Summary
Многие модели эндометриоза на грызунах ограничены технической сложностью, воспроизводимостью и / или потребностью в животных с ослабленным иммунитетом или специальных мышах-репортерах. Мы представляем упрощенную систему индукции поражения с использованием любой экспериментальной мыши с независимо проверяемой, объективной системой оценки и без необходимости овариэктомии или операции по выживанию.
Abstract
Эндометриоз является основной причиной тазовых болей и бесплодия. Определяется наличием ткани эндометрия во внематочном расположении. Разработка новых методов лечения и диагностических инструментов для эндометриоза была ограничена отчасти из-за проблем в изучении заболевания. За пределами приматов немногие млекопитающие менструают, и ни у одного из них не развивается спонтанный эндометриоз. Модели грызунов популярны, но требуют искусственной индукции эндометриоза, причем многие из них используют либо иммунокомпрометированных мышей, либо хирургически индуцированное заболевание. В последнее время больше внимания уделяется моделям, включающим внутрибрюшинную инъекцию. Мы представляем мышиную модель эндометриоза, которая объединяет несколько особенностей существующих моделей эндометриоза в новую, упрощенную систему, которая опирается на микроскопическую количественную оценку вместо субъективной оценки. В этой модели мы выполняем гормональную стимуляцию мышей-доноров, внутрибрюшинную инъекцию, систематическое абдоминальное обследование и сбор тканей, а также гистологическую количественную оценку, которая может быть выполнена и проверена в любое время после некропсии. Эта модель требует минимальных ресурсов и обучения; не требует экспертизы лаборантов в хирургии выживания мысов или в выявлении грубых эндометриотических поражений; может быть использован у иммунокомпрометированных, иммунокомпетентных и/или мутантных мышей; и надежно создает эндометриотические поражения, которые гистологически согласуются с эндометриотической болезнью человека.
Introduction
Эндометриоз является загадочным заболеванием женского репродуктивного тракта со значительным финансовым и оздоровительным бременем для женщин1,2. Этиология эндометриоза не полностью понята, и было предложено множество объяснений, включая целовую метаплазию, эмбриональные остатки Мюллера, набор клеток-прогениторов костного мозга и ретроградную менструацию3. Хотя могут быть задействованы многочисленные аспекты этих предлагаемых механизмов, и ни одно объяснение не может объяснить все формы заболевания, ведущей моделью патогенеза эндометриоза является ретроградная менструация. Ретроградная менструация – это прохождение менструальных стоков по фаллопиевым трубам и в брюшинную полость; Подсчитано, что 90% менструаций женщин регулярно подвергаются ретроградным менструациям4,5. Учитывая это обыденное явление ретроградной менструации, почему эндометриоз развивается только у подгруппы женщин, неясно5. Чтобы лучше понять этиологию этого заболевания, прямые исследования на людях невозможны, и исследования на животных оправданы.
Эндометриоз является проблемой как для лечения, так и для изучения. Распространенность заболевания неизвестна, но оценивается в 10%1. В то время как некоторые продвинутые типы эндометриоза могут быть точно идентифицированы с помощью неинвазивной визуализации, окончательный диагноз достигается только путем гистопатологического анализа хирургически полученных образцов биопсии; поражения, которые визуально кажутся больными, на самом деле могут быть фиброзом или рубцеванием от других причин6. Тяжесть и степень заболевания не коррелирует с симптоматикой7.
Поражения эндометриоза состоят из гетерогенных типов клеток и популяций, которые взаимодействуют сложными способами в микросреде, что ограничивает полезность клеточных моделей8,9. Модели in vivo существуют, но они имеют присущие им проблемы и ограничения10,11,12. Модели приматов идеальны, но часто неосуществимы13,14,15. Немногие млекопитающие, не являющиеся приматами, менструают и у них развивается эндометриоз спонтанно16. Модели эндометриоза на грызунах существуют, но каждая из них имеет ограничения17. Многие из этих моделей требуют операции по выживанию для наложения швов или имплантации ткани эндометрия в стенку донора-реципиента или кишечник, добавляя техническую сложность, потребность в анестезии и смешивая иммунные факторы от самой операции18,19,20. Кроме того, многие модели требуют овариэктомии и добавок эстрогена; увеличивая выход поражения, это увеличивает время, затраты и дополнительную операцию по выживанию. Модели внутрибрюшинных (IP) инъекций не требуют анестезии или операции по выживанию, и эти модели логически имитируют ретроградную менструацию лучше, чем шовные модели21,22,23. Однако большинство моделей ИС подвержены большей изменчивости в месте поражения из-за случайного рассеивания фрагментов эндометрия после инъекции и, следовательно, большей погрешности в идентификации и измерении поражения.
