Summary
जन्मजात डायाफ्रामेटिक हर्निया और भ्रूण श्वासनली ऑक्लसियन के विभिन्न पशु मॉडल नैतिक मुद्दों, लागत, शल्य चिकित्सा कठिनाई, आकार, जीवित रहने की दर और आनुवंशिक उपकरणों की उपलब्धता के बारे में लाभ और नुकसान मौजूद हैं। यह मॉडल फेफड़ों के विकास पर दोनों श्वासनली ऑक्स्यूल और बढ़े हुए चमकदार दबाव के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए एक नया उपकरण प्रदान करता है।
Abstract
भ्रूण श्वासनली ऑक्स्यूलस (TO), एक स्थापित उपचार मोडलेंसी, गंभीर जन्मजात डायाफ्रामेटिक हर्निया (सीडीएच) में भ्रूण फेफड़ों के विकास और अस्तित्व को बढ़ावा देता है। इसके बाद, स्रावित एपिथेलियल तरल पदार्थ को बनाए रखने से चमकदार दबाव बढ़ता है और फेफड़ों के विकास को प्रेरित करता है। सीडीएच और टू के पैथोफिजियोलॉजी को समझने के लिए विभिन्न पशु मॉडलों को परिभाषित किया गया है। सभी के अपने फायदे और नुकसान हैं जैसे तकनीक की कठिनाई, जानवर का आकार, लागत, उच्च मृत्यु दर, और आनुवंशिक उपकरणों की उपलब्धता। इसके साथ ही, मुरीन भ्रूण के एक उपन्यास ट्रांसगर्भाशय मॉडल का वर्णन किया गया है। गर्भवती चूहों को एनेस्थेटाइज्ड किया गया था, और गर्भाशय एक मिडलाइन लेप्रोटॉमी के माध्यम से उजागर हुआ था। चयनित भ्रूणों के श्वासनली को श्वासनली के पीछे रखे एक ट्रांसगर्भाशयी सीवन, एक कैरोटिड धमनी और एक जुगुलर नस के साथ लिगा किया गया था। बांध को बंद कर उसे ठीक करने की अनुमति दे दी गई। भ्रूण को परिध से ठीक पहले एकत्र किया गया था। भ्रूण में फेफड़ों से शरीर के वजन अनुपात नियंत्रण भ्रूण में है कि अधिक से अधिक था । यह मॉडल शोधकर्ताओं को फेफड़ों के विकास पर दोनों के प्रभाव और बढ़े हुए चमकदार दबाव का अध्ययन करने के लिए एक नया उपकरण प्रदान करता है।
Introduction
जन्मजात डायाफ्रामेटिक हर्निया (सीडीएच) 1:2500 गर्भधारण में होता है और इसके परिणामस्वरूप फेफड़े के हाइपोप्लासिया और नवजात फेफड़े के उच्च रक्तचाप1,2,3, 4,5,6होते हैं । भ्रूण श्वासनली ऑक्सीकरण (TO) गंभीर सीडीएच रोगियों में एक स्थापित प्रसव पूर्व चिकित्सा है जिसमें 26-30 वें गर्भावधि सप्ताह में फेटोस्कोपी शामिल है जिसमें एक गुब्बारा कैरिना के ठीक ऊपर रखाजाता है और फिर 32 वें गर्भावधि सप्ताह में हटा दियाजाता है। यह भ्रूण फेफड़ों के विकास को प्रेरित करता है और अस्तित्व में सुधार करता है। जन्मजात हाई एयरवे रुकावट सिंड्रोम फेफड़ों के हाइपरप्लासिया से जुड़ी एक घातक स्थिति है, जिसने सर्जनों को स्रावित एपिथेलियल तरल पदार्थ की अवधारण को बढ़ावा देने के लिए श्वासनली के कृत्रिम ऑक्स्यूलसेशन को करने के लिए प्रेरित किया। इस ऑक्लूज़न ने ल्यूमिनल प्रेशर बढ़ाया और फेफड़ों की वृद्धिकोप्रेरित किया । हालांकि, एपिथेलियल सेल परिपक्वता को सक्षम करने के लिए ऑक्सक्लूजन को उलट दिया जाना चाहिए।
