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Cancer Research

अग्नाशय के कैंसर का एक ऑर्थोटोपिक रीसेक्शनल माउस मॉडल

Published: September 24, 2020 doi: 10.3791/61726
Automatic Translation
1,2,4,5, 1,2, 1,2, 1,2, 3, 1, 1,2, 1,2, 1,2
1Pancreatic Research Group, South Western Sydney Clinical School, University of New South Wales, 2Ingham Institute for Applied Medical Research, 3Centre for Circulating Tumour Cell Diagnostics and Research, Ingham Institute for Applied Medical Research, 4Surgical Innovations Unit, Westmead Hospital, 5Westmead Clinical School, University of Sydney

Summary

नैदानिक संदर्भ में, स्थानीय अग्नाशय के कैंसर वाले रोगियों को अग्नाशय के कैंसर से गुजरना होगा जिसके बाद एडजुवेंट उपचार होगा। यहां रिपोर्ट किए गए इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य नग्न चूहों में इस नैदानिक परिदृश्य को मॉडलिंग करने की एक सुरक्षित और प्रभावी विधि स्थापित करना है, अग्नाशय के कैंसर के ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण के माध्यम से डिस्टल अग्नाशय और स्प्लीनेक्टॉमी के बाद।

Abstract

अग्नाशय के कैंसर (पीसी) की सर्जरी के लिए विचार किया जा रहा रोगियों में adjuvant और/या neoadjuvant चिकित्सा का अध्ययन करने के लिए संतोषजनक पशु मॉडल की कमी है । इस कमी को दूर करने के लिए, हम पीसी के ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण को शामिल करते हुए एक माउस मॉडल का वर्णन करते हैं जिसके बाद डिस्टल अग्नाशय और स्प्लीनेक्टॉमी होती है। मॉडल को एडजुवेंट और नव एडजुवेंट सेटिंग्स में विभिन्न चिकित्सीय दृष्टिकोणों के अध्ययन के लिए सुरक्षित और उपयुक्त रूप से लचीला होने के लिए प्रदर्शित किया गया है।

इस मॉडल में, एक अग्नाशय ट्यूमर पहले मानव अग्नाशय के कैंसर कोशिकाओं (लूसिफ़ेरेस-टैग AsPC-1) और मानव कैंसर से जुड़े अग्नाशय स्टेलेट कोशिकाओं के एक मिश्रण को बाल्ब/सी एथिमिक न्यूड चूहों के डिस्टैल्ट अग्न्याशय में प्रत्यारोपित करके उत्पन्न होता है । तीन सप्ताह के बाद, कैंसर को फिर से लेप्रोटॉमी, डिस्टल अग्नाशय और स्प्लीनेक्टॉमी द्वारा पुन: प्राप्त किया जाता है। इस मॉडल में, बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग का उपयोग कैंसर के विकास की प्रगति और रिसेक्शन/उपचार के प्रभावों का पालन करने के लिए किया जा सकता है। रिसेक्शन के बाद, एडजुवेंट थेरेपी दी जा सकती है। वैकल्पिक रूप से, नियोएडजुवेंट उपचार पुनर्सेक्शन से पहले दिया जा सकता है।

45 चूहों से प्रतिनिधि डेटा प्रस्तुत कर रहे हैं। सभी चूहों को सफल डिस्टल अग्नाशय/स्प्लेनेक्टॉमी से गुजरना पड़ा, जिसमें हेमेस्तिस का कोई मुद्दा नहीं था । 43 (96%) में 5 मिमी से अधिक स्थूल समीपस्थ अग्नाशय का मार्जिन हासिल किया गया था चूहों। अग्नाशय केरिसेक्शन की तकनीकी सफलता दर 100% थी, जिसमें 0% प्रारंभिक मृत्यु दर और रुग्णता थी। रीसेक्शन के बाद सप्ताह के दौरान किसी भी जानवर की मौत नहीं हुई ।

संक्षेप में, हम चूहों में अग्नाशय के कैंसर के सर्जिकल रीसेक्शन मॉडल के लिए एक मजबूत और प्रजनन योग्य तकनीक का वर्णन करते हैं जो नैदानिक परिदृश्य की नकल करता है। मॉडल दोनों adjuvant और neoadjuvant उपचार के परीक्षण के लिए उपयोगी हो सकता है।

Introduction

अग्नाशय डक्टल एडेनोकार्सिनोमा (अग्नाशय का कैंसर [पीसी]) एक खराब पूर्वानुमान1से जुड़ा हुआ है। सर्जिकल रीसेक्शन पीसी के लिए केवल संभावित उपचारात्मक उपचार रहता है और प्रारंभिक चरण की बीमारी के साथ पेश रोगियों के लिए विचार किया जाना चाहिए। दुर्भाग्य से, यहां तक कि आर 0 रीसेक्शन (यानी, ट्यूमर से मुक्त रीसेक्शन मार्जिन) के साथ, पुनरावृत्ति दर (स्थानीय या पता नहीं चला मेटास्टैटिक रोग से) उच्च2,3है। इसलिए, लगभग सभी रोगियों में प्रणालीगत एडजुवेंट थेरेपी इंगित की जाती है जो रिसेक्शन4से गुजरते हैं। इसके अलावा, जबकि नियोएडजुवेंट थेरेपी अब केवल सीमा रेखा-पुन: प्राप्त कैंसर के लिए अनुशंसित है, इसके संकेत इस तरह का विस्तार कर रहे हैं कि इसका नियमित उपयोग बहुत नैदानिक अनुसंधान5,6,7,8का ध्यान केंद्रित है। Resection शामिल पीसी के लिए उपन्यास चिकित्सकीय दृष्टिकोण विकसित करने के लिए, इन दृष्टिकोणों को पहले पूर्व-नैदानिक मॉडल में मूल्यांकन करने की आवश्यकता होती है जो नैदानिक सेटिंग्स को सही ढंग से पुन: रीकैपिटेट करते हैं।

पीसी के ऑर्थोटोपिक माउस मॉडल का उपयोग अतीत में दवा उपचार 9,10का परीक्षण करने के लिए अक्सर कियाजातारहा है। इनमें से कई कैंसर कोशिकाओं के इंजेक्शन द्वारा अकेले माउस अग्न्याशय में उत्पादित किए गए थे, जिसके परिणामस्वरूप ट्यूमर में पीसी की विशेषता वाले प्रमुख स्ट्रोमा का अभाव था। हाल ही में, सह-इंजेक्शन ऑर्थोटोपिक मॉडल, जैसे कि हमने पहली बार मानव पीसी और मानव अग्नाशय के स्टेलेट कोशिकाओं (पीएससी, पीसी में कोलेजन स्ट्रोमा के प्राथमिक उत्पादकों) के मिश्रण को इंजेक्शन देकर विकसित किया था, नियमित उपयोग में आ गए हैं11,12। कैंसर और स्ट्रोमल कोशिकाओं के इस तरह के सह-इंजेक्शन द्वारा उत्पादित ट्यूमर कैंसर तत्वों और पीसी के लक्षण स्ट्रोमल (डेस्मोप्लास्टिक) घटक दोनों को प्रदर्शित करते हैं, और (ii) कैंसर सेल प्रसार और मेटास्टेसिस11को बढ़ाया जाता है। इस प्रकार, यह मॉडल मानव पीसी जैसा दिखता है। जबकि ऑर्थोटोपिक पीसी के कई रेसेक्शनल मॉडल13,14, 15,16वर्णित किए गए हैं, किसी ने भी मनुष्यों में अग्नाशय की रिसेक्शन की नैदानिक वास्तविकताओं को इस मॉडल के रूप में सटीक नहीं बताया है, और इसलिए एडजुवेंट या नियोडजुवेंट उपचारों के परीक्षण के लिए उप-स्थिर किया गया है।

