Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Een neonatale BALB / c muismodel van necrotiserende enterocolitis

Published: November 30, 2021 doi: 10.3791/63252
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1, 1, 1
1Provincial Key Laboratory of Research in Structure Birth Defect Disease and Department of Pediatric Surgery, Guangzhou Women and Children’s Medical Center, Guangzhou Medical University
* These authors contributed equally

ERRATUM NOTICE

Summary

Necrotiserende enterocolitis (NEC) is de ernstigste gastro-intestinale (GI) ziekte die vaak voorkomt bij premature baby's, vooral baby's met een zeer laag geboortegewicht, met een hoge mortaliteit en onduidelijke pathogenese. De oorzaak van NEC kan verband houden met inflammatoire immuunregulerende systeemafwijkingen. Een NEC-diermodel is een onmisbaar hulpmiddel voor nec-ziekte-immuunonderzoek. NEC-diermodellen gebruiken meestal C57BL / 6J neonatale muizen; BALB/c neonatale muizen worden zelden gebruikt. Gerelateerde studies hebben aangetoond dat wanneer muizen geïnfecteerd zijn, Th2-celdifferentiatie overheersend is bij BALB / c-muizen in vergelijking met C57BL / 6J-muizen. Studies hebben gesuggereerd dat het optreden en de ontwikkeling van NEC geassocieerd zijn met een toename van T-helper type 2 (Th2) cellen en over het algemeen gepaard gaan met infectie. Daarom gebruikte deze studie neonatale BALB / c-muizen om een NEC-model te induceren met vergelijkbare klinische kenmerken en intestinale pathologische veranderingen als die waargenomen bij kinderen met NEC. Verder onderzoek is gerechtvaardigd om te bepalen of dit diermodel kan worden gebruikt om Th2-celresponsen in NEC te bestuderen.

Abstract

Necrotiserende enterocolitis (NEC) is de ernstigste gastro-intestinale (GI) ziekte die vaak voorkomt bij premature baby's, vooral baby's met een zeer laag geboortegewicht, met een hoge mortaliteit en onduidelijke pathogenese. De oorzaak van NEC kan verband houden met inflammatoire immuunregulerende systeemafwijkingen. Een NEC-diermodel is een onmisbaar hulpmiddel voor nec-ziekte-immuunonderzoek. NEC-diermodellen gebruiken meestal C57BL / 6J neonatale muizen; BALB/c neonatale muizen worden zelden gebruikt. Gerelateerde studies hebben aangetoond dat wanneer muizen geïnfecteerd zijn, Th2-celdifferentiatie overheersend is bij BALB / c-muizen in vergelijking met C57BL / 6J-muizen. Studies hebben gesuggereerd dat het optreden en de ontwikkeling van NEC geassocieerd zijn met een toename van T-helper type 2 (Th2) cellen en over het algemeen gepaard gaan met infectie. Daarom gebruikte deze studie neonatale BALB / c-muizen om een NEC-model te induceren met vergelijkbare klinische kenmerken en intestinale pathologische veranderingen als die waargenomen bij kinderen met NEC. Verder onderzoek is gerechtvaardigd om te bepalen of dit diermodel kan worden gebruikt om Th2-celresponsen in NEC te bestuderen.

Introduction

Necrotiserende enterocolitis (NEC), de ernstigste gastro-intestinale (GI) ziekte, komt voor bij de meeste premature baby's (>90%), vooral die met een zeer laag geboortegewicht (VLBW)1. Bij VLBW-zuigelingen varieert de incidentie van de ziekte van 10% tot 12% en de mortaliteit van kinderen met de diagnose NEC ligt tussen 20% en 30%2,3. De oorzaak van NEC kan verband houden met mucosale verwondingen, invasie door pathogene bacteriën en darmvoeding, wat kan leiden tot ontstekingsreacties en de inductie van darmletsels bij gevoelige gastheren3. De pathogenese van NEC is onduidelijk. Relevant onderzoek toont aan dat de immuunrespons van het getroffen kind abnormaal is en dat genetische gevoeligheid, microvasculaire spanning en intestinale bacteriële veranderingen een belangrijke rol kunnen spelen bij de ziekte3.

