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Biology

योनि लैवेज का उपयोग करके कृंतक एस्ट्रस चक्र निगरानी: सामान्य चक्र जैसी कोई चीज नहीं

Published: August 30, 2021 doi: 10.3791/62884
Automatic Translation
1, 1, 2, 1, 1, 2
1Department of Neurosurgery, Brain Injury Research Center, UCLA, David Geffen School of Medicine, 2Department of Psychology, Pepperdine University, Seaver College

Summary

यह अध्ययन मादा चूहों से जुड़े प्रयोगात्मक डिजाइनों में विचार करने के लिए महत्वपूर्ण कारकों का विवरण देता है। एक बड़े अर्थ में, ये डेटा कलंक को कम करने और अधिक समावेशी नैदानिक और हस्तक्षेप उपकरणों के विकास में सहायता करने का काम करते हैं।

Abstract

वर्तमान पद्धति मादा स्प्रैग डॉली (एसडी) किशोर चूहों के एस्ट्रस चक्र की निगरानी के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य, मानकीकृत और लागत प्रभावी दृष्टिकोण स्थापित करती है। यह अध्ययन हार्मोनल चक्रों की जटिलता और एक विश्वसनीय और वैध निगरानी तकनीक के निर्माण के लिए आवश्यक समझ के व्यापक स्पेक्ट्रम को दर्शाता है। प्रमुख प्रयोगात्मक डिजाइन और प्रक्रियात्मक तत्वों की गहन परीक्षा के माध्यम से, चक्र और इसके मौलिक सिद्धांतों का यह विवरण भविष्य की प्रतिकृति के लिए गलत धारणाओं को और समझने और विघटित करने के लिए एक रूपरेखा प्रदान करता है।

योनि लैवेज को नियोजित करने वाली नमूना संग्रह प्रक्रिया की रूपरेखा के साथ, प्रक्रिया प्रोस्ट्रस, एस्ट्रस, मेटेस्ट्रस और डायस्ट्रस के चार-चरण मॉडल में डेटा वर्गीकरण के तंत्र का वर्णन करती है। इन चरणों को एक नए प्रस्तावित दृष्टिकोण की विशेषता है, जो संग्रह के समय योनि द्रव की स्थिति, सेल प्रकार (ओं) मौजूद, सेल व्यवस्था और सेल मात्रा के 4 वर्गीकृत निर्धारकों का उपयोग करता है। प्रत्येक चरण की विविधताएं, अनुकूल और प्रतिकूल नमूने, चक्रीयता और एसाइक्लिसिटी के बीच का अंतर, और एकत्रित वर्गीकृत घटकों के ग्राफिक चित्रण डेटा के प्रभावी व्याख्यात्मक और संगठनात्मक प्रथाओं के साथ प्रस्तुत किए जाते हैं। कुल मिलाकर, ये उपकरण पहली बार मात्रात्मक डेटा श्रेणियों के प्रकाशन की अनुमति देते हैं, जिससे प्रतिकृति पर वर्गीकरण कारकों का मानकीकरण होता है।

Introduction

उपन्यास योगदान
कृंतक एस्ट्रस चक्र को कल्याण के एक आवश्यक संकेतक के रूप में पहचाना गया है। हालांकि, जांचकर्ताओं के बेहोश पूर्वाग्रह और महिला शरीर के बारे में गलत व्याख्याएं वैज्ञानिक समुदाय में बाधा डालती हैं। "एस्ट्रस" शब्द की बहुत व्युत्पत्ति का तात्पर्य हीनता और नकारात्मकता की भावना से है। यूरिपिड्स ने "उन्माद" या पागलपन का वर्णन करने के लिए इस शब्द का उपयोग किया, होमर ने आतंक का वर्णन किया, और प्लेटो ने एक तर्कहीन ड्राइव का वर्णन किया। यह अध्ययन इस बात पर प्रकाश डालता है कि ये आदिम दृष्टिकोण वर्तमान वैज्ञानिक समुदाय को कैसे प्रभावित करते हैं और एक उपन्यास मोज़ेक प्रतिमान के माध्यम से इन चिंताओं को संबोधित करते हैं- पहले से अध्ययन किए गए तरीकों का एक अद्यतन संयोजन, अधिक व्यापक दृष्टिकोण के दायरे में विस्तारित।

इस तकनीक का अध्ययन और उपयोग आवश्यक है, सबसे पहले, क्योंकि कोई मानकीकृत और व्यापक निगरानी तकनीक नहीं है, और डेटा व्याख्या प्रथाएं अस्पष्ट हो सकती हैं। दूसरा, हालांकि एस्ट्रस चक्र विशेषताएं अध्ययन किए जा रहे व्यक्तिगत चूहों पर निर्भर हैं, वे अक्सर सार्वभौमिक होते हैं। तीसरा, जबकि हार्मोनल चक्र नियमित और फायदेमंद प्रक्रियाएं हैं, वे 'ट्रांसलेशन टू ह्यूमन' अनुभाग में खोजे गए खतरनाक कलंक से घिरे हुए हैं। इस अध्ययन का उद्देश्य इन तीन मुद्दों को तीन तरीकों से संबोधित करना है- (ए) एक गहन चक्र निगरानी तकनीक का वर्णन करके और यह स्पष्ट करके कि परिणामों की व्याख्या कैसे की जा सकती है, (बी) प्रत्येक चक्र की अखंडता और व्यक्तित्व को बनाए रखने वाले तरीकों को रेखांकित करके, और (सी) उन गलत धारणाओं पर ध्यान देकर जो निराधार प्रथाओं को बनाए रखते हैं।

यह अध्ययन किशोर चूहों पर अपने ध्यान में भी अद्वितीय है, महत्वपूर्ण विकासात्मक परिवर्तनों द्वारा चिह्नित एक अवधि जो वयस्कता में विभिन्न व्यवहार, शारीरिक और शारीरिक अभिव्यक्तियों पर प्रकाश डालतीहै 1. सामान्य पूर्वाग्रहों को विघटित करते हुए एक कम शोधित आबादी में हार्मोनल चक्रों की निगरानी के लिए एक मानकीकृत प्रयोगात्मक डिजाइन का निर्माण विश्वसनीय और वैध हार्मोनल सहसंबंध 2,3,4 के विकास और स्थिति-निर्भर चक्र व्यवधानों के निर्धारण के लिए अनुमति देगा 5,6,7,8,9,10 . आखिरकार, ये सस्ता माल नैदानिक मानदंडों, उपचारों और विभिन्न कल्याण चिंताओं के हस्तक्षेप का विस्तार करने के लिए काम करते हैं।

मौलिक परिभाषाएँ और उपयोग
एस्ट्रस चक्र गतिशील शारीरिक प्रक्रियाओं का एक संग्रह है जो तीन दोलन महिला सेक्स स्टेरॉयड हार्मोन के जवाब में होता है: एस्ट्राडियोल, ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन (एलएच), और प्रोजेस्टेरोन (चित्रा 1 ए, बी)। अंतःस्रावी और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के बीच बातचीत चक्र को विनियमित करती है, जो अक्सर 4-5 दिनों तक बनी रहती है और यौन परिपक्वता की शुरुआत से प्रजनन बुढ़ापे और / इसे हार्मोन के स्तर के आधार पर अलग-अलग श्रेणियों में विभाजित किया गया है- आमतौर पर डायस्ट्रस (डीआईई), प्रोस्ट्रस (प्रो), एस्ट्रस (ईएसटी), और मेटेस्ट्रस (एमईटी) के 4 चरणों में, जो एक परिपत्र फैशन में प्रगति करते हैं। अध्ययन13 की प्रकृति के आधार पर विभाजन की संख्या 3 चरणों11 से 13 चरण 12 तक हो सकतीहै। डिवीजनों की कम संख्या अक्सर एमईटी को एक चरण के रूप में बाहर करती है और इसे अल्पकालिक संक्रमणकालीन अवधि के रूप में वर्गीकृत करती है। उच्च संख्या में आमतौर पर उपखंड शामिल होते हैं जो ट्यूमर के विकास या सहज छद्म गर्भावस्था, भ्रूण प्रत्यारोपण12,14,15 के बिना गर्भावस्था की शारीरिक स्थिति जैसी घटनाओं के करीब निरीक्षण की अनुमति देते हैं।

इस अध्ययन में, चरणों को योनि नहर के घटकों के माध्यम से पहचाना गया था, जिसका नाम 3 वर्गीकृत निर्धारक-सेल प्रकार (ओं) वर्तमान, सेल व्यवस्था और सेल मात्रा (चित्रा 2 ए-डी) है। जबकि इस अध्ययन में योनि द्रव की स्थिति की निगरानी नहीं की गई थी, इसे चौथे वर्गीकृत घटक के रूप में शामिल करने की सिफारिश की जाती है। योनि द्रव की जांच के बारे में अधिक जानकारी संदर्भ सूची16 में पाई जा सकती है। वर्गीकृत घटकों की जांच योनि लैवेज के माध्यम से कोशिकाओं को निकालकर की जा सकती है, जो आधुनिक दिन एस्ट्रस चक्र निगरानी में अनुशंसित प्राथमिक तकनीक है। जबकि प्रत्येक चरण के भीतर गहन शारीरिक प्रक्रियाएं इस अध्ययन के दायरे से बाहर हैं, साहित्य17 में अधिक जानकारी पाई जा सकती है।

इस एस्ट्रस चक्र निगरानी तकनीक का उपयोग और निरंतर विकास सेक्स स्टेरॉयड हार्मोन और शारीरिक प्रणालियों के कार्य जैसे हृदय प्रणाली18, अंतःस्रावी तंत्र8 और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र 19,20,21 के बीच संबंधों में निहित है। इसी समय, एस्ट्रस चक्र निगरानी हमेशा आवश्यक नहीं हो सकती है जब महिला कृन्तकों को 22,23,24,25 शामिल किया जाता है। इसके बजाय, यह विचार करना महत्वपूर्ण है कि क्या अध्ययन के विशिष्ट क्षेत्र में सेक्स मतभेदों की सूचना दी गई है, जिसे प्रकाशित समीक्षा22,23 में आगे खोजा जा सकता है। यद्यपि अनुसंधान जांच के व्यापक स्पेक्ट्रम में एस्ट्रस चक्र निगरानी महत्वपूर्ण है, लेकिन इसे प्रयोगों में महिला कृन्तकों को शामिल करने में बाधा के रूप में नहीं देखा जाना चाहिए। हालांकि यह तकनीक जटिल और समय लेने वाली दिखाई दे सकती है, प्रक्रिया को पूरा करने में 15 मिनट से भी कम समय लग सकता है, अन्वेषक के आधार पर, और लागत प्रभावी है। कुल मिलाकर, वैज्ञानिक अध्ययनों में महिला कृन्तकों का समावेश शारीरिक प्रणालियों, विभिन्न स्थितियों और विकृतियों और सामान्य कल्याण की समझ के लिए फायदेमंद है, क्योंकि ये विकास मुख्य रूप से पुरुष शरीर टेम्पलेट पर आधारित हैं।

कृंतक में सार्वभौमिक मापदंडों और प्राकृतिक परिवर्तनशीलता
मानक चक्र पैटर्न को परिभाषित करने, तुलनात्मक और विश्लेषणात्मक उद्देश्यों के लिए पैरामीटर निर्धारित करने और असामान्यताओं और बाहरी लोगों का पता लगाने के लिए "विशिष्ट" के रूप में देखे जाने वाले पहलुओं के लिए श्रेणियों की स्थापना आवश्यक है। इसी समय, यह पहचानना भी महत्वपूर्ण है कि प्रत्येक चूहे का चक्र अद्वितीय है, और पशु तनाव, शारीरिक प्रक्रियाओं और पर्यावरणीय परिस्थितियों के आधार पर विचलन की उम्मीद है। वास्तव में, एस्ट्रस चक्र के सबसे "सामान्य" पहलुओं में से एक परिवर्तनशीलता है। यह कुल चक्र लंबाई में देखा जाता है, जिसमें 3-38 दिन26,27 की सीमा होती है; यौन परिपक्वता की आयु जो 32-34 दिनों से लेकर कई हफ्तों तक हो सकती है 28,29,30; जिसे एसाइक्लिकल11 माना जाता है, और वर्गीकृत निर्धारक पैटर्न11,13। कुल मिलाकर, एस्ट्रस चक्र के लिए कोई सार्वभौमिक टेम्पलेट नहीं है, और वैज्ञानिक समुदाय और आम जनता दोनों के लिए इसका अनुवाद करना प्रयोगात्मक प्रक्रिया का एक महत्वपूर्ण हिस्सा है।

प्रायोगिक समय बिंदु और विकासात्मक आयु
परिवर्तनशीलता के इस सिद्धांत को पहचानना एक विश्वसनीय और वैध प्रयोगात्मक डिजाइन के निर्माण में सहायता करता है। उदाहरण के लिए, एस्ट्रस साइक्लिंग मॉनिटरिंग की शुरुआत चूहों के शारीरिक और शारीरिक विकास पर निर्भर करती है, जो पर्यावरणीय और शारीरिक कारकों के आधार पर भिन्न होती है। निगरानी योनि खोलने (वीओ) के विकास तक शुरू नहीं हो सकती है, जो योनि नहर (चित्रा 3 ए-डी) के आंतरिक भाग की ओर जाता है जो योनि से घिरा हुआ बाहरी योनि छिद्र है। जबकि वीओ अक्सर 32 और 34 दिनों की उम्र के बीच पूरी तरह से विकसित होता है, यह प्रत्येक विषय के लिए व्यक्तिगत रहता है, और प्रक्रिया के बारे में बहुत कुछ अज्ञात रहता है। इस उद्घाटन का उपयोग यौन परिपक्वता की शुरुआत की पहचान करने के लिए किया गया है, जिसे एस्ट्राडियोल31 की वृद्धि, हाइपोथैलेमिक-पिट्यूटरी-डिम्बग्रंथि अक्ष32 की परिपक्वता और चूहों में पहला ओव्यूलेशन 17,33,34,35 से जोड़ा गया है। हालांकि, हाल के प्रकाशनों में पाया गया है कि यह केवल प्रजनन विकास का एक अप्रत्यक्ष मार्कर है, क्योंकि यह प्रतिकूल वातावरण31 में हार्मोनल और विकासात्मक घटनाओं से असंबद्ध हो सकता है और यौन परिपक्वता33 के बजाय एस्ट्राडियोल के स्तर में परिवर्तन का प्रतिनिधित्व कर सकता है। इसलिए, विकासात्मक आयु निर्धारित करने के लिए और एस्ट्रस चक्र निगरानी 36 के लिए एक क्वालीफायर के रूप मेंवीओ पर पूरी तरह से भरोसा नहीं करने की सिफारिश की जाती है, बल्कि यौन परिपक्वता की शुरुआत को चिह्नित करने के लिए उपकला कोशिकाओं30 के पहले ईएसटी चरण और कॉर्निफिकेशन की उपस्थिति का भी उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

शरीर का वजन कृन्तकों30,37 में किशोरावस्था की अवधि के दौरान विकासात्मक आयु के साथ विशेष रूप से सहसंबद्ध है और इसलिए इस अवधि में विकासात्मक आयु निर्धारित करने में भी सहायता कर सकता है। इस घटना से संबंधित प्रस्तावित तंत्र में प्रजनन विकास के लिए आवश्यक हार्मोन की उत्तेजना शामिल है, जैसे कि विकास हार्मोन, और भूख नियामक, लेप्टिन30 द्वारा हाइपोथैलेमिक-पिट्यूटरी अधिवृक्क (एचपीए) अक्ष का निषेध। हालांकि, प्रजातियों और विक्रेता प्रदाताओं में चूहों के बीच देखे गए बड़े विचरण के कारण विकासात्मक आयु के एकमात्र संकेतक के रूप में इस उपाय का उपयोग करने की सिफारिश नहींकी जाती है। वीओ और शरीर के वजन के विकास में देखी गई परिवर्तनशीलता समग्र प्रयोगात्मक प्रक्रिया में अवधारणा के महत्व का उदाहरण देती है।

मनुष्यों के लिए अनुवाद: सांस्कृतिक और वैज्ञानिक संदर्भ
पशु-से-मानव प्रजनन अध्ययन का अनुवादात्मक संबंध द्विदिश है। पशु-आधारित अध्ययनों के परिणाम प्रभावित करते हैं कि मानव प्रक्रियाओं का मूल्यांकन, संपर्क और विश्लेषण कैसे किया जाताहै 39. मानव प्रजनन प्रणाली और इससे संबंधित प्रक्रियाओं की धारणा प्रभावित करती है कि जानवरों का अध्ययन कैसे किया जाता है। वास्तव में, इस क्षेत्र में आगे के शोध के लिए सबसे जोरदार संकेतों में से एक हार्मोनल चक्रों से संबंधित पक्षपाती समाजशास्त्रीय मान्यताओं से उपजा है जो वैज्ञानिक प्रक्रिया को प्रभावित करते हैं। इनमें से कई सम्मेलन मासिक धर्म पर चर्चा करने के लिए एक सामान्य सांस्कृतिक घृणा से प्राप्त होते हैं, जिसके कारण अच्छी तरह से प्रमाणित ज्ञान40,41 में डेटा अंतर हो गया है। इसमें परिणामों का एक स्पेक्ट्रम है जो मामूली से घातक तक फैला हुआ है- ठंडे बस्ते में डालने की ऊंचाई और स्मार्टफोन के आकार से लेकर पुलिस बॉडी आर्मर फिटिंग तक और मिस्ड कैंसर निदान42.

