Summary
이 프로토콜은 사내에서 지어진 전신 흡입(WBI) 노출 시스템(WBI)을 통해 담배 연기(CS)의 병리학적 효과에 대한 연구를 보여줍니다. 이 시스템은 폐 기종및 혈청증에 대한 CS 중재 효과의 연구를 위한 통제된 반복조건하에서 CS에 동물을 노출할 수 있습니다.
Abstract
2018년 미국 성인의 14%에 가까운 사람들이 담배를 피우는 것으로 보고되었습니다. 폐와 심혈관 질환에 대한 담배 연기(CS)의 영향은 널리 연구되었지만 혈액및 골수와 같은 다른 조직 및 장기에서 CS의 영향은 불완전하게 정의되어 있습니다. 설치류에서 CS의 효과를 연구할 적절한 시스템을 찾는 것은 엄청나게 비싸고 시판되는 시스템을 구입해야 합니다. 따라서, 우리는 마우스에서 CS의 병리학적 효과를 연구하기 위해 저렴하고 신뢰할 수 있으며 다재 다능한 시스템을 구축하기 시작했습니다. 이 전신 흡입 노출 시스템(WBIS)은 CS와 깨끗한 공기에 대한 노출을 번갈아 가며 담배의 호흡과 퍼핑을 모방합니다. 여기서 우리는 이 do-it-yourself (DIY) 시스템이 담배 연기 노출의 4 달 후에 마우스에 있는 기도 염증 및 폐 폐기종을 유도한다는 것을 보여줍니다. 이 장치를 사용하여 골수에서 조혈 줄기 및 선조 세포 (HSPC)에 대한 CS의 전신 흡입 (WBI)의 효과도 도시되어 있습니다.
Introduction
담배 흡연은 지난 50~60년 동안 담배 흡연 성인의 수가 꾸준히 감소했음에도 불구하고 미국에서 예방 가능한 질병의 주요 원인중하나입니다. 흡연은 폐종 과 만성 기관지염2,3,4를포함하는 질환군인 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)을 포함한 폐와 혈액의 여러 질환과 관련이 있는 것으로 널리 알려져 있다. 질병 통제 센터 (CDC)에 따르면, 2014년에, COPD는 이 질병 때문에 손해를 입은 1,500만 명 이상의 미국인과 미국에서 죽음의 세 번째 주요한 원인이었습니다5.
CS는 또한 최근에 단일 조혈 줄기 세포가 불균형하게 사람의 말초 혈액의 큰 비율을 생성하는 조건인 클로날 조혈 (CH)6,7을개발의 고위험과 연관되었습니다. 이 발견은 흡연과 골수 기능 사이의 잠재적인 연결을 나타냅니다. CS의 광범위하고 매우 중요한 건강 영향을 감안할 때 질병의 뮤린 모델은 생물 의학 연구에서 진보의 초석임을 감안할 때, 마우스에서 CS를 모델링하는 효율적이고 저렴한 시스템을 개발하는 것이 유용합니다.
여기에서, 우리는 폐 폐기종과 골수 항상성에 CS의 생체 내 효과를 치료하고 공부하기위한 저렴한 시스템을 구축하기위한 단계별 가이드를 제공합니다. 이 장비의 조립은 사용자가 전문 지식을 가질 필요가 없으므로 DIY 조립을 허용합니다.
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Protocol
실험과이 기술의 개발에 관련된 모든 동물은 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)와 실험실 동물 관리 (AAALAC)의 평가 및 인증 협회에 의해 인가 된 베일러 의과 대학 및 MD 앤더슨 기관에서 승인 한 동물 사용 프로토콜에 따라되었습니다.
1. 장치 구축
- 밸브 시스템으로 공기 압축기 조립.
- 1/8 인치 나사 로 처리 된 남성 어댑터 젖꼭지 피팅을 사용하여 유량계 (Y 막대와 2 개의 전원 이륙과 2 개의 전원 이륙)를 소형 압력 조절기에 연결합니다. 스레드가 있는 모든 끝에 스레드 씰 테이프를 사용해야 합니다.