सीडीएच और टू - ओवाइन, खरगोश, चूहा और माउस के विभिन्न पशु मॉडल - सीडीएच और टू के रोगविज्ञान को समझने के लिए विकसित किए गए हैं। सभी के अपने फायदे और नुकसान हैं जैसे तकनीक की कठिनाई, जानवर का आकार, लागत, उच्च मृत्यु दर, और आनुवंशिक उपकरणों की उपलब्धता। हालांकि शल्य चिकित्सा तकनीक ovine मॉडल के लिए इस्तेमाल किया बहुत है कि मनुष्यों में इस्तेमाल किया और उलट जा सकता है के समान है, इस मॉडल की प्रमुख कमियां जानवर की कीमत, लंबी गर्भावधि, और सर्जरी की सीमित संख्या संभव हैं । खरगोश मॉडल में एक छोटा गर्भावधि अवधि है और भेड़ मॉडल की तुलना में कम महंगा है। हालांकि, खरगोश मॉडल अपरिवर्तनीय8,9है । मुरीन मॉडल में सबसे कम लागत है, गर्भावस्था के प्रति भ्रूण की सबसे अधिक संख्या, सबसे अच्छी विशेषता वाले जीनोम, और सेलुलर और आणविक विश्लेषण के लिए व्यापक रूप से उपलब्ध उपकरण हैं। हालांकि, एक प्रमुख खामी करने के लिए की प्रतिवर्तीता की कमी है, करने के प्रभाव की पूरी समझ को रोकने । इसके साथ, एक विधि प्रस्तुत की जाती है जो पहले उल्लिखित मॉडल के सभी फायदों को जोड़ती है और मॉडल के लिए एक आसान, संभावित रूप से रिवर्सिबल और न्यूनतम आक्रामक कृंतक बनाती है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
सभी प्रयोगों की देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए स्वास्थ्य गाइड के राष्ट्रीय संस्थानों के साथ पालन किया है (NIH प्रकाशन संख्या ८००२३, संशोधित १९७८) । इस प्रक्रिया को सिनसिनाटी चिल्ड्रन रिसर्च फाउंडेशन इंस्टीट्यूशनल एनिमल केयर एंड यूज कमेटी द्वारा #2016-0068 के आईएसीयूसी प्रोटोकॉल के साथ मंजूरी दी गई थी ।
1. तैयारी
- उम्र से मेल खाने वाले जंगली प्रकार (डब्ल्यूटीई) C57BL/6 चूहों को मेट करने के लिए, उन्हें 6:00 पी.m पर एक ही पिंजरे में रखें और उन्हें अगले दिन 9:00 ए.m पर अलग करें।
- भ्रूण दिवस 0 (E0) निर्धारित करने के लिए, योनि प्लग को देखें, जिसमें योनि की दीवार से जुड़ा एक सजातीय बाहरी क्षेत्र है और एक आंतरिक क्षेत्र जो रेशेदार है और इसमें कुछ शुक्राणु शामिल हैं जो प्लग सामग्री के तंतुओं के साथ मिश्रित उलझी हुई जनता बनाते हैं।
- संभोग के समय चूहों का वजन रिकॉर्ड करें।
- चल रही गर्भावस्था सुनिश्चित करने के लिए E10 पर चूहों को फिर से तौलें।
- E16.5 (प्रारंभिक कैनलिकुलर चरण) पर सर्जरी करें।
- सर्जरी के दौरान उपयोग किए जाने वाले उपकरणों को स्टरलाइज करें: कैंची, सुई धारक, संदंश, क्लैंप, और सर्जिकल चाकू और हैंडल।
- सर्जरी प्लेटफॉर्म को 24 डिग्री सेल्सियस तक प्री-हीट करें और सर्जरी से पहले गर्म नमकीन (24 डिग्री सेल्सियस) तैयार करें।
- वसूली के लिए एक गर्म वातावरण बनाएं, और जल्दी खिलाने के लिए पिंजरे के अंदर गीला भोजन छोड़ दें।
- संचालित जानवरों के साथ तब तक रहें जब तक कि वे खुद को खिला न सकें।
- सर्जरी के बाद अपने व्यक्तिगत पिंजरों में अकेले संचालित चूहों रखें।
2. एनेस्थीसिया
- प्रक्रिया से पहले गर्भवती बांधों को 0.1 मिलीग्राम/किलो बुप्रेनोरफिन लगाएं।
- संज्ञाहरण के लिए प्रक्रिया के दौरान इंडक्शन के लिए आइसोफ्लुरेन के साँस 5 एमएल/एच और लगातार 2 एमएल/एच का उपयोग करें ।