Здесь мы представляем мышиную модель эндометриоза, которая объединяет несколько особенностей существующих моделей эндометриоза в новую, упрощенную и эффективную систему, которая опирается на микроскопическую количественную оценку вместо субъективной классификации.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ПРИМЕЧАНИЕ: Использование животных в этом исследовании было одобрено Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) в Кливлендском научно-исследовательском институте клиники Лернера. Все общедоступные стандарты ухода за животными и их использования были выполнены в соответствии с руководящими принципами Национальных институтов здравоохранения. Эта процедура использует асептические методы. Чашка Петри стерильна. Используемый PBS/физиологический раствор является стерильным. Хирургические инструменты для некропсии и рассечения тканей стерилизуются с помощью автоклава. Мы используем 70% EtOH на инструментах между случаями с животными (если более одного за сеанс), чтобы уменьшить загрязнение.
1. Подготовка мышей-доноров и реципиентов (см. Рисунок 1)
- Убедитесь в том, что для работы с лабораторными животными получено соответствующее разрешение.
- Определите штамм мыши. В этих экспериментах использовались мыши дикого типа и мутанты, имеющие фон C57BL/6J, но исследователи, использующие аналогичные модели, сообщают об успехе с другими штаммами мышей, такими как мыши BALB/ c10. Кроме того, мыши-доноры и/или мыши-реципиенты могут использовать репортерные системы, такие как мыши GFP или RFP (см. Рисунок 2 и Рисунок 3).
- Для определения сроков трансплантации ткани эндометрия убедитесь, что мышам-донорам на момент инъекции гонадотропина было от 22 до 24 дней. Это гарантирует, что они репродуктивно наивны, например, еще не начали эструйную езду на велосипеде.
- Убедитесь, что мыши-реципиенты репродуктивно неповреждены (без предшествующих овариэктомий) в возрасте от 2 до 4 месяцев. Хотя это и не требуется, рекомендуется периодически помещать пропитанную мочой постельное белье из клетки самцов мышей в клетку реципиента, чтобы облегчить продолжающийся цикл эструсов, и снова за 72 часа до трансплантации ткани эндометрия.
ПРИМЕЧАНИЕ: Это не обеспечит синхронизацию эстрального цикла реципиентов, так как размещение пропитанного мочой постельного белья сильно зависит от количества используемых мужских постельных принадлежностей и имеет переменные результаты. Если синхронизация эстрального цикла желательна, три последовательные подкожные инъекции 100 нг/100 мкл эстрадиола приведут всех животных к эструсной фазе. В то время как мы не обнаружили различий в индукции поражения на основе фазы эстрального цикла, другие группы обнаружили, что фаза цикла важна10. - Подкожно вводят беременной кобыле сыворотки гонадотропин (ПМСГ, 2 МЕ, разведенные в 200 мкл) мышам-донорамподкожно с использованием тонкой иглы (рекомендуется 25-27 г). Не давайте ПМСГ мышам-реципиентам, так как это вызовет овуляцию и последующую среду с высоким содержанием прогестерона, которая менее восприимчива к образованию эндометриоза.
ПРИМЕЧАНИЕ: Предыдущие мышиные модели использовали pmsg или эстроген для стимуляции пролиферации эндометрия у мышей-доноров до сбора урожая эндометрия23. PMSG рекомендуется по следующим причинам: Период полувыведения PMSG составляет 40 ч, тогда как период полувыведения 17-бета-эстрадиола составляет всего 2 ч. Использование однократной подкожной инъекции ПМСГ донорам за 40 ч до забора ткани эндометрия обеспечивает устойчивую продолжительность воздействия стимуляции гонадотропином, который действует для стимуляции эндогенного эстрогена. Многие препараты экзогенного эстрогена требуют многократных инъекций для адекватной праймы эндометрия. - После инъекции PMSG запланируйте некропсию, закупку и трансплантацию реципиенту в промежутке 38-42 ч. Время сбора ткани эндометрия после инъекции гонадотропина для обеспечения сбора ткани перед овуляцией, которая происходит через 42 ч после инъекции. Овуляция производит среду с высоким содержанием прогестерона (P4), что уменьшает очаг поражения.