मासिक धर्म का वर्णन अस्वास्थ्यकर, विनाशकारी और विषाक्त के रूप में- सम्मानित ग्रंथों, मीडिया, शब्दकोशों और चिकित्सा शिक्षाओं में देखा जाता है- वैज्ञानिक प्रकाशनों द्वारा संरक्षित किया जाता है। यह हार्मोनल चक्रों के गलत और पक्षपाती विवरणों के माध्यम से होता है, इसके न्यूरोएंडोक्राइन समकक्षों और पर्यावरणीय प्रभावों से प्रजनन प्रणाली का अलगाव, और 'गर्भ धारण करने में विफलता' के रूप में एक चक्र के पूरा होने के न्यूनतावादी परिप्रेक्ष्य 43,44। यह अस्वस्थ प्रयोगात्मक प्रथाओं के निर्माण की ओर जाता है, जैसे कि बाहरी चर की चूक जो हार्मोनल चक्रों को प्रभावित करती है, पूरी तरह से शारीरिक विकास के आधार पर शुरुआत और समापन बिंदुओं का निर्धारण करती है, और परिपत्र फैशन के बजाय रैखिक में चक्र की उन्नति को मापती है। समाजशास्त्रीय कारकों और जैविक परिणामों के बीच सीधे संबंध के बावजूद, इसे अक्सर वैज्ञानिक साहित्य में नहीं माना जाता है। अधिक समग्र प्रकाशनों43,44,45 के निरीक्षण के माध्यम से, शोधकर्ता इन कलंकों को विघटित कर सकते हैं और अधिक विश्वसनीय और वैध प्रयोगात्मक डिजाइन बना सकते हैं।

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Protocol

इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित सभी हैंडलिंग और प्रक्रिया विधियां राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) पशु देखभाल और उपयोग दिशानिर्देशों के साथ संरेखित होती हैं और पेपरडाइन विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) और यूसीएलए चांसलर की पशु अनुसंधान समिति (एआरसी) द्वारा अनुमोदित की गई हैं।

1. पशु देखभाल और उपयोग

  1. शक्ति विश्लेषण के अनुसार संख्या में मादा चूहों का अधिग्रहण करें, और व्हिटन प्रभाव या अधिक सुसंगत साइकिल चालन 46 को बढ़ावा देने के लिए नरचूहों। ज्ञात डेटाबेस47 में अध्ययन के उद्देश्य के आधार पर तनाव का निर्धारण करें।
    नोट: वर्तमान डेटा एक सहयोगी अध्ययन के हिस्से के रूप में पेपरडाइन विश्वविद्यालय और यूसीएलए प्रयोगशालाओं दोनों में स्थित पुरुष एसडी चूहों की उपस्थिति में महिला किशोर एसडी इंटरनेशनल जेनेटिक स्टैंडर्डाइजेशन प्रोग्राम (आईजीएस) को दर्शाता है। ये चूहे 28 दिनों की उम्र में अलग-अलग समूहों में पहुंचे, और तीव्र और पुरानी स्तरों पर मतभेदों को प्रदर्शित करने के लिए 10 या 20 दिनों के लिए एस्ट्रस चक्र प्रगति की निगरानी की गई, जो 34 दिनों की उम्र से शुरू हुई (7-दिवसीय त्वरण अवधि के बाद)।
  2. हैंडलिंग से पहले, नए वातावरण में परिवहन और समायोजन के बाद शारीरिक स्थिरीकरण के लिए एक संगरोध और / या एक त्वरण अवधि की अनुमति दें।
    नोट: 3-दिवसीय न्यूनतम अवधि का हवाला दिया गया है, जिसमें 7-दिन की अवधि 48,49,50,51,52 की सिफारिश की गई है। कुल मिलाकर, यह परिवहन की स्थिति, पशु तनाव और अध्ययन उद्देश्यों पर निर्भर है।
  3. सुनिश्चित करें कि तनाव एक त्वरण अवधि के उपयोग के साथ कम हो जाता है, क्योंकि तनाव उचित प्रजनन प्रणाली के कामकाज को बाधित कर सकताहै 53. हालांकि, इसे खत्म करने का प्रयास करके अधिक क्षतिपूर्ति न करें, क्योंकि मध्यम मात्रा में तनाव जानवरों की भलाई के लिए फायदेमंद है51.
  4. एक तापमान में मेजबान चूहों- (68-79 डिग्री फ़ारेनहाइट, यानी, 20-26 डिग्री सेल्सियस) और आर्द्रता-नियंत्रित (30-70%) वातावरण विवेरियम या प्रयोगशाला प्रबंधकों से संपर्क करके और इन सुविधाओं को सुनिश्चित करके। कंपनी की वेबसाइट पर सूचीबद्ध पोषक तत्वों के घटकों और सप्ताह में एक बार पिंजरे की सफाई के साथ पानी और चाउ विज्ञापन लिबिटम वितरित करें।
    नोट: इस अध्ययन में, चूहों को 1 9 "एक्स 10" एक्स 8 "स्पष्ट पुन: प्रयोज्य प्लास्टिक पिंजरों में सेक्स द्वारा अलग किए गए 2 के समूहों में रखा गया था और कॉर्नकोब बिस्तर तक पहुंच थी जिसे सप्ताह में एक बार बदल दिया गया था। तापमान 70 डिग्री फ़ारेनहाइट और आर्द्रता 35-79% पर बनाए रखा गया था, औसतन 62% के साथ।
  5. कम सापेक्ष आर्द्रता के स्तर और चरम तापमान के प्रमाण के लिए पूंछ और पैर की उंगलियों के रिंगटेल या इस्केमिक नेक्रोसिस के विकास की जांच करें, जिससे जैविक प्रतिक्रियाओं का प्रत्यावर्तन हो सकता है।
    नोट: तापमान और आर्द्रता प्रजनन प्रणाली, यौन परिपक्वता, और एस्ट्रस चक्रीयता 54,55,56,57,58 के लिए महत्वपूर्ण हैं।
  6. प्रयोगशाला अंतरिक्ष में प्रकाश स्रोतों की समान मात्रा जमा करके आवास स्थान में उचित और संतुलित रोशनी सुनिश्चित करें जो समय-नियंत्रित प्रकाश: अंधेरे प्रणाली पर कार्य करते हैं।
    नोट: यहां, 12: 12-एच प्रकाश: अंधेरे चक्र, 06: 00-18: 00 घंटे से रोशनी के साथ, 2,550-लुमेन रैखिक एलईडी बल्बों द्वारा नियंत्रित किया गया था।
  7. जानवरों के रंजकता, आयु, तनाव, लिंग और हार्मोनल स्थिति की विविधताओं के आधार पर52 प्रदान की गई लक्स आवश्यकताओं का पालन करें।
    नोट: जब शोधकर्ता एकत्र किए गए सेल नमूनों को वर्गीकृत करते हैं, तो लगातार प्रकाश उचित दृश्य पहचान और विश्वसनीय स्टेजिंग59 के लिए अनुमति देगा। प्रकाश की अवधि और तीव्रता सीधे प्रजनन प्रणाली, यौन परिपक्वता और एस्ट्रस साइकिल चालन 54,55,56,57,60,61 से संबंधित है।

2. उपकरण और प्रयोग की तैयारी

  1. वर्गीकृत निर्धारकों की समीक्षा करें ( चित्रा 2 ए में देखा गया): एस्ट्रस चक्र के प्रत्येक चरण की पहचान कैसे करें और माइक्रोस्कोप और कैमरा उपकरण कैसे संचालित करें।
  2. सुनिश्चित करें कि निगरानी किए जाने वाले प्रत्येक विषय यौन परिपक्वता तक पहुंच गया है और विकास-वीओ, शरीर के वजन और उम्र के उचित संकेतक दिखाता है। चूहों का वजन और सटीक तुलना के लिए प्रत्येक दिन एक ही समय में वीओ के लिए उनकी जांच करें और उन्हें अनुमोदित हैंडलिंग विधि के साथ स्थानांतरित करें। विश्वविद्यालय से संबद्ध पशुचिकित्सक से परामर्श करें यदि कोई जानवर अपने पिछले शरीर के वजन का 20% से अधिक खो देता है।
    नोट: वीओ मूत्रमार्ग खोलने और गुदा के लिए कपाल के लिए दुम रहता है, दोनों के बीच स्थित है, जैसा कि चित्रा 3 में दर्शाया गया है।
  3. चूंकि ये कारक तनाव-निर्भर हैं, विनिर्देशों के लिए आपूर्तिकर्ता के साथ जांच करें और प्रयोगशाला62 के लिए विशिष्ट पर्यावरणीय कारकों पर विचार करें।
    नोट: सामान्य तौर पर, यह 32-34 दिनों की उम्र और एसडी चूहों के लिए 75-150 ग्राम63 से लेकर औसत शरीर के वजन के बीच होगा और पहले एक झिल्लीदार म्यान द्वारा कवर किए गए एक परिपत्र आकार के उद्घाटन द्वारा इंगित किया जाता है।
  4. संक्रमणकालीन नमूने एकत्र करने से रोकने के लिए निगरानी की जा रही चूहों के समूह के लिए उपयुक्त एक नमूना संग्रह अवधि का चयन करें। सबसे पहले, उस समय को निर्धारित करने के लिए पूरे दिन 2 या 3 अलग-अलग टाइमपॉइंट्स पर कुछ जानवरों का नमूना लें जहां अधिकांश चक्र चरण मौजूद हैं (उदाहरण के लिए, विभिन्न जानवरों के लिए 12:00 घंटे, 13:00 घंटे और 14:00 घंटे पर नमूनाकरण)। सुसंगत और विश्वसनीय मंचन के लिए प्रत्येक दिन एक ही समय में योनि लैवेज को पूरा करें।
    नोट: यह बताया गया है कि 12:00 और 14:00 घंटे के बीच के घंटे सभी चरणों को कैप्चर करने के लिए सबसे अच्छे हैं। इस अध्ययन में, एस्ट्रस चक्र निगरानी 12:00 और 14:00 घंटे के बीच हुई, जिसे संपीड़न-शैली पकड़ के साथ संभाला गया (चरण 3.4 देखें)। अन्य प्रयोगात्मक हस्तक्षेपों (जैसे, व्यवहार कंडीशनिंग, दवा) के सापेक्ष एस्ट्रस चक्र निगरानी समय का महत्व अनुसंधान का एक विकासशील क्षेत्र है और इसे आगे खोजा जा सकता है11. एस्ट्रस चक्र निगरानी की अवधि का निर्धारण अध्ययन-निर्भर है और प्रकाशित अध्ययन11,33 में आगे का पता लगाया जा सकता है।
  5. माइक्रोस्कोप से सुरक्षात्मक कवर निकालें और सुरक्षात्मक कैमरा लेंस कवर को हटाकर और माइक्रोस्कोप की आईपीस पर लेंस रखकर कैमरे को कंप्यूटर से संलग्न करें।
  6. उसके बाद, कंप्यूटर पर पूर्वचयनित सॉफ़्टवेयर खोलें। इस अध्ययन में चयनित सॉफ़्टवेयर का उपयोग करने के लिए, कैमरा सूची लेबल वाले टैब के तहत, स्क्रीन के बाईं ओर स्थित यूएसबी से जुड़े कैमरे का चयन करें। सुनिश्चित करें कि यूएसबी कैमरा कंप्यूटर से ठीक से जुड़ा हुआ है, जो कैमरा सूची लेबल वाले टैब के तहत कोई डिवाइस नहीं पढ़ेगा, यदि नहीं।
  7. एक बार टैब के तहत यूएसबी कैमरा का चयन हो जाने के बाद, आधार पर स्थित माइक्रोस्कोप लाइट स्विच चालू करें।
  8. कक्ष नमूना फ़ोटो के लिए निर्दिष्ट कंप्यूटर पर कोई फ़ोल्डर बनाएँ. प्रत्येक अलग दिन के लिए एक फ़ाइल फ़ोल्डर बनाएं जो डेटा एकत्र किया जाता है, छवियों को लेने से पहले तैयार किया जाता है।
  9. तैयार किए गए उपकरणों के साथ, विषय के पिंजरे को अपने होल्डिंग प्लेस से पुनः प्राप्त करें और इसे नमूना संग्रह स्टेशन पर लाएं।

