यहां हम इंट्रापोर्टल आइलेट प्रत्यारोपण को सफलतापूर्वक निष्पादित करने पर परिष्कृत सर्जिकल प्रक्रियाओं को प्रस्तुत करते हैं, जो चूहों में एक नैदानिक रूप से प्रासंगिक लेकिन तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण सर्जिकल प्रक्रिया है।
यद्यपि जिगर को वर्तमान में नैदानिक सेटिंग्स में मानव आइलेट के लिए प्राथमिक प्रत्यारोपण स्थल के रूप में स्वीकार किया जाता है, आइलेट को अधिकांश कृंतक प्रीक्लिनिकल आइलेट प्रत्यारोपण अध्ययनों में गुर्दे के कैप्सूल के तहत प्रत्यारोपित किया जाता है। इस मॉडल का आमतौर पर उपयोग किया जाता है क्योंकि मुरीन इंट्राहेपेटिक आइलेट प्रत्यारोपण तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है, और चूहों का एक उच्च प्रतिशत सर्जिकल जटिलताओं से मर सकता है, विशेष रूप से इंजेक्शन साइट से रक्तस्राव के बाद प्रत्यारोपण। इस अध्ययन में, दो प्रक्रियाएं जो पोस्ट-इन्फ्यूजन पोर्टल शिरा रक्तस्राव की घटनाओं को कम कर सकती हैं, का प्रदर्शन किया जाता है। पहली विधि इंजेक्शन साइट पर एक अवशोषित हेमोस्टेटिक जिलेटिन स्पंज लागू करती है, और दूसरी विधि में वसा ऊतक के माध्यम से आइलेट इंजेक्शन सुई को पहले और फिर रक्तस्राव को रोकने के लिए एक शारीरिक बाधा के रूप में वसा ऊतक का उपयोग करके पोर्टल नस में प्रवेश करना शामिल है। दोनों विधियां प्रभावी रूप से रक्तस्राव-प्रेरित माउस की मौत को रोक सकती हैं। आइलेट वितरण और आइलेट थ्रोम्बोसिस पोस्ट-ट्रांसप्लांटेशन के सबूत दिखाने वाले पूरे जिगर अनुभाग, इंट्राहेपेटिक आइलेट प्रत्यारोपण के लिए एक विशिष्ट विशेषता, प्रस्तुत किए गए थे। ये बेहतर प्रोटोकॉल इंट्राहेपेटिक आइलेट प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं को परिष्कृत करते हैं और प्रयोगशालाओं को पूर्व-नैदानिक सेटिंग्स में आइलेट अस्तित्व और कार्य का अध्ययन करने के लिए प्रक्रिया स्थापित करने में मदद कर सकते हैं।
पोर्टल शिरा के माध्यम से इंट्रापोर्टल आइलेट प्रत्यारोपण (आईआईटी) नैदानिक सेटिंग्स में मानव आइलेट प्रत्यारोपण के लिए सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली विधि है। माउस आईआईटी मॉडल आइलेट प्रत्यारोपण का अध्ययन करने और होनहार इंटरवेंशनल दृष्टिकोणों का परीक्षण करने का एक शानदार अवसर प्रदान करता है जो आइलेट प्रत्यारोपण की प्रभावकारिता को बढ़ा सकता है। IIT को पहली बार 1970 के दशक में वर्णित किया गया था और इसका उपयोग कई समूहों द्वारा किया गया था1,2,3,4,5। इसने वर्ष 20006,7 में मानव आइलेट प्रत्यारोपण में सफलता के बाद लोकप्रियता हासिल की। हालांकि, अधिकांश आइलेट प्रत्यारोपण अध्ययनों ने अपनी आसान सफलता के कारण प्रयोगात्मक आइलेट प्रत्यारोपण के लिए एक पसंदीदा साइट के रूप में गुर्दे के कैप्सूल का उपयोग किया। इसके विपरीत, आईआईटी अधिक तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है और आइलेट प्रत्यारोपण अध्ययन 8,9 के लिए कम बार उपयोग किया जाता है। आईआईटी के विपरीत, हालांकि, गुर्दे के कैप्सूल के तहत प्रत्यारोपित आइलेट्स तत्काल रक्त-मध्यस्थता भड़काऊ प्रतिक्रिया से पीड़ित नहीं होते हैं जो घनास्त्रता, सूजन और यकृत ऊतक इस्केमिया की विशेषता है, और इस प्रकार यकृत में प्रत्यारोपित आइलेट्स की तुलना में बेहतर कार्य होता है। इसलिए, किडनी कैप्सूल मॉडल पूरी तरह से मानव आइलेट प्रत्यारोपण 10,11,12 में आइलेट द्वारा सामना किए गए तनावों की नकल नहीं कर सकता है।