- 조립된 압력 레귤레이터를 컴프레서 공기 콘센트의 1/8 인치 육각 형 젖꼭지, 1/8 인치 나사 커플링 피팅 및 압력 조절에 연결되는 1/8 인치 나사 남성 어댑터 젖꼭지 피팅과 같은 유량계와 유량계를 연결합니다.
- 각 (4) 유량계에 산소 회전 가시 커넥터를 설치합니다.
- 공기 압축기의 상단 공기 콘센트에 남성 어댑터를 설치합니다 (의료 공기 압축기 기기에 포함 된 부분).
- 어셈블 챔버(4유닛 확인)
- 3/4 인치 염소 화 폴리 염화 비닐 (CPVC) 파이프를 8 개의 4 인치 세그먼트로 자른다.
- 각 세그먼트를 3/4 인치 90° 팔꿈치 CPVC 피팅에 삽입하고 팔꿈치의 피팅 측면을 3/4 인치 직경 CPVC 남성 어댑터에 부착합니다. CPVC 세그먼트는 8개여야 하며, 각 세그먼트는 하나의 CPVC 팔꿈치 피팅과 1개의 CPVC 남성 어댑터에 부착되어야 합니다.
- 뚜껑이 있는 8.5L 밀폐 용기(11.25 x 7.75 x 6인치)의 반대편에서 두 개의 구멍(직경 1 1/4인치)을 드릴링합니다(그림 1 노출 챔버 참조). 구멍의 위치는 위에서 아래로, 왼쪽에서 오른쪽으로 중앙으로 지정됩니다.
- 용기의 각 구멍에 미리 조립된 CPVC 수컷 어댑터의 나사측면을 삽입합니다.
- 용기 의 내부에서, 다른 쪽에 3/4 인치 CPVC 캡을 부착 (챔버 연기 입력) 한쪽에 3/4 인치 CPVC 드립 관개 여성 어댑터 (챔버 연기 출력).
- 챔버 연기 출력의 CPVC 캡 상단에 5 개의 3mm 구멍을 퀸쿤스 (샤워 헤드) 패턴으로 드릴. 이렇게 하면 담배 연기가 더 높은 속도의 챔버에 들어갈 수 있으며 모든 방향으로 챔버 내부에 고르게 퍼집니다.
- 조립 담배 챔버 (4 뮤린 노출 단위까지 구성)
- 1홀 고무 스토퍼(제조사 크기 8.5)를 가지고 넓은 면에 1/4 인치 가시 Y 커넥터와 좁은 면에 직선 가시 피팅 (8mm 개구부)을 삽입하십시오. 담배는 흡연 시술(담배 받침대)에 배치됩니다.
- 12인치 길이의 의료용 비닐 파이프의 한쪽 끝을 고무 스토퍼에 부착된 Y 커넥터의 가시 커넥터 중 하나에 연결하고 다른 쪽 끝은 1/4 인치 피팅에 부착하고 이 피팅의 반대쪽을 1 홀 고무 스토퍼 (제조업체 크기 1)에 삽입합니다.
- 다른 고무 스토퍼(제조업체 크기 8.5)에 1/4인치 직선 튜브 커넥터를 스토퍼의 넓은 측면에 삽입하고 피팅의 외부 끝을 7피트 의학적 등급의 비닐 파이프에 연결합니다.
- 실험실 유리 드레인 튜브에서 1.3.1-1.3.3 단계 에서 조립 된 두 개의 고무 스토퍼 구조를 8 인치 x 1.75 인치 유리 실린더에 연결합니다.
- 밸브 제어 시스템
- 이 시스템은 담배 연기와 깨끗한 공기의 흡입 (퍼핑)을 시뮬레이션하는 솔레노이드 밸브의 리듬 개폐에 의해 제어됩니다. 솔레노이드 밸브를 제어하는 시스템은 상업적으로 설계되었습니다(재료 표참조).