3. योनि कोशिकाओं का संग्रह

  1. एक डिस्पोजेबल सिरिंज पुनः प्राप्त करें और बाँझ 0.9% एनएसीएल के 0.2 मिलीलीटर के साथ सिरिंज में से प्रत्येक को भरें। यदि हवा के बुलबुले मौजूद हैं, तो धीरे-धीरे बैरल सिरिंज को झटका दें जब तक कि सभी हवा के बुलबुले सिरिंज की खुली नोक तक न पहुंच जाएं और हवा को निष्कासित न करें। यदि अभी भी हवा के बुलबुले मौजूद हैं, तो समाधान को एनएसीएल रिसेप्टेक में वापस निष्कासित करें और तब तक फिर से भरें जब तक कि कोई भी न हो।
    नोट: अत्यधिक झटका अधिक हवा के बुलबुले के गठन में परिणाम हो सकता है।
  2. रैपिंग के सील किए गए हिस्से के अंदर सिरिंज की नोक के साथ, एक बाँझ क्षेत्र को बनाए रखने के लिए प्लास्टिक रैपिंग में प्रत्येक सिरिंज वापस करें।
  3. पिंजरे को खोलें और धीरे-धीरे पूंछ के आधार या शरीर के ट्रंक द्वारा विषय को उठाएं, दूसरों को बाहर निकलने से रोकने के लिए पिंजरे के ढक्कन को बंद करें। व्यक्तिगत वरीयता और पशु प्रतिक्रिया के आधार पर नीचे सूचीबद्ध लोगों में से एक होल्डिंग विधि का चयन करें।
  4. ऊपरी छाती क्षेत्र के खिलाफ विषय रखकर किशोर चूहों के लिए संपीड़न शैली की पकड़ का उपयोग करें, विषय की नाक जमीन पर नीचे की ओर इशारा करते हुए। स्वाब शुरू करने से पहले, सुनिश्चित करें कि विषय आंदोलन को रोकने के लिए पर्याप्त संकुचित है लेकिन पकड़ में आरामदायक और सुरक्षित है। सिरिंज डालने से पहले पूंछ को धीरे-धीरे फ्लेक्स करके विषय की योनि नहर का पर्दाफाश करें।
  5. पिंजरे के शीर्ष या किनारे पर जानवर के अग्रभाग रखकर वयस्क चूहों के लिए हिंद लेग लिफ्ट का उपयोग करें, जबकि पूंछ और हिंडलिंब पहली और दूसरी उंगलियों के बीच एक कोमल पकड़ के साथ संयमित होते हैं, अंगूठे को सिरिंज 64 को संचालित करने के लिए स्वतंत्र छोड़देते हैं।
  6. जानवरों को हैंडलिंग और निगरानी के लिए अनुकूल होने की अनुमति दें। अतिरिक्त तनाव को कम करने और शोधकर्ता को काटने जैसी आक्रामकता से बचाने के लिए जानवरों को धीरे-धीरे अभी तक सुरक्षित रूप से संभालें।
    नोट: निगरानी के पहले कुछ दिन वांछित परिणाम उत्पन्न नहीं कर सकते हैं क्योंकि जानवर अपनी स्थितियों के अनुकूल हैं। अभिवृद्धि अवधि के दौरान शरीर के वजन को इकट्ठा करने के लिए जानवरों को संभालना इस संक्रमण33 की सहायता कर सकता है।
  7. सिरिंज को तर्जनी और मध्यमा उंगली के साथ स्थिर रखते हुए, योनि नहर के समानांतर कोण पर सिरिंज की नोक (2 मिमी से अधिक नहीं) डालें। प्लंजर को अंदर की ओर धकेलकर धीरे-धीरे एनएसीएल को नहर में निष्कासित करें। सिरिंज को आगे नहर में न डालें, क्योंकि ऐसा करने से एस्ट्रस चक्र बाधित हो सकता है।
  8. उपकला अस्तर (ऊपर की ओर) से दूर सिरिंज के सवार खींचकर योनि नहर से एनएसीएल निकालें। यदि इस प्रक्रिया के दौरान विषय को पकड़ में रखने में कठिनाई होती है, तो एनएसीएल निष्कर्षण का प्रयास करने से पहले उन्हें थोड़े आराम की अवधि के लिए पिंजरे में वापस रखें।
  9. एक बार सेल नमूना एकत्र किया गया है, विषय पिंजरे में वापस जगह है और माइक्रोस्कोप के तहत सभी नमूनों का मूल्यांकन कर रहे हैं इससे पहले कि प्रत्येक जानवर के लिए इस प्रक्रिया को दोहराने।
    नोट: वैकल्पिक रूप से, प्रत्येक नमूना एकत्र किया जा सकता है और अगले जानवर पर जाने से पहले मूल्यांकन किया जा सकता है। एक जानवर को दूसरे लैवेज की आवश्यकता हो सकती है यदि नमूने को वर्गीकृत नहीं किया जा सकता है। प्रारंभिक संग्रह से एक ही सिरिंज का पुन: उपयोग किया जा सकता है यदि यह कंटेनर में सीधे खारा से संपर्क नहीं करता है और केवल एक ही जानवर के लिए।

4. नमूना मूल्यांकन

  1. निकाले गए योनि द्रव नमूने की जांच करके वर्गीकरण शुरू करें। चिपचिपाहट को चिपचिपा या गैर-चिपचिपा और वर्णन दस्तावेज़ या अन्य रिकॉर्डिंग सिस्टम पर अपारदर्शी या पारदर्शी के रूप में रंगाई के रूप में रिकॉर्ड करें।
    नोट: प्रोटोकॉल के इस खंड नमूना संग्रह के समय या बाद में किया जा सकता है।
  2. एक माइक्रोस्कोप स्लाइड पर तरल पदार्थ की 2-3 बूंदों को निष्कासित करें और स्लाइड के शीर्ष पर एक माइक्रोस्कोप कवर ग्लास रखें। स्लाइड के ऊपर से नीचे या स्लाइड के एक तरफ से दूसरी तरफ हवा के बुलबुले के गठन को रोकने के लिए माइक्रोस्कोप स्लाइड पर कवर ग्लास रखें। यदि संभव हो, तो सिरिंज में एकत्र किए गए नमूने का लगभग आधा हिस्सा छोड़ दें यदि आगे की परीक्षा की आवश्यकता है और स्लाइड पर तरल पदार्थ की अतिरिक्त मात्रा को रखने से रोकने के लिए।
  3. चरण भर में माइक्रोस्कोप स्लाइड ले जाने के द्वारा एकत्र कोशिकाओं का पता लगाएं। यदि बहुत कम कोशिकाएं या मलबे की उच्च मात्रा है, तो शेष तरल पदार्थ को एक नई स्लाइड पर निष्कासित करें और फिर से जांच करें। यदि सिरिंज में छोड़े गए नमूने की मात्रा अपर्याप्त है, या यदि दूसरी बूंद समान मुद्दों को प्रस्तुत कर रही है, तो एस्ट्रस चक्र चरण की पहचान करने का प्रयास करने से पहले विषय से एक और नमूना एकत्र करें।
  4. एक बार कोशिकाओं का पता लगाने के बाद और कंप्यूटर या कंप्यूटर कीबोर्ड को छूने से पहले, कीबोर्ड को गंदा करने से रोकने के लिए एक दस्ताने को हटा दें।
  5. सॉफ्टवेयर पैनल के बाईं ओर स्नैप लेबल वाले फ़ंक्शन पर क्लिक करके सेल नमूनों की छवियों को प्राप्त करें।
  6. फिर, पृष्ठ के ऊपरी बाएं कोने पर फ़ाइल आइकन के नीचे सहेजें पर क्लिक करके फ़ाइल को सहेजें। फ़ोटो को कंप्यूटर पर प्रीलेबल्ड फ़ोल्डर के तहत सहेजें।
    नोट: उदाहरण लेबल टेम्पलेट: #subjectnumber_date collected_estrous stage_objective लेंस का उपयोग किया।
  7. यदि प्रत्येक फ्रेम के भीतर कई कोशिकाएं नहीं हैं तो प्रत्येक उद्देश्य लेंस पर एक से अधिक फोटो लें।
    नोट: एकाधिक छवियों के लिए उदाहरण लेबल: # 1_01/09/2021_EST_4x1 और # 1_01/09/2021_EST_4x2।
  8. एकाधिक उद्देश्य लेंस के तहत प्रत्येक एकत्र किए गए नमूने के लिए प्रक्रिया को दोहराएं। कम से कम एक छोटा ऑब्जेक्टिफिकेशन, जैसे कि 4x, और कम से कम एक बड़ा ऑब्जेक्टिफिकेशन, जैसे 20x शामिल करें।
  9. फ़ोल्डर या बाहरी हार्ड ड्राइव पर छवियों को अपलोड करें ताकि इसमें शामिल सभी शोधकर्ताओं के पास फ़ाइलों तक पहुंच हो और बैकअप प्रतियां उपलब्ध हों।

5. स्टेज वर्गीकरण

  1. एक साथ ली गई तस्वीरों और रिकॉर्डिंग शीट (चित्रा 4 ए-सी) को देखने के लिए कंप्यूटर स्क्रीन सेट करें।
    नोट: यह एकत्र किए गए नमूने को देखते समय प्रलेखन के लिए अनुमति देगा। प्रोटोकॉल के इस हिस्से को नमूना संग्रह के समय या बाद में पूरा किया जा सकता है।
  2. निर्धारित करें कि नमूने में कौन से सेल प्रकार मौजूद हैं। मापदंड का उपयोग करके चरण 5.2.1-5.2.4 में सूचीबद्ध चार विकल्पों में से चुनें और निष्कर्षों को रिकॉर्ड करें।
    1. अनुक्लिएटेड केराटिनाइज्ड उपकला (एकेई) /
      1. दांतेदार या कोणीय-धार वाली कोशिकाओं की तलाश करें, जैसा कि चित्रा 2 बी और चित्रा 5 सी में देखा गया है, जो नाभिक की कमी के बावजूद, कोशिका के भीतर हल्के गोल क्षेत्रों (परमाणु भूत) दिखा सकते हैं जो दर्शाते हैं कि एक नाभिक एक बार मौजूद था। इस तरह के न्यूक्लिएटेड और एन्यूक्लिएटेड कोशिकाओं के बीच अंतर करने के लिए 20x और उससे ऊपर के उच्च आवर्धन का उपयोग करें।
      2. कोशिका के केराटिनाइज्ड या कॉर्निफाइड हिस्से को अलग करने के लिए उच्च आवर्धन का उपयोग करें- कोशिकाओं की एक पतली परत जिसमें नाभिक की कमी होती है और यदि वांछित हो तो केराटिन से भरा होता है।
        नोट: उनकी दांतेदार उपस्थिति के अलावा, इन्हें इस बात से भी अलग किया जा सकता है कि वे कैसे गुना या अलग हो सकते हैं, दांतेदार और लम्बी संरचनाओं का निर्माण कर सकते हैं जिन्हें केराटिन सलाखों के रूप में जाना जाता है।
    2. बड़े न्यूक्लिएटेड उपकला (एलएनई) कोशिकाएं
      1. अनियमित, दांतेदार या कोणीय सीमाओं से घिरे इन आम तौर पर गोल से बहुभुज आकार की कोशिकाओं की तलाश करें।
      2. निरीक्षण करें कि उनके नाभिक विभिन्न रूपों को कैसे ले सकते हैं, बरकरार से पतित या पायकॉन्टिक तक, मृत्यु या गिरावट से गुजरने वाली कोशिका के नाभिक में क्रोमैटिन के अपरिवर्तनीय संघनन से संबंधित, जैसा कि चित्रा 2 बी और चित्रा 5डी 1,2 में देखा गया है। ध्यान दें कि ये नाभिक कोशिका के भीतर साइटोप्लाज्म की तुलना में कम स्थान पर कैसे कब्जा करते हैं, छोटे उपकला कोशिकाओं की तुलना में कम परमाणु से साइटोप्लाज्मिक (एन: सी) अनुपात के साथ। साइटोप्लाज्मिक कणिकाओं के लिए देखें जो उच्च आवर्धन पर देखे जा सकते हैं13.
    3. ल्यूकोसाइट्स (एलईयू)/न्यूट्रोफिल/पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर कोशिकाएं
      1. मल्टीलोबुलेटेड नाभिक (इसलिए, पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर कोशिकाओं के रूप में जाना जाता है) के साथ इन कॉम्पैक्ट, गोलाकार कोशिकाओं की तलाश करें, जो सेल परिपक्व होने पर गायब हो जाते हैं (चित्रा 2 बी और चित्रा 5 ए)। उच्च आवर्धन (जैसे, 40x) का उपयोग मल्टीलोबुलेटेड नाभिक का निरीक्षण करने के लिए किया जा सकता है।
        नोट: संग्रह और तैयारी पर, ये कोशिकाएं संघनित, गुना या टूट सकती हैं।
    4. छोटे न्यूक्लिएटेड उपकला (एसएनई) कोशिकाएं
      1. इन गोल से अंडाकार आकार की कोशिकाओं को देखें जो ऊपर वर्णित न्यूट्रोफिल से बड़े हैं।
      2. इन गैर-उपकला उपकला कोशिकाओं (चित्रा 2 बी) के गोल नाभिक का निरीक्षण करें, जो कोशिका के अंदर साइटोप्लाज्म की तुलना में बड़ी मात्रा में स्थान लेते हैं, जिससे बड़े उपकला कोशिकाओं के सापेक्ष एक उच्च एन: सी अनुपात बनता है।
        नोट: संग्रह और तैयारी पर, ये कोशिकाएं स्ट्रिंग या बार जैसा दिखने वाली आकृति बनाने के लिए गुना या ओवरलैप कर सकती हैं, जैसा कि चित्रा 5बी 1 में दिखाया गया है।
  3. जांचें कि नमूने में मौजूद कोशिकाओं को प्रत्येक ऑब्जेक्टिफिकेशन के लिए कैसे व्यवस्थित किया जाता है। समग्र कक्ष व्यवस्था का प्रतिनिधि दृश्य देखने के लिए निचले ऑब्जेक्टिफिकेशन, जैसे 4x का उपयोग करें. रिकॉर्ड करें कि क्या कोशिकाओं को एक साथ जोड़ा जाता है (सी), समान रूप से फैलाहुआ (ईडी), या बेतरतीब ढंग से फैलाया गया (आरडी) ( चित्रा 4 सी देखें), और प्रत्येक सेल प्रकार के विशिष्ट संगठन पर ध्यान दें (उदाहरण के लिए, छोटे न्यूक्लिएटेड उपकला कोशिकाओं को क्लंप किया जाता है, और न्यूट्रोफिल समान रूप से वितरित किए जाते हैं)।
  4. अगला, नेत्रहीन अनुमान और कुल सेल मात्रा (एक स्मिज, मध्यम, कई) और व्यक्तिगत सेल मात्रा (प्रत्येक सेल प्रकार का प्रतिशत मौजूद) रिकॉर्ड करें।
    नोट: एक smidge मौजूद कोशिकाओं की सबसे छोटी संख्या है कि नमूना वर्गीकरण निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता का प्रतिनिधित्व करता है, कई कोशिकाओं है कि या तो सबसे अधिक के लिए खाते के लिए खाते हैं यदि स्लाइड पर अंतरिक्ष के सभी नहीं हैं या एक दूसरे के शीर्ष पर खड़ी कर रहे हैं की सबसे छोटी संख्या का प्रतिनिधित्व करता है, और कोशिकाओं की एक मध्यम संख्या कोशिकाओं की तुलनात्मक औसत संख्या का प्रतिनिधित्व करता है (चित्रा 5 ए-डी और चित्रा 6 ए-डी में देखा उदाहरण)।
  5. ध्यान दें कि क्या सूचीबद्ध मानदंडों या पहलुओं से कोई विचलन है जो 'असामान्यताओं' श्रेणी में विशिष्ट विषय के लिए विशिष्ट हैं और यदि आवश्यक हो तो पशुचिकित्सक से परामर्श करें।
  6. निर्धारित करें कि वर्गीकृत घटकों और नीचे दिए गए विवरणों का उपयोग करके नमूने में कौन सा एस्ट्रस चक्र चरण प्रस्तुत किया जा रहा है।
    1. मरना
      1. एलईयू को प्रमुख या एकमात्र सेल प्रकार के रूप में देखें, जो डीआईई की शुरुआत में एक गुच्छेदार तरीके से व्यवस्थित होता है लेकिन देर से चरणों में अधिक बिखर जाता है।
        नोट: मरने में संक्रमण करते समय, कोशिकाओं की मात्रा कम हो सकती है क्योंकि उपकला कोशिकाएं टूटने लगती हैं, जैसा कि चित्रा 6डी 1 में देखा गया है। इसी समय, एलईयू की संख्या बढ़ने लगती है, और उन्हें शुरू में एक गुच्छेदार तरीके से व्यवस्थित किया जाता है और समय के साथ फैलता है।
      2. ध्यान दें कि कोशिकाओं की कुल मात्रा तुलनात्मक रूप से कम हो सकती है, अक्सर दूसरे या तीसरे दिन डीआईई अवधि के बाद के चरणों में।
      3. बलगम की उच्च मात्रा का निरीक्षण करें जो इस चरण में मौजूद हो सकता है, जो एलईयू (चित्रा 5ए 1) के केंद्रित किस्में के रूप में प्रस्तुत करता है। प्रो (चित्रा 5ए 1,2) में संक्रमण में देर से चरणों के दौरान एलईयू के साथ एसएनई कोशिकाओं के छोटे गुच्छे या सेलुलर किस्में देखें।
      4. योनि द्रव की चिपचिपा और अपारदर्शी उपस्थिति का निरीक्षण करें जब संक्रमण, पूरी तरह से संक्रमण, और डीआईई से बाहर संक्रमण।
        नोट: इस चरण की औसत अवधि 4-दिवसीय चक्र के दौरान 48 घंटे और संभवतः 5-दिवसीय चक्र के दौरान 72 घंटे है।
    2. प्रो
      1. एसएनई कोशिकाओं को प्रमुख कोशिकाओं के रूप में और एलईयू, एलएनई और / या एकेई कोशिकाओं के लिए देखें जिन्हें कम संख्या में देखा जा सकता है। एसएनई कोशिकाओं की दानेदार उपस्थिति का निरीक्षण करने के लिए उच्च ऑब्जेक्टिफिकेशन का उपयोग करें जो आमतौर पर इस चरण (चित्रा 5बी 1,2) के दौरान क्लस्टर, शीट या किस्में में व्यवस्थित होते हैं।
      2. प्रो में मरने से आगे बढ़ते समय योनि तरल पदार्थ की चिपचिपा और अपारदर्शी उपस्थिति का निरीक्षण करें, और प्रो चरण (चूहों में 14 घंटे की औसत अवधि) में पूरी तरह से संक्रमण होने के बाद यह कैसे गैर-चिपचिपा और पारदर्शी हो जाता है।
    3. ईएसटी
      1. एकेई कोशिकाओं के प्रभुत्व की तलाश करें, ईएसटी में एसएनई कोशिकाओं की कमी, और कोशिकाओं की संख्या और आकार में वृद्धि के रूप में ईएसटी11,13 जारी है।
      2. केराटिन सलाखों के रूप में या भूत नाभिक युक्त एकेई कोशिकाओं की अक्सर क्लस्टर व्यवस्था की विशिष्ट विशेषता का एक नोट बनाएं, जो प्रो (चित्रा 6 बी) और एमईटी (चित्रा 6 सी) से संक्रमण में अधिक बेतरतीब ढंग से फैल सकता है।
      3. विशेषता गैर-विषैले और पारदर्शी योनि तरल पदार्थ का निरीक्षण करें, जिसकी उम्मीद की जा सकती है क्योंकि चूहे संक्रमण कर रहे हैं, पूरी तरह से संक्रमण कर रहे हैं, और ईएसटी से बाहर संक्रमण कर रहे हैं।
        नोट: ईएसटी की प्रगति में बहुत विविधीकरण (चित्रा 5 सी और चित्रा 6 बी, सी) शामिल है। चरण आमतौर पर 4-दिवसीय चक्र में औसतन 24 घंटे या 5-दिवसीय चक्र में संभवतः 48 घंटे के लिए होता है।
    4. मिले
      1. एसएनई और एलएनई कोशिकाओं की उच्च संख्या की तलाश करें क्योंकि चूहा एमईटी में संक्रमण कर रहा है, या तो नहर के भीतर सेल अनुपात के मामले में प्रमुख है या एलईयू11,13 के बराबर अनुपात के करीब है। इसके अलावा, ईएसटी के बाद उपकला कोशिका क्षय और डीआईई में जाने के कारण एमईटी में मलबे की अधिक मात्रा और अन्य चरणों की तुलना में संक्रमण का एक नोट बनाएं।
      2. सभी सेल प्रकार देखा जाता है और विभिन्न मात्रा में (चित्रा 5डी 1-3) के रूप में लगातार व्यवस्था की कमी का निरीक्षण करें। हालांकि, उन एलईयू की तलाश करें जो शुरुआती चरणों में उपकला कोशिकाओं की निकटता में पैक या क्लंप किए जाते हैं जो डीआईई में संक्रमण करते समय क्लंप्ड व्यवस्था में वापस आ सकते हैं।
      3. इस चरण में योनि तरल पदार्थ की गैर-चिपचिपा और पारदर्शी उपस्थिति का निरीक्षण करें और मरने में जाने के दौरान अधिक चिपचिपा और अपारदर्शी उपस्थिति में परिवर्तन करें।
        नोट: इस चरण की औसत अवधि 6-8 घंटे है।
  7. चरण के साथ संक्रमण में नमूने लेबल विषय की ओर बढ़ रहा है, कोष्ठक में संक्रमण के साथ ट्रैक करने के लिए जब इन्हें एकत्र कर रहे हैं. इन 4 चरणों और उनके संक्रमणों के बीच अंतर करने के तरीके के बारे में अधिक जानकारी प्रतिनिधि परिणामों में पाई जा सकती है।
    नोट: के रूप में एकत्र नमूने स्थिर हैं और चक्र गतिशील है, स्लाइड चरणों (चित्रा 6 ए-डी में देखा) के बीच संक्रमण को चित्रित कर सकते हैं।
  8. निगरानी चरण पूरा होने तक प्रत्येक जानवर के लिए इस प्रक्रिया को पूरा करें।
  9. 11 (45 दिन की उम्र) या 21 (55 दिन की उम्र) में, गिलोटिन डिकैपिटेशन से पहले 5% आइसोफ्लूरेन और 2% ऑक्सीजन के साथ चूहों को इच्छामृत्यु दें। अध्ययन की प्रकृति के आधार पर ये टाइमपॉइंट भिन्न हो सकते हैं।