Het NEC diermodel is een onmisbaar instrument voor onderzoek naar de pathogenese van NEC. De diersoorten die worden gebruikt voor NEC-modellen zijn varkens, ratten en muizen. Vanwege de lange draagtijd, groeicycli en hoge kosten zijn varkens de afgelopen jaren echter niet de eerste keuze geweest voor NEC-modellen en zijn ze vervangen door ratten of muizen4. Omdat er verschillen zijn in de immuunachtergrond van verschillende muizenstammen5, moeten verschillende studies verschillende muizenstammen gebruiken om NEC-diermodellen vast te stellen. BALB/c muizen hebben een belangrijk kenmerk; wanneer ze geïnfecteerd zijn of omgaan met externe schade, is de polarisatie van TH2-cellen tijdens infectie bij muizen aanzienlijk sterker dan die bij andere muizenstammen6,7,8. T-helpercellen spelen een cruciale rol in het optreden en de progressie van NEC, met name de ontwikkeling van TH2-cellen3,9,10,11. Daarom gebruikte deze studie BALB / c-muizen om het NEC-model vast te stellen, wat nuttig kan zijn voor NEC-ziekteonderzoek op T-cellen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Dit onderzoek werd goedgekeurd door de Medical Ethics Committee van Guangzhou Women and Children's Medical Center (NO. 174A01) en de Animal Ethical Committee van het Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center (IACUC-G160100). Alle dieren werden gefokt in dezelfde ruimte in een specifieke pathogeenvrije (SPF) omgeving en experimenten werden uitgevoerd in een conventionele omgeving. De muizen die voor de fokkerij werden gebruikt, waren 7-8 weken oud; de muizen voor het induceren van NEC (n = 72) werden op dag 4 van de dam gescheiden en de dammen (n = 14) werden in de oorspronkelijke kooi gehouden en verzorgden de controlegroepmuizen (Vervolg) (n = 24).

1. Bereiding van reagentia en hulpmiddelen

  1. Bereid de melkvervanger voor de BALB/c-muizen in de overeenkomstige verhouding (premature babymelkpoeder: geitenmelkpoeder = 2:1).
    OPMERKING: De uiteindelijke voedingssamenstellingen van formulemelk12 zijn weergegeven in tabel 1.
  2. LPS-oplossing (2,5 mg/ml)
    1. Los in totaal 10 mg LPS-poeder op in 4 ml gesteriliseerd dubbel gedestilleerd water, meng goed en bewaar in een koelkast bij -20 °C na aliquotering.
      OPMERKING: De LPS-oplossing wordt in het donker bewaard bij 2-8 °C voor onmiddellijk gebruik of bij -20 °C voor langdurige opslag.