- 모든 구성 요소를 함께 조립(그림 1참조)
- 1인치 패스너를 사용하여 밸브 제어 시스템의 측면에 4개의 솔레노이드 밸브를 장착합니다.
- 솔레노이드 밸브를 제조업체의 지시에 따라 밸브 제어 시스템에 연결합니다.
- 10-32(M) 나사 직선 커넥터를 솔레노이드 밸브의 배기("EXH") 연결과 동일한 솔레노이드 밸브의 "IN" 및 "OUT" 연결에 나사로 된 포트 어댑터를 부착합니다.
- 7피트 의료급 비닐 튜브를 사용하여 "OUT" 연결을 통해 압축기에 부착된 유량계를 솔레노이드 밸브에 연결합니다.
- 1.3.3 단계에서 고무 스토퍼와 조립 된 7 피트 비닐 튜브를 연결합니다. 솔레노이드 밸브의 "IN" 커넥터에.
- 챔버 연기 입력에 담배 챔버의 작은 고무 스토퍼를 삽입합니다.
- 솔레노이드 밸브를 1.3.1 단계에서 조립한 담배 받침대에 가시 Y 커넥터의 두 번째 연결에 연결합니다.
그림 1: CS에 노출하기 위한 WBIS 연결의 회로도. 이 그림은 모든 구성 요소가 작업 장치를 형성하기 위해 조립되는 방법을 보여줍니다. 이 그림은 기계가 작동 할 수있는 4 개의 조립 흡연 챔버 를 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
2. 담배 연기 노출
주의: 담배 연기에 대한 두 번째 및 세 번째 노출을 피하십시오. 담배 및 노출 챔버는 클래스 II 유형 B2 라미나르 흐름 생물학적 안전 캐비닛 내에서 사용되어야한다. 적절한 PPE는 연기 노출 실험 (즉, 마스크, 장갑, 헤어 넷, 가운)을 수행하는 동안 착용해야합니다.
-
압력 및 기류 설정
- 그림 1에표시된 대로 모든 구성 요소가 조립되면 공기 압축기를 켜고 안전 경보가 자체적으로 꺼지기를 기다립니다.
- 압력 조절기의 노브를 돌려 공기 압축기의 압력을 40-50 psi로 조정합니다.
- 유량계를 사용하여 공기 압축기에서 5L로 공기 흐름을 조정합니다.
- 밸브 컨트롤러를 켭니다.
- 밸브 컨트롤러의 디지털 타이머를 PULSE-C(디스플레이에 "Pu-c"로 표시됨)로 조정하여 SET/LOCK 키를 눌러 타이머의 첫 번째 숫자에서 UP 키를 누른다. 그런 다음 Pu-c 모드에 도달할 때까지 UP 키를 누릅니다. 리셋 키를 눌러 표시된 작동 모드(예: Pu-C)를 작업 모드로 설정합니다.
- SET/LOCK을 눌러 타이머 1을 변경합니다(디스플레이에 "T1"으로 표시됨).
- UP 또는 DOWN 키를 눌러 T1을 20s로 설정합니다.
- SET/LOCK을 눌러 타이머 2를 변경합니다(디스플레이에 "T2"로 표시됨).
- UP 또는 DOWN 키를 눌러 T2를 3으로 설정합니다.
참고: 단계 2.1.5 ~ 2.1.9는 특정 타이머와 함께 사용할 수 있도록 조정됩니다(재료 표참조). 이 제품의 다른 용도에 대한 자세한 지침은 해당 사용자 설명서를 참조하십시오.
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담배 연기 치료
참고 : 이 시스템은 동시에 1-4 뮤린 노출 챔버의 사용을 허용합니다.- 공기 압축기를 켜고 안전 경보가 자체적으로 꺼지기를 기다립니다.
- 밸브 컨트롤러를 켭니다.