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Representative Results

वर्तमान आंकड़े नर एसडी चूहों की उपस्थिति में महिला किशोर एसडी अंतर्राष्ट्रीय आनुवंशिक मानकीकरण कार्यक्रम (आईजीएस) को दर्शाते हैं। ये जानवर एक सहयोगी अध्ययन के हिस्से के रूप में पेपरडाइन विश्वविद्यालय और यूसीएलए प्रयोगशालाओं दोनों में स्थित थे। चित्रा 5 4 चक्र चरणों के कई रूपों को प्रस्तुत करता है। चित्रा 5ए 1 को कई सेल प्रकारों के साथ एक डायस्ट्रस नमूने के रूप में पहचाना गया था। यह उदाहरण दर्शाता है कि बड़ी संख्या में उपकला कोशिकाओं वाले नमूने डायस्ट्रस के रूप में अर्हता प्राप्त करते हैं जब वे अन्य वर्गीकृत घटक योग्यताओं को पूरा करते हैं, जैसे कि एलईयू का प्रभुत्व। इस नमूने ने बलगम स्ट्रैंड व्यवस्था का भी प्रदर्शन किया जो इस चरण में अक्सर देखे जाने वाले एलईयू की रचना करता है, जो प्रो चरण में देखी गई एसएनई कोशिकाओं से युक्त किस्में जैसा दिखता है। एसएनई कोशिकाओं से बने प्रो चरण में दिखाई देने वाले किस्में से डाई चरण में एक बलगम स्ट्रैंड को अलग करने के लिए, एलईयू के प्रभुत्व की पहचान करना महत्वपूर्ण है। चित्रा 5 ए2,3 एक सेल व्यवस्था प्रगति को अक्सर मनाया जाता है- एलईयू का एक प्रारंभिक क्लंपिंग जो डीआईई चरण के बाद की अवधि में एकत्र किए गए नमूनों में यादृच्छिक (आरडी) या यहां तक कि संवितरण (ईडी) को इकट्ठा करता है और स्थानांतरित करता है। विशेष रूप से, चित्रा 5ए 2 मौजूद कई कोशिकाओं के साथ एक मरो नमूना था। यह दर्शाता है कि एलईयू उच्च संख्या में उपकला कोशिकाओं (चित्रा 5 ए1,2) के साथ कैसे हो सकते हैं, जो एलईयू के प्रभुत्व और केराटिन सलाखों की अनुपस्थिति से मेटेस्ट्रस से अलग हैं। इसके विपरीत, चित्रा 5ए 3 दर्शाता है कि एक कम कुल सेल गिनती (एक स्मिज) आमतौर पर डीआईई चरण के बाद के चरण के दौरान देखी गई थी, जैसे कि दूसरे या तीसरे दिन के दौरान। प्रो चरण के दौरान, एसएनई कोशिकाओं को अक्सर एक दूसरे के शीर्ष पर खड़ी कई कोशिकाओं (चित्रा 5बी 1) या छोटे गुच्छों (चित्रा 5 बी 2) में व्यवस्थित कोशिकाओं के एक स्मिज के साथ किस्में में व्यवस्थित किया गया था। चित्रा 5बी 3 एसएनई कोशिकाओं की विशेषता शीट जैसी क्लंपिंग के साथ एक प्रो नमूना का उदाहरण देता है जो ओवरलैप और बार बनाते हैं जो ईएसटी चरण में मौजूद एकेई कोशिकाओं से बने केराटिन सलाखों के साथ भ्रमित हो सकते हैं। दोनों को अलग करने के लिए, प्रो में एसएनई कोशिकाओं और ईएसटी में एकेई कोशिकाओं के प्रभुत्व की पहचान करना महत्वपूर्ण है।

चित्रा 5 सी1,2 ईएसटी में देखी गई एकेई कोशिकाओं के विशिष्ट क्लंपिंग और यादृच्छिक संवितरण का प्रदर्शन करता है, जिसमें पूर्व में कई कोशिकाएं और बाद में एक मध्यम संख्या शामिल है। भूत नाभिक, केराटिन बार संरचनाएं, और बैक्टीरिया अक्सर इस चरण के दौरान एकत्र किए जाते हैं इन उदाहरणों में देखे जाते हैं। एसएनई कोशिकाओं को कई बार ईएसटी चरण (चित्रा 5सी 1) के दौरान पिछले प्रो चरण के अवशेषों के रूप में दर्शाया गया था। देर से ईएसटी चरण, जब एसएनई कोशिकाएं उभरने लगती हैं क्योंकि विषय एमईटी की ओर बढ़ता है, अक्सर प्रो चरण के लिए गलत होता है। दोनों को अलग करने के लिए, परमाणु आकार को ध्यान में रखना महत्वपूर्ण है। सामान्य तौर पर, प्रो की न्यूक्लिएटेड कोशिकाओं में उच्च एन: सी अनुपात होता है। चित्रा 5सी 3 में दिखाए गए नमूने ने कई एकेई कोशिकाओं की एक स्ट्रैंड जैसी व्यवस्था प्रस्तुत की जिसे ईएसटी चरण की विशेषता के रूप में नहीं देखा गया था। यह दर्शाता है कि प्रत्येक जानवर अद्वितीय है, कि मानदंडों से विचलन हो सकता है, और वर्गीकरण निर्धारकों को संयोजन में जांच की जानी है।

एसएनई कोशिकाओं के मौजूद होने पर ईएसटी और प्रो के बीच अंतर करने के लिए, यह देखा गया कि ईएसटी चरण के दौरान इन कोशिकाओं में कम एन: सी अनुपात हुआ। प्रो चरण (चित्रा 5बी 3) में एसएनई कोशिकाओं के अतिव्यापी या रोलिंग द्वारा गठित और एमईटी (चित्रा 6डी 1) से संक्रमण में उपकला कोशिकाओं को क्षय करके गठित लोगों से ईएसटी में मौजूद केराटिन सलाखों को अलग करने के लिए, प्रतिनिधित्व किए जा रहे चरण को अलग करने के लिए प्रमुख सेल प्रकार, व्यवस्था और मात्रा की पहचान करना महत्वपूर्ण है। अंत में, चित्रा 5डी 1,2 एमईटी चरण का प्रतिनिधित्व करने वाले यादृच्छिक संवितरण में मौजूद सभी सेल प्रकारों के संयोजन का उदाहरण देता है। इन उदाहरणों में मौजूद कई कोशिकाओं के अलावा, ईएसटी के बाद उपकला कोशिकाओं के क्षय और एलईयू के प्रभुत्व के साथ डीआईई में संक्रमण के कारण इस चरण (चित्रा 5डी 2) के दौरान मलबे की एक उच्च मात्रा एकत्र करना आम था जो उपकला कोशिकाओं की योनि नहर को साफ करने के लिए कार्य करता है। चित्रा 5डी 2 यह भी प्रदर्शित करता है कि उपकला कोशिकाओं की उच्च एकाग्रता और केराटिन सलाखों की उपस्थिति से एमईटी को डाई से कैसे अलग किया जा सकता है। कुल मिलाकर, ये अभ्यावेदन व्यापक स्पेक्ट्रम को दर्शाते हैं जो प्रत्येक चरण के भीतर मौजूद हैं और गैर-हानिकारक हैं।

4 संक्रमण चरणों के प्रतिनिधित्व चित्रा 6 में दिखाए गए हैं। हालांकि इस अध्ययन ने संक्रमण में नमूनों को 4 एस्ट्रस चक्र चरणों में से एक के रूप में वर्गीकृत किया, लेकिन संक्रमण चरणों को ठीक से पहचानना महत्वपूर्ण है। प्रो (चित्रा 6 ए) में डाई से संक्रमण में, अक्सर एलईयू की संख्या में समग्र कमी और एसएनई कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि हुई थी। एलएनई और एकेई कोशिकाएं कभी-कभी इस संक्रमण में मौजूद थीं, हालांकि उच्च मात्रा में नहीं (चित्रा 6ए 1)। चित्रा 6ए 2-4 क्लंप्ड और बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए एसएनई कोशिकाओं की उच्च संख्या को दर्शाता है जो अक्सर इस संक्रमण के दौरान एकत्र किए जाते थे, यादृच्छिक रूप से और समान रूप से बिखरे हुए एलईयू की कम संख्या के साथ। कुल मिलाकर, अन्य संक्रमण चरणों से भेद करते समय, एसएनई कोशिकाओं के प्रभुत्व और पीआरओ में देखे गए गुच्छों और स्ट्रैंड संरचनाओं की शुरुआत को नोट करना महत्वपूर्ण था। चित्रा 6 ए में सभी उदाहरण चित्रा 6ए 4 को छोड़कर कई सेल गिनती का प्रतिनिधित्व करते हैं, एक स्मिज के साथ। चित्रा 6 बी में, छवि कई क्लंप्ड एसएनई और एकेई कोशिकाओं का एक उदाहरण दिखाती है जो प्रो से ईएसटी में संक्रमण में देखी जाती हैं।