2. Закупка донорской ткани эндометрия мыши
- После эвтаназии донорской мыши (с использованием камеры CO2 с последующим вывихом шейки матки) опрыскайте брюшную полость 70% раствором этанола; это служит для уменьшения загрязнения закупаемой ткани от кожной флоры и от смещенных волосков. Рассекая ножницами, сделайте неглубокий поперечный срез по средней линии через кожу и подкожную клетчатку. Затем, захватив каждую сторону разреза кожи, используйте тупое вытяжение, чтобы открыть живот.
- Определите матку. Перед удалением матки обрежьте прилегающую соединительную ткань. Трансектейте каждый рог матки чуть ниже соответствующей фаллопиевой трубы, а затем трансектете шейку матки, чтобы удалить всю матку в блоке.
- После удаления из брюшной полости тщательно осмотрите матку и удалите дополнительный периферический жир или соединительную ткань. Поместите матку в каплю холодного PBS на чашке Петри. Определите и задокументируйте совокупную массу всей матки.
- Трансекция каждого рога от дна матки, делая трансекцию как можно ближе к дну, чтобы максимизировать длину каждого рога. С помощью рассекающего микроскопа поместите одно лезвие рассекающих ножниц внутрь просвета первого рога, затем разрезайте вдоль большой оси трубки. Осторожно откройте трубку, имея в виду, с какой стороны находится сероза, а с какой стороны эпителий.
- Положите 500 куб. см физиологического раствора или PBS на новую чашку Петри; жидкость будет оставаться вместе из-за поверхностного натяжения.
- Затем выполняют фрагментацию матки в равномерном порядке. Лучше иметь меньше более крупных поражений, чем многих меньших поражений. Начните с отделения эпителия от миометрия, захватив слой эндометрия и отклеив его.
- С другой стороны, просто фрагментируйте ткань, не отделяя миометрий (до тех пор, пока эпителиальная сторона полностью открыта), но сохранение миометрия уменьшает физиологическую значимость этой модели для заболеваний человека. Убедитесь, что фрагменты как можно больше, но достаточно малы, чтобы пройти через иглу 18 Г; (рекомендуется 1 мм x 1 мм).
- Соберите 10-12 из этих фрагментов размером 1 мм х 1 мм из первого рога (что примерно соответствует 40 мг ткани у мышей C57BL/6J). Поместите собранные фрагменты в коллекцию жидкости.
- Выполните те же шаги для другого рога матки в общей сложности около 24 фрагментов на мышь. Задокументируйте общее количество фрагментов.
3. Перитонеальная инъекция фрагментов тканей мыши-реципиенту
- Аспирировать взвешенные фрагменты 1 мм х 1 мм с помощью тупого конца шприца объемом 1 куб. см; общий объем должен составлять 1 мл.
- Прикрепите иглу 18 г к полному шприцевой шприца и загрузите жидкость в иглу. Рассмотрите имитацию инъекции обратно в чашку Петри, чтобы гарантировать, что вся ткань пройдет через иглу.
- Возьмите мышь получателя. Либо до, либо после инъекции ИП, получите вагинальный мазок мыши-реципиента для документирования эстрального цикла (10 мкл физиологического раствора с помощью шприца луковицы на вагинальном отверстии и покрытые стеклянным слайдом с крышкой).
- Выполняют внутрибрюшинное введение отломков шприцем под углом 45 градусов, заботясь о том, чтобы не вводить подкожно.
- Если фрагменты остаются после инъекции, втяни дополнительные 200 мкл жидкости в шприц для инъекции, чтобы убедиться, что все фрагменты успешно введены внутрибрюшинно.
- Уверившись в отсутствии кровотечений или осложнений, поместите мышей-реципиентов обратно в их клетки и кормите нормальной диетой.
4. Сбор эндометрийных поражений
- Усыпляйте мышей-реципиентов примерно через 21 день после инъекции фрагмента после трансплантации.