- 8.5L의 부피를 가진 밀폐 된 탈착식 뚜껑을 가진 4개의 노출 챔버각각에 5 마우스를 전송하는 것은 클래스 II 타입 B2 Laminar 흐름 생물 안전 캐비닛 내의 마우스로 4개의 노출 챔버를 놓습니다.
- 라미나르 플로우 생물학적 안전 캐비닛 내부에 담배를 밝히고 담배 실 내부에 담배를 삽입합니다. 켄터키 3RF4 연구 담배 (9.5 mg /cig tar 및 0.73 mg/cig 니코틴)에 비해 15 mg /cig 타르 및 1.1 mg /cig 니코틴8을 포함하는 시판되는 담배를 사용하십시오9.
- 현재 사용 중인 챔버에 해당하는 밸브 컨트롤러의 밸브를 켭전환합니다. 노출은 2단계로 나뉩니다: (T1) 깨끗한 공기는 20s용 노출실로 펌핑되고 (T2) 공기흐름은 담배챔버로부터 연소및 연기가 3s에 대한 노출실로 펌핑된다. 담배가 필터에 도달할 때까지 완전히 타버릴 수 있도록 합니다.
- 타이머 설정을 조정하여 ~4분 동안 평균 ~10퍼퍼/담배를 수행합니다. 타이머와 시스템은 조사자의 연구 요구에 따라 CS 투약 요법을 향상시크거나 낮추기 위해 쉽게 사용자 정의 할 수 있습니다.
- 담배 필터를 제거하고 담배 꽁초를 유리 비커에 물로 놓고 불을 끄고 냄새를 약화시킴으로써 폐기하십시오.
- 담배 실이 담배 없이 다시 닫혀 있는지 확인하십시오. 기계가 10 분 동안 깨끗한 공기를 펌프하자. CS에 노출된 척추동물에 대한 지속적인 모니터링을 유지하는 것이 가장 중요합니다. 이 노출 요법은 노출 챔버 당 9 주 이상 5 여성 마우스에 최적화됩니다.
- 하루에 챔버당 총 4개의 담배에 대해 2.3.4~2.3.7을 3회 반복합니다. 이 절차는 연구원이 그들의 실험을 위해 필요로 하는 한 주 5 일 반복됩니다.
- 노출 실에서 마우스를 해당 케이지로 다시 제거합니다.
- 밸브 컨트롤러와 공기 압축기에서 끕니다.
- 노출 및 담배 챔버를 제거하고 타르의 잔류물을 제거하기 위해 물과 비누로 씻어.
- 다시 사용하기 전에 챔버를 완전히 건조시키십시오.
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Representative Results
CS 노출의 주요 특징 중 하나는 폐에서 공기 주머니 (폐포)의 손상과 파괴를 특징으로하는 폐기종입니다. 따라서, 초기 실험은 CS에 반복된 전신 노출시 여성 마우스의 폐에 있는 폐기종 변화를 유발하는 DIY 시스템의 기능에 초점을 맞추게 되었습니다. CS 투약 요법은 우리가 CS로 마우스를 치료하고 폐기종10,11, 12,13,14,15,16의분자 병리생리학을 연구하기 위해 여기에 설명된 DIY 시스템을 활용한 우리의 이전 간행물에 기초하여 선택되었다. 구체적으로, 마우스는 매일 필터를 가진 4개의 상용 담배의 연기에 전신을 노출하였고, 금연 간격은 각 담배 사이에 10분, 4개월 동안 주 5일10,11,12,13,14,15,16을노출하였다.