2. Induceer necrotiserende enterocolitis bij neonatale BALB/c muizen

  1. Voer de neonatale muizen.
    1. Houd de neonatale muizen in dezelfde kooi als de moeder, verpleegd door de moeder op dag 0-4.
    2. In de nacht van dag 4 (wanneer de neonatale muizen 2,5-3 g wegen), scheidt u de neonatale muizen in de NEC-groep van de moeder om NEC te induceren, houdt u ze in een dierenincubator en voedt u ze met formule. De Cont. groep mag echter bij de dam blijven en gevoed worden door de dam.
      OPMERKING: Neonatale muizen die van de moeder zijn gescheiden, moeten in een couveuse worden grootgebracht vanwege hun zwakke lichaamstemperatuurregulatie.
  2. Bereid de gavagebuis voor door deze gedurende 1-2 minuten in 75% alcoholcontainers te weken en was ze twee keer in schoon, dubbel gedestilleerd water.
    OPMERKING: Om kruisbesmetting tussen de muizen te voorkomen, moet het bovenstaande proces worden uitgevoerd na het voeren van elke muis.
  3. Induceer het NEC-model.
    1. Neem de neonatale muizen van de dam op dag 4 en vast ze voor één nacht.
    2. Gavage de muizen met LPS (20-30 μL per keer) en voed ze met formule op dag 5 (40-50 μL per keer).
    3. Vanaf dag 5 onderwerpen de muizen twee keer per dag gedurende 5 dagen aan een hypoxie-reoxygenatie-koude-shockcyclus. Plaats de muizen in een hypoxie-apparaat op 5% O2 gedurende 90 s en reoxygeneer ze gedurende 3 minuten; herhaal dit proces vijf keer. Plaats de muizen vervolgens gedurende 15 minuten in een omgeving van 4 °C en breng ze vervolgens over naar een incubator. Zie figuur 1A,B voor het inductieproces.
      OPMERKING: Een cyclus van hypoxie-reoxygenatie-koude stimulatie werd eenmaal in de ochtend en eenmaal in de middag uitgevoerd. In de container werd een mengsel van 5% O2 met 95% N2 bereid en de concentratie werd gemeten met een zuurstofdetector.
  4. Observeer alle muizen nauwkeurig, weeg ze elke dag, registreer de overleving van de muizen tijdens de inductieperiode en noteer de ontlastingskenmerken (met of zonder kleverige ontlasting / bloederige ontlasting).
    OPMERKING: Het gevestigde NEC-model duurt 5 dagen.
  5. Op dag 10 of eerder, wanneer de muizen NEC-symptomen vertonen (ileus, hematochezie, diarree)13, euthanaseer de muizen door inhalatie-anesthesie met isofluraan en verzamel vervolgens onmiddellijk het darmweefsel. Verzamel geen weefsels van de muizen die spontaan stierven.
    OPMERKING: In deze studie werd het eindpunt van muiseutthenasie aangepast wanneer de muis hematochezie en cyanose van het hele lichaam vertoonde.

3. Gavage de muis

  1. Bevestig de muiskop en houd de maagsonde in de rechterhand. Plaats de maagsonde vanuit de linkerhoek van de mond van de muis.
    OPMERKING: Het hoofd werd met de wijsvinger op het hoofd van de muis bevestigd en zachtjes naar achteren en naar beneden gedrukt om te voorkomen dat de muis tijdens de operatie naar voren buigt en het inbrengen van de maagsonde beïnvloedt.
  2. Beweeg de buis langzaam naar het midden van de mond. Na het inbrengen van de buis ongeveer 2-3 cm, duw 40-50 μL formule of 20-30 μL LPS in het spijsverteringskanaal. Zie figuur 2A,B voor de maagsonde.
    OPMERKING: Onder normale omstandigheden wordt de maagsonde soepel in het spijsverteringskanaal ingebracht. Als de muis een sterke braakreflex heeft, is de maagsonde per ongeluk in de luchtpijp ingebracht. De maagsonde moet voorzichtig worden uitgetrokken en de muis moet een tijdje rusten voordat hij opnieuw probeert te plassen. Bovendien wordt de maagsondeprocedure gebruikt om het model van NEC te induceren voorafgaand aan euthanasie van muizen.

4. Verzamel verse darmweefselmonsters voor hematoxyline en eosine (H & E) kleuring

  1. Dompel het verse ileumweefsel van de muis gedurende 24 uur onder in 10% formaline.
  2. Sluit de weefsels in paraffine in en snijd ze in secties van 4 μm.
  3. Deparaffiniseer de secties in xyleen en rehydrateer ze achtereenvolgens in absolute ethanol, 95% ethanol, 80% ethanol, 70% ethanol en gedestilleerd water, waarbij ze in elke stap 5 minuten worden geweekt. Kleur de secties gedurende 5 minuten met hematoxyline-oplossing en onderscheid ze in 1% zoutzuur in 75% alcohol gedurende 5 s. Kleur ze ten slotte gedurende 1 minuut met eosine-oplossing.
    OPMERKING: Na kleuring met hematoxyline-oplossing moet het worden gedifferentieerd met 1% zoutzuur in ethanol om overmatig gebonden hematoxyline-oplossing en cytoplasmatische hematoxylinekleurstof te verwijderen. De concentratie van 1% zoutzuur is geschikt voor darmweefsel.
  4. Onderzoek de histopathologie van het darmweefsel bij 40x vergroting.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Het BALB/c muis NEC-model werd geïnduceerd door kunstvoeding, LPS-voeding, hypoxie en koudestimulatie. Tijdens de inductieperiode werden de muizen geobserveerd op darmpathologie, ontlastingskenmerken, veranderingen in lichaamsgewicht en dagelijkse overleving. Representatieve beelden van de dunne darm tijdens NEC-inductie; de getallen op de foto vertegenwoordigen de intestinale pathologiescore van 0 (normaal epitheel) tot 4 (de ernstigste) (figuur 3A). De intestinale pathologiescore was significant hoger in de NEC-groep dan in de Cont. groep (figuur 3B). De getallen op de afbeelding vertegenwoordigen ontlastingsscores van 0 (goed gevormde pellets) tot 3 (vloeibare ontlasting) (figuur 3C). Op dag 10 waren de ontlastingsscores van de NEC-groepen significant hoger in de NEC-groep, wat aangeeft dat darmdisfunctie in de NEC-groep ernstiger was (figuur 3D). Op dag 5, de eerste dag van inductie van het NEC-model, was er geen significant verschil in lichaamsgrootte tussen de twee groepen. Op dag 10 waren de muizen in de NEC-groep echter significant dunner en kleiner van kop tot staart dan de muizen in de Cont. -groep (figuur 4A).