प्रस्तुत माउस मॉडल के उद्देश्य के लिए कैसे प्रदर्शित करने के लिए थे: (i) सफलतापूर्वक प्रत्यारोपण ऑर्थोटोपिक अग्नाशय के कैंसर को कम करते हुए अनजाने पेरिटोनियल प्रसार को कम करने और (ii) बाद में पूरी तरह से कैंसर को पुनः काटना । कागज सुझावों और इस तकनीक के संभावित नुकसान पर प्रकाश डाला ।

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Protocol

सभी प्रक्रियाओं को न्यू साउथ वेल्स विश्वविद्यालय (17/109A) की एनिमल केयर एंड एथिक्स कमेटी द्वारा मंजूरी दी गई थी । महिला एथेमिक बाल्ब/सी नग्न चूहों, 8-10 सप्ताह की आयु 16-19 ग्राम वजनी, इस प्रोटोकॉल के लिए इस्तेमाल किया गया । चूहों को सूक्ष्म आइसोलेटर पिंजरों में रखा गया था और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पेल्ड भोजन और पानी विज्ञापन लिबिटमखिलाया गया था।

1. ऑर्थोटोपिक अग्नाशय के कैंसर प्रत्यारोपण

  1. प्रत्यारोपण के लिए कोशिकाओं को तैयार करें। सबसे पहले, प्रक्रिया के लिए आवश्यक कोशिकाओं की संख्या की गणना करें (1 x 106 लूसिफ़ेरेस-टैग किए गए ASPC-1 कोशिकाएं और 1 x 106 कैंसर से जुड़े मानव अग्नाशय के स्टेलेट कोशिकाएं [CAhPSCs] प्रत्येक जानवर के लिए आवश्यक हैं)।
    1. इन कोशिकाओं को आर्द्रीकृततापमान-नियंत्रित सीओ 2 इनक्यूबेटर में बनाए रखें और नियमित माइकोप्लाज्मा परीक्षण करें। AsPC-1 और CAhPSCs के लिए उपयोग किया जाने वाला संस्कृति माध्यम आरपीएमआई 1640 (300 मिलीग्राम/ 20% v/v भ्रूण गोजातीय सीरम, 1% v/v पेनिसिलिन/स्ट्रेप्टोमाइसिन) और आईएमडीएम (4 एमएम एल-ग्लूटामाइन के साथ, 10% v/v भ्रूण गोजातीय सीरम, 1% v/v पेनिसिलिन/स्ट्रेप्टोमाइसिन) ।
    2. कोशिकाओं को कोशिका निलंबन में आजमाने के लिए मानक सेल संस्कृति तकनीकों का उपयोग करें। इस्तेमाल किए गए ट्राइप्सिन समाधान की मात्रा में दो बार संबंधित पूर्ण संस्कृति माध्यम का उपयोग करके ट्राइप्सिन को बेअसर करें।
    3. इन कोशिकाओं को फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के साथ दो बार धोएं और 50 माइक्रोल सेल सस्पेंशन में 1 x 106 एस्पेसी-1 कोशिकाओं और 1 x 106 CAhPSCs वाले मिश्रण में फिर से खर्च करें।
    4. उपयोग होने तक इस निलंबन को बर्फ पर रखें।
  2. प्रक्रिया के लिए एक वर्ग द्वितीय जैवसेफ्टी कैबिनेट तैयार करें। एक बाँझ प्लास्टिक के कपड़े से मढ़ा एक हीटिंग चटाई का प्रयोग करें। प्रक्रिया के दौरान आवर्धन के लिए, 2.5x से 3.5x आवर्धन सर्जिकल loupes की एक जोड़ी का उपयोग करें।
  3. एक छेद, व्यास में 1 सेमी, एक धुंध झाड़ू में काटने से पर्स-स्ट्रिंग झाड़ू तैयार करें। इस छेद को पर्स-स्ट्रिंग सीवन के साथ सुरक्षित करें। किसी भी ठीक लट सीवन इस के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है (जैसे, 5/0 पॉलीग्लीकोलिक एसिड सीवन) । लट सीवन सामग्री की सिफारिश की जाती है क्योंकि यह ढीली गाँठ को कसने के बाद जगह में रहने की अनुमति देता है। यह चित्रा 1aमें सचित्र है ।
  4. इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा 80 मिलीग्राम/किलो केटामाइन और 10 मिलीग्राम/किलो जाइलाज़ीन के साथ माउस को एनेस्थेटाइज करें।
  5. 5 मिलीग्राम/किलो एन्फ्लॉक्सासिन एंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस, 2.5 मिलीग्राम/किलो फ्लूनिक्सिन एनाल्जेसिया और 0.9% खारा चमड़े के 1 एमएल का प्रशासन।
  6. एक बार एनेस्थेटाइज्ड होने के बाद, माउस को बाँझ क्षेत्र पर एक रीढ़ की स्थिति में रखें और त्वचा की तैयारी के लिए 70% इथेनॉल के बाद पोविडोन-आयोडीन लागू करें।
  7. पेट के बाएं कपाल चतुर्भुज की त्वचा में एक देशांतर चीरा बनाएं, और फिर संदंश के बीच मांसपेशियों की परत को चीरा लगाकर पेट में प्रवेश करें।
  8. सेल सस्पेंशन के 50 माइक्रोन के साथ 29 जी इंसुलिन सिरिंज लोड करें - यह 1 x 106 CAhPSCs और 1 x 106 लूसिफ़ेरेस-टैग किए गए AsPC-1 कोशिकाओं के बराबर है। यह इंजेक्शन डिवाइस पर माउंट। इस इंजेक्शन डिवाइस के डिजाइन और कार्य को चित्रा 1बी और इसकी किंवदंती में विस्तार से समझाया गया है।
  9. लेप्रोटॉमी चीरा पर पर्स-स्ट्रिंग झाड़ू रखें और फिर इस झाड़ू के उद्घाटन के माध्यम से तिल्ली और अग्नाशय की पूंछ को बाहरी करें। अग्न्याशय के शरीर को धीरे-धीरे घेरने के लिए पर्स-स्ट्रिंग को कस लें, इंजेक्शन के लिए अग्नाशय की पूंछ को उजागर करें। यह काफी तंग होना महत्वपूर्ण है कि धुंध अग्न्याशय से संपर्क करता है, जबकि एक ही समय में इसे संकुचित नहीं करता है।
  10. एक जोड़ी संदंश का उपयोग करके, अग्न्याशय की पूंछ को समझें और धीरे-धीरे उस पर पार्श्व तनाव रखें। एक उथले कोण पर सुई के साथ वेंट्रल पेरिटोनियल सतह पंचर और फिर इंजेक्शन डिवाइस के साथ एक धीमी और नियंत्रित फैशन (10−15 एस से अधिक) में अग्न्याशय में सेल निलंबन इंजेक्ट।
  11. इंजेक्शन प्रक्रिया के दौरान, रिसाव के लिए सावधानीपूर्वक निरीक्षण करें - इंजेक्शन साइट (भाटा से) और अग्नाशय के लोबुल के दूसरी तरफ (प्रवेश के माध्यम से और माध्यम से प्रवेश के मामले में) दोनों। यदि दिखाई देने वाला रिसाव होता है, तो इंजेक्शन को रोकें और सिरिंज में शेष इंजेक्शन की मात्रा की जांच करके रिसाव की मात्रा को नोट करें। यदि रिसाव छोटी मात्रा (<10 μL) का है, और फिर धुंध के साथ किसी भी रिसाव को अवशोषित और इंजेक्शन को पूरा करने के लिए सुई को एक अलग अग्नाशय के लोबुल में फिर से स्थान दें।
  12. तिल्ली और अग्न्याशय को बदलें और पेट की दीवार को 5/0 पॉलीग्लीकोलिक एसिड सीवन के साथ लगातार फैशन में बंद करें। क्लिप के साथ त्वचा को बंद करें।
  13. संज्ञाहरण से बरामद होने तक एक गर्म पिंजरे में माउस की निगरानी करें। एक बार जागने और सतर्क करने के बाद, माउस को अपने पिंजरे में वापस ले जाएं।

2. कैंसर रीसेक्शन सर्जरी: डिस्टल अग्नाशयक्टोमी और स्प्लीनेक्टॉमी

  1. प्रत्यारोपण के संबंध में resection के समय प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के आधार पर भिन्न हो सकते हैं। सामान्य तौर पर, ट्यूमर को रीसेक्शन से पहले कम से कम 3 सप्ताह तक बढ़ने दें, लेकिन विशेष प्रत्यारोपित कैंसर सेल लाइन के लिए इस अनुभवजन्य रूप से अनुकूलित करें।
  2. रीसेक्शन सर्जरी से पहले दिन, स्थानीयकृत प्राथमिक ट्यूमर की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए जानवरों पर बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग करें। ध्यान दें कि इस इमेजिंग अध्ययन का उपयोग चूहों को रीसेक्शन से स्पष्ट अतिरिक्त अग्नाशय की बीमारी से बाहर करने के लिए किया जाता है। न तो आकार और न ही उज्ज्वल प्रवाह resection के लिए पात्रता निर्धारित करने के लिए थ्रेसहोल्ड के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए ।
    1. चूहों का वजन करें और डी-लूसिफ़ेरिन इंट्रापेरिटोनेली (150 मिलीग्राम/किलो) के साथ इंजेक्ट करें।
    2. एक लूसिफ़ेरिन गतिज वक्र के प्रदर्शन से प्रत्येक प्रयोग के लिए लूसिफ़ेरिन इंजेक्शन के संबंध में इमेजिंग चरण के समय का निर्धारण करें। समय की अवधि जहां उज्ज्वल प्रवाह अपने अधिकतम के 90% से ऊपर है बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग के लिए इष्टतम समय का प्रतिनिधित्व करता है (इस प्रयोग में, 18 से 26 मिनट के बाद इंजेक्शन)
    3. एनेस्थीसिया को प्रेरित करें और आइसोफ्लुन (क्रमशः ऑक्सीजन के साथ 4% और 3%) का उपयोग करके बनाए रखें और बायोल्यूमिनेसेंट इमेजिंग डिवाइस (जैसे, आईविस लुमिना II) का उपयोग करके इमेजिंग करें। स्वचालित एक्सपोजर और बिनिंग सेटिंग्स का उपयोग करें (हालांकि, यह अपेक्षित उज्ज्वल प्रवाह के लिए अनुकूलित किया जा सकता है)।
  3. प्रक्रिया के लिए द्वितीय श्रेणी जैवसेफ्टी कैबिनेट तैयार करें। एक बाँझ प्लास्टिक के कपड़े से मढ़ा एक हीटिंग चटाई का प्रयोग करें। विच्छेदन के दौरान आवर्धन के लिए, 2.5x से 3.5x आवर्धन सर्जिकल loupes की एक जोड़ी का उपयोग करें।
  4. इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा 80 मिलीग्राम/किलो केटामाइन और 10 मिलीग्राम/किलो जाइलाज़ीन के साथ माउस को एनेस्थेटाइज करें।
  5. 5 मिलीग्राम/किलो एन्फ्लॉक्सासिन एंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस, 2.5 मिलीग्राम/किलो फ्लूनिक्सिन एनाल्जेसिया और 0.9% खारा चमड़े के 1 एमएल का प्रशासन।
  6. एक रीढ़ की स्थिति में बाँझ क्षेत्र पर माउस रखें और त्वचा की तैयारी के लिए 70% इथेनॉल के बाद povidone-आयोडीन लागू होते हैं।
  7. पेट के बाएं कपाल चतुर्भुज की त्वचा में एक देशांतर चीरा करें, अधिमानतः पिछले चीरा साइट के माध्यम से।
  8. स्पष्ट रूप से अंतर्निहित मांसपेशियों की पेट की दीवार से त्वचा को काटना, और फिर त्वचा के घाव को खुला रखने के लिए एक अल्म स्वयं को बनाए रखने वाला रिट्रैक्टर रखें।
  9. पिछले ऑपरेशन की सीवन रेखा के एक तरफ संदंश के बीच पेशी परत को झुकाएं, और फिर पूरे पिछले सीवन लाइन को उत्पादित करने के लिए चीरा बढ़ाएं।
  10. तिल्ली और डिस्टल अग्न्याशय को बाहरी करें और इसे कपाल से वापस लें। अग्न्याशय के कौडल पहलू पर, कोलन फिल्मी आसंजन से जुड़ा पाया जा सकता है। यदि यह पाया जाता है, तो स्पष्ट रूप से पेट को बंद कर दिया।
  11. ध्यान से अग्न्याशय और प्लीहा जहाजों के शरीर के लिए संदंश पृष्ठ की एक जोड़ी गुजरती हैं और इस जगह को खोलें। यह बाद में लिगेशन के लिए अग्न्याशय के एक खंड को मुक्त करता है।
  12. एक टाइटेनियम लिगेशन क्लिप के साथ ट्यूमर के लिए अग्न्याशय समीपस्थ के शरीर को लिगेट करें, और फिर कॉटरी के साथ इस के लिए अग्न्याशय डिस्टल को पार करें। अग्नाशय स्टंप को नियंत्रित करने का एक वैकल्पिक तरीका ट्रांसेक्शन से पहले 5/0 पॉलीग्लाइकोलिक एसिड सीवन के साथ निरंतरता में इसे लिगेट करना है।
  13. अग्न्याशय को वापस लें और तिल्ली और पेट के कपाल ध्रुव के बीच गैस्ट्रोस्प्लेनिक जहाजों को कॉटराइज करें।
  14. नमूना निकालें और हीमोस्तिस की पुष्टि करें।
  15. पेट की दीवार को 5/0 पॉलीग्लीकोलिक एसिड सीवन के साथ लगातार फैशन में बंद करें। क्लिप के साथ त्वचा को बंद करें।

3. पश्चात प्रबंधन

  1. तत्काल पोस्ट एनेस्थेटिक अवधि (उपरोक्त दोनों प्रक्रियाओं के लिए) में, एनेस्थेटिक से बरामद होने तक गर्म पिंजरे में माउस की निगरानी करें। एक बार जागने और सतर्क करने के बाद, माउस को अपने पिंजरे में वापस ले जाएं। पश्चात अवधि में, दर्द और संकट के संकेतों के लिए जानवरों की निगरानी करें। चमड़े के नीचे इंजेक्शन द्वारा 0.05 मिलीग्राम/किलो बुप्रेनोरफिन का प्रशासन करें और 12 घंटे तक जानवरों का बारीकी से निरीक्षण करें।
  2. इसके बाद, वजन, भोजन के सेवन और गतिविधि के लिए दैनिक चूहों की निगरानी करें। चीरा साइटों की जांच करें और ट्यूमर के आकार के लिए टटोलना। सातवें पश्चात दिन पर त्वचा क्लिप निकालें।
  3. यदि मानवीय अंत बिंदुओं तक पहुंच जाते हैं तो माउस को इच्छामृत्यु दें। इन मानवीय अंत बिंदुओं में शामिल हैं: शरीर के वजन >20% की हानि, अनुपचारित संकट की विशेषताएं (कूबड़ मुद्रा सहित, आंदोलन या संवारने की कमी) और बाहरी धड़कन द्वारा अनुमानित 1 सेमी3 से अधिक ट्यूमर का आकार।

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Representative Results

लगातार ५९ चूहों की प्रत्यारोपण सर्जरी की गई । आठ में हुआ सकल रिसाव (14%) चूहों। इंजेक्शन के समय रिसाव की डिग्री प्रोटोकॉल अनुभाग में ऊपर वर्णित अनुमानित है। तीन सप्ताह के बाद इन प्रत्यारोपित ट्यूमर को विकसित करने की अनुमति देने के लिए, पूर्व-resection बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग को रीसेक्शन से पहले सकल मेटास्टैटिक रोग के साथ चूहों को बाहर करने के लिए किया गया था। पैंतालीस (76%) चूहों को सर्जिकल रिसेक्शन किया गया।

सभी 45 (100%) चूहों को सफल डिस्टल अग्नाशय/स्प्लेनेक्टॉमी से गुजरना पड़ा, जिसमें हीमोस्ती का कोई मुद्दा नहीं था । 43 (96%) में 5 मिमी से अधिक स्थूल समीपस्थ अग्नाशय का मार्जिन हासिल किया गया था चूहों।

रीसेक्शन के समय, स्थानीय मेटास्टेसिस 9/45 (20%) चूहों - ज्यादातर सीवन लाइन में (प्राथमिक ट्यूमर के साथ असतत) नौ में से तीन पेट के अधिक से अधिक वक्र पर अतिरिक्त अलग नोड्यूल दिखा रहा है और एक जिगर पर एक उपकैप्सुलर नोड्यूल दिखा रहा है। प्राथमिक अग्नाशय ट्यूमर पांच में सीवन लाइन के अनुयायी था (11%) चूहों और जिगर के लिए एक में (2%) चूहा। इन अनुयायी संरचनाओं को ब्लॉक मेंउत्पादित किया गया था ।

मतलब (SEM) सर्जरी का समय (बंद करने के लिए प्रेरण) 22 (०.९) मिनट था । रीसेक्शन के बाद 1 सप्ताह के भीतर किसी भी जानवर की मौत नहीं हुई ।

एक सप्ताह के बाद resection, चूहों अवशिष्ट रोग का पता लगाने के लिए बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग से गुजरना पड़ा । माउस की वेंट्रल सतह पर अधिकतम चमक का अनुपात पृष्ठभूमि की तुलना में था। बत्तीस (71%) चूहों में <10 का अधिकतम चमक अनुपात (माउस: पृष्ठभूमि) था, जो न्यूनतम या कोई अवशिष्ट बीमारी का संकेत देता है।

Figure 1B
चित्रा 1: ट्यूमर प्रत्यारोपण की सुविधा के लिए कस्टम निर्मित उपकरणों। (क)पर्स-स्ट्रिंग गॉज झाड़ू: (i) सेंट्रल होल, व्यास में लगभग 1 सेमी, जिसके माध्यम से अग्नाशय की पूंछ इंजेक्शन के समय रखी जाएगी; (ii) छेद के चारों ओर पर्स-स्ट्रिंग सीवन; (iii) डबल-लेयर्ड धुंध; (iv) सिंगल थ्रो नॉट; (v) सीवन सामग्री का एक अंग स्टरलाइजिंग इंडिकेटर टेप के साथ धुंध के लिए सुरक्षित है; (vi) संकेतक टेप से बना एक हैंडल, सीवन सामग्री के दूसरे छोर पर फैशन है। (ख)इंजेक्शन डिवाइस: (I) एक्ट्यूटिंग सिरिंज । इस सिरिंज के शरीर के माध्यम से काटे गए स्लॉट इंजेक्शन सिरिंज (सेल निलंबन इंजेक्शन के साथ; नहीं दिखाए गए) को इस सिरिंज शरीर पर चढ़कर अनुमति देता है; (II) नियंत्रक सिरिंज। इससे पानी भर जाता है। सर्जिकल सहायक द्वारा छोटे नियंत्रक सिरिंज पर प्लंजर का अवसाद बड़े एक्ट्यूटिंग सिरिंज प्लंजर के विस्थापन का कारण बनता है। ऐक्टिंग प्लंजर का विस्थापन छोटा है, लेकिन एक यांत्रिक लाभ के साथ जो इंजेक्शन सिरिंज तंत्र से जुड़े प्रतिरोध के साथ-साथ इंजेक्शन द्वारा विस्तार के ऊतकों के प्रतिरोध को दूर करने की अनुमति देता है। यह 10-15 सेकंड से अधिक 50 माइक्रोन के सटीक और चिकनी इंजेक्शन के लिए अनुमति देता है; (III) पॉलीटेट्राफ्लोरोएथिलीन (पीटीएफई) कनेक्शन 0.5 मिमी के आंतरिक व्यास के साथ ट्यूबिंग। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

अग्नाशय के कैंसर का एक रीसेक्शनल ऑर्थोटोपिक माउस मॉडल महत्वपूर्ण है क्योंकि यह एडजुवेंट और नियोडजुवेंट उपचार के परीक्षण के लिए अनुमति देता है। यह अग्नाशय के कैंसर में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है जहां सर्जरी सबसे प्रभावी उपचार बनी हुई है, लेकिन पुनरावृत्ति के उच्च जोखिम से जुड़ी हुई है। यह पत्र एक ऐसी विधि का वर्णन करता है जो विश्वसनीय रूप से अग्नाशय के कैंसर का उत्पादन करेगी जो संभावित रूप से रीसेक्शन के साथ इलाज योग्य है, नैदानिक परिदृश्य को दोहराता है जहां नियोएडजुवेंट/एडजुवेंट थेरेपी की आवश्यकता होती है ।

मौजूदा तरीकों के संबंध में महत्व
अग्नाशय के कैंसर में एडजुवेंट और नियोडजुवेंट चिकित्सा के महत्व के बावजूद, साहित्य में कुछ अच्छी तरह से वर्णित ऑर्थोटोपिक रीसेक्शनल माउस मॉडल हैं। ये वर्णित resectional मॉडल मनुष्यों में नैदानिक स्थिति की प्रतिकृति की अपनी निष्ठा में विविध । इन पिछले मॉडलों को मोटे तौर पर वर्गीकृत किया जा सकता है: (i) ट्यूमर उत्तेजना केवल, फ्लोरेसेंस मार्गदर्शन के साथ; (ii) सबटोटल अग्नाशय कीरिसेक्शन जिसमें कोई स्प्लींकटॉमी नहीं है; (iii) डिस्टल अग्नाशय/स्प्लीनेक्टॉमी।

फ्लोरेसेंस मार्गदर्शन के साथ ट्यूमर की उत्तेजना का वर्णन सबसे बड़ी संख्या में15 , 17,18,19,20,21मेंकिया गया है । इनमें से कई शोध पत्रों की उत्पत्ति एक ही शोध समूह से हुई थी। दुर्भाग्य से, मनुष्यों में, अकेले ट्यूमर (एन्यूक्लियेशन) का स्थानीय उत्सर्जन स्थानीय पुनरावृत्ति की उच्च संभावना के कारण अग्नाशय एडेनोकार्सिनोमा (पीसी) के लिए नहीं किया जाता है, साथ ही लिम्फ नोड स्थिति22,23का आकलन करने में असमर्थता भी नहीं होती है। इसलिए, एक गैर-चिकित्सकीय प्रासंगिक तुलनाकार समूह (गैर-फ्लोरेसेंस निर्देशित परमाणु) का उपयोग इस तकनीक का वर्णन करने वाले कागजों में ऑन्कोलॉजिकल परिणामों की रिपोर्टिंग को बादल करता है। आश्चर्य नहीं कि गैर-फ्लोरेसेंस परमाणु समूहों में हमेशा स्थानीयपुनरावृत्ति15,20,21की अत्यधिक दर थी। इसके विपरीत, टॉरगेनसन एट अल14 ने एक समान फ्लोरेसेंस-निर्देशित रीसेक्शन तकनीक का वर्णन किया, और 58% की काफी कम पुनरावृत्ति दर (आठ सप्ताह के बाद-resection) की सूचना दी। कुल मिलाकर, ये अध्ययन सर्जरी के दौरान अवशिष्ट रोग के दृश्य के लिए फ्लोरेसेंस मार्गदर्शन की उपयोगिता को प्रदर्शित करते दिखाई देते हैं। हालांकि, यह अभी तक मनुष्यों में देखभाल का मानक नहीं है, जो नैदानिक परिदृश्य को दोहराने के उद्देश्य से माउस मॉडल में इसके उपयोग के मामले में एक सीमा है। बेशक, यह बदल सकता है अगर फ्लोरेसेंस-निर्देशित सर्जरी को नैदानिक अभ्यास में व्यापक रूप से अपनाया जाना था।

एक अन्य रिसेक्शन मॉडल13,24के शरीर में प्रत्यारोपित ट्यूमर के लिए स्प्लीनेक्टॉमी के बिना सबटोटल पैंक्रियाजक्टॉमी पर आधारित था । इस की नैदानिक प्रासंगिकता को भी प्रश्न में कहा जाता है क्योंकि ऑपरेशन का वर्णन न तो अग्नाशयडूडेनेक्टॉमी था और न ही मनुष्यों में किए गए डिस्टल अग्नाशय के रूप में। आश्चर्य नहीं, इन चूहों को भी ट्यूमर पुनरावृत्ति की उच्च दरों से सामना करना पड़ा, दोनों दूर और स्थानीय । विशेष रूप से ध्यान दें कि प्लीहा पुनरावृत्ति आम थी, प्रत्यारोपण24में या तो अपर्याप्त रीसेक्शन या संभावित पेरिटोनियल ट्यूमर सीडिंग का सुझाव देता है।

नी एट अल16 फ्लोरेसेंस इमेजिंग मार्गदर्शन के साथ प्रदर्शन किया एक डिस्टल अग्नाशय/स्प्लेनेक्टोमी मॉडल का वर्णन किया । निराशाजनक रूप से, एक चिकित्सकीय प्रासंगिक ऑपरेशन (फ्लोरेसेंस मार्गदर्शन के साथ) के उपयोग के बावजूद, अस्तित्व बहुत कम था (18 दिनों का मतलब अस्तित्व), यहां तक कि डिस्टल अग्नाशय समूह में भी। प्रगतिशील रोग की यह डिग्री प्रशामक उपचार मॉडल25,26, 27से भी बदतर प्रतीत होतीहै,जो अवशिष्ट के बाद सकल अवशिष्ट रोग की संभावित उपस्थिति का सुझाव देती है। हाल ही में, गिरी एट अल28 ने एक डिस्टल पैंक्रिएटेक्टोमी और आंशिक स्प्लेनेक्टॉमी माउस मॉडल की सूचना दी। यह अध्ययन उल्लेखनीय है कि यह कैंसर के एक इम्यूनोसंप्यूटर माउस मॉडल का प्रतिनिधित्व करता है। हालांकि, इस अध्ययन में लगभग सार्वभौमिक स्थानीय और अन्य इंट्रापेरिटोनियल ट्यूमर पुनरावृत्ति की सूचना दी गई, संभवतः प्रत्यारोपण में मनोगत इट्रोजेनिक मेटास्टेसिस का संकेत है।

माउस मॉडल का उपयोग जहां एडजुवंत उपचार के परीक्षण के लिए सकल अवशिष्ट रोग के बाद अवशिष्ट है अनुचित हो सकता है। मुद्दा यह है कि सकल अवशिष्ट रोग के लिए उपचार वास्तव में adjuvant उपचार के रूप में वर्गीकृत नहीं किया जा सकता है बल्कि प्रशामक इरादे के साथ उपचार माना जाना चाहिए । उस मामले में, इस तरह के माउस मॉडल कम मात्रा में बीमारी वाले गैर-रिसेक्शनल मॉडल की तुलना में कोई लाभ नहीं प्रदान करते हैं।

सुझाव और महत्वपूर्ण कदम के नुकसान
ट्यूमर प्रत्यारोपण प्रक्रिया
नैदानिक परिदृश्य को दोहराने के लिए, इस मॉडल में अलग-अलग चुनौतियां हैं जो प्रत्यारोपण और पुनर्सेक्शन प्रक्रियाओं से संबंधित हैं। प्रत्यारोपण प्रक्रिया के लिए, जिन प्रमुख चुनौतियों को दूर करने की आवश्यकता है, वे हैं सफल प्रत्यारोपण और रिसाव की रोकथाम । इन दो मुद्दों इंजेक्शन की विफलता के रूप में परस्पर संबंधित है पेट गुहा में ट्यूमर सेल निलंबन के सकल रिसाव में परिणाम होगा । यह पेरिटोनियल मेटास्टेसिस के साथ एक माउस मॉडल का उत्पादन करेगा, जो अग्नाशय केरिसेक्शन की परवाह किए बिना प्रगति करेगा। यह मनुष्यों में प्रसिद्ध नैदानिक परिदृश्य को दर्शाता है जहां मेटास्टैटिक पीसी में अग्नाशय कारिसेक्शन रोगी परिणाम को प्रभावित नहीं करता है। यह मनुष्यों में लेप्रोस्कोपी का मंचन का आधार है29.

ट्यूमर के प्रत्यारोपण की सफलता स्पष्ट रिसाव के बिना सेल निलंबन के एक "बुलबुला" की सफल पीढ़ी के रूप में इंट्राऑपरेटिव रूप से देखा जा सकता है। एक अच्छा परिणाम प्राप्त करने में सबसे अधिक महत्व अग्नाशय परेन्चिमा के भीतर सुई की सटीक नियुक्ति है। यह केवल अग्न्याशय को "खींच" करके प्राप्त किया जा सकता है ताकि पेरिटोनियल सतह तना हुआ हो। पंचर सुई बेवेल ऊपर की ओर (वेंटरैली) का सामना करना पड़ रहा है के साथ हो जाना चाहिए। एक बार जब सुई पेरिटोनियल सतह को पंचर कर देती है, तो इसे उन्नत किया जाना चाहिए जबकि सुई टिप को थोड़ा उठाया जाता है ताकि बेवल सतह पेरिटोनम के ठीक नीचे ग्लाइड्स हो। यह अनजाने में अग्न्याशय के पंचर को रोक देगा, जो माउस अग्नाशय के लोबुल के छोटे आयामों के कारण एक आम नुकसान है। एक बार जब पूरा बेवेल अग्न्याशय के पदार्थ के भीतर होता है, तो सेल निलंबन इंजेक्शन दिया जाता है। शल्य चिकित्सा loupes के साथ दृष्टि का आवर्धन सुई प्रवेश की गहराई को सही ढंग से कल्पना करने के लिए अत्यधिक वांछनीय है।

अनजाने में रिसाव के जोखिम को और कम करने के लिए कई तकनीकों का उपयोग किया जा सकता है।
इंजेक्शन के लिए एक बड़े लोबुल का चयन। छोटे lobules उच्च दबाव फुलाने के लिए (Laplace कानून के बाद) की आवश्यकता है, जिससे पंचर साइट पर सुई के आसपास रिसाव का खतरा बढ़ रहा है ।
इंजेक्शन की गति का अनुकूलन। एक इंजेक्शन डिवाइस(चित्रा 1b)का उपयोग जो सेल निलंबन को 10-15 सेकंड से अधिक इंजेक्ट करने की अनुमति देता है, तीन उद्देश्यों को पूरा करता है। सबसे पहले, यह अग्न्याशय में दबाव के परिवर्तन की दर को कम करता है, ऊतकों को विकृत होने का समय देता है और निलंबन के भाटा के जोखिम को कम करता है। दूसरा, यह इंजेक्शन प्रक्रिया की निगरानी करने की अनुमति देता है और, यदि आवश्यक हो, बंद कर दिया और सुई फिर से तैनात । किसी भी रिसाव को पोविडोन-आयोडीन से लथपथ धुंध से उड़ाया जा सकता है। तीसरा, यह ऑपरेटर को प्लंजर को दबाना की जरूरत से मुक्त करता है, जिससे ऑपरेटर को अग्न्याशय के भीतर सुई टिप रखने पर ध्यान केंद्रित करने की अनुमति मिलती है जबकि सहायक कोशिका निलंबन इंजेक्ट करता है।
डबल-लेयर्ड पर्स-स्ट्रिंग धुंध का उपयोग करें। यह धुंध अग्नाशय की पूंछ के चारों ओर एक कॉलर बनाती है जो कोशिका निलंबन के किसी भी रिसाव को अवशोषित कर लेगी और इसलिए पेट की गुहा में संदूषण को कम करेगी।

साहित्य के कुछ अध्ययनों में एक बाह्राश मैट्रिक्स मिश्रण (मैट्रिक्स) का उपयोग किया गया है जो इंजेक्शन 13,15,24के बाद समय के साथ जम जाता है। इससे इंजेक्शन के बाद लीकेज का खतरा कम हो सकता है। हालांकि, इस रणनीति का एक संभावित नुकसान यह है कि मैट्रिक्स या इसी तरह के अन्य एक्सट्रासेलुलर मैट्रिक्स समाधान पीएससी30पर गैर-शारीरिक प्रभाव डाल सकते हैं। उदाहरण के लिए, मातृजेल को पीएससी को शांत करने के लिए दिखाया गया है जिससे मॉडल31, 32में पीएससी के प्रभावों को संभावित रूप से नकार दियाजासके । कैंसर कोशिकाओं के इंजेक्शन के लिए एक विकल्प ट्यूमर ऊतक का आर्थोटोपिक प्रत्यारोपण है (या तो सीधे रोगियों से या चमड़े के नीचे माउस मॉडल से)। हालांकि, इन दृष्टिकोणों के अपने नुकसान हैं। सबसे पहले, विषमता नमूना त्रुटि या प्रत्यारोपित ऊतक की मात्रा में भिन्नता से उत्पन्न हो सकती है। इस तरह की विषमता बाद के उपचार तुलना की शक्ति को कम कर सकती है। दूसरा, एक चमड़े के नीचे माउस मॉडल के साथ ट्यूमर ऊतक के पासेजिंग उप क्लोन जो मूल रोगी ट्यूमर के लिए अलग जैविक व्यवहार है के चयन के लिए नेतृत्व कर सकते हैं ।

ट्यूमर रीसेक्शन प्रक्रिया
इस मॉडल में, हमने मनुष्यों में किए गए डिस्टल अग्नाशय/स्प्लेनेक्टॉमी प्रक्रिया का उपयोग किया है। रिसेक्शनल सर्जरी से संबंधित चुनौतियां पैथोलॉजिकल और शारीरिक कारकों पर निर्भर करती हैं।

प्रमुख रोग कारक ट्यूमर प्रसार है। अग्नाशय के रीसेक्शन के समय कम मात्रा में स्थानीय प्रसार को फिर से विभाजित किया जा सकता है, हालांकि यह अधिक दूर पेरिटोनियल और अन्य मेटास्टेसिस की संभावना का संकेत दे सकता है। हम नियमित रूप से पहले ऑपरेशन से सीवन लाइन का उत्पादन करते हैं क्योंकि यह स्थानीय पुनरावृत्ति का संभावित क्षेत्र है। यदि ट्यूमर आसपास की संरचनाओं से जुड़ा हुआ है, जैसे पेट की दीवार या जिगर के बाएं पालि, इन ब्लॉक एनपुनः प्राप्त किया जा सकता है । शारीरिक रूप से, महत्वपूर्ण कदम अग्न्याशय के शरीर के लिए विमान पृष्ठीय विच्छेदन है। अग्न्याशय के बाहरी होने के बाद अक्सर अग्न्याशय के पीछे प्लीहा नस की कल्पना की जा सकती है। यह एक प्रमुख मील का पत्थर है, के रूप में भ्रूण रक्तहीन विमान तुरंत इस के लिए पृष्ठीय है ।

यहां वर्णित मॉडल में दो अन्य संभावित शारीरिक नुकसान हैं। कोलन अग्नाशय के शरीर के कौडल पहलू का पालन हो सकता है। इस संरचना को दूर जुटाने में विफलता अग्नाशय विभाजन या बंधन के समय अनजाने में उपनिवेश की चोट का कारण बन सकती है। गैस्ट्रोस्प्लेनिक वाहिकाएं छोटी होती हैं और यदि अवुल्स या अपर्याप्त रूप से कॉटराइज्ड होती हैं तो आसानी से खून बह सकता है। इसके अलावा, एक बार avulsed, रक्तस्राव बिंदु अक्सर पेट के अधिक से अधिक वक्र के पीछे पेट में गहरी वापस ले लेता है, जिससे रक्तस्राव के बाद का नियंत्रण अधिक चुनौतीपूर्ण हो जाता है। इसलिए, गैस्ट्रोस्प्लेनिक जहाजों की तिल्ली और कौटे के सावधानीपूर्वक पीछे हटने की आवश्यकता होती है। सफल hemostasis के लिए एक दृष्टिकोण तिल्ली के हिलाकर पहलू है जो आसपास खोखले आंत के लिए अनजाने थर्मल चोट के जोखिम को कम करने पर इन जहाजों cauterize है ।

हमने पाया है कि एक टाइटेनियम लिगेशन क्लिप का उपयोग करना, व्यापक रूप से जहाजों के बंधन के लिए मानव सर्जरी में उपयोग किया जाता है, अग्नाशय स्टंप को नियंत्रित करने का एक तेजी से और प्रभावी तरीका है, जिसके परिणामस्वरूप लिगेचर के उपयोग की तुलना में कुल ऑपरेटिव समय में कमी आती है। इसका उपयोग गिरि एट अल28द्वारा भी किया गया था।

तकनीक की सीमाएं
अग्न्याशय के इस रिसेक्शनल मॉडल की सीमाएं हैं। एक सीमा पुनरावृत्ति/मेटास्टेसिस का उत्पादन करने की अनुमति के समय से संबंधित है । एक तरफ, मेटास्टैटिक रोग के विकास को अधिकतम करने की आवश्यकता है, लेकिन दूसरी ओर, स्थानीय रूप से उन्नत होने से पहले ट्यूमर को फिर से काटना चाहिए। प्रत्यारोपण और resection के बीच की अवधि इसलिए विशेष नैदानिक परिदृश्य एक को दोहराने की इच्छा के लिए समायोजित करने की आवश्यकता हो सकती है । एक अन्य सीमा कैंसर कोशिकाओं के अनजाने बिखराव और बाद में पेरिटोनियल मेटास्टेसिस से संबंधित है जिसकी ऊपर चर्चा की गई है।

एडजुवंत उपचार मॉडल की एक बड़ी चुनौती सर्जिकल उपचार प्रभाव से एडजुवंत उपचार प्रभाव को विच्छेदन कर रही है। जाहिर है, एक अच्छी तरह से डिजाइन अध्ययन जो यादृच्छिक है, एक नियंत्रण समूह के साथ resection सर्जरी के दौर से गुजर की आवश्यकता है । सापेक्ष उपचार प्रभावों के आकलन में और सुधार करने के लिए, हम वीवो में ट्यूमर के बोझ का आकलन करने का सुझाव देते हैं (उदाहरण के लिए, लूसिफ़ेरेस-टैग किए गए कैंसर कोशिकाओं का उपयोग करके और वीवो बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग में प्रदर्शन करके)। ऑर्थोटोपिक मॉडल में इस आकलन की अर्ध-मात्रात्मक प्रकृति के बावजूद (जैसा कि बायोल्यूमिनेसेंस सिग्नल ओवरलीटिंग ऊतकों के माध्यम से पारित होने से क्षीण होता है), यह दृष्टिकोण ट्यूमर के बोझ के देशांतर मूल्यांकन की अनुमति देता है, जिसमें सर्जिकल अवशिष्ट रोग का आकलन शामिल है।

संशोधन और भविष्य के अनुप्रयोग
अग्नाशय के स्टेलेट कोशिकाओं के साथ या उसके बिना प्रत्यारोपित सेल लाइन और/या सेल नंबरों को लक्षित नैदानिक परिदृश्य को प्रतिबिंबित करने के लिए संशोधित किया जा सकता है12। मेटास्टेसिस गठन के जोखिम को बदलने के लिए प्रत्यारोपण और रिसेक्शन के बीच की अवधि को भी संशोधित किया जा सकता है। अन्य विविधताओं में रोगी या चूहों से व्युत्पन्न ज़ेनोबेड़ा या ऑर्गेनॉइड33का प्रत्यारोपण शामिल हो सकता है।

नियोएडजुवेंट थेरेपी का परीक्षण यहां वर्णित मॉडल की बुनियादी विशेषताओं के भीतर भी किया जा सकता है। इसके लिए सर्जिकल रिसेक्शन34से पहले दवा उपचार शुरू करने की आवश्यकता होगी । इसी तरह, दोनों neoadjuvant और adjuvant चिकित्सा एक ही चूहों में अध्ययन किया जा सकता है ।

अंत में, जब हमने एथिमिक बाल्ब/सी न्यूड चूहों के उपयोग का वर्णन किया है जो एक इम्यूनोडिफिशिएंसी मॉडल का प्रतिनिधित्व करता है, तो एक वैकल्पिक इम्यूनोसंप्यूटेंट मॉडल में C57B6 चूहों28में प्रत्यारोपित केपीसी ट्यूमर कोशिकाओं को शामिल किया जा सकता है । यह एडजुवेंट/नियोएडजुवेंट प्रतिरक्षा चिकित्सा के परीक्षण के लिए एक उपयोगी विकल्प हो सकता है ।

संक्षेप में, हम चूहों में अग्नाशय के कैंसर के सर्जिकल रीसेक्शन मॉडल के लिए एक मजबूत और प्रजनन योग्य तकनीक का वर्णन करते हैं जो नैदानिक परिदृश्य की नकल करता है और विशेष उपकरणों की आवश्यकता नहीं होती है। यह मॉडल एडजुवेंट और नियोडजुवेंट उपचार दोनों के परीक्षण के लिए उपयोगी हो सकता है।

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Disclosures

लेखकों को इस परियोजना के संबंध में खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है ।

Acknowledgments

लेखकों को एवनर अग्नाशय के कैंसर फाउंडेशन से समर्थन मिला है ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Animals, Materials and Equipment for Implantation Procedure
AsPC-1 human pancreatic cancer cell line, luciferase tagged (luc+ gene from Promega PGL3 Basic plasmid) American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA supplied by Professor Takashi Murakami, Saitama Medical University, Saitama, Japan
Autoclip wound clips, 9 mm Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW, Australia 500346
Basic Dressing Pack Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia
Cancer associated human pancreatic stellate cells Pancreatic Research Group cell bank In house cell bank
Cryogenic tubes, 1.0 mL Thermo Fisher Scientific Australia Pty Ltd, Scoresby, VIC, Australia 366656
Disposable stainless-steel scalpel blade with handle, size 15 Livingstone International, Mascot, NSW, SCP15
Foetal bovine serum (FBS) Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia 16000044
Gilles fine tooth forceps 12 cm Generic stainless steel microsurgical instrument set
Heated mats to maintain body temperature during surgery and postoperative recovery Generic
Homozygous athymic nude mice: Strain BALB/c-Fox1nu/Ausb, female Australian Bioresources, Moss Vale, NSW, Australia
Iscove's modified Dulbecco's medium (IMDM) with 4mM L-glutamine and no phenol red Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia 21056023
Jewellers forceps 11.5 cm Generic stainless steel microsurgical instrument set
Micro needle holder (round handle) 15 cm straight Generic stainless steel microsurgical instrument set
Micro scissors (round handle) 15 cm straight Generic stainless steel microsurgical instrument set
Penicillin 10,000 U/mL, streptomycin 10,000 μg/mL Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia 15140122
Polyglycolic acid suture, size USP 5/0 on 13mm half-circle round-bodied needle Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia C1049407
Portable weighing scale Precision balances, Bradford, MA, USA
Reflex clip applier and clip remover World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA 500345
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 with phenol red and 300 mg/L Lglutamine Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia 11875085
Round bodied vessel dilator 15 cm, 0.1 mm tip Generic stainless steel microsurgical instrument set
Trypsin 0.05%, EDTA 0.02% Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia 25300054 For pancreatic stellate cells
Trypsin 0.25%, EDTA 0.02% Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia 25200056 For ASPC-1 cells
U-100 insulin syringes, 0.5 mL with 29 G (0.33 mm) × 13 mm needle Terumo Medical Corporation, Elkton, MD, USA
Equipment for Resection Procedure
Alm self-retaining retractor Generic stainless steel microsurgical instrument set
Autoclip wound clips 9 mm Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW 500346
Basic Dressing Pack Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia 08-559NP
Disposable stainless-steel scalpel blade with handle, size 15 Livingstone International, Mascot, NSW, SCP15
Gilles fine tooth forceps 12 cm Generic stainless steel microsurgical instrument set
Hand-held high temperature fine tip cautery Bovie Medical Corporation, Melville, NY, USA AA01
Heated mats to maintain body temperature during surgery and postoperative recovery Generic
IVIS Lumina II Bioluminescent Imaging Device Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA
Jewellers forceps 11.5 cm Generic stainless steel microsurgical instrument set
Micro needle holder (round handle) 15 cm straight Generic stainless steel microsurgical instrument set
Micro scissors (round handle) 15 cm straight Generic stainless steel microsurgical instrument set
Polyglycolic acid suture, size USP 5/0 on 13mm half-circle round-bodied needle Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia C1049407
Portable weighing scale Precision balances, Bradford, MA, USA
Reflex wound clip applier and clip remover World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA 500345
Round bodied vessel dilator 15 cm, 0.1 mm tip Generic stainless steel microsurgical instrument set
Titanium “Weck style” Ligaclip, small HZMIM, Hangzhou, China
Titanium Ligaclip applier for open surgery, small HZMIM, Hangzhou, China
Volatile anaesthetic machine, including vapouriser and induction chamber Generic Generic vapouriser and induction chamber
Drugs for Procedures
70% w/w ethanol solution Sigma-Aldrich Pty Ltd, Castle Hill, NSW, Australia Applied topically as surgical skin preparation
Buprenorphine 0.3 mg/mL Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia Dose: 0.05 mg/kg s.c.
D-Luciferin (1 U/g) PerkinElmer, Inc., Waltham, MA, USA 122799 diluted in PBS to 15 mg/mL. Dose: 150 mg/kg i.p
Enrofloxacin 50 mg/mL Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia Dose: 5 mg/kg s.c.
Flunixin 50 mg/mL Norbrook Laboratories Australia, Tullamarine, VIC, Australia Dose: 2.5 mg/kg s.c.
Isoflurane Zoetis Australia Pty Ltd., Rhodes, NSW, Australia Dose (vapourised with oxygen): 4% induction, 3% maintenance
Ketamine 100 mg/mL Maylab, Slacks Creek, QLD, Australia Dose: 80 mg/kg i.p.
Povidone-Iodine 10% w/v solution Perrigo Australia, Balcatta, WA, Australia RIO00802F Applied topically to the anterior abdomen as surgical skin preparation
Refresh eye ointment (liquid paraffin 42.5% w/w, soft white paraffin 57.3% w/w) Allergan Australia Pty Ltd, Gordon, NSW, Australia Applied to both eyes
Sodium chloride 0.9% w/v Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia 9481P Dose: 900 μL s.c.
Water for injections BP Pfizer Australia, Sydney, NSW, Australia For dilution of drugs
Xylazine 20 mg/mL Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia Dose: 10 mg/kg i.p.

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कैंसर रिसर्च अंक 163 अग्नाशय डक्टल एडेनोकार्सिनोमा (पीडीएसीसी) एडजुवेंट थेरेपी नियोडजुवेंट थेरेपी पैंकोइटेक्टॉमी ऑर्थोटोपिक माउस मॉडल अग्नाशय स्टेलेट कोशिकाएं
अग्नाशय के कैंसर का एक ऑर्थोटोपिक रीसेक्शनल माउस मॉडल
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Pang, T. C. Y., Xu, Z., Mekapogu, A. … More

Pang, T. C. Y., Xu, Z., Mekapogu, A. R., Pothula, S., Becker, T. M., Goldstein, D., Pirola, R. C., Wilson, J. S., Apte, M. V. An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer. J. Vis. Exp. (163), e61726, doi:10.3791/61726 (2020).

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