चूहों में आईआईटी की प्रमुख जटिलताओं में से एक प्रत्यारोपण के बाद इंजेक्शन साइट से खून बह रहा है, जो विभिन्न माउस उपभेदों के बीच मृत्यु दर का 10-30% का कारण बन सकता है। इस पेपर में, रक्तस्राव को अधिक तेजी से और सुरक्षित रूप से रोकने और आईआईटी के बाद माउस मृत्यु दर को कम करने के लिए दो परिष्कृत दृष्टिकोण विकसित किए गए हैं। इन परिष्कृत विवरणों के दृश्य प्रदर्शन से शोधकर्ताओं को इस तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण प्रक्रिया के प्रमुख चरणों की पहचान करने में मदद मिलेगी। इसके अलावा, प्राप्तकर्ता के जिगर में आइलेट ग्राफ्ट का स्थान हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन (एच एंड ई) दाग यकृत ऊतक (पूरे अनुभाग) की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा द्वारा निर्धारित किया गया था, जिसमें प्रत्यारोपित आइलेट्स होते हैं।
इस अध्ययन में, दो बेहतर प्रक्रियाएं जो रक्तस्राव को रोक सकती हैं और माउस आईआईटी के दौरान माउस मृत्यु दर को कम कर सकती हैं, का प्रदर्शन किया गया है। यह अध्ययन शोधकर्ताओं को आइलेट प्रत्यारोपण मॉडल की कल्प…
The authors have nothing to disclose.
इस अध्ययन को दिग्गजों के मामलों के विभाग (VA-ORD BLR &D मेरिट I01BX004536) और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान द्वारा समर्थित किया गया था # 1R01DK105183, DK120394, DK118529, HW के लिए। हम आपको श्री माइकल ली और सुश्री लिंडसे स्वाबी को भाषा संपादन के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं
10% Neutral buffered formalin v/v | Fisher Scientific | 23426796 | |
1 mL Syringe with needle | AHS | AH01T | |
20 mL Syringe | BD | 301031 | |
25G x 5/8" hypodermic needles | BD | 305122 | |
Alcohol prep pads, sterile | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
Animal Anesthesia system | VetEquip, Inc. | 901806 | |
Buprenorphine hydrochloride, injection | Par Sterile Products, LLC | NDC 42023-179-05 | |
Centrifuge tubes, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
CMRL-1066 | Corning | 15110CV | |
DMEM | Corning | 10013CV | |
Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade | Fisher Scientific | BP2818500 | |
Extra fine Micro Dissecting scissors 4” straight sharp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5882 | |
Fetal bovine serum (FBS) | Corning | 35011CV | |
FreeStyle Glucose meter | Abbott | Lite | |
FreeStyle Blood Glucose test strips | Abbott | Lite | |
Gelfoam (absorbable gelatin sponge, USP) | Pharmacia & Upjohn Company | 34201 | |
Graefe forceps 4” extra delicate tip | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5136 | |
Heated pad | Amazon | B07HMKMBKM | |
Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25” | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-7850 | |
Insulin syringe with 27-gauge needle | BD | 879588 | |
Iodine prep pads | Fisher Scientific | 19-027048 | |
Isoflurane | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
Penicillin/streptomycin (P/S) | HyClone | SV30010 | |
Polypropylene Suture 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
Polypropylene Suture 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
Sodium chloride, 0.9% intravenous solution | VWR | 2B1322Q | |
Streptozocin (STZ) | Sigma | S0130 | |
Surgical drape, sterile | Med-Vet International | DR1826 | |
Tissue Cassette | Fisher Scientific | 22-272416 |