Gedurende de 5 dagen waarin het model werd vastgesteld, nam het gewicht van de muizen in de NEC-groep langzaam toe of vertoonde zelfs een negatieve groei, en de overlevingskans van de muizen in de NEC-groep nam geleidelijk af in vergelijking met de Cont. groep (Figuur 4B, C). Bovendien werd een andere partij muizen gebruikt om het NEC-model te induceren, maar zonder de weefsels te verzamelen; op dag 13 waren alle muizen in deze NEC-groep gestorven en was de overlevingscurve aanzienlijk verminderd (aanvullende figuur S1). Figuur 5A toont de morfologie en pathologische resultaten (necrose van darmslijmvliesweefsel) van het gereseceerde ileocecale gebied van het darmweefsel van NEC-patiënten in dit ziekenhuis. In deze studie ontwikkelden de muizen in de NEC-groep (1/13) ileocecale bloeding en necrose (figuur 5B).

Figure 1
Figuur 1: Inductie van het BALB/c NEC-modelproces. (A) De muizen in de NEC-groep werden bij de geboorte van de moeder gescheiden tot ze 4 dagen oud waren (op dag 4) en vastten die nacht. Het NEC-model werd geïnduceerd vanaf dag 5 na de geboorte en duurde 5 dagen. Darmweefselmonsters werden verzameld op dag 10 of eerder. De muizen in de Cont. groep werden gehuisvest bij en verzorgd door de dam. (B) De volgorde van bewerkingen voor elke dag na het induceren van het NEC-model. Afkortingen: Vervolg = controle; NEC = necrotiserende enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figure 2
Figuur 2: Maagsonde. (A) In deze studie werd een gespecialiseerd maagsondeapparaat gebruikt, dat werd gecombineerd met een plastic buis en spuit. (B) De sondebuis kwam binnen vanuit de mondhoek in een hoek van 45° ten opzichte van de verticale lijn. (C) De buis werd langzaam naar het midden van de mond van de muis verplaatst om ervoor te zorgen dat de maagsonde en de slokdarm zich op hetzelfde verticale niveau bevonden. Afkortingen: D= diameter. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figure 3
Figuur 3: BALB/c muis NEC-model. (A) Fotomicrografen van de intestinale pathologiescore uit de twee groepen, bijvoorbeeld met intact en normaal slijmvlies in de Cont. groep (score 0), milde submucosale of lamina propria zwellingsscheiding in twee groepen (score 1), matige submucosale en/of lamina propria scheiding in de NEC groep (score 2), ernstige submucosale en/of lamina propria scheiding in de NEC groep (score 3), intestinale villi verdwijnen met intestinale necrose in de NEC-groep (score 4). (B) De intestinale pathologiescores bij de muizen na NEC-inductie waren hoger dan die van de Cont. groep (n = 9 in de Cont. groep, n = 35 in de NEC groep, *** P < 0,001 met Student's t-test). (C) Fotomicrografen van ontlastingsscores uit twee groepen, bijvoorbeeld met goed gevormde pellets in de Cont. groep (score 0), vormden ontlasting in twee groepen (score 1), halfgevormde ontlasting in de NEC-groep (score 2) en vloeibare ontlasting in de NEC-groep (score 3). (D) De ontlastingsscores in de NEC-groep waren significant hoger dan die in de Cont.-groep (n = 6 in de Cont.-groep, n = 13 in de NEC-groep, *** P < 0,001 met student t-test). De rode driehoek vertegenwoordigt de scheiding van slijmvlies en lamina propria en de zwarte pijl wijst naar muizenuitwerpselen. Schaalbalken = 50 μm. Afkortingen: Vervolg = controle; NEC = necrotiserende enterocolitis; HE = hematoxyline en eosine. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figure 4