ПРИМЕЧАНИЕ: Из опыта и из обсуждения с сотрудниками, использующими аналогичные модели, максимальный размер и количество поражений происходят примерно через 3 недели после трансплантации; через 3 недели поражения начинают регрессировать в размерах. Используется одобренный IACUC метод эвтаназии. - После эвтаназии и вывиха шейки матки опрыскайте брюшко животного 70% этанолом и позолойте кожу поверхностно рассекающими ножницами. Разрезайте кожу и подкожное пространство ножницами, чтобы тупо открыть живот.
- Перед проведением любого дальнейшего вскрытия проводится полное обследование грубых поражений, размер которого измеряется суппортами и документируется их анатомическая область (см. Ниже).
- Выполните полный сбор трех различных анатомических областей в блоке (независимо от того, могут ли поражения быть оценены грубо). Если поражения наблюдаются в других областях (например, в кишечнике), их следует игнорировать и не собирать, если поражение не пересекает одну из трех областей ниже.
- A = брюшная стенка/брюшина (может быть либо сплющена в кассету, либо свернута, при том случае, если она согласуется между образцами).
- B = поджелудочная железа и брыженеечный жир.
- C = параматочная соединительная ткань и жир (белая сверкающая ткань, которая окружает матку, но не затрагивает никаких органов, кроме мочевого пузыря; позаботьтесь о том, чтобы не принять мочевой пузырь за поражение).
- Поместите каждую рассеченную область в кассету, соответствующим образом помеченную, и поместите ее в формалин и обработайте в соответствии с лабораторным протоколом для гистологического сечения.
- Сечение формалиновых блоков в два слайда (D1 и D2) на площадь ткани на двух однородных глубинах.
5. Оценка эндометрийных поражений
- Сканирование (при 40-кратном увеличении) и архивирование слайдов.
- Используйте программное обеспечение для цифрового считывания слайдов, определите самое большое расстояние (X) между краями эндометриотического поражения - независимо от того, состоит ли край из желез или стромы - и отметьте его. Непрерывное поражение определяется железами, окруженными стромой; линия не обязательно пересекает только эндометриотическую ткань (как в случае определения конечных точек на неправильной форме или волнообразном очаге эндометриоза), но две конечные точки должны быть соединены непрерывной стромой и/или железами (см. Рисунок 4).
- Сделайте вторую линию (Y) 90 градусов поперек первой линии, причем длина второй линии определяется в соответствии с приведенными выше правилами.
- Если встречается несколько несмежных поражений, дайте каждому свои собственные измерения X и Y.
- Рассчитайте итоговый балл для каждого слайда как суммирование областей (X*Y) каждого поражения.
- Возьмите большую из оценок с двух слайдов (D1 против D2) в качестве окончательной оценки для этого региона (A, B, C).
- Суммировать баллы из каждого региона, чтобы дать окончательный микроскопический балл для этого животного.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Для первоначального экспериментального доказательства концепции донорский эндометрий от мышей RFP вводили мышам-реципиентам дикого типа. Окрашивание H&E выявило гистопатологическое подтверждение классической архитектуры поражения эндометриозом(рисунок 3А). Флуоресцентная микроскопия подтвердила, что наблюдаемое поражение, о чем идет речь, произошло от донора(рисунок 3B).
Второй эксперимент проводился с использованием 10 доноров дикого типа C57BL/6J и 10 реципиентов. Еще 5 реципиентов получили фиктивное лечение (вводили PBS, а не фрагменты эндометрия) и присвоили случайный идентификационный номер; рецензенты были ослеплены до некропсии и гистопатологического обзора.
Все реципиенты получили донорскую ткань эндометрия в течение 42 ч после донорского лечения PSMG. Не было никакой корреляции между этим временным интервалом и окончательным весом матки или размером поражения. На момент донорской закупки средняя общая масса матки составляла 54 ± 9,5 мг. Среднее количество фрагментов составило 22,4 ± 5,2, в результате чего средний вес фрагмента составил 2,5 ± 0,5 мг. Операция конечной точки произошла либо на 20-й день, либо на 22-й день для всех получателей.
При среднем количестве поражений 1,5 и среднем общем диаметре поражения 3,7 мм эти конечные точки аналогичны другим исследованиям с использованием мышиных моделей с аналогичной массой введенных фрагментов эндометрия(рисунок 2)10. Распространенность поражений у всех мышей составила 80%. Мыши без поражений имели значительно большее фракционирование эндометрия по сравнению с мышами с поражениями (30,5 общих фрагментов против 20,3 соответственно; среднее общее количество фрагментов для всех мышей составило 22,4), что привело к снижению среднего размера фрагмента во время инъекции (1,9 мг против 2,6 мг). Как и ожидалось, фиктивные контрольные органы (вводимые физиологическим раствором, а не фрагментами эндометрия) не имели грубого или микроскопического заболевания. В последующем исследовании с использованием расширенного числа мышей эструсная фаза мыши-реципиента не была связана с числом поражения или показателем микроскопического заболевания.