इस संक्रमण के दौरान, एसएनई कोशिकाओं को ईएसटी की तुलना में एकेई कोशिकाओं के कम क्लंप्ड और अधिक यादृच्छिक संवितरण के साथ उच्च संख्या में देखा जाता है चित्रा 6 सी एकेई, एसएनई और एलएनई के उद्भव और ईएसटी से उच्च संख्या में कोशिकाओं के साथ ईएसटी से मेट तक संक्रमण में एकेई कोशिकाओं में कमी को दर्शाता है। मौजूद मलबा पिछले एस्ट्रस चरण से क्षयकारी एकेई कोशिकाओं का प्रतिनिधित्व करता है जिसे अक्सर मेटेस्ट्रस में देखा जाता है। यह एमईटी से डाई तक अंतिम संक्रमण चरण में भी देखा जाता है, जहां उपकला कोशिकाओं ने क्षय करना शुरू कर दिया और मलबे (चित्रा 6डी 1,2) का उत्पादन किया, जिसमें पूर्व में मौजूद कई कोशिकाएं और उत्तरार्द्ध में मध्यम संख्या थी। ये आंकड़े डाईस्ट्रस के संक्रमण में प्रमुख सेल प्रकार बनने के लिए संख्या में वृद्धि करने वाले एलईयू की घटना को प्रदर्शित करते हैं। 20 दिनों (एन = 3) के लिए निगरानी किए गए समूह के लिए, 12 दिन थे जब संक्रमण के नमूने एकत्र किए गए थे, औसतन 4 के साथ। 10 दिनों (एन = 3) के लिए निगरानी किए गए समूह के लिए, 9 दिन थे जब संक्रमण के नमूने एकत्र किए गए थे, औसतन 3 के साथ।

चित्रा 7 प्रतिकूल सेल नमूना संग्रह का प्रतिनिधित्व करता है, जिनमें से अधिकांश दोहराने वाले लैवेज वारंट करते हैं। चित्रा 7ए 1 एक अनुचित सिरिंज सम्मिलन और निष्कर्षण के कारण एकत्र स्क्वैमस कोशिकाओं का एक द्रव्यमान दिखाता है, जिससे स्क्वैमस कोशिकाओं को योनि नहर की दीवार से चूषण किया जा सकता है। द्रव्यमान और इसकी विशिष्ट सीमाओं के उच्च घनत्व और कॉम्पैक्टनेस के कारण इन कोशिकाओं को क्लंप्ड उपकला कोशिकाओं या एलईयू से अलग किया जा सकता है। चित्रा 7 बी मलबे के संग्रह का प्रतिनिधित्व करता है, जहां या तो कोई कोशिकाएं नहीं निकाली गई थीं, फोकस का विमान गलत है, या स्लाइड कोशिकाओं के लिए पूरी तरह से स्कैन नहीं किया गया था। मलबे को कोशिका प्रकारों और अक्सर विशिष्ट छोटे आकार और क्लंपिंग के साथ परिचित होने के माध्यम से कोशिकाओं से अलग किया जा सकता है। यह मलबा अक्सर जानवरों के बिस्तर, बालों या कोशिका क्षय से उपजा है। चित्रा 7 सी एक स्लाइड को दर्शाता है जिसमें एक सेल गिनती होती है जो एक स्मिज के नीचे होती है। जबकि कम सेल गिनती आमतौर पर देर से एमईटी और शुरुआती डीआईई के दौरान देखी जाती थी, यह उन स्लाइडों का प्रतिनिधित्व करती है जिनमें एक चरण में सटीक रूप से वर्गीकृत करने के लिए बहुत कम कोशिकाएं होती हैं।

चित्रा 7 डी माइक्रोस्कोप स्लाइड पर नहर से योनि तरल पदार्थ के साथ संयुक्त एनएसीएल निष्कर्षण समाधान के दो उदाहरण दिखाता है। पहली छवि में, चित्रा 7डी 1, तरल पदार्थ मौजूद था और फोकस से बाहर था, सटीक रूप से वर्गीकृत करने की क्षमता में बाधा डालता है। चित्रा 7डी 2 में, तरल पदार्थ एलईयू के साथ सामंजस्यपूर्ण हलकों में स्लाइड में फैल गया था। हालांकि इस उदाहरण को उच्च सेल उपस्थिति के कारण दोहराए जाने वाले लैवेज की आवश्यकता नहीं होती है, लेकिन स्मीयर को रोकने के लिए स्लाइड पर रखे गए तरल पदार्थ की मात्रा और माइक्रोस्कोप कवर स्लाइड के प्लेसमेंट पर विचार करना महत्वपूर्ण है। कुल मिलाकर, ये छवियां उचित वर्गीकरण के लिए गुणवत्ता प्रतिनिधि छवियों को कैप्चर करने के महत्व पर जोर देती हैं। इसमें एक छवि को कैप्चर करने से पहले प्रत्येक स्लाइड को स्कैन करके सेल निष्कर्षण के तरीके, फोकस के विमान और छवि की सामग्री पर विचार करना शामिल है।

प्रयोगात्मक समूह (ओं) में प्रत्येक जानवर को वर्गीकृत करने के बाद, बार या लाइन ग्राफ पर चरण प्रगति को ग्राफ करना आम है। यह शोधकर्ताओं को समग्र चक्र पैटर्न की जांच करने और पहचानने की अनुमति देता है कि जब जानवर एस्ट्रस चरणों की अनियमित प्रगति प्रस्तुत करता है, जिसे एसाइक्लिसिटी के रूप में जाना जाता है। नमूनों को तब इस विश्लेषण उपकरण में चक्र की लंबाई और चरण प्रगति पैटर्न द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है। चित्रा 8 ए, बी में दिखाया गया है, इस अवधारणा में अलग-अलग चरणों में इस अध्ययन के मामले में अलग-अलग ऊंचाइयों की सलाखों को निर्दिष्ट करना और एक्स-अक्ष में रिकॉर्ड किए गए डेटा (चित्रा 4 बी) का अनुवाद करना शामिल है। इन उदाहरणों में, मेट और डाई को सबसे कम, प्रो को बीच में और ईएसटी को सबसे ऊंची बार ऊंचाइयों द्वारा दर्शाया जाता है। एमईटी चरण की छोटी अवधि के कारण, इसे एक बार में डाई चरण के साथ जोड़ा जाता है। यद्यपि चक्र पूर्णता को मापने के विभिन्न तरीके हैं, लेकिन एक पूर्ण चक्र को एक ईएसटी से दूसरे11 तक आंदोलन के रूप में गिनना आम है। हालांकि, यह एक चक्र पूरा होने को प्रतिबिंबित नहीं करता है, लेकिन लगातार ईएसटी चरण होने पर 2-दिवसीय ईएसटी चरण अवधि को दर्शाता है।

चित्रा 8 ए एक चूहे से डेटा को दर्शाता है जो एमईटी / डाई, प्रो और ईएसटी के माध्यम से एक सुसंगत और दोहराए जाने वाली प्रगति के माध्यम से आगे बढ़ता है इसके अतिरिक्त, यह चूहा 4.375 की औसत लंबाई पर 4- से 5-दिवसीय चक्रों की सीमा के भीतर गिर गया। प्रत्येक चरण लंबाई की मानकीकृत श्रेणियों से अधिक नहीं होता है, ईएसटी में बिताए गए 1.0625 दिनों के औसत के साथ, एसाइक्लिसिटी के लिए एक विशिष्ट मूल्यांकन। यदि निकाले गए डेटा नियमितता के साथ ईएसटी से ईएसटी के इस पैटर्न का पालन करते हैं, तो यह न केवल पुष्टि करता है कि विषय के हार्मोन का स्तर स्वीकार्य सीमाओं के भीतर रहा, बल्कि यह भी कि प्रक्रिया की चक्रीय प्रकृति को महत्वपूर्ण रूप से बाधित किए बिना प्रक्रिया आयोजित की गई थी। अंत में, इस चूहे ने 16 चक्र पूरे किए, जो ईएसटी से ईएसटी सलाखों की संख्या की गिनती करके निर्धारित किए गए थे।

चित्रा 8 बी सामान्य प्रकार की एसाइक्लिसिटी का प्रतिनिधित्व करता है, जिसमें विस्तारित (ईएक्सटी के रूप में देखा जाता है) और अनियंत्रित चरण शामिल हैं। यह आंकड़ा चक्र पैटर्न और प्रत्येक चरण में बिताए गए दिनों की लंबाई और संख्या दोनों की जांच करने के महत्व पर भी प्रकाश डालता है। विशेष रूप से, इस उदाहरण में, जबकि ईएसटी में औसत चक्र की लंबाई और दिनों की संख्या उल्लिखित मापदंडों के भीतर आती है, चरण प्रगति के चक्र पैटर्न से असामान्यताओं का पता चला। इसलिए, एस्ट्रस चक्र की व्यापक रूप से जांच करना महत्वपूर्ण है। दोनों विस्तारित डीआईई ( एक्सटी डायस्ट के रूप में लेबल किया गया) और ईएसटी ( एक्सटी एस्ट के रूप में लेबल) चरण ों को आंकड़े में दिखाए गए चक्रों में दर्ज किया गया था, और कई चक्र थे जहां प्रो चरण को रिकॉर्ड नहीं किया गया था। यह उदाहरण देखे गए लगातार चरणों की संख्या की जांच करने के महत्व को भी दर्शाता है, जो केवल ईएसटी में चक्र और दिनों की औसत लंबाई की जांच करने के बजाय विशिष्ट श्रेणियों के बाहर आते हैं, जो विशिष्ट श्रेणियों के भीतर आते हैं।

इन उदाहरणों के कारणों और सहसंबंधों में शारीरिक असामान्यताएं (ट्यूमर, छद्म गर्भावस्था, लंबे समय तक तनाव), हानिकारक पर्यावरणीय परिस्थितियां (लंबे समय तक रोशनी, जहरीले रसायनों के संपर्क में, एकान्त आवास), नमूना संग्रह का अनुचित समय, शोधकर्ता त्रुटि (खराब नमूना संग्रह, छवि कैप्चर, अनुचित मंचन), उम्र से संबंधित घटनाएं (किशोरावस्था और प्रजनन बुढ़ापे में देखी जाने वाली सामान्य अनियमितता), या विशिष्ट के लिए अद्वितीय विचलन जैसे कारक शामिल हो सकते हैं। जानवर। शोधकर्ता त्रुटि या नमूना संग्रह और शारीरिक असामान्यताओं या उम्र से संबंधित घटनाओं के अनुचित समय को अलग करने के लिए, 4 वर्गीकृत घटकों को अधिक विस्तार से जांचना सहायक होता है। यह अनियमितताओं के संभावित कारणों को निर्धारित करने में सहायता कर सकता है या, व्यापक अर्थों में, उन अध्ययनों में उपयोग किया जा सकता है जो एस्ट्रस चक्र विशेषताओं का अधिक बारीकी से अध्ययन कर रहे हैं।

चित्रा 9 वाई-अक्ष पर कुल और व्यक्तिगत सेल मात्राओं को शामिल करके इस करीबी निरीक्षण को दर्शाता है, सेल प्रकार (ओं) को विभिन्न बार भरण रंगों द्वारा दर्शाया गया है, और सेल व्यवस्था (ओं) को विभिन्न बार भरण पैटर्न द्वारा दर्शाया गया है, कुल निगरानी अवधि में रेखांकित किया गया है। इस विश्लेषण पद्धति ने पूरा किए गए चक्रों की कुल संख्या, प्रत्येक चक्र की लंबाई, चरण प्रगति और प्रत्येक व्यक्तिगत चूहे के लिए अधिक विस्तार से वर्गीकृत घटकों की परीक्षा की अनुमति दी। चित्रा 9 ए एक चूहे का प्रतिनिधित्व करता है जिसमें चक्रों की औसत संख्या से कम था, जिसमें 10 दिनों में कुल 3 पूर्ण चक्र थे- दो 3-दिवसीय चक्र और एक 5-दिवसीय चक्र (3.67 का औसत)। 50% दिनों के साथ चरण की प्रगति में देखी गई अनियमितता में एक या एक से अधिक रिकॉर्ड किए गए चरण और 30% नमूने संक्रमण में एकत्र किए गए थे- दिन 2 मेट-डाई के रूप में, दिन 5 ईएसटी-मेट के रूप में, और दिन 8 प्रो-डाई संक्रमण के रूप में। यह नमूना संग्रह के अनुचित समय, शोधकर्ता त्रुटि, उम्र से संबंधित घटना या अद्वितीय विचलन के कारण हो सकता है। आगे की निगरानी स्पष्टता प्रदान कर सकती थी कि कौन सा लागू होता है।

विशिष्ट प्रमुख व्यवस्था, सेल प्रकार, और व्यक्तिगत और कुल सेल मात्रा दर्ज किए गए प्रत्येक चरण के भीतर देखी गई थी। ईएसटी चरणों के भीतर, एक स्मिज (नमूनों का 25%), मध्यम (नमूनों का 25%), और कई (नमूनों का 50%) क्लंप्ड एकेई कोशिकाओं को एलईयू, एसएनई और एलएनई कोशिकाओं की कम उपस्थिति के साथ देखा गया था। कैप्चर किए गए एक एमईटी चरण में, कई बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए एलईयू (50%), एकेई कोशिकाओं (20%), एलएनई (15%), और एसएनई (15%) कोशिकाओं का संयोजन मौजूद था। डीआईई चरणों के लिए, एक स्मिज (नमूनों का 50%) और कई (नमूनों का 50%) बेतरतीब ढंग से फैला हुआ, समान रूप से फैला हुआ, और प्रमुख एलईयू का संयोजन एकेई, एलएनई और एसएनई कोशिकाओं के साथ देखा गया। एकत्र किए गए एक प्रो चरण में, बेतरतीब ढंग से छितरी हुई एलईयू (मौजूद कोशिकाओं का 60%) और एसएनई कोशिकाओं (मौजूद कोशिकाओं का 40%), जो व्यवस्था के संयोजन में थे, मौजूद थे, डीआईई से प्रो में संक्रमण का प्रतिनिधित्व करते थे।

चित्रा 9 बी में, प्रतिनिधित्व चूहे एक 4 दिन चक्र पैटर्न के साथ, 3 पूर्ण चक्र की कुल था। एकत्र किए गए नमूने एक विस्तारित डीआईई अवधि (दिन 6-9) और बिना रिकॉर्ड किए गए चरणों के 5 अन्य उदाहरणों (2 अनरिकॉर्डेड एमईटी चरणों, 2 अनरिकॉर्डेड प्रो चरणों और 1 अनरिकॉर्डेड ईएसटी चरण) के साथ एक सुसंगत चरण प्रगति का प्रतिनिधित्व नहीं करते थे। चूंकि केवल 20% नमूने संक्रमण में थे (दिन 3 डाई-प्रो के रूप में, दिन 5 ईएसटी-मेट के रूप में, दिन 18 मेट-डाई के रूप में, और दिन 19 डीआईई-प्रो के रूप में), और केवल 3 चरणों को एमईटी चरण और लंबे समय तक मरने की अवधि के बाहर दर्ज नहीं किया गया था, यह निष्कर्ष निकाला गया था कि नमूना संग्रह का समय इस विशिष्ट जानवर के लिए उपयुक्त था। जैसा कि पिछले 10 दिनों की निगरानी में 4 चरणों के माध्यम से एक आदेशित प्रगति शामिल थी, प्रारंभिक अनियमितताओं को किशोरावस्था के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। अधिक बढ़ी हुई निगरानी अवधि (20 दिन) ने इस निष्कर्ष के लिए अनुमति दी।

वर्गीकृत घटकों की परीक्षा से विशिष्ट श्रेणियों का पता चला। ईएसटी चरणों ने कम एलईयू, एसएनई और एलएनई कोशिकाओं के साथ क्लंप्ड एकेई कोशिकाओं की कई मात्रा (नमूनों का 50%) के लिए एक मध्यम (नमूनों का 50%) के प्रभुत्व को प्रतिबिंबित किया। एकत्र किए गए एमईटी नमूनों में, एक मध्यम (33.33% नमूनों) से कई (नमूनों का 66.67%) बेतरतीब ढंग से फैला हुआ और क्लंप्ड एलईयू (10-90% की मात्रा सीमा के साथ), क्लंप्ड एसएनई (0-30%), बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए एलएनई (0-10%), और क्लंप्ड और बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए एकेई कोशिकाओं (10-90%) का संयोजन था। डीआईई चरणों ने एक मध्यम (20%) के प्रभुत्व को कई (नमूनों का 80%) समान रूप से फैलाया, बेतरतीब ढंग से फैलाया, और क्लंप्ड एलईयू (50-100% की सीमा) दोनों बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए एकेई और एसएनई कोशिकाओं की उपस्थिति में प्रतिबिंबित किया। प्रो चरणों की पहचान एलईयू, एकेई और एलएनई कोशिकाओं की उपस्थिति में यादृच्छिक रूप से छितरी हुई और क्लंप्ड एसएनई (10-99%) कोशिकाओं की एक स्मिज (नमूनों का 3.33%) और कई (66.67% नमूने) के प्रभुत्व से की गई थी।