Figuur 4: Vergelijking van de lichaamsvorm en de overleving van muizen tussen de Cont. groep en de NEC groep. (A) Het uiterlijk van de twee groepen muizen op dag 5 en dag 10. (B) Deze sectie toont de gewichtsveranderingen van de muizen in twee groepen in de loop van de tijd; de x-as vertegenwoordigt het aantal dagen nadat de muizen zijn geboren en de y-as vertegenwoordigt de gewichtsveranderingen van de muizen; **P < 0,01, ***P < 0,001 met de t-test van Student om de Cont. groep (n = 10) en de NEC groep (n = 27) (C) te vergelijken Deze sectie toont de overlevingscurves van muizen in de controlegroep (n = 10) en de NEC-groep (n = 25). Afkortingen: Vervolg = controle; NEC = necrotiserende enterocolitis. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figure 5
Figuur 5: Ileocecale bloeding bij kinderen met NEC en muizen met NEC. (A) Bloeding en necrose van het ileocecale gebied bij kinderen met NEC. (B) Bloeding en necrose in het ileocecale gebied van muizen met NEC (1/13); de darmen van de muizen in de Cont. groep waren echter normaal, zonder bloeding en necrose. De zwarte driehoek verwijst naar darmbloeding en necrose, en de rode pijl toont bloeding en necrose van het ileocecale gebied. Schaalbalken = 50 μm. Afkortingen: Vervolg = controle; NEC = necrotiserende enterocolitis. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Compositie Muis (g/L) Melkvervanger (g/L)
eiwit 69-118 100
vet 93-175 100
koolhydraat 28-37 50
calcium 0.97-6.2 2.84
fosfor 1.6-2.72 1.62
natrium 0.66-1.4 1
kalium 1.08-1.7 1.2
chloride 1.17-1.76 1.76
magnesium 0.0001-0.3 >0,12
zink 0.009-0.055 0.018
ijzer 0.004-0.007 0.017
koper 0.0017-0.007 0.0018

Tabel 1: Zuivelformule melkingrediënten.

Aanvullende figuur S1: De overlevingscurve was significant verminderd in de NEC-groep, zodat alle muizen spontaan stierven (n = 5 in de Cont. groep, n = 10 in de NEC-groep). Afkortingen: Vervolg = controle; NEC = necrotiserende enterocolitis. Klik hier om dit bestand te downloaden.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

NEC is de meest voorkomende gastro-intestinale systeem noodsituatie voor pasgeborenen, met een hoge incidentie en mortaliteit, vooral bij premature baby's1,2,3. De pathogenese is echter nog steeds onduidelijk. Er wordt momenteel aangenomen dat mucosale schade, pathogene invasie en enterale voeding risicofactoren zijn voor NEC3. Tot op heden zijn de dieren die voor het NEC-model worden gebruikt voornamelijk varkens, ratten en muizen. De meeste studies hebben neonatale C57BL / 6-muizen gebruikt om NEC13, 14, 15, 16 te induceren, en zeer weinig studies hebben BALB / c neonatale muizen gebruikt om NEC te induceren. BALB/c-muizen hebben echter het voordeel van Th-celpolarisatie6,7,8, wat verder onderzoek rechtvaardigt om te bepalen of ze een goed NEC-model kunnen zijn voor Th-celonderzoek van de ziekte.