Грубое число поражений, по-видимому, является плохим суррогатным маркером для общей нагрузки поражения, поскольку между макроскопическим и микроскопическим заболеванием, присутствующим в тканях, наблюдалось несоответствие. В 60% (n = 6) случаев было достигнуто согласие между макроскопическим и микроскопическим подсчетом (соглашение, определяемое как показывающее наличие или отсутствие, и разница в общем размере была в пределах 3 мм). Тем не менее, в 40% (n = 4) случаев было несогласие, при этом в 10% (n = 1) времени макроскопическое заболевание отсутствовало, но микроскопическое заболевание присутствовало с помощью гистологии, 10% (n = 1) макроскопическое заболевание наблюдалось, несмотря на отсутствие эндометриоза на подтверждающей гистологии(рисунок 5),а остальные 20% (n = 2) были согласны в наличии, но не в величине размера поражения. Таким образом, макроскопическое исследование только поражений недостаточно для количественной оценки бремени болезни эндометриоза.
Рисунок 1:Обзор модели. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2:Обследованные области для количественной оценки поражения. В то время как кишечник и другие внутрибрюшинные места могут содержать поражения, сложнее отличить их грубо, и исчерпывающее обследование брюшной полости будет более трудоемким с уменьшением отдачи. Поэтому последовательный, систематический подход к сбору всей ткани (независимо от того, присутствует ли грубое заболевание) выполняется в трех наиболее распространенных областях образования эндометриоза: брюшной стенке / брюшине(А),поджелудочной железе и брыжеечном жире(В)и параматочном жире(С). Помечены репрезентативные изображения микроскопических находок поражений из каждой из трех областей. 40-кратное увеличение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 3:Индукция эндометриоза с использованием донорских мышей эндометрия, экспрессивающего красный флуоресцентный белок. (A) H&E участок поражения. (B) Флуоресцентная микроскопия с окрашиванием DAPI. 40-кратное увеличение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 4:Репрезентативные изображения программного обеспечения, используемого для измерения размеров поражения и количественной оценки нагрузки поражения. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 5:Репрезентативные образцы грубых «поражений», не соревновений эндометриозом при гистопатологическом исследовании. 40-кратное увеличение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Наше исследование показывает, что эндометриоз может быть надежно индуцирован у мышей, не требуя использования овариэктомии и / или операции по выживанию, и что внематочные поражения эндометрия могут быть идентифицированы и количественно определены с использованием стандартизированного обследования брюшной полости и гистологического анализа.
Многие мышиные исследования эндометриоза используют хирургически индуцированный эндометриоз, при котором донорский эндометрий пришивается на месте к кишечнику, брюшной стенке или другому внутрибрюшинному расположению12,20. Это имеет преимущество стандартизации размера и расположения пересаживаемой ткани. Однако, в дополнение к дополнительным логистическим проблемам хирургии выживания, это может привести к смешанным переменным из самой операции, учитывая, что эндометриоз является воспалительным заболеванием и что в клинических условиях эндометриоз обычно развивается до любой хирургической процедуры. Внутрибрюшинная инъекция, с другой стороны, более точно моделирует ретроградную менструацию, которая, как считается, вызывает большинство поражений эндометриозом.
Овариэктомия часто выполняется на моделях грызунов для уменьшения изменчивости, введенной эструсным циклом; и поскольку эндометриоз является гормонозависимым заболеванием, в этих случаях вводятся супрафизиологические дозы эстрадиола. Эта практика, возможно, ограничивает применимость мышиной модели к заболеваниям человека. Наше исследование показывает, что овариэктомия не является необходимой для надежного создания поражений эндометриоза и что фаза эстрального цикла не влияет на способность устанавливать поражения.
