild tilstedeværelse (<25%), 2 svarer til en moderat tilstedeværelse (mellem 25 og 50%) og 3 svarer til en intens tilstedeværelse (> 50%) (tabel 1). De udførte målinger var plasma amylase aktivitet, bugspytkirtelødem, acinar celle, skade / nekrose, bugspytkirtelbetændelse (ved histologi analyse af H &E-farvede sektioner) og IL-6 cytokin koncentration i serum og PerC væske. Efter 12 timers svær AP viste APTA-gruppen en stigning i serum amylasekoncentrationen (6194 ± 336,7 U/dL) sammenlignet med falskgruppen (3845 ± 135,7 U/dL). Samtidig viste APTA-gruppen øget IL-6 cytokinkoncentration i serum- og PerC-væsken (figur 2). Figur 3 viser en repræsentativ hæmatoxylin-eosin farvning af falsk og APTA gruppe.
Figur 1: Skemaer for alvorlig akut induktion af pancreatitis med 2,5 % natrium taurocholat i C57BL/6 mus. (A) galdeblære; B) almindelig galdegang C) bugspytkirtelkanal D) portalåre E) mikrovesselclips F) punkteringssted (nål, der er fastgjort til et polyethylenrør og tilsluttet infusionspumpen) G) midlertidig nålefiksering i den fælles galdegang. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Repræsentative resultater efter 12 timer af alvorlig akut pancreatitis. (A) Dyrets serum amylasekoncentration (U/dL). B) IL-6 cytokinkoncentration i serum og PerC-væske. Forskelle mellem grupper blev vurderet ved ulønnet t-test analyse * p <0,05, hvis APTA ≠ falsk (n = 9 / gruppe). Klik her for at se en større version af dette tal.
| Interstitial ødem | Inflammatorisk infiltration | Parenchyma nekrose | Parenchyma blødning | |
| SHAM | 1±0* | 0.0 | 0.0 | 0.0 |
| APTA | 3±0* | 3±0 | 3±0 | 3±0 |
| * P<0,05 hvis SHAM≠APTA. |
Tabel 1: Histologiske ændringer i bugspytkirtelvæv efter 12 timer af svær AP. Bugspytkirtlen blev behandlet og analyseret i henhold til Schmidt's scale21. Resultaterne blev udtrykt som gennemsnitlige ± SEM og forskelle mellem grupper blev vurderet af Student t test. * s <0,05 hvis APTA ≠ SHAM; (n=9/gruppe).
Figur 3: Repræsentativhematoxylin-eosin farvning i bugspytkirtelvæv efter 12 timers svær AP. Histologiske ændringer i (A) SHAM og (B) APTA bugspytkirtelvæv (Hæmatoxylin-Eosin farvning- 40x forstørrelse). Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Metoden til at fremkalde akut pancreatitis ved retrograd natrium taurocholat infusion er allerede blevet påvist hos rotter22,23,24. Tre lignende værker, der blev offentliggjort i 2008, 2010 og 2015, fungerede som reference for protokollen3,14,15. I dette arbejde opregner vi alle de kritiske trin til gengivelse af denne metode i C57BL/6 mus og nogle muligheder for validering af den.
Et kritisk trin i denne test er at blokere galdegangen på niveau med fæstet med en microvessel klip (trin 3.1) for at undgå natrium taurocholat refluks ind i leveren. Dette trin kræver meget opmærksomhed, da portalvenen ligger ved siden af kanalen (Figur 1D), så man skal passe på ikke at blokere den sammen. Nålen må kun indsættes i den mest distale kanaldel. Hvis det indføres dybt i kanalen, det kan forårsage et brud med syre overfyldte til kirtel parenkym og / eller til andre kanaler14. Kontroller, at polyethylenrøret har luft inde for at forhindre obstruktion af den fælles galdegang.
Denne model kræver et snit i musens underliv. Indsættelse af kanylen gennem bugspytkirtlen kanalen åbning kræver erfaring, men det kan opnås med uddannelse15,25. Det er vigtigt at fremhæve, at sværhedsgraden af pancreatitis i denne model er proportionalt afhængig af koncentrationen, mængden af infusionen, infusionstrykket og tidspunktet for AP induktion. Således skal der anvendes en konstant infusionsmaskine med kontrolleret volumen og tryk.
Til denne undersøgelse standardiserede vi en koncentration på 2,5%, med en infusionshastighed på 10 μL/min, i 3 min og konstant tryk. Ved 12 timer af AP blev der observeret øgede inflammatoriske parametre og nekrose i bugspytkirtlen, og dyrene døde inden for 16 timer efter AP-induktion.