- गर्भवती चूहों की ठोड़ियों की गतिविधियों की निगरानी करें।
3. लेप्रोटॉमी
- पेट की सतह को शराब और पोविडोन-आयोडीन से साफ करें। पूरे ऑपरेशन में बाँझ स्थितियों को बनाए रखें।
- गर्भवती बांधों की लेप्रोटॉमी के लिए एक ऊर्ध्वाधर चीरा प्रदर्शन करें। सभी परतों को अलग-अलग काट लें।
- हर तरफ गर्भाशय के सींग ों की पहचान करें।
- सर्जरी के लिए उम्मीदवार भ्रूण निर्धारित करें।
नोट: योनि के निकटतम भ्रूण पर काम न करें। - प्रत्येक गर्भाशय सींग में दो भ्रूण पर काम करें यदि प्रत्येक पक्ष (4 अधिकांश समय) पर भ्रूण की एक भी संख्या है, और प्रत्येक गर्भाशय सींग में 1 भ्रूण पर यदि गर्भाशय की एक अजीब संख्या है (3 अधिकांश समय)।
4. श्वासनली ऑक्सीलसियन
- विज़ुअलाइज़ेशन के लिए 2.5x आवर्धन चश्मे का उपयोग करें।
- गर्भाशय के सींग को ट्रांसवर्स फैशन में रखें।
- पिल्ले, ऊपर की ओर का सामना करना पड़, पिल्ले की आंखों का उपयोग कर दो उंगलियों के बीच और भ्रूण की स्थिति के लिए एक गाइड के रूप में पूंछ ले लो ।
- सिर के विस्तार की अनुमति देने के लिए पिल्ला के सिर पर कोमल दबाव लागू करें और इसलिए, गर्दन का दृश्य।
- करने के लिए प्रदर्शन करने के लिए एक atraumatic सुई के साथ एक 6.0 पॉलीप्रोपाइलीन सीवन का प्रयोग करें(चित्रा 1).. प्लेसेंटा को साइड में रखें और सुई के प्रवेश द्वार और निकास बिंदुओं से दूर रखें।
- गर्भाशय के किनारे के माध्यम से सुई को गर्दन के 1/3पूर्ववर्ती भाग के माध्यम से प्लेसेंटा से दूर करें।
- गर्दन के मिडलाइन तक सुई को धीरे-धीरे ले जाएं और इसे पूर्वकाल के हिस्से में निर्देशित करें, फिर श्वासनली के बीच गर्दन से बाहर निकलें और कैरोटिड म्यान और गर्भाशय के विपरीत।
- सीवन गाँठ, झिल्ली और गर्भाशय की दीवार की अखंडता को बनाए रखने के लिए ध्यान रखना, और गांठ के दौरान गर्भनाल को सुरक्षित रखें।
चित्र 1: श्वासनली ऑक्लूजन। (क)गर्दन से गुजरने वाला ट्रांसक्यूरेरिन सीवन। (ख)सीवन के बाद संरचनाओं का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व गाँठ से और उसने पहले से गुजरता है । संक्षिप्त रूप: सी = कैरोटिड धमनी; जम्मू = जुगुलर नस; टी = श्वासनली; ई = घेघा; V = कशेरुका। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
5. पेट की दीवार बंद
- पेट में गर्भाशय के सींग को बदलें।
- बंद होने से पहले पेरिटोनियल गुहा में गर्म बाँझ खारा के 2 एमएल इंजेक्ट करें।
- पेट की दीवार को बंद करने के लिए रनिंग 5/0 पॉलीग्लोलेक्टिन सीवन लगाएं और बिना चलने वाले सिल्क सीवन से त्वचा को बंद करें।
- एनाल्जेसिया के लिए 0.1 मिलीग्राम/किलो बुप्रेनोरफिन इंट्रापेरिटोनली लागू करें, और बांध को गर्म इनक्यूबेटर में रिकवरी की अनुमति दें।
6. फसल
- गर्भवती बांध में संज्ञाहरण लागू करें, और सिजेरियन सेक्शन द्वारा E18.5 पर सभी भ्रूणों की कटाई करें।
- भ्रूण की गतिविधियों को देखकर भ्रूण की व्यवहार्यता की जांच करें।