Недостатком других моделей внутрибрюшинных инъекций является опора на субъективные показатели размера поражения или нагрузки. Хотя использование суппортов или других приборов может обеспечить объективные показатели, эти измерения регистрируются во время сбора повреждений и, следовательно, не могут быть проверены позднее и могут подвергаться внутривидовой изменчивости. В нашей модели гистологическая количественная оценка может быть выполнена и проверена в течение длительного времени после некропсии, а это означает, что тем, кто выполняет некропсию, не нужно иметь опыт в идентификации грубых поражений и легче ослеплять полученное вмешательство. Кроме того, как показывает наша работа, часть болезней может быть упущена, если полагаться только на грубую болезнь; кроме того, многие предполагаемые поражения могут быть физиологическими (например, лимфоидная ткань) или фиброзом. Наконец, взятие стандартизированных участков целых анатомических областей у каждой мыши еще больше снижает изменчивость. Такой подход к приобретению одинакового количества ткани на мышь предотвращает неизбежное подчеркивание, которое произойдет с небольшими образцами, и завышение больших образцов, тем более что может присутствовать микроскопическое заболевание.
В конечном счете, эти усовершенствования служат как для стандартизации, так и для упрощения подхода, в результате чего мышейная модель может изучать эндометриоз с высокой пропускной способностью. Эта модель является анализируемым методом для скрининга путей и мишеней лекарств, и наша лаборатория в настоящее время использует эту модель для исследования валидации лекарств. Эта модель особенно полезна при попытке определить относительную важность экспрессии аберрантных генов (или медикаментозного лечения) в донорском эндометрии по сравнению с перитонеальной средой реципиента. Он также может быть использован с репортерными мышами (как мы показали) и иммунокомпрометированными и нокаутными мышами.
Таким образом, мы предлагаем несколько важных инноваций, которые обеспечивают мышиную модель с высокой надежностью, воспроизводимостью и объективностью в изучении эндометриоза. Наш подход продвигает область, не только предоставляя простой, оптимизированный процесс индукции поражений, но и стандартизированный способ измерения и представления данных.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
У авторов нет конфликта интересов для раскрытия.
Acknowledgments
Мы хотели бы поблагодарить членов лаборатории Рейзеса за их критический обзор и понимание во время подготовки рукописи, а также ядра визуализации и гистологии в Научно-исследовательском институте Лернера за их помощь в сборе и анализе данных. Эта работа была поддержана за счет внутреннего грантового финансирования через Комитет по исследовательской программе в клинике Кливленда и внешнего гранта через Общество репродуктивных исследований и Bayer. Исследования в лаборатории Рейзеса также финансируются через VeloSano Bike to Cure, Центр передового опыта в области гинекологического рака и через кафедру Лоры Дж. Клиника Кливленда владеет авторским правом на Рисунок 1 и Рисунок 2.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Supplies for injecting PMSG into donor mouse | |||
| 1 mL Tuberculin syringe with 27G needle | Fisher Scientific | 14-826-87 | |
| Pregnant mare serum gonadotropin | Sigma-Aldrich | 9002-70-4 | |
| Supplies for necropsy of donor mouse and tissue processing | |||
| 6” serrated forceps, curved tip | Electron Microscopy Sciences | 72993-6C | |
| 70% ethanol solution | Pharmco | 33000HPLCCS4L | 70% solution dilute ethyl acetate 200 proof |
| Analytical balance | Mettler Toledo | ME54TE | |
| Carbon dioxide | TriGas Supplier | ||
| Dissecting tray | Fisher Scientific | S14000 | |
| No. 10 disposable scalpel | Fisher Scientific | NC9999403 | |
| Scissors, curved | Electron Microscopy Sciences | 72941 | |
| Scissors, straight | Electron Microscopy Sciences | 72940 | |
| Stereo microscope | Leica Microsystems | Leica SE 4 | For tissue dissection |
| Sterile phosphate buffered saline (PBS) | Institutional core facility supplies | ||
| Surgical instrument sterilization tray | Electron Microscopy Sciences | 66112-02 | |
| Tissue culture dishes | Fisher Scientific | 08-772E | |
| Weighing dishes | Fisher Scientific | 02-202-103 | |
| Supplies for injecting into recipient mouse | |||
| 1 cc syringe | BD Biosciences | 301025 | |
| 18 G needle | Fisher Scientific | 148265d | |
| 200 uL pipette tip | Fisher Scientific | 02-707-422 | |
| Double distilled water | Institutional core facility supplies | ||
| Latex bulb | Fisher Scientific | 03-448-21 | |
| Micro cover glass slip | VWR | 48366-067 | |
| Microscope slide | Fisher Scientific | 12-544-7 | |
| Standard light microscope | Leica Microsystems | DM IL | For evaluating vaginal cytology smears |
| Supplies for harvesting tissue from recipient mouse | |||
| 10% Buffered formalin | Fisher Scientific | SF100-4 | |
| Biopsy foam pads | Fisher Scientific | 22-038-222 | |
| Precision Digital Calipers | Electron Microscopy Sciences | 62065-40 | |
| Processing/embedding cassettes | Fisher Scientific | 22-272416 |
References
- Zondervan, K. T., Becker, C. M., Missmer, S. A.