We verwezen naar de Nadler pathologische scorestandaard van NEC-model17 en ontdekten dat de score van de NEC-groep significant hoger was dan die van de controlegroep. Een score ≥ 2 geeft NEC aan en het slagingspercentage van het induceren van NEC is 38-50%, wat lager is dan het slagingspercentage van 77% van NEC-modellering in de studie van Caplan et al. (DOI: 10.3109 / 15513819409037698). We evalueerden ook de ontlastingsscores18 van de twee groepen muizen en ontdekten dat de scores van de NEC-groep hoger waren dan die van de controlegroep. Hoe hoger de score, hoe ernstiger de darmfunctie. Al deze gegevens tonen aan dat de oprichting van het NEC-model succesvol was. Daarnaast is het bemoedigend dat het neonatale BALB/c muismodel van NEC tot op zekere hoogte menselijke NEC kan simuleren. Bloeding en necrose komen voor in de darmen van kinderen met NEC3,19; vergelijkbare pathologische aandoeningen werden waargenomen in dit model.

Gavage is de belangrijkste stap in het induceren van NEC in het muismodel. Als de maagsonde-operatie niet vakkundig onder de knie was, was het gemakkelijk om de maagsonde per ongeluk in de luchtpijp te plaatsen en de muis te laten sterven. Tijdens maagsonde werden de linkerduim, middelvinger en ringvinger gebruikt om beide zijden van de romp van de muis vast te klemmen en de wijsvinger werd op het hoofd geplaatst om de muis op zijn plaats te bevestigen. Dit om te voorkomen dat de muis zou bewegen en ervoor zou zorgen dat de maagsonde de slokdarm zou beschadigen. De maagsonde werd ingebracht vanuit de linkerhoek van de mond van de muis. Pas als de maagsonde soepel en zonder weerstand de slokdarm binnenkomt, kunnen we hem blijven inbrengen. LPS of formulemelk mag alleen worden geïnjecteerd na het inbrengen van de maagsonde op 2-3 cm van de onderlip van de muis.

De lengte van hypoxie moet zorgvuldig worden gecontroleerd. In deze studie duurde hypoxie telkens 90 s. Als hypoxie te lang is, zullen de muizen het niet kunnen verdragen en zullen ze sterven. Dit model kan worden gebruikt om NEC-gerelateerde immuuncellen te onderzoeken, met name TH1- en TH2-cellen3,9,10,11,20. In de toekomst zijn we van plan om te onderzoeken of dit model nuttig is om Th2-celresponsen in NEC te bestuderen. Daarnaast introduceerde deze studie ook een nieuwe methode van ontlastingsscore om darmstoornissen bij muizen met NEC18 te evalueren. Er zijn echter enkele beperkingen aan deze studie. Zo was het slagingspercentage van het model niet erg hoog. Er worden inspanningen geleverd om de methode van BALB/c NEC-modellering te verbeteren om het slagingspercentage te verhogen door het hypoxieniveau aan te passen van 5% O2 naar 1% O2, zoals eerder beschreven15.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

Acknowledgments

De auteurs bedanken de Clinical Biological Resource Bank van Guangzhou Women and Children's Medical Center voor het verstrekken van het klinische monster en Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center voor het leveren van muizen. Dit onderzoek werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China grant 81770510 (R.Z.).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Absolute ethanol Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 100092683
Goat Milk powder  Petag  71795558417
HE dye solution Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. G1003
Isoflurane RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD. R510  
LPS Sigma-Adrich L2880
Medical oxygen various various
Microscope NIKON NIKON imaging system (DS-Ri2)
Neutral resin Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 10004160
Paraffin various various
Premature baby milk powder Abbott 57430
Xylene Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. 10023418
1% Hydrochloric acid various various
10% Formalin LEAGENE DF0110