헤마톡시린과 에오신(H&E)-스테인드 폐 조직학은 공기 처리마우스(그림2A)에비해 CS에 노출된 마우스에서 폐포의 파괴를 보였다. 이에 따라, 눈먼 방식으로 폐 단면의 조직학적 분석은 평균 선형 차단(MLI)이 공기 대조군(도2B)에비해 CS에 노출된 마우스에서 상당히 높은 것으로 나타났다. 예상대로, CS에 WBIS는 체중감소(도 2C)를유발합니다. 상기 관측과 일치하여 CS-노출된 마우스는 또한 매트릭스 메탈로로테제 9 및12(Mmp9 및 Mmp12)유전자 발현의 유도뿐만 아니라 면역 세포의 향상된 기도 침투를 보였으며, 이는 조직손상(도 2D,E)17. 코티닌, 니코틴의 대사 산물 및 CS 노출을 위한 바이오마커, CS의 4개월에 노출된 마우스의 혈청에서 현저하게 상승되는 것이 검출되었지만 공기 노출마우스(도 2F)에서검출할 수 없었다.
신체의 세포와 조직에 CS 노출의 다각적 인 영향의 증가 감사가있다. 사전 연구에 따르면 WBI가 3R4F 담배를 가진 9개월 동안 6h/day, 5일/주 동안 CS에 마우스를 노출하여 조혈 줄기 세포 틈새 세포 틈새18에서변경된 것으로 나타났다. 따라서, 우리는 우리의 사전 설립 된 CS 투약 처방10,11,12,13,14,15,16을활용하여 골수 항상성을 변경하는이 DIY 시스템의 능력을 테스트했다. 노출 후, 우리는 유동 세포측정(도3A)을사용하여 BM 인구를 분석하였다. 기대에 따라, 이 DIY 시스템에 CS를 가진 마우스의 처리는 골수 (BM) 인구에 있는 변경을 초래했습니다. 구체적으로, 유동 세포측정 분석은 공기통제(그림 3B)에비해 4개월간의 CS 노출 후 조혈 줄기 및 전조자(HSPC) 집단에서 상당한 증가를 보였다. 이러한 관찰을 확장하여, 시판되는 시스템을 활용하는 마우스의 CS에 대한 전신 노출(재료표참조) 또한 HSPC인구(도 3C)에서의 변동을 보였다. 상용 시스템에 사용되는 CS 노출의 투약 요법 및 지속 시간 및 CS 및조혈제(18)에 대한 사전 간행물은 골수 항상성이 광범위한 CS 투약 및 치료 요법(도3C)에절묘하게 민감하다는 것을 시사하는 이 DIY 시스템과는 상당히 달랐다. 전반적으로,이 데이터는이 DIY 시스템이 안정적으로 세포와 조직의 범위에서 그 효과를 연구하기 위해 제어 조건하에서 CS에 마우스를 노출하는 데 사용할 수있는 저렴한 옵션임을 강조한다.
그림 2: 마우스의 기도 염증 및 폐 기종 변화의 CS 매개 유도. (A)4개월 동안 항공 또는 CS에 노출된 WT C57BL/6 마우스로부터 H&E 염색 폐 단면. 4배 배율; 인셋 20배율. 스케일 바 200 μM. (B)평균 선형 요격(MLI)은 인터알포라 벽 거리의 척도로서 공기 또는 CS에 의해 처리된 마우스로부터의한 편견없는 히스토모홈트리를 사용하여 측정하였다. (D)기관지알알라 라베이지(BAL) 유체의 제어(AIR) 유체에서 CS 처리마우스를 비교하여 총 및 차동 세포 수. 총 백혈구 (총), 대식세포 (맥), 호중구 (Neu), 림프구 (Lym). (E) Mmp9 및(F) Mmp12 mRNA의 상대적 발현은 공기 또는 CS의 BAL 유체로부터 실시간 PCR에 의해 정량화되어 Gapdh 발현으로 정규화된다. n = 4-5 마우스 / 그룹. (G)공기 또는 CS에 노출된 마우스에서 코티닌의 혈청 수준은 마지막 CS 처리 후 ELISA 24h에 의해 측정되었다; n = 7-8 마우스 / 그룹. 통계비교는(B, C, D, E)페어링되지 않은 t-test및(F)웰치의 t-test를사용하여 수행하였다. 데이터는 평균 ± SEM. **p < 0.01, ***p < 0.001, ****p < 0.0001. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3: 기대에 따라 이 DIY 시스템은 마우스의 골수에서 CS 매개 효과를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. (A)유동 세포측정을 통해 HSPC와 HSC를 식별하는 게이팅 전략. 리니지 마커는 다음과 같습니다: Gr1, 맥1, B220, CD4, CD8 및 Ter119. (B)동일한 4개월 요법을 가진 이 DIY 시스템을 사용하여 CS 노출 후 전체 골수에서 HSPC 및 HSC의 백분율. (C)HSPC와 HSC의 백분율은 다음과 같은 노출 절차와 함께 시판 되는 시스템을 사용하여 CS 노출 후 전체 골수에서: 24 3RF4 연구 담배 매일, 12 퍼프/담배, 5 일 4.5 주 기간 동안 주. (B-C) 만 휘트니 테스트; n = 5 마우스 / 그룹. 평균 ± SEM으로 표시된 데이터* p < 0.05. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
여기서 우리는 CS에 마우스의 WBIS에 대한 장치의 건설에 필요한 정보를 제공합니다. 시스템의 설치 후, 조사관이 동물에서 니코틴 또는 코티닌의 전달 된 복용량에 따라 시스템을 보정하는 것이 매우 중요합니다. 이 장치에는 담배 퍼프 볼륨, 퍼프 주파수, 결합된 연기 노출 기간 및 동물이 각 담배 사이에 받는 휴식 간격을 조절하는 데 사용할 수 있는 타이머 및 압력 게이지가 포함되어 있습니다. 더욱이, 매일 투여되는 담배의 실제 수는 타르 및 니코틴 함량에 따라 달라질 수 있다. 마지막으로, 담배 연기에 노출된 모든 성분은 동물의 적절한 연기 순환과 일관된 연기 노출을 보장하기 위해 정기적으로 청소해야 합니다.
CS 및 공기 독성물질을 가진 마우스의 처리를 위해 적어도 반 다스 상용 시스템 및 프로토콜이 있습니다. 그러나 이러한 목적으로 사용되는 장비의 대부분은 상업용 공급업체 또는 조립용 전자 제품 및/또는 전기 공학에 대한 심층적인 지식이 필요합니다. 그 시스템 중 일부는 WBI 처방을 사용하는 반면 다른 시스템은 코 전용 치료를 통합하지만, 이러한 시스템은 대부분의 실험실에서 엄청나게 비싼 만드는 $ 100,000까지 요할 수 있습니다.
이 DIY 시스템의 장점은 제조, 저렴한 비용 (~ $ 6,000) 및 다재 다능성에 내재된 단순성입니다. 또한,이 DIY 장치의 건설에 필요한 구성 요소는 상업 소매 업체 및 공급 망에서 쉽게 사용할 수 있습니다. 우리는 노출 프로토콜및 장비의 한계가 마우스 노출 챔버로 전달 된 담배 연기 성분을 측정하는 dosimetry 장비의 부족임을 인정합니다. 그러나, 이 시스템의 디자인은 통제된 방식으로 작동하고 우리는 이 선택된 흡연 요법에 있는 혈청 코티닌의 수준이 CS 유도 된 폐기종20,21의그밖 뮤린 모형에 비교된다는 것을 보여주었습니다. 더욱이, 이 방법은 폐와 BM에 있는 CS의 효력을 감시하는 것 이상으로 응용을 가지고 있는 것을 보여주었습니다. 우리 그룹은 담배 연기가 장 조직에 미치는 영향을 연구하기 위해이 시스템을 사용했다15. 우리는 또한 최근에 폐에 전자 담배에 노출의 해로운 효력을 연구하기 위하여 이 시스템을 적응했습니다22.
요약하자면, 이 장치는 담배 흡연의 해로운 영향의 광대 한 배열을 연구하기 위해 저렴하고 구축하기 쉬운 노출 시스템을 나타냅니다.