Selv om hovedårsagerne til AP er alkoholforbrug eller galdesten, disse modeller er ikke eksperimentelt reproducerbare26. I øjeblikket involverer den mest anvendte protokol til AP-induktion hos mus 7 intraperitoneale injektioner af cerulein (50 μg/kg kropsvægt) med 1 timers intervaller27. Cerulein er blevet brugt til at fremkalde en mild eller moderat akut pancreatitis samt. Variationen i denne model begrænser dens anvendelse til at studere de destruktive virkninger af sygdommen, som giver klinisk sygelighed og dødelighed10. Modeller, der udløser høj dødelighed på kort tid, er relevante for studiet af svær AP (nekrotiserende), da de kan evaluere effektiviteten af nye lægemidler eller interventioner. Blandt disse modeller er hæmoragisk AP induktion hos unge kvindelige gnavere (mellem 4 og 6 uger) ved en cholin-mangelfuld kost28 og L-arginin (f.eks 3 x 3 g /kg eller 2 x 4 g/kg) baseret akut pancreatitis induktion i mus, men korrekt dosering af L-arginin at fremkalde AP bør testes af hvert laboratorium og i hver mus stamme29. I 2015 viste en undersøgelse, at en intra-ductal taurocholat infusion efterfulgt af distal fælles galdegang ligation fører til en alvorlig, nekrotisk model af bugspytitis hos mus3. Men, denne model er ikke nyttig til test af lægemiddeleffektivitet og interventioner på grund af dens irreversibel tilstand.
Resultaterne i denne undersøgelse korrelerer med nyere litteratur såsom højden af serum amylase koncentration og IL-6 er forbundet med sygdomsprogression. Det er muligt, at målingen af proteiner som TNF-α, IL-1β og myeloperoxidase i fremtiden vil være en klinisk prognostisk parameter for alvorlig akut bugspytkirtelbetændelse30,31,32.
Afslutningsvis vil jeg sige, at den protokol, der anvendes i denne undersøgelse til at fremkalde AP hos mus ved infusion af natrium taurocholat direkte i den fælles galdegang, resulterer i alvorlig akut bugspytitis med nekrose i bugspytkirtelvæv, der kan observeres selv ved 12 timer efter induktionen med højde af IL-6 cytokin i serum og peritonealvæske og med høj dødelighed (100% dødelighed i 16 timer, data, der ikke er vist).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Forfatterne tak til Post Graduation Program i Medicinsk Klinik ved Universitetet i São Paulo; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) og University of São Paulo Medical School (FMUSP).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.4 mm needle | INTRAG MEDICAL TECH | 90183210 | 30G |
| 0.54 mm polyethylene tube | Tygon | 730010 | - |
| Styrofoam block | - | - | - |
| masking tape for mounting the mouse | Missner | 1236 | - |
| Infusion pump scheduled to 10µL / min. | Havard aparatus-Peristaltic Pump Series | MA1 55-7766 | Model 66 Small Peristaltic |
| Scissors and forceps | |||
| Antiseptic providine iodine | Pfizer | 12086OR | antisepsis |
| 70% ethanol | SIGMA | 459836 | Mix 700 mL 100% ethanol with 300 mL dH2O |
| Razor blade | Lord | bdk9a1ghk6 | For trichotomy |
| Sodium taurocholate | Sigma-Aldrich | 86339- 1G | CAS NUMBER- 345909-26-4 |
| microvessel clip | Medicon Surgical | 56.87.35 | Approximator, opening 4.0 mm, closing pressure 30 - 40 g |
| 6-0 prolene | Bioline | 5162 | Suture line |
| Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL | Cristália | ||
| Xilazine 2% | Syntec | ||
| Sterile saline solution (0.9% (wt/vol) saline) | Farmace | 105851 | |
| Methyl Blue | Sigma-Aldrich Chemicals | M5528 | |
| MILLIPLEX MAP Mouse Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel - Immunology Multiplex Assay | MERCK | MCYTOMAG-70K | Simultaneously analyze multiple cytokine and chemokine biomarkers with Bead-Based Multiplex Assays using the Luminex technology, in mouse serum, plasma and cell culture samples. |
| Amylase Assay | Labtest | 11 | |
| Desmarres retractor 13-mm width |
ROBOZ | RS-6672 |
References
- Li, X., et al. Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center. BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).
- Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats. Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).
- T, L., et al. Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice. Pancreas. 44 (3), (2015).
- Botoi, G., Andercou, A. Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis. Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).
- Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis. Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).
- Feng, C., et al. Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis. Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).
- Fang, D. Z., et al. Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats. International Immunopharmacology. 80, (2020).
- Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A.
- Wan, M. H., et al. Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research. HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).
- Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).
- Wang, N., et al. Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1. International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).
- Ma, Z. H., et al. Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis. Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).
- Souza, L. J., et al. Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis. Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).
- Perides, G., Acker, G. J. v, Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct. Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).
- Wittel, U. A., et al. Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice. Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).
- Tao, L., Reese, T. A. Making mouse models that reflect human immune responses. Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).
- Vandamme, T. F. Use of rodents as models of human diseases. Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).
- Song, H. K., Hwang, D. Y. Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches. Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).
- Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition. (1), CRC Press. (2010).
- Ray, A., Dittel, B. N. Isolation of mouse peritoneal cavity cells. Journal of Visualized Experiments. (35), e1488 (2010).
- Schmidt, J., et al. A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy. Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).
- Liu, D. L., et al. Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis. International Immunopharmacology. 80, 106128 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125 (12), 110024 (2020).
- Yang, X. F., et al. Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125, 110024 (2020).
- Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. The effects of bile acids on pancreatic ductal cells. Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).
- Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors. Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).
- Lerch, M. M., Gorelick, F. S. Models of acute and chronic pancreatitis. Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).
- Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice. Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).
- Kui, B., et al. New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis. PLoS One. 10 (2), 011758 (2015).
- Xue, J., et al. Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis. Nature Communication. 6, 7158 (2015).
- Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas. Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).
- Rao, S. A., Kunte, A. R. Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis. Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).