- इच्छामृत्यु के लिए कम से कम दो अलग-अलग तकनीकों का उपयोग करें: कार्बन डाइऑक्साइड इनस्फलेशन और सर्वाइकल अव्यवस्था।
- पशु चिकित्सा प्रयोगशाला के नियमन के अनुसार निकायों को हटा दें।
- सभी भ्रूणों का वजन करें।
- फेफड़ों को हटाने के लिए थोराकोटॉमी के लिए छाती पर एक ऊर्ध्वाधर चीरा करें।
- भ्रूण के फेफड़ों विच्छेदन, और उन्हें शरीर के वजन अनुपात के लिए कुल फेफड़ों की गणना करने के लिए वजन (LBWR = (बाएं फेफड़ों के वजन + दाएं फेफड़ों का वजन)/शरीर के वजन x100) ।
7. हिसटोलॉजी
- स्नैप-तरल नाइट्रोजन, इष्टतम काटने तापमान यौगिक, और सूखी बर्फ में ऊतकों फ्रीज ।
- क्रायोस्टेट का उपयोग करके 10 माइक्रोन अनुभागों में नमूनों को काटें, और उन्हें पॉली-lysine-लेपित स्लाइड पर माउंट करें।
- रात भर 60 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइड बेक करें, और एक वाइडफील्ड माइक्रोस्कोप का उपयोग करके 10-20x आवर्धन पर छवि अधिग्रहण के लिए उन्हें बढ़ते से पहले हेमटॉक्सीलिन और इओसिन के साथ बेक्ड स्लाइड्स को दाग दें।
8. प्रोटीन और डीएनए विश्लेषण के लिए ऊतक प्रसंस्करण
- स्नैप-विच्छेदित भ्रूण फेफड़ों को फ्रीज करें, और उन्हें रेडियोइम्यूनोप्रिपिटेशन परख बफर के 300 माइक्रोन में समरूप बनाएं। 18,000 × जीपर 5 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रलाइज।
- निकालें और प्रोटीन, डीएनए, और आरएनए10,12की मात्रा ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
इस अध्ययन में 37 भ्रूणों की जांच की गई: 20 (54.1%) के रूप में बनाम 17 (45.9%) नियंत्रण के रूप में। चूंकि ट्रेकिया को टू ग्रुप में 4 भ्रूणों में ऑक्सीक् स नहीं किया जा सकता था, इसलिए उन्हें अध्ययन से बाहर रखा गया । दोनों समूहों में मृत्यु दर में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था: 4 भ्रूण (25%) टू ग्रुप और 2 भ्रूण (12%) नियंत्रण समूह में (पी = 0.334, बाधाओं अनुपात (ओआर) 2.5, 95% विश्वास अंतराल (सीआई) 0.39-16.05) । मतलब शरीर का वजन, फेफड़ों का वजन, और फेफड़ों से शरीर के वजन अनुपात (एलबीडब्ल्यूआर) नियंत्रण समूह(तालिका 1)की तुलना में टू समूह में अधिक थे। एलबीडब्ल्यूआर (पी = 0.006) में टू और कंट्रोल ग्रुप्स के बीच काफी अंतर था।
एलबीडब्ल्यूआर(चित्रा 2)में अंतर के कारण का निर्धारण करने के लिए डीएनए, आरएनए और प्रोटीन की मात्रा निर्धारित की गई थी। फेफड़ों के डीएनए की मात्रा और डीएनए/प्रोटीन अनुपात टीओ समूह में अधिक थे, फेफड़ों के आरएनए में कोई अंतर नहीं देखा गया था, और नियंत्रण समूह की तुलना में टीओ समूह में प्रोटीन की मात्रा कम थी, जैसा कि पहले खरगोश में मॉडल के लिए मनाया गया था जिसमें एपिथेलियल हाइपरप्लासिया12नोट किया गया था । टू ग्रुप में एयरवेज के व्यास ने भी बढ़ोतरी का प्रदर्शन किया ।
E18.5 फेफड़ों के हिस्टोलॉजिकल विश्लेषणों ने नियंत्रण नमूनों में एपिथेलियल सतहों के बीच हवाई क्षेत्रों और गाढ़ा इंटरस्टिटियम के साथ फेफड़ों के विकास के देर से कैनेलिकुलर/प्रारंभिक सैकुलर चरण को दिखाया जबकि टो समूह में फेफड़ों ने नाभिक(चित्र 2)की व्यक्तिपरक रूप से अधिक संख्या के साथ केंद्रीय और असंतोषजनक हवाई क्षेत्रों को फैलाया था । यह बढ़ी हुई सेलुलरिटी फेफड़ों के डीएनए की मात्रा में उल्लेखनीय वृद्धि के अनुरूप है।
चित्रा 2:समूहों की विशेषताएं। (ए)सामान्यीकृत फेफड़ों से भ्रूण वजन अनुपात,(बी)फेफड़ों के डीएनए से प्रोटीन अनुपात,(C)फेफड़ों के डीएनए की मात्रा फेफड़ों के वजन को सामान्य,(D)फेफड़ों के वजन के लिए सामान्यीकृत फेफड़ों की आरएनए सामग्री, औरफेफड़ोंके वजन के लिए सामान्य रूप से फेफड़ों की प्रोटीन सामग्री । (एफ)C57BL/6 E18.5 फेफड़ों के प्रतिनिधि हेमटॉक्सीलिन और eosin छवियों के बिना (स्केल बार = 50 माइक्रोन) और(जी)भ्रूण ट्रांसक्यूरेंटाइन श्वास नली ऑक्लूजन के साथ वायुमार्ग के संचालन और डिस्टल हवाई क्षेत्रों के आकार में वृद्धि के हाइपरप्लासिया दिखा; स्केल बार = 100 माइक्रोन। नियंत्रण की तुलना (एन = 9) और श्वासनली ऑक्लसेशन (टीओ) (एन = 6) छात्र के टी-टेस्टका उपयोग करके किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
| तालिका 1: समूहों के मॉर्फोमेट्रिकल परिणाम | |||
| तक | नियंत्रण | पी | |
| भ्रूण वजन (मिलीग्राम) | 1100.52 ± 229.38 | 1087.15 ± 172.32 | 0.896 |
| फेफड़ों का वजन (मिलीग्राम) | 28.41 ± 5.87 | 23.38 ± 3.09 | 0.043 |
| एलबीडब्ल्यूआर | 0.0259 ± 0.0021 | 0.0217 ± 0.0028 | 0.006* |
| मानक विचलन के साधन के रूप में व्यक्त मूल्य ±। संक्षिप्त रूप: LBWR = फेफड़े भ्रूण शरीर वजन अनुपात के लिए; = श्वासनली ऑक्सीलसेशन के लिए। | |||
| * 95% विश्वास अंतराल 0.0222-0.0249। छात्र के टी-टेस्ट की तुलना में समूह । | |||
तालिका 1: समूहों के मॉर्फोमेट्रिकल परिणाम
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
यह विधि चूहों में भ्रूण श्वासनली ऑक्सक्यूशन की एक शल्य प्रक्रिया और फेफड़ों के विकास पर इसके प्रभाव का वर्णन करती है। प्रोटोकॉल में कुछ महत्वपूर्ण कदम हैं जिन्हें सफल करने के लिए सावधानीपूर्वक किया जाना चाहिए। जिस मंच पर सर्जरी होती है और पेरिटोनियल गुहा में पेश किए गए खारे की गर्मी गर्भावस्था की प्रगति के लिए महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, गर्दन के जोखिम को सुनिश्चित करने के लिए पिल्ले के सिर पर थोड़ा सा दबाव लगाना पड़ता है।
एक 6.0 पॉलीप्रोपाइलीन सीवन ही सीवन है जिसका उपयोग इस तकनीक के लिए किया जा सकता है। 6.0 से बड़े टांके की सुई मोटी होती है और गर्दन में श्वासनली के आसपास की संरचनाओं को नष्ट कर देती है, जिसके परिणामस्वरूप भ्रूण का नुकसान होता है। पतले टांके की सुई बहुत कम हैं और एक E16.5 पिल्ला (प्रारंभिक कैनलिकुलर चरण) की गर्दन के माध्यम से पारित नहीं कर सकते हैं। इसके अलावा, एक काटने सुई उचित नहीं है क्योंकि यह आसन्न संरचनाओं को नष्ट कर सकता है।
इस मॉडल की कुछ सीमाएं हैं। सबसे पहले, चूहों और मनुष्यों के बीच फेफड़ों के विकास के चरणों और गर्भावधि अवधि के संबंध में अंतर है। दूसरा, चूहों में सीडीएच विकसित करना मुश्किल है और अंत में, हेमोडायनामिक अध्ययन माउस मॉडल में आचरण करना मुश्किल है। हालांकि, इस अध्ययन में कम सीखने की अवस्था के परिणामस्वरूप भ्रूण मृत्यु दर में नाटकीय कमी आई। जैसा कि पहले कहा गया है, जानवरों की लागत के साथ-साथ उनके रखरखाव, गर्भावस्था के प्रति भ्रूण की संख्या, गर्भावस्था अवधि की लंबाई, और आनुवंशिक उपकरणों की सीमित उपलब्धता खरगोश और भेड़ मॉडल में मुख्य सीमित कारक हैं ।
इस माउस मॉडल का पहला लाभ यह है कि यह TO के लिए उन्माद की आवश्यकता को समाप्त करता है औरगर्भाशय 11में उलट जाने की क्षमता रखता है, जो इस अध्ययन में देखी गई कम मृत्यु दर के लिए खाता है। दूसरा, जानवरों की लागत में कमी और उनके रखरखाव और एक छोटी गर्भावस्था अवधि प्रयोगों की एक बड़ी रेंज की सुविधा । तीसरा, हाइपोथर्मिया और संज्ञाहरण जैसी जटिलताओं के गैर-तकनीकी कारणों को सर्जरी की छोटी अवधि से रोका जाता है। अंत में, चूहों में उपलब्ध आनुवंशिक उपकरणों की विस्तृत विविधता सीडीएच के रोगविज्ञान को समझने के लिए अधिक अध्ययन करने के लिए नेतृत्व करेंगे। सीडीएच के नाइट्रोफेन और नॉकआउट मॉडल में भ्रूण के जीवित जन्म के साथ ट्रांसक्यूराइन सीवन को हटाना इस तकनीक के भविष्य के अनुप्रयोग होंगे।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस शोध को सार्वजनिक, वाणिज्यिक, या गैर-लाभकारी क्षेत्रों में वित्तपोषण एजेंसियों से कोई विशिष्ट अनुदान प्राप्त नहीं हुआ । सभी लेखकों ने अध्ययन, अधिग्रहण, विश्लेषण और डेटा की व्याख्या, लेख का मसौदा तैयार करने और इसे महत्वपूर्ण बौद्धिक सामग्री और संस्करण के अंतिम अनुमोदन के लिए प्रस्तुत करने के लिए संशोधित करने के लिए अवधारणा और डिजाइन में पर्याप्त योगदान दिया है। लेखकों का शुक्रिया अदा कर सकते है शल्य चिकित्सा तकनीक की कलाकृति के उत्पादन पर अपनी तरह के प्रयासों के लिए Sabuncuoğlu ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Buprenorphine | Par Pharmaceutical | NDC 42023-179-05 | For regional anesthesia |
| Isoflurane | Halocarbon Life Sciences | NDC 66794-017-25 | For general anesthesia |
| Magnification glasses | USA Medical-Surgical | SLR-250LBLK | At least 2.5x |
| Nikon 90i microscope | Nikon | 3417 | Motorized Fluorescence |
| Nucleospin Tissue Kit | Macherey-Nagel, Düren, Germany | 740952.5 | DNA isolation |
| Pierce BCA Protein Assay Kit | Thermo Fisher, IL, USA | 23225 | Protein quantification |
| Polyglactin suture | Ethicon | VCP451H | 4-0, 24 mm, cutting |
| Polylysine slides | VWR | 48382-117 | Microscope adhesion slides |
| Polypropylene suture | Ethicon | Y432H | 6-0, 13 mm 1/2c Taperpoint |
| RIPA buffer | Sigma-Aldrich, Missouri, USA | R0278-50ml | Protein isolation |