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Horbar, J. D., et al. Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009. Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).
  2. Stoll, B. J., et al. Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonatal Research Network. Pediatrics. 126 (3), 443-456 (2010).
  3. Neu, J., Walker, W. A. Necrotizing enterocolitis. New England Journal of Medicine. 364 (3), 255-264 (2011).
  4. Sangild, P. T., et al. Invited Review: The preterm pig as a model in pediatric gastroenterology. Journal of Animal Science. 91 (10), 4713-4729 (2013).
  5. Cancro, M. P., Sigal, N. H., Klinman, N. R. Differential expression of an equivalent clonotype among BALB/c and C57BL/6 mice. Journal of Experimental Medicine. 147 (1), 1-12 (1978).
  6. Kuroda, E., Yamashita, U. Mechanisms of enhanced macrophage-mediated prostaglandin E2 production and its suppressive role in Th1 activation in Th2-dominant BALB/c mice. Journal of Immunology. 170 (2), 757-764 (2003).
  7. Fornefett, J., et al. Comparative analysis of clinics, pathologies and immune responses in BALB/c and C57BL/6 mice infected with Streptobacillus moniliformis. Microbes and Infection. 20 (2), 101-110 (2018).
  8. Rosas, L. E., et al. Genetic background influences immune responses and disease outcome of cutaneous L. mexicana infection in mice. International Immunology. 17 (10), 1347-1357 (2005).
  9. Sproat, T., Payne, R. P., Embleton, N. D., Berrington, J., Hambleton, S. T cells in preterm infants and the influence of milk diet. Frontiers in Immunology. 11, 1035 (2020).
  10. Nanthakumar, N., et al. The mechanism of excessive intestinal inflammation in necrotizing enterocolitis: an immature innate immune response. PLoS One. 6 (3), 17776 (2011).
  11. Afrazi, A., et al. New insights into the pathogenesis and treatment of necrotizing enterocolitis: Toll-like receptors and beyond. Pediatric Research. 69 (3), 183-188 (2011).
  12. Auestad, N., Korsak, R. A., Bergstrom, J. D., Edmond, J. Milk-substitutes comparable to rat's milk; their preparation, composition and impact on development and metabolism in the artificially reared rat. British Journal of Nutrition. 61 (3), 495-518 (1989).
  13. Liu, Y., et al. Lactoferrin-induced myeloid-derived suppressor cell therapy attenuates pathologic inflammatory conditions in newborn mice. Journal of Clinical Investigation. 129 (10), 4261-4275 (2019).
  14. MohanKumar, K., et al. A murine neonatal model of necrotizing enterocolitis caused by anemia and red blood cell transfusions. Nature Communications. 10 (1), 3494 (2019).
  15. He, Y. M., et al. Transitory presence of myeloid-derived suppressor cells in neonates is critical for control of inflammation. Nature Medicine. 24 (2), 224-231 (2018).
  16. Cho, S. X., et al. Characterization of the pathoimmunology of necrotizing enterocolitis reveals novel therapeutic opportunities. Nature Communications. 11 (1), 5794 (2020).
  17. Halpern, M. D., et al. Decreased development of necrotizing enterocolitis in IL-18-deficient mice. American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 294 (1), 20-26 (2007).
  18. Wu, N., et al. MAP3K2-regulated intestinal stromal cells define a distinct stem cell niche. Nature. 592 (7855), 606-610 (2021).
  19. Nino, D. F., Sodhi, C. P., Hackam, D. J. Necrotizing enterocolitis: new insights into pathogenesis and mechanisms. Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 13 (10), 590-600 (2016).
  20. Chuang, S. L., et al. Cow's milk protein-specific T-helper type I/II cytokine responses in infants with necrotizing enterocolitis. Pediatric Allergy & Immunology. 20 (1), 45-52 (2009).

Tags

Geneeskunde Necrotiserende enterocolitis BALB/c muizen Immunologie T helper type 2 cellen

Erratum

Formal Correction: Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis
Posted by JoVE Editors on 03/07/2022. Citeable Link.

An erratum was issued for: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. The Representative Results section was updated.

Figure 1 was updated from:

Figure 1
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.

to:

Figure 1
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.

Een neonatale BALB / c muismodel van necrotiserende enterocolitis
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Tian, Y., Huang, J., Fu, M., He, Q., … More

Tian, Y., Huang, J., Fu, M., He, Q., Chen, J., Chen, Y., Zhang, R., Zhong, W. A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. J. Vis. Exp. (177), e63252, doi:10.3791/63252 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter