Summary
В настоящем документе приводится подробное описание того, как построить животное модель анхепатической фазы (ишемия печени) у крыс, чтобы облегчить фундаментальные исследования ишемии-реперфузии травмы после трансплантации печени.
Abstract
Ортопедическая трансплантация печени (OLT) у крыс является проверенной и проверенной моделью животных, используемой для предоперационных, интраоперационных и послеоперационных исследований, включая ишемию-реперфузию (ИРИ) внегепатических органов. Эта модель требует многочисленных экспериментов и устройств. Продолжительность анхепатической фазы тесно связана со временем развития ИРИ после трансплантации. В этом эксперименте мы использовали гемодинамические изменения, чтобы вызвать экстрагепатические повреждения органов у крыс и определили максимальное время толерантности. Время до самой тяжелой травмы органа варьировалось для различных органов. Этот метод можно легко воспроизвести, а также может быть использован для изучения ИРИ внегепатических органов после трансплантации печени.
Introduction
Ишемия-реперфузия травмы (ИРИ) является распространенным осложнением после трансплантации печени. Печеночная ИРИ является патологическим процессом, включающим ишемию опосредованное повреждение клеток и ненормальное ухудшение реперфузии печени. Печеночная ИРИ и местный врожденный иммунный ответ можно разделить на горячие и холодные ИРИ, в соответствии с различиями в клиническойсреде 1. Горячая ИРИ вызвана травмой стволовых клеток, как правило, в результате трансплантации печени, шока и травмы2. Холодный ИРИ является осложнением трансплантации печени, вызванной эндотелиальных клеток и периферической циркуляции3. Клинические отчеты показали, что печеночная ИРИ связана с 10% ранних отказов органов и может увеличить заболеваемость острым и хроническимотторжением 4,5. Кроме того, печеночная ИРИ может также вызвать синдромы множественной дисфункции органов или синдром системной воспалительной реакции, с высокойсмертностью 6. Пациенты с экстрагепатической участия органа, как правило, остаются дольше в больнице, тратить больше денег, и хуже прогноз7. Развитие осложнений тесно связано с продолжительностью анхепатической фазы трансплантации печени8.
Ортотопическая трансплантация печени (OLT) у крыс была впервые зарегистрирована американским профессором Ли в 1973 году. Экспериментальная операция смоделировала этапы клинической трансплантации печени и анатомоза кровеносных сосудов и общего желчного протока (КБР) с использованием шовного метода. Процедура трудна и занимает много времени с низким уровнем успеха9. В 1979 году Kamada и др. сделал значительное улучшение OLT у крыс, творчески используя "двух-манжеты метод" для анатомоза портала вены для управления анхепатической фазы в течение 26 минут10. В том же году Циммерманн предложил «метод единого желчного стента». На основе работы Ли Циммерманн использовал полиэтиленовые трубки для непосредственной анатомозы КБР донора и реципиента, упростил реконструкцию КБР и сохранил функцию сфинктера, и этот метод стал стандартом для желчной реконструкцииOLT-моделей 11. В 1980 году Miyata et al. предложили «метод с тремя манжетами», в котором порталная вена (PV), супрагепатическая кава вены (SVC) и внутрицепатическая кава вены (IVC) были анастомозированы методом манжеты. Тем не менее, существует риск искажения канюлы с помощью этого метода, который может привести к обструкции нижней вены кавы рефлюкс12. В 1983 году «метод двух наручников» был предложен с использованием метода манжеты для анатомоза фотоэлектрических и IVC, но принятие метода шва для SVC13. Этот метод был принят учеными во всем мире для создания OLT-моделей. С тех пор, манжеты анатомоз шаги были улучшены, чтобы сократить анхепатической фазы и улучшить выживаемость крыс14. Аналогичным образом, улучшенные методы используются в клинической практике, чтобы сократить анхепатическойфазы 15. Однако фундаментальные исследования ИРИ после трансплантации печени показали, что выживаемость обратно связана со степенью повреждения внегепатических органов. Поэтому необходимы дальнейшие исследования, и для имитации ИРИ после трансплантации печени необходима простая и воспроизводимая модель животных.
Основываясь на определении анхепатической фазы, мы смоделировали гемодинамические изменения в трансплантации печени, в результате чего ИРИ экстрагепатических органов у крыс. В этом случае мы предоставляем подробное описание того, как построить животное модель анхепатической фазы (ишемия печени) у крыс, чтобы облегчить фундаментальные исследования иРИ после трансплантации печени.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Комитет по этике животных одобрил эксперимент Гуанси-Медицинского университета (No20190920). Все животные были поставлены Центром экспериментов на животных Гуанси медицинского университета. Мы использовали SPF мужчин Sprague Доули крыс (200-250 г, 10-12 недель), хранится под комнатной температурой 25 ± 2 градусов по Цельсию и влажность 50 ± 10%. Кормление было прекращено за 24 часа до операции; однако вода была обеспечена.
ПРИМЕЧАНИЕ: Один оператор может выполнять все операции без микрохирургии или хирургического микроскопа.
1. Операция
- После взвешивания, анестезировать крыс с изофлюран (5%) с помощью аппарата анестезии животных.
- Через 1-2 минуты аккуратно зажимите пинцетом цыоцы крысы. Если крыса не реагирует после щипать, она вступила в состояние анестезии. Используйте ветеринарную мазь на глазах, чтобы предотвратить сухость. Используйте лампы для обогрева животных, чтобы поддерживать температуру тела крыс на уровне 37-38 градусов по Цельсию.
- После дезинфекции брюшной полости (раствор йода пувидона) закрепните крысу на столе для вскрытия животных. Сделайте средний разрез на 3 см ниже процесса xiphoid с помощью типсов и ножниц.
- Откройте брюшную полость, разоблачите печень с помощью ретрактора и мобилизуйте гепатогастрическую связку. Используйте ватные тампоны, чтобы аккуратно перевернуть среднюю долей печени и повернуть ее вверх, чтобы разоблачить порта hepatis. Определите КБР,. и HA.
- Нажмите тонкой кишки к левой нижней брюшной полости с помощью ватных тампонов, покрыть его влажной марлей, и переместить внутрицепочечных кавы вену правой почечной вены.
- Изолировать портальной вены, печеночной артерии, и нижней ены кавы выше правой почечной вены с внутриглазной линзы и миппы отмечены 3-0 шелковой нитью, каждый со скольжением узла.
- Разрежьте кожу левой и правой нижних конечностей и выставить бедренную вену с помощью офтальмологических типсов. Медленно введать низкий молекулярный вес гепарина 625 МЕ/кг через бедренную вену, чтобы гепаринизировать все тело.
- Ligate вены портала, печеночным артерии, и нижней вены кавы выше правой почечной вены с No 3-0 швов, продолжительностью 45 минут(рисунок 1). Замените тонкий кишечник в брюшной полости и накройте его марлей. Уменьшить ингаляционную анестезию в эти периоды.
- Через 45 минут отпустите порталную вену, печеночную артерию и нижняя вена кавы выше правой почечной вены.
- Шов мышцы и кожи, слой за слоем, и прекратить ингаляционную анестезию. Обеспечить послеоперационную анальгезию с использованием подкожного морфина 5 мг/кг каждые 4 часа.
- Наблюдайте за крысой до тех пор, пока она не проснется и не покормите ее при температуре 25 ± 2 градуса по Цельсию и влажности 50 ± 10%. Необходимы лампы для обогрева животных.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Толерантность крыс к ишемии печени
В этой модели животных, сайты, на которых кровеносные сосуды были лигатированы во время работы показаны на рисунке 1. Крысы были случайным образом разделены на 5 групп для ишемии в течение 15 минут (I15 группы), 30 минут (I30 группы), 45 минут (I45 группы), 60 минут (I60), и фиктивной группы, с 10 крыс в каждой группе. Выживаемость каждой группы наблюдалась через 14 дней после операции. Все крысы выжили в группе I15, группе I30 и фиктивной группе. Восемь выжили в течение 14 дней в группе I45, и только 2 выжили в группе I60. Эти результаты показывают, что крысы могут терпеть анхепатической фазы в течение максимум 45 минут(таблица 1).
Влияние сосудистой перевязки на кровообращение у крыс
В ходе эксперимента биосистемы зафиксировали пульс и артериальное давление (внутренняя инотубация внутренней сонной артерии) до и после анхепатической фазы. Мы обнаружили, что пульс и среднее артериальное давление (MAP) крыс резко изменилась после сосудистой перевязки(рисунок 2).
Воздействие на внегепатические органы
Гепатическое скопление ишемии и отеков были обнаружены в кишечнике, желудочных варикозных и splenomegaly после перевязки. Восемьдесят крыс были случайным образом разделены на 8 групп для ишемии в течение 45 минут (T0), reperfusion в течение 6 часов (T6), 12 часов (T12), 24 часов (T24), 48 часов (T48), 72 часов (T72), 7 дней (D7), и 14 дней (D14). После того, как крысы были принесены в жертву, ткани из почек, поджелудочной железы, тонкой кишки, сердца и легких были взяты и окрашены гематоксилин-эозин (HE). Весь процесс окрашивания состоит из пяти этапов: деваксирование, окрашивание, обезвоживание, прозрачность и уплотнение. За исключением сердца, патологические баллы были назначены,как описано ранее 16,17,18,19.
Время до максимальной травмы внегепатических органов варьировалось; это было 6-24 часов после операции на поджелудочной железе и 24-48 часов для легких. Наиболее серьезно пострадали желудочно-кишечный тракт и почки после 45 минут ишемии. Через 24 часа после операции не было явных нарушений слизистой оболочки кишечника, и через 48 часов почки восстановились. После реперфузии, местный некроз клеток миокарда, фрагментация клеток и растворение, воспалительное проникновение клеток, а также местное вазодилатация и заторы были обнаружены в сердце через 24-48 часов послеоперации (рисунок 3).
Легкие
Инфильтрация нейтрофила была обнаружена в легочной ткани после ишемии. С увеличением времени reperfusion (T0,T6), слизь бронхиального люмена также можно было увидеть в легочной ткани. Воспалительное проникновение клеток произошло в альвеолярной стенке, которая сильно утолщалась. Альвеолярный коллапс и исчезновение альвеолярной полости также могут быть найдены в некоторых тканях. В альвеолярных стенах не было значительных альвеолярных отеков или капиллярных заторов. Они были наиболее тяжело ранены через 24-48 часов после операции, при этом некоторые крысы были показаны одышка и другие проявления 7 дней после операции. Он окрашивания результаты предложили лимфаденит в дыхательных путей, мягкий воспалительный инфильтрации клеток в альвеолярной стенке, иместное кровоизлияние ( Рисунок 3A, Рисунок 4).
Почек
Небольшое количество эозинофильных веществ было обнаружено в почечных трубоулях после ишемии на фазе T0, но не было замечено воспалительного инфильтрации клеток и других отклонений. Тем не менее, опухшие почечные трубчатые эпителиальные клетки, пористые или ваку изолированные цитоплазмы, некротические клетки в нескольких люменов, кариопихноз, фрагментация, потеря границы кисти, и трубчатой кислотной группы во многих люменов были замечены 6-48 часов после операции. Кроме того, небольшое количество почечных трубчатых эпителиальных клеток были замечены с гранулированной дегенерацией, а пористые и слегка окрашенные цитоплазмы видели 48 часов после операции. Значительная интерстициальная телангиэктазия, но не было обнаружено тяжелой воспалительной инфильтрацииклеток (рисунок 3B, рисунок 5).
Тонкий кишечник
Тонкий кишечник был наиболее серьезно ранен после ишемии (T0). Была тяжелая инфильтрация воспалительных клеток, эпителий слизистой оболочки и телангиэктазия. С увеличением времени reperfusion, травма зажила быстро. Слизистый эпителий был полностью восстановлен через 24 часа после операции, и было замечено только легкое воспалительноепроникновение клеток (рисунок 3C, рисунок 6).
Поджелудочной железы
Тяжелые воспалительные клетки проникли вокруг ткани поджелудочной железы на фазе T0. Тем не менее, поражения поджелудочной железы не были однородными. Шесть из 10 имели некроз поджелудочной железы и воспалительное проникновение через 24 часа после операции, а остальные 4 не имели явных отклонений. Через 24 часа после операции, помимо инфильтрации воспалительных клеток, появился отек, расширение межлобулярного пространства, кровоизлияние, некроз небольшого количества ацинарных клеток, неясная демаркация клеток, ядерная фрагментация и растворение, а также легкая инфильтрация воспалительных клеток в поле зрения. Затем воспаление исчезло медленно(рисунок 3D, рисунок 7 ).
Сердце
К фазе T0, сердечные миоциты были организованы регулярно с четкой демаркации, нормальной морфологии клеток, местных интерстициальных заторов, и мягкий коричнево-желтый пигмент осаждения. Кроме того, воспалительное проникновение клеток наблюдалось в межстициальных и перивазкулярных областях миокарда. С увеличением времени реперфузии, местный некроз клеток миокарда, фрагментация клеток и растворение, воспалительное проникновение клеток, местное вазодилатация и заторы были обнаружены в тканях через 24-48 часов после операции. В некоторых образцах были замечены вентрикулярная дилатация, пористая структура, увеличение интерстиция миокарда и легкая инфильтрация воспалительных клеток. Через 48 часов местные кардиомиоциты исчезли и были заменены небольшим количеством волокнистой соединительной ткани с легким воспалительным проникновением клеток. К тому времени, никаких других очевидных аномалий не было замечено (Рисунок 8).
Влияние гемодинамических изменений на печень, почки, поджелудочную железу и сердечные серологические индексы
Сыворотка была собрана, и уровни аланина аминотрансферазы (ALT), аспарта аминотрансферазы (АСТ), креатинина и амилазы были обнаружены автоматическим биохимическим анализатором. Все показатели достигли максимума в 24-48 часов, в отличие от патологических изменений. Хотя эти уровни были нормальными 48 часов после операции, патологические повреждения продолжались (Рисунок 9).
Рисунок 1: Расположение лигатуры: PV, HA, IVC верхней части правой почечной вены. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой фигуры.
| Группы | N | выживаемость на уровне 24 ч, n (%) | выживаемость на уровне 7 д, n (%) | выживаемость на уровне 14 d, n (%) |
| Шам | 10 | 10 | — | — |
| Я 15 мин | 10 | 10/10 | 10 (100) | 10 (100) |
| Я 30 мин | 10 | 10/10 | 10 (100) | 10 (100) |
| Я 45 мин | 10 | 8/10 | 8/10 (80) | 8/10 (80) |
| Я 60 мин | 10 | 2/10 | 2/10 (20) | 2/10 (20) |
Таблица 1: Толерантность крыс к ишемии печени
Рисунок 2: Гемодинамические изменения в I45 мин группы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 3: Результаты органной гистологии. (A) легкое; (B)почки; (C)кишечник; (D)поджелудочная железа; Статистически значимый по сравнению с фиктивнойгруппой (P lt; 0.05). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 4: Патологические изменения в легких после операции. (A)Шам группы; (B)Группа Ишемии (группа T0); (C)Реперфузия 6 часов (T6) группа; (D)Реперфузия 12 часов (T12) группы; (E)Reperfusion 12 часов (T12) группа; (F)Реперфузия 24 часа (T24) группа; (G)Реперфузия 48 часов (T48) группа; (H) Reperfusion 7 дней (D7) группы; (I)Группа reperfusion 14 дней (D14) (шкала 50 мкм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 5: Патологические изменения в почках после операции. (A)Группа Шам; (B)Группа Ишемии (группа T0); (C)Реперфузия 6 часов (T6) группа; (D)Реперфузия 12 часов (T12) группы; (E)Reperfusion 12 часов (T12) группа; (F)Реперфузия 24 часа (T24) группа; (G)Реперфузия 48 часов (T48) группа; (H) Reperfusion 7 дней (D7) группы; (I)Группа reperfusion 14 дней (D14) (шкала 50 мкм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 6: Патологические изменения в тонкой кишке после операции. ( A) Sham группы; (B)Группа Ишемии (группа T0); (C)Реперфузия 6 часов (T6) группа; (D)Реперфузия 12 часов (T12) группы; (E)Reperfusion 12 часов (T12) группа; (F)Реперфузия 24 часа (T24) группа; (G)Реперфузия 48 часов (T48) группа; (H) Reperfusion 7 дней (D7) группы; (I)Группа reperfusion 14 дней (D14) (шкала 50 мкм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 7: Патологические изменения в поджелудочной железе после операции. ( A) Sham группы; (B)Группа Ишемии (группа T0); (C)Реперфузия 6 часов (T6) группа; (D)Реперфузия 12 часов (T12) группы; (E)Reperfusion 12 часов (T12) группа; (F)Реперфузия 24 часа (T24) группа; (G)Реперфузия 48 часов (T48) группа; (H) Reperfusion 7 дней (D7) группы; (I)Реперфузия 14 дней (D14)группы (A и D шкала 50 мкм; ШКАЛА BCEFGHI 50 мкм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 8: Патологические изменения в сердце после операции. (A)Шам группы; (B)Группа Ишемии (группа T0); (C)Реперфузия 6 часов (T6) группа; (D)Реперфузия 12 часов (T12) группы; (E)Reperfusion 12 часов (T12) группа; (F)Реперфузия 24 часа (T24) группа; (G)Реперфузия 48 часов (T48) группа; (H) Reperfusion 7 дней (D7) группы; (I)Реперфузия 14 дней (D14)группы (шкала 50 мкм; Шкала BCDEFGHI 100 мкм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 9: Изменения ALT, АСТ, креатинина (Cr) и амилаз в каждой группе; «Статистически значимый по сравнению с фиктивнойгруппой (Пзлт;0,05). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
OLT у крыс является идеальной моделью для изучения сохранения органов в области трансплантации печени, ИРИ, отторжения трансплантата, иммунной толерантности, патологии трансплантации и фармакологии, гомотрансплантации и ксенотрансплантации. В настоящее время он широко используется в экспериментальных исследованиях трансплантации печени.
В ходе экспериментальных исследований мы впервые ввели интраперитонеаленную анестезию пентобарбитала натрия и обнаружили, что это привело к высокой послеоперационной смертности и короткой терпимости к гемодинамическим изменениям. Таким образом, мы использовали ингаляционную анестезию в последующих испытаниях для быстрого начала действия и быстрого исключения характеристик in vitro. Переход на ингаляционную анестезию значительно улучшил время толерантности и послеоперационное выживание крыс. Исследователи должны обратить внимание на дыхание и частота сердечных сокращений крысы, чтобы предотвратить передозировку анестезии. Биосистемы могут быть использованы для мониторинга сердечного ритма и артериального давления. Мы также наблюдали влияние толщины хирургического шва на перевязку кровеносных сосудов. Хотя линии меньше, чем 3-0 может прекрасно ligate кровеносных сосудов, они были трудно ослабить и может привести к разрыву кровеносных сосудов. Напротив, линии размером более 3-0 могут привести к неполной сосудистой окклюзии, что предотвращает гемодинамические изменения. Эти материальные проблемы будут усовершенствован в будущих экспериментах. В нашем протоколе есть некоторые ограничения. Тепловые лампы не рекомендуются для поддержания температуры из-за их потенциала для перегрева; альтернативные предложения по нагреваниям, такие как рециркуляция водных одеял, рекомендуются в интересах животного.
Есть много причин для дистальной травмы органа после OLT. Во-первых, травма может быть вызвана холодной консервации донорской печени в пробирке20. Во-вторых, ИРИ может произойти и вызвать повреждение тканей, когда кровоснабжение возвращается в ткани (реперфузия) после длительного периода ишемии. Ишемия является основной причиной травмы, и reperfusion это процесс, где происходит травма. После одновременного блокирования IVC и PV во время анхепатической фазы, большое количество застоя крови произошло в нижних конечностях и внутренних органах. Эффективный объем циркулирующих (ECV) резко снизился, а МАП уменьшилась. Однако, из-за стимуляции блуждающего нерва, не было компенсационного увеличения сердечного ритма у крыс. В этом эксперименте мы обнаружили, что крысы претерпели значительные гемодинамические изменения в течение 5 минут после перевязки и высвобождения сосудов, которые соответствовали определению синдрома ишемии-реперфузии.
Ишемия произошла в некоторых тканях вне печени. После анхепатической фазы ЭКВ увеличился. MAP вернулся к нормальной жизни после IVC и. были разблокированы, с травмами, происходящими за пределами печени после reperfusion. Кроме того, ИРИ донорской печени производила воспалительные посредники (ТНФ-α, интерлеукин-1, интерлеукин-6, интерлеукин-8), которые атаковали дистальныеорганы 21. В этом эксперименте была смоделирована гемодинамика во время анхепатической фазы, что вызвало пассивную перегрузку IVC и почек, повреждение желудочно-кишечного барьера, бактериальную транслокацию, ишемию органов (например, легкие, сердце, поджелудочную железу, почки и т.д.), где находится SVC, и ИРИ к внегепатической органам.
Патологические результаты показали, что пик ишемической травмы и время восстановления были разными в каждом органе. Хотя холодное хранение и повреждение причиненное иммунными факторами не смогли быть смоделированы в этом изучении, anhepatic IRI можно реплицировать и сравнено с другими животными моделями для того чтобы исследовать extrahepatic ушиб органа. Нашу модель и OLT модель можно сравнить и наблюдать, чтобы обеспечить основу для исследования экстрагепатической травмы органов. Кроме того, наша модель похожа на некоторые клинические операции на печени, такие как холангиокарцинома Hilar. Hilar cholangiocarcinoma является злокачественной опухолью, которая часто вторгается в. или IVC и часто требует. зажима во время операции22. Проведена реконструкция печеночным порталом; когда опухоль вторгается в IVC, интраоперационное зажим IVC также требуется, и в результате гемодинамические изменения согласуются с нашей моделью.
Подводя итог, можно сказать, что наша модель у крыс проста в использовании и проста, без микрохирургии, и обеспечивает основу для фундаментальных исследований ИРИ экстрагепатических органов после печеночных ишемий.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы этой рукописи не имеют конфликта интересов, чтобы раскрыть.
Acknowledgments
Мы хотели бы отметить полезные предложения д-ра Вэнь-тао Ли и д-ра Цзи-хуа Ву из Второй аффилированной больницы Гуанси-Медицинского университета. Авторы хотели бы поблагодарить наших товарищей по команде за полезные комментарии и дискуссии. Авторы также хотели бы поблагодарить анонимных рецензентов и редакторов JoVE за их комментарии. Особая благодарность должна идти к родителям доктора Yuan для их непрерывной поддержки и ободрения. Работа была поддержана Фондом естественных наук Нинбо (2014A610248).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4% paraformaldehyde solution | Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd | P804536 | |
| air drying oven | Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd. | BPG | |
| Alanine aminotransferase (ALT)Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K235-S | |
| ammonia | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10002118 | |
| amylase Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K005-M | |
| anhydrous ethanol | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 100092183 | |
| Animal anesthesia machine | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | R640 | |
| aspartate aminotransferase (AST)kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| automatic biochemical analyzer. | SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosystems (when nessary) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | BL-420F | |
| Centrifuge | Baiyang Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | |
| cover glass | Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd | 10212432C | |
| creatinine Kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03076 | |
| dewatering machine | Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd | Donatello Series 2 | |
| embedding machine | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL1 | |
| frozen machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| hematoxylin-eosin dye solution | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G1005 | |
| high-efficiency paraffin wax | Shanghai huayong paraffin wax co., Ltd | Q/YSQN40-91 | |
| hydrochloric acid | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10011018 | |
| intraocular lens (IOL)forceps | Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd. | JTZRN | |
| Isoflurane | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | — | |
| micro Scissors(when nessary) | Shanghai Surgical Instrument Factory | WA1010 | |
| needle holders | Shanghai Surgical Instrument Factory | J32010 | |
| neutral gum | Shanghai Huashen Healing Equipment Co.,Ltd. | — | |
| normal optical microscope | Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd | Nikon Eclipse CI | |
| ophthalmic forceps | Shanghai Surgical Instrument Factory | J3CO30 | straight |
| ophthalmic forceps | Shanghai Surgical Instrument Factory | JD1060 | bending |
| ophthalmic Scissors | Shanghai Surgical Instrument Factory | J1E0 | |
| pathological slicer | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | |
| pipettes | Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd. | 7010101008 | |
| retractors | Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd. | JNT-KXQ | |
| scanner | Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd | Pannoramic 250 | |
| slide | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G6004 | |
| xylene | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 1330-20-7 |
References
- Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms. Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).
- Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q. Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy. World Journal of Gastroenterology. 21 (45), 12822-12834 (2015).
- Liu, Y., et al. Activation of YAP attenuates hepatic damage and fibrosis in liver ischemia-reperfusion injury. Journal of Hepatology. 71 (4), 719-730 (2019).
- Hirao, H., Dery, K. J., Kageyama, S., Nakamura, K., Kupiec-Weglinski, J. W. Heme Oxygenase-1 in liver transplant ischemia-reperfusion injury: From bench-to-bedside. Free Radical Biology and Medicine. 157, 75-82 (2020).
- Motiño, O., et al. Protective role of hepatocyte cyclooxygenase-2 expression against liver ischemia-reperfusion injury in mice. Hepatology. 70 (2), 650-665 (2019).
- Guo, W. A. The search for a magic bullet to fight multiple organ failure secondary to ischemia/reperfusion injury and abdominal compartment syndrome. Journal of Surgical Research. 184 (2), 792-793 (2013).
- Elham, M., Mahmoudi, M., Nassiri-Toosi, M., Baghfalaki, T., Zeraati, H. Post liver transplantation survival and related prognostic factors among adult recipients in tehran liver transplant center; 2002-2019. Archives of Iranian Medicine. 1 (23), 326-334 (2020).
- Kim, E. H., Ko, J. S., Gwak, M. S., Lee, S. K., Kim, G. S. Incidence and clinical significance of hyperfibrinolysis during living donor liver transplantation. Blood Coagulation and Fibrinolysis. 29 (3), 322-326 (2018).
- Czigány, Z. Improving research practice in rat orthotopic and partial orthotopic liver transplantation: a review, recommendation, and publication guide. European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).
- Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).
- Zimmermann, F. A., et al. Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts. Transplantation Proceedings. 11 (1), 571-577 (1979).
- Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses. Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).
- Kamada, N. A., Calne, R. Y. Surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat. Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).
- Yang, L. F., et al. A rat model of orthotopic liver transplantation using a novel magnetic anastomosis technique for suprahepatic vena cava reconstruction. Journal of Visualized Experiments. 19 (133), e56933 (2018).
- Liu, L. X., He, C., Huang, T., Gu, J. Development of a new technique for reconstruction of hepatic artery during liver transplantation in sprague-dawley rat. PLoS One. 10 (12), 0145662 (2015).
- Paller, M. S., Hoidal, J. R., Ferris, T. F. Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure In the rat. Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1156-1164 (1984).
- Schmidt, J., Lewandrowsi, K., Warshaw, A. L., Compton, C. C., Rattner, D. W. Morphometric characteristics and homogeneity of a new model of acute pancreatitis in the rat. International Journal of Pancreatology. 12 (1), 41-51 (1992).
- Chui, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal. Archives of Surgery. 101 (4), 478-483 (1970).
- Kozian, A., et al. One-lung ventilation induces hyperfusion and alveolar damage in the ventilated lung:an experimental study. British Journal of Anaesthesia. 100 (4), 549-559 (2008).
- Shimada, S., et al. Heavy water (D2O) containing preservation solution reduces hepatic cold preservation and reperfusion injury in an isolated perfused rat liver (IPRL) model. Journal of Clinical Medicine. 8 (11), 1818 (2019).
- Nakamura, K. Sirtuin 1 attenuates inflammation and hepatocellular damage in liver transplant ischemia/reperfusion: from mouse to human. Liver Transplantation. 23 (10), 1282-1293 (2017).
- Blaire, A., et al.