- Schwartz, K., Llarena, N. C., Rehmer, J. M., Richards, E. G., Falcone, T. The role of pharmacotherapy in the treatment of endometriosis across the lifespan. Expert Opinion on Pharmacotherapy. 21 (8), 893-903 (2020).
- Giudice, L. C.
- D'Hooghe, T. M., Debrock, S. Endometriosis, retrograde menstruation and peritoneal inflammation in women and in baboons. Human Reproduction Update. 8 (1), 84-88 (2002).
- Ahn, S. H., et al. Pathophysiology and immune dysfunction in endometriosis. BioMed Research International. 2015, (2015).
- Falcone, T., Flyckt, R.
- Vercellini, P., et al. Association between endometriosis stage, lesion type, patient characteristics and severity of pelvic pain symptoms: a multivariate analysis of over 1000 patients. Human Reproduction. 22 (1), 266-271 (2007).
- Bulun, S. E., et al.
- Brueggmann, D., et al. Novel three-dimensional in vitro models of ovarian endometriosis. Journal of Ovarian Research. 7, 17 (2014).
- Dodds, K. N., Beckett, E. A. H., Evans, S. F., Hutchinson, M. R. Lesion development is modulated by the natural estrous cycle and mouse strain in a minimally invasive model of endometriosis. Biology of Reproduction. 97 (6), 810-821 (2017).
- Martinez, J., Bisbal, V., Marin, N., Cano, A., Gómez, R. Noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (144), (2019).
- Pelch, K. E., Sharpe-Timms, K. L., Nagel, S. C. Mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (59), e3396 (2012).
- Nishimoto-Kakiuchi, A., et al. Spontaneous endometriosis in cynomolgus monkeys as a clinically relevant experimental model. Human Reproduction. 33 (7), Oxford, England. 1228-1236 (2018).
- Nair, H. B., et al. An efficient model of human endometriosis by induced unopposed estrogenicity in baboons. Oncotarget. 7 (10), 10857-10869 (2016).
- Laganà, A. S., et al. Translational animal models for endometriosis research: a long and windy road. Annals of Translational Medicine. 6 (22), 431 (2018).
- Bellofiore, N., et al. First evidence of a menstruating rodent: the spiny mouse (Acomys cahirinus). Amercian Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (1), 1-11 (2017).
- Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. Rodent models of experimental endometriosis: identifying mechanisms of disease and therapeutic targets. Current Women's Health Reviews. 14 (2), 173-188 (2018).
- Bilotas, M. A., et al. Interplay between endometriosis and pregnancy in a mouse model. PloS One. 10 (4), 0124900 (2015).
- Peterse, D., et al. Of mice and women: a laparoscopic mouse model for endometriosis. Journal of Minimally Invasive Gynecology. 25 (4), 578-579 (2018).
- Richards, E. G., et al. KLF11 is an epigenetic mediator of DRD2/dopaminergic signaling in endometriosis. Reproductive Sciences. 224 (8), Thousand Oaks, Calif. 1129-1138 (2017).
- Jones, R. L., Lang, S. A., Kendziorski, J. A., Greene, A. D., Burns, K. A. Use of a Mouse Model of Experimentally Induced Endometriosis to Evaluate and Compare the Effects of Bisphenol A and Bisphenol AF Exposure. Environmental Health Perspectives. 126 (12), 127004 (2018).
- Greaves, E., et al. A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium. The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).
- Nothnick, W. B., Graham, A., Holbert, J., Weiss, M. J. miR-451 deficiency is associated with altered endometrial fibrinogen alpha chain expression and reduced endometriotic implant establishment in an experimental mouse model. PloS One. 9 (6), 100336 (2014).