निकाले गए डेटा का विश्लेषण करते समय एक अन्य विकल्प पहले वर्णित तत्वों को शामिल करके एस्ट्रस चक्र प्रोफाइल का निर्माण है- वाई-अक्ष पर कुल और व्यक्तिगत सेल मात्रा, विभिन्न बार भरण रंगों द्वारा दर्शाए गए सेल प्रकार (ओं), और विभिन्न बार भरण पैटर्न द्वारा दर्शाए गए सेल व्यवस्था (ओं), प्रत्येक चक्र चरण के लिए कुल निगरानी अवधि में रेखांकित। यह प्रति चूहा या पूरे समूह के औसत को पूरा किया जा सकता है। इस विश्लेषण उपकरण का उद्देश्य प्रति चरण वर्गीकृत घटक रुझानों की जांच करना है, जो समग्र वैज्ञानिक समुदाय को एस्ट्रस चक्र चरण वर्गीकरण के लिए विशिष्ट वर्गीकृत घटक भेदों को चिह्नित करने में सहायता करता है। चित्रा 10ए 1 में, 10 दिन डीआईई प्रोफाइल ने कम एसएनई, एकेई और एलएनई कोशिकाओं के साथ समान रूप से बिखरे हुए एलईयू (78.25% का औसत) की एक मध्यम (नमूनों का 50%) और कई (नमूनों का 50%) का प्रभुत्व प्रदर्शित किया। चित्रा 10ए 2 में, 20 दिन के डायस्ट्रस प्रोफाइल ने एक मध्यम (नमूनों का 20%) और कई (नमूनों का 80%) समान रूप से बिखरे हुए, क्लंप्ड और बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए एलईयू (सभी 10 दिनों में मौजूद 82% का औसत) की मात्रा का प्रभुत्व प्रदर्शित किया।

चित्रा 10बी 1 में प्रदर्शित प्रो चरण ने एलईयू और एकेई कोशिकाओं की उपस्थिति में यादृच्छिक रूप से छितरी हुई एसएनई कोशिकाओं (60%) की एक मध्यम संख्या का प्रभुत्व प्रदर्शित किया। चित्रा 10 बी 2 में 20 दिन प्रो चरण प्रोफाइल ने एलईयू और एकेई कोशिकाओं के साथ व्यवस्था और बेतरतीब ढंग से छितरी हुई एसएनई (सभी 3 नमूनों में मौजूद 66.33% का औसत) कोशिकाओं के संयोजन की एक स्मिज (नमूनों का 33.33%) और कई (नमूनों का 66.67%) राशि का प्रभुत्व दिखाया। चित्रा 10 सी 1 में देखा 10 दिन ईएसटी प्रोफाइल एक मध्यम (नमूनों का 50%) या एक कई (नमूनों का 50%) एकेई कोशिकाओं की राशि (मौजूद 2 दिनों के लिए 80% का औसत) व्यवस्था के संयोजन में, एलईयू, एसएनई, और एलएनई कोशिकाओं की एक कम संख्या के साथ का प्रभुत्व का प्रदर्शन किया। चित्रा 10सी 2 में, 20 दिन ईएसटी प्रोफाइल ने मध्यम (नमूनों का 75%) या कई राशि (नमूनों का 15%) बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए एकेई (4 दिनों के लिए 57.5% का औसत) कोशिकाओं या व्यवस्था के संयोजन में, एलईयू, एसएनई और एलएनई कोशिकाओं की कम संख्या के साथ प्रभुत्व का प्रदर्शन किया।

चित्रा 10 डी 1 में 10 दिन एमईटी चरण प्रोफ़ाइल में कई बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए एलईयू (50%), एकेई (20%) कोशिकाएं और एसएनई (30%) कोशिकाएं शामिल थीं। चित्रा 10 डी 2 में 20 दिन एमईटी चरण प्रोफाइल ने एक मध्यम (नमूनों का 3.33%) या कई (नमूनों का 6.667%) एलईयू (सभी 3 नमूनों में 50% का औसत), एसएनई (सभी 3 नमूनों में मौजूद 15% का औसत), एकेई कोशिकाओं (मौजूद 3 नमूनों में 23.33% के साथ), एलएनई कोशिकाओं (मौजूद सभी 2 नमूनों में 15% का औसत) की मात्रा का प्रदर्शन किया। एलईयू का आधा बेतरतीब ढंग से फैला हुआ था (1 नमूना) और शेष 50% व्यवस्था (1 नमूना) का संयोजन था। एसएनई कोशिकाओं के दो-तिहाई को मौजूद होने पर बेतरतीब ढंग से फैलाया गया था, जबकि शेष 33.33% मौजूद होने पर व्यवस्था के संयोजन में थे (3 नमूनों में से 1)। अंत में, 66.67% एकेई कोशिकाओं को मौजूद नमूनों (2 दिन) में क्लंप किया गया था, जबकि शेष 33.33% व्यवस्था (1 दिन) के संयोजन में थे। तालिका 1 में दो समूहों से वर्गीकृत निर्धारकों के संख्यात्मक औसत शामिल हैं। जबकि चित्रा 9 ए, बी और चित्रा 10 ए-डी में डेटा में व्यक्तिगत जानवरों से वर्गीकृत निर्धारकों पर जानकारी शामिल है, इन तालिकाओं में एक उदाहरण के रूप में एस्ट्रस चरण के लिए औसत शामिल है। जब अन्य प्रयोगशालाओं में पुन: पेश किया जाता है, तो ये पैरामीटर चरण पहचान के लिए मानक बन सकते हैं। यह, बदले में, वर्तमान में स्टेजिंग प्रक्रिया में शामिल व्यक्तिपरकता के स्तर को कम कर सकता है।

सांख्यिकी
सामान्य तौर पर, चक्र विशेषताओं की व्याख्या करते समय विचार करने के लिए कुछ पैरामीटर हैं, हालांकि "असामान्य" माना जाता है, और विचलन विशिष्ट हैं। गोल्डमैन एट अल 24-48 घंटे ईएसटी और 48-72 घंटे डीआईई चरणों11 के साथ 4-5 दिन चक्र के रूप में "नियमित" की पहचान करें। इन मापदंडों से विचलन विभिन्न कारकों के कारण हो सकता है, जिसमें एक या एक से अधिक शारीरिक असामान्यताएं, अनुचित संग्रह समय, या हार्मोन के स्तर के परिपक्व होने के रूप में किशोर चूहों द्वारा अक्सर अनुभव की जाने वाली प्रारंभिक एसाइक्लिसिटी शामिल है। प्रयोगशाला पशुचिकित्सा से परामर्श करने के अलावा, उचित समय सुनिश्चित करने के लिए एक परीक्षण संग्रह अवधि को सक्षम करना, और तुलनात्मक समयरेखा स्थापित करने के लिए किशोरावस्था से पहले जानवरों की निगरानी करना, सांख्यिकीय विश्लेषण किसी भी असामान्यताओं के कारण और / श्रेणियों (जैसे, सुसंगत और असामान्य) में चक्रों को चिह्नित करने के बाद, एक ची-स्क्वायर विश्लेषण समूहों की तुलना करने में सहायता कर सकता है। इसके अतिरिक्त, वर्गीकृत घटकों या सामान्य चक्र विशेषताओं की तुलना विचरण (एनोवा) 11 के विश्लेषण का उपयोग करके पोस्टइंटरवेंशन की जा सकती है। हालांकि, इस तरह के विचलन जैविक रूप से सार्थक नहीं हो सकते हैं, जैसा कि परिचय में चर्चा की गई है, और इसलिए प्रयोगात्मक संदर्भ पर विचार किया जाना चाहिए।