| Silk suture | Ethicon | VCP682G | 4-0, 24 mm, cutting |
| Trizol | Invitrogen | 15596026 | RNA isolation |
References
- Wright, N. J. Global PaedSurg Research Collaboration. Management and outcomes of gastrointestinal congenital anomalies in low, middle and high income countries: protocol for a multicentre, international, prospective cohort study. BMJ Open. 9, 030452 (2019).
- Aydin, E. Current approach for prenatally diagnosed congenital anomalies that requires surgery. Turkish Clinics Journal of Gynecology and Obstetrics. 27, 193-199 (2016).
- Nolan, H., et al. Hemorrhage after on-ECMO repair of CDH is equivalent for muscle flap and prosthetic patch. Journal of Pediatric Surgery. 54 (10), 2044-2047 (2019).
- Aydin, E., et al. Congenital diaphragmatic hernia: the good, the bad, and the tough. Pediatric Surgery International. 35 (3), 303-313 (2019).
- Aydın, E., Özler, O., Burns, P., Lim, F. Y., Peiró, J. L. Left congenital diaphragmatic hernia-associated musculoskeletal deformities. Pediatric Surgery International. 35 (11), 1265-1270 (2019).
- Aydın, E., et al. When primary repair is not enough: a comparison of synthetic patch and muscle flap closure in congenital diaphragmatic hernia. Pediatric Surgery International. 36 (4), 485-491 (2020).
- Wilson, M., Difiore, J. W., Peters, C. A. Experimental fetal tracheal ligation prevents the pulmonary hypoplasia associated with fetal nephrectomy: Possible application for congenital diaphragmatic hernia. Journal of Pediatric Surgery. 28 (11), 1433-1440 (1993).
- Mudri, M., et al. The effects of tracheal occlusion on Wnt signaling in a rabbit model of congenital diaphragmatic hernia. Journal of Pediatric Surgery. 54 (5), 937-944 (2019).
- Khan, P. A., Cloutier, M., Piedboeuf, B. Tracheal occlusion: a review of obstructing fetal lungs to make them grow and mature. American Journal of Medical Genetics. Part C, Seminars in Medical Genetics. 145 (2), 125-138 (2007).
- Chomczynski, P. A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples. Biotechniques. 15 (3), 532-537 (1993).
- Beurskens, N., Klaassens, M., Rottier, R., De Klein, A., Tibboel, D. Linking animal models to human congenital diaphragmatic hernia. Birth Defects Research Part A: Clinical and Molecular Teratology. 79 (8), 565-572 (2007).
- Varisco, B. M., et al. Excessive reversal of epidermal growth factor receptor and ephrin signaling following tracheal occlusion in rabbit model of congenital diaphragmatic hernia. Molecular Medicine. 22, 398-411 (2016).