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Disclosures
저자는 공개 할 것이 없습니다.
Acknowledgments
AR, XH 및 PE는 NIH 보조금 R01HL140398 및 길슨 롱겐바우 재단 보조금에 의해 지원되었습니다. DEMM과 KK는 NIH 보조금 R01HL136333 및 R01HL134880(KYK)과 헬리스 의학 연구 재단의 보조금으로 지원받았습니다. DEMM은 또한 하워드 휴즈 의학 연구소에 의해 지원됩니다 (HHMI) 고급 연구를위한 길리엄 펠로우십. PE는 또한 정밀 환경 건강 과학 NIEHS T32 ES027801 펠로우십 프로그램 교육을 통해 지원됩니다. JC와 MF는 후성 유전학 및 분자 발암발생학과와 MD 앤더슨의 후성유전학 센터(MF에 대한 학자 상)의 담배 연구 기금에 의해 지원됩니다. FK와 YZ는 NIH 보조금 R01 ES029442-01 및 R01 AI135803-01뿐만 아니라 VA 메리트 보조금 CX0000104에 의해 지원됩니다. 이 프로젝트는 베일러 의과 대학의 세포 측정 및 세포 선별 코어에 의해 지원되었으며 CPRIT 코어 시설 지원 상 (CPRIT-RP180672), NIH (CA125123 및 RR024574), 조엘 M. 세더스트롬의 지원.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 in fastener | Lowes | 756990 | |
| 1/4 in Barbed Y connector | VWR | 89093-282 | |
| 1/4 in straight tubing connector | VWR | 62866-378 | |
| 1/8 hex nipple | Lowes | 877221 | |
| 1/8 in threaded coupling fitting | Lowes | 877208 | |
| 1/8 in threaded male adapter nipple fitting | Lowes | 877243 | |
| 10/32 (M) threaded straight connector | Bimba | EB60 | |
| 3/4 in 90-degree elbow CPVC fitting | Lowes | 22643 | |
| 3/4 in chlorinated polyvinyl chloride (CPVC) pipe | Lowes | 23814 | |
| 3/4 in CPVC cap | Lowes | 23773 | |
| 3/4 in CPVC Drip irrigation female adapter | Lowes | 194629 | |
| 3/4 in diameter CPVC male adapter | Lowes | 23766 | |
| 8.5 L airtight container with lid (11.25in x 7.75in x 6 in) | Komax | N/A | Listed as "Komax Biokips Large Bread Box | (280-oz) Large Storage Container" |
| Glass drain tube (1.75 in diameter x 8 in length) | KIMAX | 6500 | |
| Isonic Solenoid Valves | Bimba | V2A02-AW1 | |
| Marlboro Red 100's | Marlboro | N/A | |
| Oxygen swivel barbed connector | Global Medical Solutions | RES002 | |
| Panasonic Timer LT4H-W | Panasonic | LT4HW | Item was built-in the valve controller by Shepherd Controls & Associates |
| Pressure regulator | Allied Electronics and Automation | 70600552 | Also listed as "Norgren R07-100-RGKA" |
| Rubber stopper # 1 (one hole) | VWR | 59581-163 | |
| Rubber stopper # 8.5 (one hole) | VWR | 59581-389 | |
| Scireq inExpose system | Scireq and Emka Technologies | N/A | Commercial system used for comparison with our DIY WBIS |
| Straight barbed fitting (8mm opening) | VWR | 10028-872 | |
| Thread Sealant tape | Lowes | 1184243 | |
| Threaded port adaptor | Bimba | P1SA1 | |
| Timeter Aridyne 2000 Medical Air Compressor | MFI Medical | AHC-TE20 | |
| Timeter flowmeter | Allied Healthcare Products | 15006-03YP2 | Also listed as "Puritan Air Meter" |
| Valve Control system | Shepherd Controls and Associates | N/A | Company custom designed the valve control system for this model. |
| Vinyl pipes | Vitality Medical | RES3007 |
References
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