Figure 1
चित्रा 1: एस्ट्रस चक्र चरणों में हार्मोन लयबद्धता( ए) प्रमुख एस्ट्रस चक्र चरणों के दौरान अलग-अलग सेक्स स्टेरॉयड हार्मोन के स्तर को रेखांकित और संक्षेप में प्रस्तुत किया जाता है। चरण की प्रगति बिल्डिंग हार्मोन के स्तर और प्रक्रिया की परिपत्र प्रगति को प्रदर्शित करने के लिए मेटेस्ट्रस के साथ शुरू और समाप्त होती है। एक बाहरी स्रोत से अनुकूलित11. (बी) रक्तप्रवाह के माध्यम से केंद्रीय तंत्रिका तंत्र से प्रजनन प्रणाली में सेक्स स्टेरॉयड हार्मोन का प्रवाह। यह देखा गया है कि हार्मोन का स्तर हाइपोथैलेमस और पिट्यूटरी ग्रंथि से संकेतों के माध्यम से गोनाडोट्रोपिन-रिलीजिंग हार्मोन (जीआरएच या एलएचआरएच) और कूप-उत्तेजक हार्मोन और ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन के संयोजन के माध्यम से क्रमशः बढ़ जाता है। इसमें एस्ट्राडियोल और प्रोजेस्टेरोन की एकाग्रता के आधार पर सकारात्मक और नकारात्मक प्रतिक्रिया लूप दोनों शामिल हैं। सूचना17 और बाहरी स्रोतों से पता लगाई गई छवियां 65,66,67। संक्षिप्त नाम: एलएचआरएच = ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन-रिलीजिंग हार्मोन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्रा 2: एस्ट्रस चक्र वर्गीकृत निर्धारकों को मापा जाता है। (ए) यहां सूचीबद्ध घटक हैं जब एकत्र किए गए सेल नमूनों और प्रत्येक चरण के लिए प्रमुख घटकों का मंचन करते समय उपयोग किया जाता है। यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि ये सामान्य पैरामीटर हैं और मतभेद अपेक्षित हैं। (बी) यहां प्रत्येक चरण में मौजूद प्रमुख सेल प्रकार हैं। जबकि ये सामान्य विभाजन हैं, प्रत्येक कोशिका प्रकार सभी चरणों के भीतर पाया जा सकता है। (सी) यहां प्रस्तुत इस अध्ययन के भीतर पाए जाने वाले सेल व्यवस्था प्रकार हैं। (डी) यहां छवि 4 एस्ट्रस चक्र चरणों में से प्रत्येक में मौजूद विशिष्ट सेल मात्रा को दर्शाती है, जिसमें चतुर्थांश मात्रा अनुमानित सेल मात्रा का प्रतिनिधित्व करती है। एक बाहरी स्रोत13 से सोर्स किया गया और पहले68 को अनुकूलित किया गया। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्रा 3: स्प्रैग डॉली चूहों में योनि उद्घाटन (ए) अविकसित बाहरी जननांग और योनि खोलने का शारीरिक अभिविन्यास जो मूत्रमार्ग खोलने के संबंध में योनि नहर की ओर जाता है। (बी) एक तीर द्वारा चिह्नित अविकसित क्षेत्र का दृश्य प्रतिनिधित्व। (सी) मूत्रमार्ग खोलने के संबंध में विकसित बाहरी जननांग और योनि छिद्र का शारीरिक अभिविन्यास, आमतौर पर लगभग 34 दिनों की उम्र में होता है। (डी) छवि ए में उल्लिखित विकसित क्षेत्र का संबंधित दृश्य प्रतिनिधित्व। बाहरी स्रोत से प्राप्त सभी आंकड़े29. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्रा 4: निर्धारक डेटा रिकॉर्डिंग टेम्पलेट को वर्गीकृत करना। (ए) डेटा रिकॉर्डिंग के लिए एक विकल्प; निर्धारकों को वर्गीकृत करने के विवरण शामिल हैं। इसका उपयोग दैनिक रूप से किया जाना है, प्रत्येक चूहे की निगरानी के लिए एक। (बी) यह टेम्पलेट डेटा प्रविष्टि के लिए एक विकल्प है, जिसमें वर्गीकृत निर्धारकों और चूहे की पहचान की सरलीकृत रिकॉर्डिंग है। यह नोट्स को दूसरे प्रो वर्गीकरण में डेटाशीट में इनपुट करने की अनुमति देता है। शीर्ष पंक्ति पर रंग प्रतिनिधित्व किए गए प्रयोगात्मक समूह को सौंपे गए रंग को दर्शाता है, जो एक समूह को दूसरे से अलग करने में मदद करता है। (सी) एक और टेम्पलेट विकल्प; सभी वर्गीकृत निर्धारक शामिल हैं और व्यक्तिगत वरीयता या अध्ययन के उद्देश्यों के आधार पर संशोधित किया जा सकता है। संक्षिप्त नाम: एकेई = एन्यूक्लिएटेड केराटिनाइज्ड उपकला; एलईयू = ल्यूकोसाइट्स; एलएनई = बड़े न्यूक्लिएटेड उपकला; एसएनई = छोटे न्यूक्लिएटेड उपकला; सी = क्लंप्ड; ईडी = समान रूप से फैला हुआ; आरडी = बेतरतीब ढंग से फैला हुआ; सीओएम = संयुक्त; एसएमडी = स्मिज; एमओडी = मध्यम; एनयूएम = कई; ईएक्सई = व्यायाम; एसईडी = गतिहीन; एस्ट = एस्ट्रस; मरना = डिस्ट्रस; मेट-डाई = मेटेस्ट्रस-डायस्ट्रस संक्रमण; प्रो = प्रोएस्ट्रस; प्रो-एस्ट = प्रोस्ट्रस-एस्ट्रस संक्रमण; ** = गुणवत्ता उदाहरण जो प्रकाशन में सहायक हो सकता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्रा 5: चरण-वर्गीकृत निर्धारक विविधताएं( ए) छवियों की इस श्रृंखला में डायस्ट्रस चरण के विभिन्न उदाहरणों को दर्शाया गया है। पहली छवि (ए 1) केंद्रित एलईयू के किस्में द्वारा दर्शाए गए बलगम के जमा को दर्शाती है, जिसमें उपकला कोशिकाएं यादृच्छिक संवितरण में मौजूद होती हैं। यह 4x और 10x आवर्धन दोनों का उपयोग करने के महत्व का एक उदाहरण है। यह 4x आवर्धन एक प्रोएस्ट्रस स्ट्रैंड के समान दिखाई देता है लेकिन 10x पर करीब निरीक्षण करने पर, एलईयू का प्रभुत्व प्रदर्शित करता है। दूसरी छवि (ए 2) दर्शाती है कि अक्सर डायस्ट्रस चरणों में क्या देखा जाता था- उपकला कोशिकाओं की एक क्लंप्ड व्यवस्था के साथ देखे गए एलईयू का प्रभुत्व: एसएनई, एलएनई और एकेई कोशिकाएं। इस श्रृंखला (ए 3) में अंतिम छवि एलईयू के यादृच्छिक संवितरण को दर्शाती है, जिसे अक्सर योनि और खारा तरल पदार्थ की बूंदों के बीच में डायस्ट्रस चरण के भीतर देखा जाता है। (बी) छवियों की यह श्रृंखला प्रोस्ट्रस चरण के विभिन्न उदाहरणों को दर्शाती है। पहली छवि (बी 1) किस्में में एसएनई कोशिकाओं की एक क्लंपिंग व्यवस्था को दर्शाती है। दूसरी छवि (बी 2) कम कुल सेल गिनती और एसएनई कोशिकाओं के एक क्लंपिंग के साथ एक स्लाइड को दर्शाती है। तीसरी छवि (बी 3) एसएनई कोशिकाओं के सामान्य क्लंपिंग और अधिक यादृच्छिक संवितरण और एलईयू और एकेई कोशिकाओं की कम संख्या को दर्शाती है। (सी) छवियों की यह श्रृंखला एस्ट्रस चरण के विभिन्न उदाहरणों को दर्शाती है। पहली छवि (सी 1) एसएनई कोशिकाओं की उपस्थिति में केराटिन बार संरचनाओं के साथ एकेई कोशिकाओं की एक सामान्य क्लंपिंग व्यवस्था को दर्शाती है। दूसरी छवि (सी 2) भूत नाभिक और बैक्टीरिया के साथ एकेई कोशिकाओं के क्लंपिंग को प्रस्तुत करती है। अंतिम छवि (सी 3) एकेई कोशिकाओं की एक स्ट्रैंड जैसी व्यवस्था प्रस्तुत करती है। (डी) छवियों की यह श्रृंखला मेटेस्ट्रस चरण के विभिन्न उदाहरणों को दर्शाती है। पहली छवि (डी 1) मलबे की उपस्थिति में एलईयू, एसएनई कोशिकाओं, एकेई कोशिकाओं और एलएनई कोशिकाओं के यादृच्छिक संवितरण और क्लंपिंग को दर्शाती है। दूसरी छवि (डी 2) केराटिन सलाखों के साथ एक क्लंपिंग व्यवस्था में मौजूद सभी सेल प्रकारों को दर्शाती है। अंतिम छवि (डी 3) मौजूद एलईयू, एसएनई, एकेई और एलएनई कोशिकाओं की अधिक व्यापक व्यवस्था दिखाती है। इन आंकड़ों, या तो 4x (A1, A2, B2, B3, D1, और D3) या 10x (A3, C1, C2, C3, और D2) ऑब्जेक्टिफिकेशन पर लिया गया है, वर्गीकरण घटकों के बढ़ते दृश्य के लिए अनुमति देने के लिए ज़ूम इन किया गया है। स्केल सलाखों = 100 μm. आकार संदर्भ के लिए; एकेई कोशिकाओं का व्यास लगभग 40-52 μm, लगभग 10 μm के एलईयू, 36-40 μm की एलएनई कोशिकाएं और लगभग 25-32 μm16 की एसएनई कोशिकाएं होती हैं। संक्षिप्त नाम: एसएनई = छोटे न्यूक्लिएटेड उपकला; एलएनई = बड़े न्यूक्लिएटेड उपकला; एकेई = एन्यूक्लिएटेड केराटिनाइज्ड उपकला; एलईयू = ल्यूकोसाइट्स। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 6
चित्रा 6: संक्रमण चरण नमूने (ए) छवियों की यह श्रृंखला डीआईई और प्रो चरणों के बीच संक्रमण के उदाहरणों को दर्शाती है। पहली छवि (ए 1) एलईयू, एसएनई, एलएनई और एकेई कोशिकाओं के बड़े गुच्छे और यादृच्छिक संवितरण प्रस्तुत करती है। दूसरी छवि (ए 2) में एलईयू के इंटरस्पर्स्ड स्ट्रैंड्स के साथ क्लंप्ड एलईयू और एसएनई का एक बड़ा द्रव्यमान शामिल है। तीसरी छवि (ए 3) में गुच्छे और यहां तक कि एलईयू के संवितरण और एसएनई की एक छोटी मात्रा शामिल है। चौथी और अंतिम छवि (ए 4) क्लंप्ड और यादृच्छिक वितरित एसएनई कोशिकाओं और एलईयू दोनों को दर्शाती है। (बी) यह छवि एसएनई और एकेई कोशिकाओं के क्लंपिंग के साथ प्रो और ईएसटी चरणों के बीच संक्रमण का एक उदाहरण दर्शाती है। (सी) यह छवि ईएसटी से एमईटी में संक्रमण का प्रतिनिधित्व करने के लिए मलबे के बीच में देखी गई एकेई, एसएनई और एलएनई कोशिकाओं के क्लंपिंग और यादृच्छिक संवितरण को दर्शाती है। (डी) पहली छवि (डी 1) एमईटी और डीआईई चरणों के बीच संक्रमण का एक उदाहरण दर्शाती है, जिसमें एलईयू में वृद्धि के साथ क्षय उपकला कोशिकाएं होती हैं। दूसरी छवि (डी 2) पहले वर्णित क्लंप्ड एलईयू और एसएनई कोशिकाओं की उपस्थिति में एकेई कोशिकाओं को दर्शाती है। 4x (A1, A2, A3, B, और C) या 10x (A4, D1 , और D2) आवर्धन पर लिए गए इन आंकड़ों को वर्गीकरण घटकों के बढ़ते विज़ुअलाइज़ेशन की अनुमति देने के लिए ज़ूम इन किया गया है। स्केल बार = 100 मीटर। आकार संदर्भ के लिए, एकेई कोशिकाओं का व्यास लगभग 40-52 μm, लगभग 10 μm के LEUs, 36-40 μm की LNE कोशिकाओं और लगभग 25-32 μm16 की एसएनई कोशिकाओं है। संक्षिप्त नाम: एकेई = एन्यूक्लिएटेड केराटिनाइज्ड उपकला; एलईयू = ल्यूकोसाइट्स; एलएनई = बड़े न्यूक्लिएटेड उपकला; एसएनई = छोटे न्यूक्लिएटेड उपकला; सी = क्लंप्ड; ईएसटी = एस्ट्रस; डाई = डिस्ट्रस; प्रो = प्रोस्ट्रस; मेट = मेटेस्ट्रस। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 7
चित्रा 7: प्रतिकूल सेल नमूना संग्रह ( ए ) इन दो छवियों में, स्क्वैमस कोशिकाओं को बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए एलईयू के अलावा योनि नहर की दीवार से चूषण किया गया था। (बी) इस छवि में मलबे की कम मात्रा शामिल है, जहां कोशिकाओं को या तो नहीं देखा गया था या एकत्र नहीं किया गया था। (सी) इस उदाहरण में, कुल कम सेल गिनती देखी गई थी। (डी) इन दो छवियों (डी 1 और डी 2) में, सोडियम क्लोराइड (एनएसीएल) निष्कर्षण समाधान और योनि द्रव को माइक्रोस्कोप स्लाइड में देखा और फैलाया गया था। 4x (A1, A2, और D1) या 10x (B, C, और D2) आवर्धन पर लिए गए इन आंकड़ों को वर्गीकरण घटकों के बढ़ते विज़ुअलाइज़ेशन की अनुमति देने के लिए ज़ूम इन किया गया है। स्केल सलाखों = 100 μm. आकार संदर्भ के लिए, एकेई कोशिकाओं का व्यास लगभग 40-52 μm, लगभग 10 μm के LEUs, 36-40 μm की LNE कोशिकाओं और लगभग 25-32 μm16 की एसएनई कोशिकाओं है। संक्षिप्त नाम: एकेई = एन्यूक्लिएटेड केराटिनाइज्ड उपकला; एलईयू = ल्यूकोसाइट्स; एलएनई = बड़े न्यूक्लिएटेड उपकला; एसएनई = छोटे न्यूक्लिएटेड उपकला। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 8
चित्रा 8: नियमित और अनियमित साइकिल चलाना पैटर्न नमूना (ए) यह छवि कुल 16 पूर्ण चक्रों को दर्शाती है जो एक दोहराए जाने वाले और सुसंगत पैटर्न के माध्यम से प्रगति करते हैं, जो सेक्स स्टेरॉयड हार्मोन के नियमित दोलन को दर्शाते हैं। इसके भीतर, डायस्ट्रस को सबसे कम, प्रोस्ट्रस को बीच में दर्शाया जाता है, और एस्ट्रस को सबसे ऊंची ऊंचाई पर बार द्वारा दर्शाया जाता है। इन आंकड़ों का विश्लेषण एस्ट्रस चरणों के बीच के दिनों को ट्रैक करके किया जाता है, जिसमें प्रत्येक एस्ट्रस-टू-एस्ट्रस एक पूर्ण चक्र का प्रतिनिधित्व करता है। ये आंकड़े यूसीएलए में रखे गए मादा चूहों के आंकड़ों को दर्शाते हैं। (बी) यह छवि 22 चूहों के विभिन्न एसाइक्लिकल पैटर्न के सैद्धांतिक संयोजन का प्रतिनिधित्व करती है। विस्तारित एस्ट्रस को पूर्ण ऊंचाई पर सलाखों के कई दोहराए जाने वाले दिनों के साथ देखा जा सकता है, सबसे कम बार ऊंचाई के कई दोहराए जाने वाले दिनों के साथ देखे गए विस्तारित डायस्ट्रस, और मेटेस्ट्रस के माध्यम से डायस्ट्रस से प्रगति के चक्रीय पैटर्न की अनुपस्थिति। संक्षिप्त नाम: एस्ट = एस्ट्रस; डाईस्ट/डाई = डाइस्ट्रस। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 9
चित्रा 9: व्यक्तिगत वर्गीकरण निर्धारकों( ए) यह स्टैक्ड बार ग्राफ एस्ट्रस नमूना चरणों में एकत्र किए गए व्यक्तिगत नमूनों को वर्गीकृत करने के लिए उपयोग किए जाने वाले उपकरणों के प्रत्येक घटक को दर्शाता है। यहां, एक विषय जिसे 10 दिनों तक मॉनिटर किया गया था, विभिन्न प्रकार के सेल प्रकार, मात्रा और व्यवस्था दिखाता है। यह किशोर जानवरों के लिए अपेक्षित है, क्योंकि हार्मोनल स्तर आमतौर पर वयस्कता तक सुसंगत या नियमित नहीं होते हैं। (बी) यहां, एक जानवर के लिए एक एस्ट्रस प्रोफाइल प्रस्तुत किया गया है जिसे 20 दिनों तक निगरानी की गई थी। इसी तरह की अनियमितताओं को यहां देखा जा सकता है, जहां विषय 4 दिनों बनाम विशिष्ट 1-2 के लिए डायस्ट्रस में रहा। ये डेटा पेपरडाइन विश्वविद्यालय में रखे गए 6 मादा चूहों का प्रतिनिधित्व करते हैं। संक्षिप्त नाम: एकेई = एन्यूक्लिएटेड केराटिनाइज्ड उपकला; एलईयू = ल्यूकोसाइट्स; एलएनई = बड़े न्यूक्लिएटेड उपकला; एसएनई = छोटे न्यूक्लिएटेड उपकला; सी = क्लंप्ड; ईडी = समान रूप से फैला हुआ; आरडी = बेतरतीब ढंग से फैला हुआ; सीओएम = संयुक्त; एसएमडी = स्मिज; एमओडी = मध्यम; एनयूएम = कई; ईएक्सई = व्यायाम; एसईडी = गतिहीन; एस्ट = एस्ट्रस; मरना = डिस्ट्रस; प्रो = प्रोएस्ट्रस; मेट = मेटेस्ट्रस।

Figure 10
चित्रा 10: स्टेज प्रोफाइल (ए) यह खंड डायस्ट्रस के रूप में वर्गीकृत हर दिन के दौरान व्यक्तिगत चूहों के लिए वर्गीकृत निर्धारक डेटा को दर्शाता है। पहली छवि (ए 1) 10 दिनों में एकत्र किए गए डेटा का प्रतिनिधित्व करती है और दूसरी (ए 2) 20 दिनों के लिए। (बी) यह खंड प्रोस्ट्रस के रूप में वर्गीकृत हर दिन के दौरान व्यक्तिगत चूहों के लिए डेटा को दर्शाता है। पहली छवि (बी 1) 10 दिनों में एकत्र किए गए डेटा का प्रतिनिधित्व करती है और दूसरी (बी 2) 20 दिनों के लिए। (सी) यह एस्ट्रस चरण के रूप में पहचाने जाने वाले हर दिन के दौरान व्यक्तिगत चूहों के लिए डेटा को दर्शाता है। पहली छवि (सी 1) 10 दिनों में एकत्र किए गए डेटा का प्रतिनिधित्व करती है और दूसरी (सी 2) 20 दिनों के लिए। (डी) श्रृंखला के इस खंड में मेटेस्ट्रस चरण के रूप में पहचाने जाने वाले प्रत्येक दिन के दौरान व्यक्तिगत चूहों के लिए वर्गीकृत घटक डेटा को दर्शाया गया है। पहली छवि (डी 1) 10 दिनों की अवधि में एकत्र किए गए डेटा का प्रतिनिधित्व करती है और दूसरी (डी 2) 20 दिनों के लिए। इन आंकड़ों के आंकड़े पेपरडाइन विश्वविद्यालय में रखे गए 6 मादा चूहों को दर्शाते हैं। संक्षिप्त नाम: एकेई = एन्यूक्लिएटेड केराटिनाइज्ड उपकला; एलईयू = ल्यूकोसाइट्स; एलएनई = बड़े न्यूक्लिएटेड उपकला; एसएनई = छोटे न्यूक्लिएटेड उपकला; सी = क्लंप्ड; ईडी = समान रूप से फैला हुआ; आरडी = बेतरतीब ढंग से फैला हुआ; सीओएम = संयुक्त; एसएमडी = स्मिज; एमओडी = मध्यम; एनयूएम = कई; ईएक्सई = व्यायाम; एसईडी = गतिहीन; एस्ट = एस्ट्रस; मरना = डिस्ट्रस; प्रो = प्रोएस्ट्रस; मेट = मेटेस्ट्रस। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

ईएसटी: 10 दिन अवधि (दिन) एकेई (%) एलईयू (%) एलएनई (%) एसएनई (%) कुल कक्ष गणना (%)
3 88 2.78 1.89 7.33 एमओडी: 44.44 एनयूएम: 44.44 एसएमडी: 11.11
श्रेणियों 2–4 70–100 0–10 0–17 0–20 स्मिज-कई
व्यवस्था सी: 50
ईडी: 0
आरडी: 50		 सी: 0
ईडी: 0
आरडी: 100		 सी: 0
ईडी: 0
आरडी: 100		 सी: 50
ईडी: 0
आरडी: 50
ईएसटी: 20 दिन अवधि (दिन) एकेई (%) एलईयू (%) एलएनई (%) एसएनई (%) कुल कक्ष गणना (%)
4 71.92 5.5 2.92 19.67 एमओडी: 50 एनयूएम: 50 एसएमडी: 0
श्रेणियों 4–4 10–100 0–20 0–20 0–80 स्मिज-कई
व्यवस्था सी: 60
ईडी: 6.67
आरडी: 33.33		 सी: 0
ईडी: 12.5
आरडी: 87.5		 सी: 33.33
ईडी: 0
आरडी: 66.67		 सी: 44.44
ईडी: 0
आरडी: 55.56

तालिका 1: औसत चरण निर्धारक नमूना। ये तालिकाएँ एकत्रित सभी ईएसटी चरणों के लिए वर्गीकृत निर्धारकों और अवलोकन के लिए औसत को दर्शाती हैं। ऊपरी तालिका 10 दिनों के लिए निगरानी किए गए सभी जानवरों के लिए औसत और 20 दिनों के लिए निचली तालिका को दर्शाती है। इसमें एस्ट्रस चक्र की अवधि, सेल प्रकार और प्रतिशत, और सेल व्यवस्था और प्रत्येक सेल प्रकार के लिए देखी गई प्रत्येक व्यवस्था का प्रतिशत शामिल है। ये आंकड़े पेपरडाइन विश्वविद्यालय में रखी गई 6 मादा चूहों के डेटा को दर्शाते हैं। संक्षिप्त नाम: एकेई = एन्यूक्लिएटेड केराटिनाइज्ड उपकला; एलईयू = ल्यूकोसाइट्स; एलएनई = बड़े न्यूक्लिएटेड उपकला; एसएनई = छोटे न्यूक्लिएटेड उपकला; सी = क्लंप्ड; ईडी = समान रूप से फैला हुआ; आरडी = बेतरतीब ढंग से फैला हुआ; ईएसटी = एस्ट्रस।

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Discussion

महत्वपूर्ण कदम और महत्वपूर्ण विचार
प्रदान किए गए प्रोटोकॉल में कुछ महत्वपूर्ण चरणों पर जोर देने की आवश्यकता होती है, खासकर योनि कोशिकाओं के संग्रह के भीतर। योनि द्रव निष्कर्षण के दौरान, सिरिंज सम्मिलन के उचित कोण और गहराई को सुनिश्चित करना संतोषजनक परिणाम उत्पन्न करने और अंततः जानवर को जलन, चोट या गर्भाशय ग्रीवा उत्तेजना को रोकने के लिए महत्वपूर्ण है। गर्भाशय ग्रीवा की उत्तेजना स्यूडोप्रेग्नेंसी प्रेरण का एक स्रोत हो सकती है, जो ल्यूकोसाइट-केवल योनि स्मीयर 11 के12-14 दिनों द्वारा इंगित की जाती है। माइक्रोस्कोप मूल्यांकन चरण के दौरान, एकत्र योनि कोशिकाओं को प्रदर्शित करने वाले दृश्य विमान पर ध्यान केंद्रित करना महत्वपूर्ण है। यह एक या दो कोशिकाओं की पहचान करके और फोकस प्राप्त होने तक विज़ुअलाइज़ेशन को समायोजित करके पूरा किया जाता है।

इसके बाद, मंचन के लिए योनि कोशिकाओं की प्रतिनिधि छवियों को कैप्चर करना माइक्रोस्कोप स्लाइड की संपूर्णता को स्कैन करके होता है। यह सुनिश्चित करता है कि कैप्चर की गई छवियां जानवरों की योनि नहर में एकत्र और मौजूद होने के सटीक चित्रण को दर्शाती हैं। वर्गीकरण से पहले, वर्गीकृत निर्धारकों के साथ परिचित होना आवश्यक है, जैसे कि सेल प्रकारों को अलग करना और प्रत्येक सेल प्रकार के विभिन्न परिवर्तनों को अलग करना। यह अनुशंसा की जाती है कि प्रत्येक प्रतिभागी को ठीक से प्रशिक्षित किया जाए और पूर्व-तैयार अभ्यास स्लाइड के माध्यम से चरण पहचान का अभ्यास किया जाए।

प्रक्रिया में शामिल पूर्वाग्रह और व्यक्तिपरकता की मात्रा को कम करने के लिए, वर्गीकृत चरण में दो प्रतिभागियों को शामिल करने की सिफारिश की जाती है, दोनों प्रत्येक जानवर के लिए पहले से दर्ज चरण पहचान को जानते हुए उपचार समूह असाइनमेंट के लिए अंधे रहते हैं। नमूनों को वर्गीकृत करने के लिए दो प्रतिभागियों को असाइन करना सम्मेलन और पहचान में व्यक्तिपरकता में कमी की अनुमति देता है। हालांकि, यदि प्रतिभागियों को नमूनों को अलग से वर्गीकृत करना है, तो यह अनुशंसा की जाती है कि विशेषज्ञता विकसित होने के साथ अंतर-रेटर विश्वसनीयता बढ़ाने के लिए प्रारंभिक सहयोग अवधि हो। असंगत निष्कर्षों को रोकने के लिए एक माध्यमिक परीक्षा प्रणाली को नियोजित किया जा सकता है, जैसे कि वर्गीकरण के बाद डेटा सेट का आदान-प्रदान करना और प्रारंभिक आकलन की पुष्टि करने के लिए तस्वीरों का उपयोग करना।

सीमाएं और संशोधन
वर्तमान तकनीक की सीमाओं में व्यवहार्यता की अवधि शामिल है। चोट या जलन के कारण जो सिरिंज के दोहराए जाने वाले सम्मिलन के साथ हो सकता है, लंबे समय तक और आवर्तक निगरानी जानवरों की उचित देखभाल और उपयोग के साथ संरेखित नहीं होती है। इसलिए, अनुदैर्ध्य अध्ययन करते समय, लैवेज की आवृत्ति को कम करके प्रक्रिया को संशोधित करना आवश्यक हो सकता है। उदाहरण के लिए, प्रति दिन एक बार प्रत्येक जानवर की निगरानी करने के बजाय, चूहों को पूरे सप्ताह में अलग-अलग दिनों में निगरानी किए गए समूहों में विभाजित किया जा सकता है। एक दूसरी सीमा में उल्लिखित प्रक्रिया में नमूना धुंधला की अनुपस्थिति शामिल है, जिसमें रंग द्वारा सेलुलर घटकों का कोई पृथक्करण नहीं है, जिससे ऊपर प्रोटोकॉल में सूचीबद्ध वर्गीकरण निर्धारकों पर अधिक निर्भरता पैदा होती है।

इसके अलावा, इस तरह के वर्गीकरण निर्धारकों के भीतर, व्यक्तिपरकता के तत्व हैं जो सटीक प्रतिकृति को सीमित कर सकते हैं। विशेष रूप से, एकत्र किए गए नमूनों के भीतर सेल मात्रा प्रतिशत व्यक्तिगत अनुमानों पर आधारित हैं। इस संबंध में संशोधनों में मौजूद व्यक्तिगत सेल प्रकारों को मापने के लिए एक गणितीय एल्गोरिथ्म विकसित करना शामिल हो सकता है। वैकल्पिक संशोधनों में एक माइक्रोस्कोप स्लाइड पर जमा नमूनों की संख्या शामिल हो सकती है, जिसे स्लाइड और कवर के आकार के आधार पर बढ़ाया जा सकता है। आगे की सीमाओं में इस अध्ययन में योनि द्रव डेटा की कमी शामिल हो सकती है- भविष्य के अध्ययनों के संशोधन में चरण वर्गीकरण में योगदान के रूप में एकत्र योनि द्रव की स्थितियों को रिकॉर्ड करना शामिल हो सकता है। प्रोटोकॉल के अतिरिक्त संशोधनों में सेल निष्कर्षण के लिए एक और आइसोटोनिक तरल पदार्थ का उपयोग करना शामिल हो सकता है, जो फॉस्फेट-बफर खारा13 जैसे समान परिणाम उत्पन्न करेगा। अंत में, विभिन्न उम्र या उपभेदों के चूहों के लिए इस प्रक्रिया को लागू करते समय, शरीर के आकार या गतिविधि स्तर के कारण पशु हैंडलिंग तकनीक जैसे संशोधनों की आवश्यकता हो सकती है। इसमें वयस्कों के लिए लोभी विधि69 और फोरलिम्ब क्रिसक्रॉस64 विधियां और युवा चूहों के लिए उपयोग की जाने वाली एक और दो-हाथ संयम64 विधि शामिल हो सकती है।

वैकल्पिक तरीके
एस्ट्रस चक्र निगरानी के वैकल्पिक तरीकों की तुलना में, योनि लैवेज इसकी सटीकता, उत्पादित जानकारी की मात्रा, न्यूनतम आक्रामकता और कम संबद्ध लागतों में अद्वितीय है। गर्भाशय और अंडाशय की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा का उपयोग चक्र चरणों की पहचान करने के लिए किया जा सकता है लेकिन यह अधिक घुसपैठ है और निरंतर निगरानी की अनुमति नहीं देता है। सेक्स स्टेरॉयड हार्मोन के स्तर को मापने के दौरान एस्ट्रस चक्र की निगरानी में सहायता करता है, इसके लिए रक्त संग्रह की आवश्यकता होती है और प्रत्येक विषय के अद्वितीय सेलुलर या योनि द्रव प्रोफ़ाइल के लक्षण वर्णन की अनुमति नहीं देता है। चूंकि बाहरी जननांग का विकास अप्रत्यक्ष रूप से सेक्स स्टेरॉयड हार्मोन के स्तर के साथ सहसंबद्ध है, योनि खोलने की परीक्षा यौन परिपक्वता पर जानकारी प्रदान कर सकती है। इसके अतिरिक्त, ऊतक का रंग, नमी का स्तर, आकार और योनि खोलने की सूजन को एस्ट्रस चक्र चरणों70 के साथ सहसंबद्ध किया गया है। हालांकि, चूहों में योनि नहर के उद्घाटन के लिए अग्रणी सटीक शरीर विज्ञान अभी तक पूरी तरह से रिपोर्ट नहीं किया गया है। हाल के प्रकाशनों में पाया गया है कि यह केवल प्रजनन विकास का एक अप्रत्यक्ष मार्कर है और हमेशा31,34 के साथ संरेखित नहीं होता है। मूत्र के नमूनों का जैव रासायनिक विश्लेषण लागत प्रभावी और आसानी से आयोजित किया जाता है, लेकिन अन्य तरीकों की विशिष्टता और विश्वसनीयता की अनुमति नहीं देताहै 71. इसलिए, यह योनि नहर में मौजूद कोशिकाओं की जांच के रूप में विश्वसनीय या मान्य नहीं है।

इसके अतिरिक्त, विद्युत प्रतिबाधा के माप का उपयोग एस्ट्रस चक्र की निगरानी के लिए किया गया है और तरल लैवेज की तुलना में कम शारीरिक रूप से परेशान है। हालाँकि, यह विधि वर्गीकृत घटकों पर उतनी जानकारी प्रदान नहीं करती है। यह उपकरण विशेष रूप से जानबूझकर संभोग के समय को अनुकूलित करने के लिए डिज़ाइन किया गया है, जब सेक्स स्टेरॉयड हार्मोन का स्तर उच्चतम 72,73,74 है। इसके अतिरिक्त, यह बताया गया है कि यह विधि ईएसटी और नॉनईएसटी के बीच अंतर करने के लिए प्रभावी है, लेकिन उस75 के बाहर एस्ट्रस चक्र की निगरानी करने की अपनी क्षमता में सीमित है। कुल मिलाकर, इस पद्धति को अविश्वसनीय बताया गया है, हमेशा लागत प्रभावी नहीं है, और अक्सर साहित्य में इसका उपयोग नहीं किया जाता है जिससे तुलनीय डेटा74 की कमी होती है। जबकि योनि झाड़ू प्रदान की जाने वाली जानकारी में लैवेज के समान है, इसमें जलन या चोट का खतरा बढ़ जाता है क्योंकि इसे कोशिकाओं को पुनः प्राप्त करने के लिए सीधे योनि नहर के अस्तर से संपर्क करने की आवश्यकता होती है। अंत में, जबकि माइक्रोस्कोप स्लाइड धुंधला सेल प्रकारों के बीच एक तेज विपरीत प्रदान कर सकते हैं और नमूना संरक्षण के लिए अनुमति दे सकते हैं, यह गीला माउंट53 की तुलना में अधिक समय लेने वाला और महंगा प्रयास है। कुल मिलाकर, प्रत्येक निगरानी तकनीक की अपनी सीमाएं और फायदे हैं, और कृंतक एस्ट्रस चक्र की व्यापक परीक्षा प्राप्त करने के लिए इन तरीकों के संयोजन का उपयोग करना फायदेमंद हो सकता है।

अनुप्रयोगों
वर्तमान अध्ययन को अधिक से अधिक वैज्ञानिक समुदाय और आम जनता के संदर्भ में देखना महत्वपूर्ण है। इस पद्धति का उपयोग किसी भी परियोजना में किया जा सकता है जिसमें मादा जानवरों की जांच शामिल है- न केवल जानबूझकर प्रजनन पर ध्यान केंद्रित करने वाले अध्ययनों के भीतर, असामान्यताओं के साथ मौजूद जानवरों को बाहर करने के लिए, और / या हाइपोथैलेमिक-पिट्यूटरी-डिम्बग्रंथि अक्ष के कार्य के लिए, बल्कि उपचार समूहों के भीतर प्रमुख अंतर्दृष्टि के लिए भी। अधिक विशेष रूप से, यह प्रक्रिया i) औषधीय अध्ययन के भीतर प्रभावशाली है, क्योंकि विभिन्न दवाएं और रसायन प्रजनन पथ और एस्ट्रस चक्र 11,27,76 को बाधित या बदलते हैं; ii) न्यूरोलॉजिकल अध्ययन, जैसे कि दर्दनाक मस्तिष्क की चोटों, अनुभूति, या अपक्षयी विकारों पर ध्यान केंद्रित करते हुए, सेक्स स्टेरॉयड हार्मोन और तंत्रिका तंत्र के बीच बातचीत के कारण77; iii) मायोसाइट्स पर स्थित सेक्स स्टेरॉयड हार्मोन रिसेप्टर्स और बादकी बातचीत के कारण संचार प्रणाली अनुसंधान; iv) अस्थि वृद्धि से संबंधित अनुसंधान38; अंतःस्रावी तंत्रके लिए 11,78; और v) अन्य अनुत्पादक अध्ययन3.

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

यह अध्ययन कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय लॉस एंजिल्स ब्रेन इंजरी रिसर्च सेंटर (बीआईआरसी) के बीच एनआईएच-वित्त पोषित सहयोग के माध्यम से आयोजित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
AmScope 40X-1000X LED Student Microscope + 5MP USB Camera AmScope Part Number: M150C-E5 EAN: 0608729747796 Model Number: M150C-E5 https://www.amazon.com/AmScope-40X-1000X-Student-Microscope-Camera/dp/B00O9GNOTA/ref=sr_1_15?crid=2W9CHTG8YSOTV&
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BD PrecisionGlide Needle Pack, 20G x 1, Short Bevel Fischer Scientific 14-815-526 https://www.fishersci.com/shop/products/bd-precisionglide-single-use-needles-short-bevel-regular-wall-4/14815526#?keyword=BD%20PrecisionGlide%20Needle%20Pack,%2020G%20x%201
Bed O Cob 1/8 NEWCO 93009 https://andersonslabbedding.com/cob-products/bed-ocobs-8b/
Corning™ Plain Microscope Slides Plain water-white glass Fischer Scientific 12-553-7A https://www.fishersci.com/shop/products/corning-plain-microscope-slides-microscope-slides-75-x-25mm/125537a
Corning™ Rectangular Cover Glasses Fischer Scientific 12-553-464 https://www.fishersci.com/shop/products/corning-square-rectangular-cover-glasses-rectangle-no-1-thickness-0-13-0-17mm-size-24-x-50mm/12553464#?keyword=true
Kimberly-Clark Professional™ Kimtech Science™ Kimwipes™ Delicate Task Wipers, 1-Ply Fischer Scientific 06-666 https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/p-211240?crossRef=kimwipes
Labdiet Rodent Lab Chow 50lb, 15001  NEWCO Specialty and LabDiet 5012 https://www.labdiet.com/products/standarddiets/rodents/index.html
Linear LED Bulb, UL Type A, T8, Medium Bi-Pin (G13), 4,000 K Color Temperature, Lumens 2550 lm Grainger 36UX10 https://www.grainger.com/product/36UX10?gclid=CjwKCAjw_
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